As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的体外研究

目的 体外研究As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的作用。方法 获取体外经As2O3作用后再培养的Colon26培养上清，以不经As2O3作用的Colon26同步培养上清作对照，定量ELISA法测定这些上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10 5种免疫抑制分子的含量，实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和Con A诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα、CD3ε^＋ζ^＋和CD3ε^-ζ^＋4表达5项免疫功能指标的影响。结果 不经As2O3作用同步培养的Colon26上清，5种免疫抑制分子均可被测到，以TGF-β1含量最高；该上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标，均有显著抑制作用。As2O3作用后的Colon26，其第一次再培养上清，5种免疫抑制分子含量及对除CD3ε^-ζ^＋表达外的其余4项免疫功能指标的抑制，均明显降低；与第一次再培养上清相比，其第二次再培养上清，TGF-β1、VEGF和IL-4含量及对NK杀伤、ConA诱导转化和CD3ε^＋ζ^＋表达的抑制，均明显提高，其余无明显变化。相关分析显示，TGF-β1和IL-10与抑制ConA诱导转化及IL-2Rα表达正相关；IL-4与抑制ConA诱导转化、NK杀伤及CD3ε^＋ζ^＋表达正相关；VEGF和IL-6与5项免疫功能指标的抑制不相关。结论 As2O3可明显下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子的分泌，下调TGF-β1、VEGF和IL-4分泌的作用可持续48h，下调IL-6和IL-10分泌的作用可持续96h，可能是As2O3抗瘤效应机制之一。     

黄芪制剂逆转结直肠癌免疫抑制及其作用靶分子的体外研究

目的:体外研究黄芪制剂对结直肠癌免疫抑制的逆转,初步分析其作用靶分子。方法:获取体外经黄芪作用后再传代的结直肠癌细胞(Colon26)培养上清,以不经黄芪作用的同步培养上清作对照,定量ELISA法测定上清中TGFβ-1、VEGF、IL-4、IL-6、IL-10、PGE2等六种免疫抑制分子的含量,分析其对MTT法测定的小鼠脾细胞NK杀伤和诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达5项免疫功能的影响,多元相关分析黄芪下调Colon26分泌免疫抑制分子与免疫抑制逆转作用之间的关系。结果:结直肠癌细胞培养上清中可检测到免疫抑制分子,以TGFβ-1含量最高;对5项免疫功能指标均有显著抑制作用。黄芪作用后,其第一次再培养上清中TGFβ-1和IL-10含量及对除IL-2Rα以外的4项免疫功能指标的抑制均明显降低,IL-6、PGE2含量显著升高;与第一次再培养上清相比,第二次再培养上清中TGFβ-1含量及对CD3ε+ζ+表达的抑制继续降低,IL-6含量降低至无中药处理的对照水平,对IL-2Rα表达的抑制开始降低,IL-10含量显著回升。相关分析显示,诱导转化、CD3ε+ζ+、CD3ε-ζ+表达及NK杀伤功能抑制率与TGFβ-1含量呈正相关,与PGE2含量呈负相关;VEGF、IL-4、IL-6和IL-10与5项免疫功能抑制不相关。结论:黄芪可通过下调结直肠癌细胞分泌TGFβ-1等免疫抑制分子,影响其免疫抑制效应的发挥,这可能是黄芪的抗瘤新机制之一。     

不同类型中药制剂逆转结直肠癌T细胞免疫抑制及其靶分子的比较研究

目的比较研究不同类型抗瘤中药制剂对结直肠癌所致T细胞免疫抑制的影响,寻找能有效逆转结直肠癌T细胞免疫抑制的抗瘤中药制剂组方。方法分别制备三氧化二砷(As2O3)、川芎嗪(LHC)、黄芪(AMB)、氧化苦参碱(MOX)、猪苓多糖(PUPS)、青蒿琥酯(ART)等6种中药制剂作用后的小鼠结直肠癌Colon26细胞再培养上清;MTT法检测中药制剂作用后对Colon26所致T细胞转化抑制的影响,直接免疫荧光FCM法检测对IL-2Rα及CD3ε+ζ+表达抑制的影响;定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6、IL-10和PGE2含量;多元相关分析中药制剂逆转结直肠癌T细胞免疫抑制的相应靶分子。结果 AMB、PUPS及ART对T细胞转化抑制的下调程度较强(下调约50%),维持时间较长;ART对IL-2Rα表达抑制的下调作用最强(下调约50%),维持时间较长;AMB对CD3ε+ζ+表达抑制的下调作用最强,不但可完全消除表达抑制,还可进一步促进表达,维持时间亦较持久。对Colon26肿瘤细胞所致转化抑制及CD3ε+ζ+表达抑制的逆转,LHC的作用靶分子为TGF-β1和IL-10,其他5种中药制剂的靶分子均为TGF-β1。对IL-2Rα表达抑制的逆转,除AMB以外其他5种中药制剂的靶分子均为TGF-β1。结论通过阻碍肿瘤细胞分泌TGF-β1、IL-10等免疫抑制分子,以逆转肿瘤细胞产生的T细胞免疫抑制,应是中药制剂的新型抗瘤机制之一。     

青蒿琥酯、苦参素对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的影响

为了研究青蒿琥酯(ART)、苦参素(MOX)是否可逆转Colon26肿瘤细胞对免疫细胞功能的抑制,分别制备经这两种中药作用后的Colon26再培养上清,同时以不经中药作用的Colon26相应上清作对照,研究对小鼠脾细胞功能的影响,包括以MTT法测定NK杀伤和ConA诱导转化,以及流式细胞术分析的CD4+及CD8+表达的影响,定量ELISA测定TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制物质的含量,并分析这两种中药下调Colon26分泌免疫抑制物质与上清免疫抑制之间的关系。结果显示,不经中药作用的Colon26培养上清中五种免疫抑制物质均可被测到,以TGF-β1含量最高;该上清对所测的小鼠脾细胞免疫功能均有显著抑制。ART作用后的Colon26,其第一次再培养上清的TGF-β1、VEGF、IL-10含量,及对小鼠脾细胞ConA诱导转化、CD4+CD8-表达及NK细胞杀伤的抑制均明显降低;其第二次再培养上清的TGF-β1和IL-10含量,及对ConA诱导转化和CD4+CD8-表达的抑制继续保持较低,VEGF含量及NK细胞杀伤的抑制恢复至对照水平。MOX作用后的Colon26,其第一次再培养上清的TGF-β1和IL-10含量,及对小鼠脾细胞ConA诱导转化的抑制均明显降低;其第二次再培养上清TGF-β1和IL-10含量继续降低,对ConA诱导转化的抑制恢复至对照水平。相关分析显示,ART及MOX作用后,Colon26培养上清对小鼠脾细胞转化的抑制均与TGF-β1含量正相关;ART作用后,Co-lon26培养上清对NK细胞杀伤的抑制与IL-10含量正相关。以上结果表明,ART和MOX可通过抑制免疫抑制物质的分泌而逆转Colon26肿瘤细胞的免疫抑制作用,这可能是ART和MOX的抗瘤机制之一。     

氧化苦参碱对L929肿瘤细胞免疫抑制作用的影响

目的:体外研究氧化苦参碱(MOX)对L929肿瘤细胞(L929)免疫抑制作用的影响.方法:获取经MOX作用后再培养的L929培养上清,以不经MOX作用同步培养的1929培养上清作对照,检测上清对小鼠脾细胞5项免疫功能的影响(包括NK杀伤和ConA诱导转化,MTT法;细胞表面IL-2Rα、cD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达水平,流式细胞术法)和上清中4种免疫抑制分子的浓度(包括TC,F-βl、PGE2、VEGF和IL-1O,定量ELISA法).分析MOX影响L929免疫抑制作用与影响L929免疫抑制分子分泌之问的关系.结果:不经MOX作用同步对照培养的1929培养上清(C-S1、C-S2),可稳定地测到所测4种免疫抑制分子(以TGF-βl和PGF2浓度最高),和稳定地抑制所测小鼠脾细胞5项免疫功能(C-SI比C-S2,P>0.05).经MOX作用后的L929,其第一次再培养上清(MOX-S1),4种免疫抑制分子的浓度及对5项免疫功能的抑制均明显低于对照上清(c-SI);其第二次再培养上清(MOX-s2)与MOX-S1相比,4种抑制分子浓度无明显变化(P>0.05),除对CD3ε+ζ+的抑制作用明显降低外(P<0.01),对其余4项免疫功能的抑制作用亦无明显变化(P>0.05).相关分析显示,MOX下调L929对小鼠脾细胞ConA诱导转化及IL广2Ra和CD3ε-ζ+表达的抑制与下调TGF-βl和PGF2分泌显著正相关,下调对MK杀伤的抑制与下调TGF-βl分泌显著正相关.结论:氧化苦参碱可显著下调L929免疫抑制分子分泌而显著下调L929肿瘤细胞的免疫抑制作用,下调肿瘤细胞免疫抑制作用可能是其抗瘤新机制之一.     

青蒿琥酯逆转L929肿瘤细胞的免疫抑制作用

目的：体外研究青蒿琥酯（ART）逆转L929肿瘤细胞（L929）的免疫抑制作用。方法：获取经ART作用后再培养的L929培养上清和不经ART作用同步对照培养的L929培养上清,检测上清对小鼠脾细胞4项免疫功能的影响（包括NK杀伤和ConA诱导转化：MTT法;细胞表面CD4^＋和CD8^＋表达水平：流式细胞术法）和上清中4种免疫抑制分子的浓度（包括TGF-β1、PGE2、VEGF和IL-10：定量ELISA法）。分析青蒿琥酯逆转L929的免疫抑制作用与其下调L929免疫抑制分子分泌之间的关系。结果：同步对照培养的L929的上清,可稳定地检测到所测4种免疫抑制分子（TGF-β1和PGE2浓度最高）和对所测小鼠脾细胞4项免疫功能的显著抑制作用（C-S1与C-S2相比,P〉0.05）。对ART作用后的L929：其第一次再培养上清（ART-S1）与相应对照上清（C-S1）相比,4种免疫抑制分子的浓度及对小鼠脾细胞NK杀伤、ConA诱导转化和CD4^＋ CD8^-表达的抑制作用显著降低（P〈0.01）;其第二次再培养上清（ART-S2）与ART-S1相比,除IL-10浓度轻度上升（P〈0.05）和对小鼠脾细胞CD4-CD8^＋表达的抑制作用轻度降低（P〈0.05）外,余无显著变化（P〉0.05）。相关分析显示,ART逆转L929对小鼠脾细胞NK杀伤、ConA诱导转化及CD4^＋ CD8^-表达的抑制,与其下调L929分泌TGF-β1（r=0.971、r=0.984、r=0.990,P〈0.05）、PGE2（r=0.960、r=0.981、r=0.982,P〈0.05）及VEGF（r=0.970、r=0.992、r=0.982,P〈0.05）显著正相关。ART逆转L929对小鼠脾细胞CD4^- CD8^＋表达的抑制,可能与其下调L929其它免疫抑制分子分泌有关。结论：ART可通过下调L929免疫抑制分子分泌而逆转其免疫抑制作用,逆转肿瘤免疫抑制应是ART抗瘤新机制之一。     

卵巢癌细胞对CD8+T细胞ζ链表达及分泌Tc1/Tc2型细胞因子的影响

目的：通过研究卵巢癌细胞对CD8+T细胞ζ链表达及分泌Tc1/Tc2型细胞因子影响，探讨其在卵巢癌免疫抑制中的作用。方法:Western印迹方法检测3株卵巢癌细胞（OVCAR3、CAOV3和SKOV3）培养上清液作用后CD8+ T细胞ζ链蛋白的表达；分别采用MTT、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观察卵巢癌细胞培养上清液对CD8+ T细胞增殖和分泌Tc1/Tc2型细胞因子的影响。结果:（1）与对照组比较，OVCAR3、CAOV3和SKOV3细胞培养上清液均能抑制CD8+ T细胞中ζ链的表达，ζ链蛋白平均吸光度值分别为（0.346±0.004; 0.349±0.007; 0.387±0.011; 0.616±0.013）；（2）3株卵巢癌细胞培养上清液皆抑制CD8+ T细胞增殖，分泌的Tc1细胞因子IFN-γ显著降低，而Tc2细胞因子IL-10显著增高。结论:卵巢癌细胞源性的免疫抑制因子通过下调CD8+ T细胞ζ链的表达，从而抑制其增殖并导致Tc1/Tc2细胞因子分泌失衡，这可能是卵巢癌诱导腹腔免疫抑制的机制之一。     

卵巢癌耐药细胞对活化CD4~+T细胞免疫活性的抑制及其机制

目的探讨卵巢癌顺铂耐药肿瘤细胞对活化CD4~+T细胞的抑制作用及其机制,为卵巢癌耐药患者的免疫治疗提供理论依据。方法用中等浓度间歇作用法建立耐顺铂卵巢癌细胞SKOV3/CDDP,MTT法测定细胞耐药指数及交叉耐药性,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率。ELISA检测肿瘤细胞培养上清液中TGF-β1、IL-10的含量。抽取正常人外周血用免疫磁珠分离CD4~+T细胞,用CD3和CD28抗体刺激活化CD4~+T细胞。用含20%肿瘤培养上清液培养,ELISA检测CD4~+T细胞IL-2表达量的变化,Western blot检测CD4~+T细胞内NF-κB、Snail的表达变化及肿瘤细胞中TGF-β1、P-smad2/3的表达变化;将肿瘤细胞与活化的CD4~+T淋巴细胞共培养,计数CD4~+T细胞增殖情况,HE染色观察肿瘤细胞对活化CD4~+T细胞黏附的抑制作用。结果SKOV3/CDDP的耐药指数为32.4,对阿霉素、紫杉醇产生交叉耐药性,在CDDP作用下,SKOV3/CDDP凋亡率明显降低。与SKOV3细胞相比,SKOV3/CDDP细胞培养上清TGF-β1表达量升高,SKOV3/CDDP培养上清能抑制活化的CD4~+T淋巴细胞IL-2的表达,抑制CD4~+T淋巴细胞的增殖及黏附作用;Western blot检测显示CD4~+T细胞内NF-κB、Snail的表达降低;SKOV3/CDDP细胞中TGF-β1和P-smad2/3的表达升高(P0.01)。结论 SKOV3/CDDP耐药细胞TGF-β1/P-smad信号通路激活,细胞分泌TGF-β1增多,对活化CD4~+T淋巴细胞的增殖及黏附起抑制作用,可能是通过抑制CD4~+T细胞内的NF-κB/Snail信号通路实现的。     

次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸

目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。     

B7H1-Ig诱导Tr1细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞转化的研究

为探讨Ⅰ型调节性T细胞(Tr1)与CD4+CD25+Foxp3+Treg之间的转化和相互关系,以预包被而固相化的B7H1-Ig融合蛋白加抗CD3单抗刺激初始CD4+CD62L+T细胞,分析细胞因子及Foxp3表达水平的变化,检测细胞功能;在B7H1-Ig开始刺激时或诱导细胞分化结束后加入重组人TGF-β,观察其对细胞分化的影响。结果显示,B7H1-Ig激活的CD4+T细胞产生高水平IL-10、IFN-γ和IL-5,极低水平的IL-2和IL-4,不表达Foxp3,通过分泌抑制性细胞因子IL-10发挥免疫抑制功能,证实B7H1-Ig可诱导Tr1细胞的产生。同时发现TGF-β不影响B7H1-Ig刺激的初始CD4+T的分化,却可促进B7H1-Ig诱导的已分化Tr1细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg转化,提示在特定条件下,Tr1细胞可转化的CD4+CD25+Foxp3+Treg。研究结果为将来临床应用CD4+Treg治疗免疫失调性疾病奠定了基础。     

Effects on M-protein on laboratory data

We describe two patients with abnormal immunoglobulins: Case 1 was a non-diabetic patient with IgA-kappa type M-protein whose serum fructosamine(FRA) value was markedly elevated; and Case 2 was a patient with pseudo-leukocytosis induced by the interaction of etylenediaminetetraacetic acid(EDTA) and IgG-kappa type M-protein. The M-protein in Case 1 was found to be conjugated to serum albumin by immunoelectrophoresis. By gel filtration, the FRA peak of the patient's serum was shown in the high molecule weight fraction. The glycation of IgA-kappa type M-protein was clearly demonstrated by FRA staining after fractionation by serum protein electrophoresis. Although serum FRA values of other non-diabetic patients with IgA type M-protein were elevated, patients with IgG type M-protein and IgM type M-protein had low or normal serum FRA values. In Case 2, the white blood cell count of the patient's blood anti-coagulated with EDTA was 52,300/microliter as determined using an automated counter, but was within normal limits when counted manually by light microscopy using a hemacytometer. The white precipitates were formed by the interaction of the patient's serum with EDTA. Immunofixation electrophoresis revealed that the precipitates were IgG2-kappa type M-protein.     

国外关于复原力的研究综述

复原力是指个体从创伤经历以及压力性情景中成功成对并良好适应的一种能力。文章对国外有关复原力的研究进行了系统综述，从复原力的概念、结构、测量等三个办衙总结了具体研究领域的最新进展。在此基础上，指出复原力研究领域中存在的问题和将来的研究方向。     

Possible influence on heart rate on tinnitus

Assuming the possibility of the inner ear damage due to a hemodynamic imbalance essentially due to an abnormal vasomotor regulatory response, the possibility that heart rate (HR) has a correlation with the onset and/or the enhancement of tinnitus is hypothesized. In fact, recent studies have drawn the influence of other factors than blood pressure, in normotensive subjects, in taking part to the regulation of peripheral resistance, outlining the importance of both cardiac output (CO) - which is a function of heart rate (HR) and stroke volume (SV) and SV itself as a dynamic component to baroreflex control of muscle sympathetic nerve activity (MSNA). From this point of view, it could be possible that a condition of bradycardia can enhance tinnitus regardless of its cause, and conversely that a more elevated HR can be related to a relief of this symptom.     

国外关于自我设阻行为的研究综述

文章对国外 2 0多年来有关自我设阻的研究进行了系统综述。从自我设阻的行为表现及分类、引发条件、内在动机、影响因素、效果和测量等 7个方面总结了具体研究领域的最新进展。在此基础上 ,指出自我设阻研究领域中存在的问题和将来的研究方向     

超声造影方法的再探讨

目的探讨造影剂（Sono Vue）和与之相匹配的对比脉冲系列成像技术（CPS）在超声造影（contrast—enhanced uhrasonography）中的方法。方法对不同的造影部位及不同造影目的采用了不同的造影参数设置。结果84例患者除1例注射时刺破血管造成造影剂外渗影响造影效果外，其余83例效果满意。超声造影检查对肿块定性诊断的准确率优于CT、MRI，心肌灌注检查为临床提供方便、可靠的无创方法。结论应根据使用的造影剂和成像技术及造影目的设置相应的造影参数。     

胎儿血红蛋白持续综合征的实验研究

目的采用电泳技术对地中海贫血进行诊断,研究血红蛋白电泳技术在诊断HbF持续综合征应用中的准确性、可靠性。方法在地中海贫血筛查中,对脆性低者进行血红蛋白电泳,HbF定量分析,丽春红染色。结果在182例地贫筛查者的电泳结果中,有7例HbF持续综合征电泳只出现一条颜色较深的HbF带,含量均在65%以上。结论电泳技术在诊断地中海贫血疾病中是一项不可缺少的重要技术,对HbF持续综合征的正确诊断率为100%。