木犀草苷抑制SNHG14表达改善SW1353骨关节炎细胞模型的实验研究

目的：观察木犀草苷（Cy）对骨关节炎细胞模型的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：使用0.1%二甲基亚砜（DMSO）及不同浓度的Cy(0、10、20、30、40、50μmol/mL)处理SW1353细胞,采用CCK-8检测其细胞毒性,确定刺激浓度。将SW1353细胞分为正常对照组、白细胞介素-1β(IL-1β)组、Cy低剂量组、Cy高剂量组。正常对照组SW1353细胞不进行任何处理;IL-1β组SW1353细胞采用10 ng/mL IL-1β处理24 h;Cy低剂量组SW1353细胞采用10 ng/mL IL-1β+10μmol/mL Cy处理24 h;Cy高剂量组SW1353细胞采用10 ng/mL IL-1β+20μmol/mL Cy处理24 h。采用RT-qPCR法检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA、白细胞介素-6(IL-6)mRNA、Ⅱ型胶原（COL2a1）mRNA、蛋白聚糖（ACAN）mRNA及长链非编码RNA(lncRNA)SNHG14 mRNA的表达水平;采用Western blotting检测MMP-13及细胞外基质COL2a1、ACAN蛋白表达。结果...     

寒温并用方对IL-1β诱导INS-1细胞凋亡的影响

目的用细胞模型探讨IL-1β诱导INS-1细胞凋亡,并观察寒温并用方对其保护作用。方法 MTT观察寒温并用方(1、0.5、0.25、0.125 g/L)分别作用24、48、72 h对INS-1细胞增殖的影响。寒温并用方(1、0.5、0.25、0.125 g/L)预处理细胞12 h,50 ng/L IL-1β继续处理细胞24 h,同时设空白对照组,IL-1β处理组。Annexin V-FITC流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blotting检测各组caspase3,bcl-2 Bax蛋白表达。结果MTT显示寒温并用方以时间剂量依赖性促进INS-1细胞增殖。但1 g/L浓度在作用72 h后与其他浓度比较,显示明显的细胞抑制作用。Annexin V-FITC/PI结果显示IL-1β促进细胞凋亡。Western blotting结果表明IL-1β促进细胞凋亡蛋白合成,寒温并用方抑制其表达。结论寒温并用方能促进INS-1细胞增殖,并抑制IL-1β诱导INS-1的凋亡,可以用于炎症性胰岛细胞受损糖尿病的预防及治疗。     

黄总黄酮对高糖培养下牛视网膜血管周细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡的影响.方法:以在体外培养3代融合的牛视网膜血管周细胞为对象,分为正常对照组、高糖组(25 mmol/L)、干预组不同浓度黄芪总黄酮组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml),孵育6d,采用TUNEL法检测培养后周细胞凋亡率;硫代巴比妥酸检测培养液丙二醛(MDA)水平;黄嘌呤氧化酶反应系统检测培养液超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:与高糖组比较,黄芪总黄酮0.5、1.0、2.0mg/ml组周细胞MDA含量、SOD活力、MDA含量/SOD活力比值及凋亡率均降低(P＜0.01);MDA含量/SOD活力与周细胞凋亡率二者呈正相关(r=0.921,P＜0.01);黄芪总黄酮2.0 mg/ml组周细胞氧化应激水平及凋亡率明显低于其他各组(P<0.05).结论:一定浓度黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡有明显的抑制作用,呈剂量依赖性.     

黄芪总黄酮对高糖培养下牛视网膜血管周细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡的影响。方法:以在体外培养3代融合的牛视网膜血管周细胞为对象,分为正常对照组、高糖组(25 mmol/L)、干预组不同浓度黄芪总黄酮组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml),孵育6d,采用TUNEL法检测培养后周细胞凋亡率;硫代巴比妥酸检测培养液丙二醛(MDA)水平;黄嘌呤氧化酶反应系统检测培养液超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:与高糖组比较,黄芪总黄酮0.5、1.0、2.0mg/ml组周细胞MDA含量、SOD活力、MDA含量/SOD活力比值及凋亡率均降低(P<0.01);MDA含量/SOD活力与周细胞凋亡率二者呈正相关(r=0.921,P<0.01);黄芪总黄酮2.0 mg/ml组周细胞氧化应激水平及凋亡率明显低于其他各组(P<0.05)。结论:一定浓度黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡有明显的抑制作用,呈剂量依赖性。     

牛膝总皂苷体外干预膝关节炎软骨细胞增殖与凋亡的研究

目的观察不同浓度牛膝总皂苷对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法实验分为空白组、牛膝总皂苷0.01 mg/mL组、牛膝总皂苷0.05 mg/mL组、牛膝总皂苷0.1 mg/mL组、牛膝总皂苷0.5 mg/mL组、牛膝总皂苷1 mg/mL组。取第3代人膝骨关节炎软骨细胞,空白组常规培养,牛膝总皂苷各组加入相应浓度牛膝总皂苷D/F12培养,采用CCK-8法及Annexin V-FITC/PI检测细胞增殖和凋亡情况,应用放射免疫分析法检测IL-1β水平,应用ELISA法检测TNF-α水平。结果牛膝总皂苷各组培养第3天细胞增殖达到高峰(空白组第5天达到高峰),之后呈下降趋势,牛膝总皂苷0.5 mg/mL组各时间点细胞增殖OD值均明显高于其他组(P均0.05)。培养3 d后,牛膝总皂苷0.01 mg/mL和0.05 mg/mL组早期和晚期细胞凋亡率及总凋亡率与空白组比较差异均无统计学意义(P均0.05);牛膝总皂苷0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL组早期和晚期细胞凋亡率及总凋亡率均明显低于空白组(P均0.05),且牛膝总皂苷0.5 mg/mL组细胞总凋亡率明显低于牛膝总皂苷0.1 mg/mL和1 mg/mL组(P均0.05)。干预72 h,牛膝总皂苷各组IL-1β、TNF-α水平均明显低于空白组(P均0.05),且牛膝总皂苷浓度越高,IL-1β、TNF-α水平越低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论牛膝总皂苷体外能有效促进人膝骨关节炎软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡及软骨细胞中IL-1β、TNF-α的表达。     

家蚕醇提物对MIN6细胞增殖及凋亡的影响

目的研究不同浓度的家蚕醇提物(Silkworm alcohol Extract,SA)对胰岛MIN6细胞的增殖活性、细胞凋亡的影响。方法用不同浓度的SA(0、0.25、0.5、1 mg/mL)干预MIN6细胞12 h,采用CCK-8法检测对正常MIN6细胞的增殖活性,不同浓度H_2O_2诱导MIN6细胞的存活率;流式细胞术结合PI荧光染色检测细胞凋亡。结果与对照组(0 mg/mL)比较,0.5 mg/mL和1 mg/mL SA组MIN 6细胞增殖活性升高(P0.05);440μmol/L H_2O_2诱导细胞损伤12 h,细胞存活率为60%,为最佳造模浓度;0.5 mg/mL和1 mg/mL SA组对H_2O_2诱导MIN6细胞存活率增高(P0.05);0.5 mg/mL和1 mg/mL SA组MIN 6细胞凋亡率有下降趋势(P0.05)。结论不同浓度SA对正常MIN 6细胞增殖活性升高、对H_2O_2损伤MIN6细胞存活率升高,细胞凋亡率下降。     

通络生骨胶囊对骨关节炎的治疗作用及其分子机制研究

目的:利用碘乙酸诱的SD大鼠骨关节炎模型,研究通络生骨胶囊对骨关节炎(OA)的治疗作用;利用IL-1β诱导的人软骨细胞(SW1353)损伤模型,研究通络生骨胶囊对软骨细胞保护作用的分子机制。方法:SD大鼠膝关节注射碘乙酸(3 mg/只)诱导形成OA模型,造模3 d后分为对照组、模型组和不同浓度的通络生骨溶液组(0.5、1、2 g/kg)。给药3周后检测血清中IL-1β的含量,膝关节软骨细胞中MMP-13的mRNA表达水平以及c-Fos蛋白表达水平。检测经通络生骨胶囊(1、5、10、50、100μg/mL)处理48 h后的IL-1β(20 ng/mL)损伤SW1353细胞8 h后的细胞活率;荧光定量PCR法检测Wnt4a、β-catenin、GSK-3β、MMP-13、ADAMTS4、Nrf2、GCLC和NQO-1的mRNA表达水平,Western-Blot的方法检测β-catenin和MMP-13的蛋白含量。结果:不同浓度(0.5、1、2 g/kg)的通络生骨胶囊溶液均可以有效降低碘乙酸诱导的IL-1β含量,抑制软骨细胞中的MMP-13和c-Fos的表达,呈剂量效应关系。在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,不同浓度(10、50、100μg/mL)的通络生骨胶囊溶液均能显著增强细胞活率,抑制IL-1β诱导的Wnt4a、β-catenin、MMP-13、ADAMTS4和GSK-3β的mRNA表达水平上调作用,增强IL-1β抑制的Nrf2、GCLC和NQO-1的mRNA表达水平。结论:通络生骨胶囊可以通过降低IL-1β等炎症因子的分泌,抑制IL-1β诱导的Wnt/β-catenin信号通路的活化、降低MMP-13、ADAMTS4等基质金属蛋白酶的分泌,增强Nrf2/HO-1信号通路,并从多方面提高软骨组织的抗损伤能力。     

中华中医药学刊2020年第38卷第2期要目

<正>博士导师新论儿童多动症中医学研究现状分析//韩新民,袁海霞,杨江,雷爽心衰康及其拆方不同干预周期对心衰大鼠肾脏皮髓质AVPR1a、AVPR2的影响//王振涛,柴松波,吴鸿,芮浩淼,边汝涛国家项目点击探索骨碎补总黄酮对IL-1β介导的软骨肉瘤细胞SW1353干预的最适浓度范围//陈颖颖,李冬霞,杜梦梦,张丽宁,胡琪,周丽,罗莎,周同亮,陶庆文     

华蟾素对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:探讨华蟾素对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞株增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:分别采用四氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪检测华蟾素对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡的影响。用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果:1不同浓度华蟾素对RPMI 8226细胞的增殖均有抑制作用,随药物浓度的增加及作用时间的延长,药物的作用效果增强;2不同浓度华蟾素(0.0625、0.125、0.25、0.5μg/m L)作用于RPMI 8226细胞72h,细胞凋亡率分别为(14.92±1.59)%、(19.17±2.10)%、(19.43±2.63)%和(27.47±3.39)%,与对照组(2.98±0.67)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。0.5μg/m L浓度华蟾素凋亡率高于其于各组(P<0.01);3与对照组比较,不同浓度华蟾素作用于RPMI 8226细胞72h,细胞上清中IL-6及VEGF水平下降,其中高浓度华蟾素组(0.25及0.5μg/m L)的变化有显著性差异(P<0.01),但低浓度组(0.0625及0.125μg/m L)变化无统计学意义(P>0.05)。结论:华蟾素在体外具有抗多发性骨髓瘤的作用,并呈时间和剂量的依赖性,与其直接细胞毒作用及诱导凋亡有关,降低瘤细胞分泌IL-6及VEGF的水平可能是其作用机制之一。     

片仔癀对人结肠癌细胞株干细胞的影响

目的 观察片仔癀(PZH)对结肠癌细胞株HT-29、SW620干细胞的抑制作用.方法 采用人结肠癌细胞株HT-29、SW620常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度片仔癀组(0.25、0.5、1mg/mL),干预24h后,MTT法测定细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析片仔癀对HT-29、SW620细胞株干细胞数量的影响.结果 MTT显示,不同浓度片仔癀干预HT-29、SW620细胞后,细胞活力均下降且具有剂量依赖性;倒置显微镜观察,PZH 1 mg干预24h后,HT-29及SW620细胞数量减少,细胞变小,折光性差,细胞悬浮、脱落而死亡;流式分析HT-29、SW620细胞株SP细胞的比例分别为10.87%、8.46%,片仔癀1 mg/mL干预24 h后,SP细胞比例分别下降为1.69%、1.18%.结论 片仔癀具有抑制HT-29、SW620结肠癌细胞增殖的作用,并且能够减少这2种细胞株干细胞的数量.     

基于NF-κB和JAK/STAT通路探讨黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉调控大鼠滑膜细胞增殖和凋亡的作用机制

目的基于NF-κB和JAK/STAT通路,探讨黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉对IL-1β诱导的大鼠滑膜细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法取生长状态良好的RSC-364细胞,分为5组:正常组无药物干预,模型组加10 ng/mL IL-1β,对照组加10 ng/mL IL-1β、10 ng/mL IL-1RA,100μg/mL药物组加10 ng/mL IL-1β和100μg/mL黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉,250μg/mL药物组加10 ng/mL IL-1β和250μg/mL黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉,分别于培养12 h、24 h后流式细胞术检测各组滑膜细胞凋亡率,HE染色观察滑膜细胞形态,Western-Blot法检测滑膜细胞中NF-κB和JAK/STAT通路关键蛋白NF-κB p50、IKKα/β、JAK1、STAT3表达水平。结果模型组培养12 h和24 h细胞凋亡率均显著低于正常组(P均<0.05),250μg/mL药物组培养12 h后细胞凋亡率显著高于模型组(P<0.05)。模型组培养12 h和24 h后细胞中TRAF2、IKKα/β、NF-κB p50、JAK1、STAT3表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),而250μg/mL药物组均明显低于模型组(P均<0.05);100μg/mL药物组STAT3表达水平与模型组比较差异无统计学意义(P均>0.05),TRAF2、IKKα/β、NF-κB p50、JAK1表达水平也均明显低于模型组(P均<0.05)。结论黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉可能通过抑制NF-κB和JAK/STAT信号通路促进滑膜细胞凋亡,抑制IL-1β诱导的滑膜细胞过度增殖,减轻炎症反应。     

八宝丹联合顺铂抑制胃癌耐药细胞生长和转移的机制研究

目的 观察八宝丹（BBD）联合顺铂（DDP）对胃癌耐药细胞（SGC7901/DDP）生长和转移的影响,探讨其抑制SGC7901/DDP细胞生长及转移的机制。方法 将对数生长期SGC7901/DDP细胞消化后接种于96孔板中,分别加入0、1、2、4、6、8、10、16、32μg/mL DDP溶液和0、0.25、0.5、0.75、1.0 mg/mL BBD溶液干预48 h,MTT法筛选DDP和BBD干预浓度分别为2μg/mL和0.25 mg/mL。将SGC7901/DDP细胞分为对照组、DDP组、BBD组和联合组,对照组加入常规培养基,DDP组加入2μg/mL DDP溶液,BBD组加入0.25 mg/mL BBD溶液,联合组加入0.25 mg/mL BBD溶液和2μg/mL DDP溶液,均干预48 h。MTT法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;黏附实验检测细胞黏附能力;Western blot检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、MMP-2蛋白表达量。结果 与...     

龙须藤总黄酮对膝关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响研究

目的：探讨龙须藤总黄酮对膝关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其对长链非编码核糖核酸（LncRNA）MEG3 的调控作用。方法：分离培养大鼠软骨细胞,对照 1 组为正常培养的软骨细胞,对照 2 组在含 10 ng/L 白细胞介素-1β（IL-1β）的培养基培养 24 h,药物 1 组在含 1 μg/mL 龙须藤总黄酮及 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,药物 2 组在含 2 μg/mL 龙须藤总黄酮及 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,药物 3 组在含 3 μg/mL 龙须藤总黄酮及 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,药物 3+si-NC 组 用 si-NC 转染入软骨细胞后加入含 3 μg/mL 的龙须藤总黄酮与 10 ng/L IL-1β 的培养基共同处理 24 h,药物 3+si-MEG3 组用si-MEG3 转染入软骨细胞后加入含 3 μg/mL 的龙须藤总黄酮与 10 ng/L IL-1β 的培养基共同处理 24 h。分别将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-MEG3 转染至软骨细胞,用含有 10 ng/L IL-1β 的培养基培养 24 h,分别记为 pcDNA3.1 组、pcDNA3.1-MEG3 组。检测各组细胞存活率、凋亡率及 MEG3、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、P21、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）、B 淋巴细胞瘤-2 相关 X 蛋白（Bax）表达情况。结果：与对照 1 组比较,对照 2 组细胞存活率及 MEG3 表达降低 （P＜0.05）,凋亡率及 P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达升高 （P＜0.05）;与对照 2 组比较,药物 1 组、药物2 组、药物 3 组细胞存活率及 MEG3 表达升高（P＜0.05）,凋亡率及 P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达降低（P＜0.05）;与 pcDNA3.1 组比较,pcDNA3.1-MEG3 组细胞存活率及 MEG3 表达升高 （P＜0.05）,凋亡率及 P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达降低 （P＜0.05）;与药物 3+si-NC 组比较,药物 3+si-MEG3 组细胞存活率及 MEG3 表达降低 （P＜0.05）,凋亡率及P21、Caspase-3、Bax、IL-6、TNF-α 表达升高 （P＜0.05）。结论：龙须藤总黄酮可能通过上调 MEG3 表达促进膝关节炎软骨细胞增殖及抑制细胞凋亡,同时抑制炎症反应从而保护软骨细胞。     

鬼针草总黄酮对过敏性紫癜患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨鬼针草总黄酮(total flavones of Bidens pi/osa L.,TFB)对过敏性紫癜(HenochSch(o|¨)nlein purpura,HSP)患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法以人脐静脉内皮细胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)为研究对象,用正常IgA1和HSP患儿血清IgA1进行干预,同时加入不同浓度TFB,分为空白对照组、正常对照组、HSP IgA1组及TFB(1.0、0.5、0.25 mg/mL)组。ELISA法分别检测各组上清液IL-8和TNF-α水平,硝酸还原酶法检测各组上清液NO水平;荧光定量PCR和Western blot法检测HUVECs中NF-κB和ICAM-1 mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组和空白对照组比较,HSP组IL-8、TNF-α及NO水平均明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与HSP组比较,TFB(1.0、0.5 mg/mL)干预后IL-8、TNF-α及NO水平均明显降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。荧光定量PCR和Western blot检测结果均显示:与正常对照组和空白对照组比较,HSP患儿血清IgA1诱导内皮细胞NF-κB与ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与HSP组比较,TFB 1.0,0.5、0.25 mg/mL干预下,NF-κB与ICAM-1mRNA和蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 TFB可能通过抑制性HSP患儿体内NF-κB高表达、减少血管内皮细胞分泌IL-8、TNF-α、NO而缓解血管损伤发生。     

脑心通对氧化低密度脂蛋白作用下的THP-1巨噬细胞活力及炎症反应的影响

目的 观察脑心通对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下的人THP-1细胞活力及炎症反应的影响.方法 将THP-1源性巨噬细胞分为7个组,即对照组(不加任何干预)、OX-LDL组(50mg/L ox-LDL干预细胞24h)、脑心通1组、脑心通2组、脑心通3组、脑心通4组(分别以0.125g/L、0.25g/L、0.5g/L、1.0g/L脑心通和50mg/L OX-LDL与细胞共孵育24h)、阿托伐他汀组(1μmol/L阿托伐他汀和50mg/L ox-LDL与细胞共孵育24h).噻唑蓝(MTT)比色法检测THP-1细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 脑心通有轻度保护ox-LDL作用下巨噬细胞活力的作用,并抑制其引起的细胞炎症反应,上述作用均呈浓度依赖性,1g/L 脑心通作用最为明显.结论 脑心通呈浓度依赖性抑制ox-LDL引起的细胞损伤及炎症反应.     

三七有效成分对人子宫内膜细胞培养液TNF-α和IL-1β含量的影响

目的利用细菌脂多糖(LPS)诱导正常子宫内膜细胞,导致细胞发生炎症反应的体外细胞模型,研究三七不同有效成分干预炎症细胞模型后,其细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化.方法比较不同浓度的三七有效成分对正常子宫内膜细胞生长的抑制率,筛选最佳浓度的三七有效成分干预炎症子宫内膜细胞模型,测定其两个时间段(48h、72h)的、TNF-α、IL-1β的浓度.结果1.通过对三七有效成分5个梯度剂量进行剂量筛选,采用四氮唑蓝(MTT)法测定发现,符合药物对细胞的抑制率(IR)≤10%的为三七有效成分第3组(三七皂苷0.0408mg/mL+三七氨酸0.002mg/mL).2.3个药物干预组TNF-α和IL-1β浓度都明显低于同时段的模型组(P＜0.01).但是与正常对照组相比,两时段的三七皂苷组和三七氨酸组TNF-α和IL-1β的浓度含量还是明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),而三七复方组与正常对照组比较无明显差异.结论1.三七有效成分的剂量筛选的第3组(三七皂苷0.0408mg/mL+三七氨酸0.002mg/mL)可做为干预炎症子宫内膜细胞模型的三七复方的药物浓度,干预的时间及用量的定量化,为进一步的实验研究提供了必要的基础.2.三七的各有效成分可不同程度地抑制炎症细胞因子TNF-α、IL-1β的分泌.     

“连花汤”正丁醇提物对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究"连花汤"正丁醇提物对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响,为临床应用"连花汤"治疗子宫内膜癌提供实验依据。方法提取物从10 mg/mL依次降浓度梯度至0.078125 mg/mL分成8组,即:10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL、0.15625 mg/mL、0.078125 mg/mL组。MTT法检测细胞抑制率;分别计算出两种细胞的半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 "连花汤"正丁醇提物在不同浓度、不同时间里对2种内膜癌细胞系的增殖有显著抑制作用。其中,作用24小时、48小时,HEC-1A细胞1.25 mg、0.625 mg、0.3125 mg组间细胞抑制率有显著性差异(P0.01);Ishikawa细胞5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL、0.15625 mg/mL组间细胞抑制率有显著性差异(P0.01);作用24小时,HEC-1A细胞、Ishikawa细胞10 mg、5 mg、0.625 mg、0.078125 mg组间细胞抑制率有显著性差异(P0.01)。与正常组相比,"连花汤"正丁醇提物细胞凋亡率显著增高,差异显著。其中,HEC-1A细胞:高剂量组0.4 mg/mL、中剂量组0.2 mg/mL、低剂量组0.1 mg/mL与正常组比较,细胞凋亡率有显著性差异(P0.01);Ishikawa细胞:Ishikawa高剂量组1.0 mg/mL、中剂量组0.5 mg/mL、低剂量组0.25 mg/mL与正常组比较,细胞凋亡率有显著性差异(P0.05)。结论"连花汤"正丁醇提物能有效抑制子宫内膜癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

半枝莲抑制大肠癌干细胞自我更新及成瘤能力

目的探讨半枝莲对大肠癌干细胞自我更新和成瘤能力的影响及其可能的调控机制。方法采用侧群细胞分选法从SW480人结肠癌细胞中分离大肠癌干细胞。利用克隆球实验检测不同浓度半枝莲(0、0.25、0.5、0.75 mg/mL)干预24 h对大肠癌干细胞体外自我更新能力的影响;加入不同浓度半枝莲(0、0.5 mg/mL)干预大肠癌干细胞24 h后,采用BALB/c裸鼠皮下移植瘤实验检测半枝莲对大肠癌干细胞体内成瘤能力的影响;采用Western blot实验检测不同浓度半枝莲(0、0.25、0.5、0.75 mg/mL)干预24 h对大肠癌干细胞自我更新和成瘤能力标志物Nanog、SOX2、OCT4及Akt信号通路中p-Akt、Akt蛋白表达的影响。结果半枝莲可显著抑制大肠癌干细胞的体外自我更新能力,可见克隆球数量明显减少(P<0.05);半枝莲可明显抑制大肠癌干细胞的体内成瘤能力,可见半枝莲组裸鼠的移植瘤质量明显减轻(P<0.05);半枝莲可显著下调大肠癌干细胞Nanog、SOX2、OCT4及p-Akt的蛋白表达(P<0.05)。结论半枝莲可抑制大肠癌干细胞的自我更新和成瘤能力,其作用机制可能是通过抑制Akt信号通路的活化。     

复元胶囊对骨关节炎软骨细胞凋亡中JNK/Bax信号通路的影响

目的探讨复元胶囊对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡影响的作用机制。方法体外培养人软骨肉瘤细胞(SW1353),给予白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)刺激,复元胶囊含药血清和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的特异抑制剂SP600125干预,随机分为正常组、模型组、抑制剂组、复元胶囊组、复元胶囊+抑制剂组,流式细胞仪分别检测细胞周期百分率和细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞信号因子磷酸化c-Jun氨基末端活化蛋白激酶(p-JNK)和Bax的蛋白表达。结果 IL-1β诱导SW1353后,模型组G1期的百分比增加,S期及G2期的百分比减少,细胞凋亡率显著增高(P0.01);抑制剂组、复元胶囊组和复元胶囊+抑制剂组G1期的百分比减少,S期及G2期的百分比增加,细胞凋亡率显著降低,p-JNK和Bax表达明显减少(P0.05或P0.01),其中以复元胶囊+抑制剂组的各项指标变化最显著(与模型组比较,P0.01)。结论复元胶囊可抑制骨关节炎软骨细胞中p-JNK及下游信号因子Bax的活化和表达,抑制细胞凋亡并促进增殖,可用于防治骨关节炎。     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5～200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2...