白花败酱草提取物对人结直肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响

目的探讨白花败酱草提取物通过抑制Notch信号通路影响人结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡机制的研究。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同质量浓度的白花败酱草对人结直肠癌SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测白花败酱草对SW480细胞凋亡的影响,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其对凋亡相关蛋白剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测其对SW480细胞中Notch信号通路中Notch1及下游靶基因Hes-1 mRNA表达的影响。结果白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,呈质量浓度和时间依赖效应,差异具有统计学意义(P0.05);流式细胞检测显示白花败酱草提取物干预SW480细胞后凋亡率升高,呈质量浓度依赖性(P0.05);白花败酱草提取物可促进SW480细胞中cleaved caspase-3和Bax的表达,抑制Notch1和Hes-1的表达,具有质量浓度依赖性(P0.05)。结论白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,诱导SW480细胞凋亡,作用机制与其抑制Notch信号通路的激活有关。     

灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法 50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。     

龙葵碱体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡及其对相关因子的影响

  目的：观察龙葵碱对人结肠癌SW480细胞凋亡及ERK/MEK、PI3K/AKT信号通路中相关因子的影响。  方法：SW480结肠癌细胞培养后共设5组,分别为空白对照组、培养液对照组及龙葵碱不同剂量(4、8、16 mmol/L)组,各组进行相应干预。采用MTT法检测龙葵碱对结肠癌细胞株的增殖作用,流式细胞法检测龙葵碱对结肠癌细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blotting法检测龙葵碱处理的SW480细胞中ERK/MEK和PI3K/AKT的表达水平。  结果：MTT生长曲线显示,龙葵碱能抑制结肠癌SW480细胞株增殖。流式细胞仪检测显示,龙葵碱能够促进SW480的凋亡。RT-PCR结果显示,龙葵碱可以抑制ERK1/2 mRNA的表达。Western blotting结果表明,龙葵碱可以降低MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。  结论：龙葵碱可以抑制结肠癌细胞增殖,其对肿瘤的诱导凋亡作用可能是通过MEK/ERK和PI3K/AKT信号途径实现的。     

姜黄素对SW480细胞凋亡的影响及机制研究

目的:通过体外培养结直肠癌SW480细胞株,观察姜黄素对人结直肠癌细胞凋亡的影响,并尝试探讨其诱导凋亡的分子机制,为结直肠癌的临床治疗提供实验依据。方法:体外培养结直肠癌SW480细胞株,给予不同浓度的姜黄素,通过流式细胞分析以及显微观察,分析SW480细胞的凋亡情况;采用ELISA法检测不同时间段SW480细胞培养上清中IL-6的浓度变化;利用Western blot检测SW480细胞株中STAT3蛋白表达水平。结果:给予姜黄素培养的SW480细胞株增殖率显著降低(P0.05),能明显检测到细胞凋亡的发生和形态学的改变,在培养24、48 h后,其细胞凋亡率显著高于空白对照组(P0.05);加入姜黄素培养的SW480细胞培养液上清中的IL-6水平显著低于空白对照组(P0.05);Western blot检测结直肠癌SW480细胞株中STAT3的表达发现,给予姜黄素处理后,细胞中STAT3蛋白表达水平显著低于空白对照组(P0.05或P0.01)。结论:姜黄素能诱导结直肠癌SW480细胞株发生凋亡,其机制可能与下调IL-6因子的表达,从而抑制JAK/STAT3信号通路有关。     

苦参碱抑制结肠癌细胞生长和迁移侵袭的作用研究

目的:观察苦参碱对人结肠癌SW480和SW480/M5细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭及AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测AKT、GSK3β和β-catenin及各自磷酸化蛋白水平。结果:苦参碱呈浓度及时间依赖性抑制SW480和SW480/M5细胞的增殖,在24、48、72 h对SW480细胞的半数抑制浓度依次为1 919、832.8、318.1μg/mL,对SW480/M5细胞的半数抑制浓度依次为2 417、947、581μg/mL。苦参碱呈浓度依赖性降低SW480和SW480/M5细胞的克隆形成率,苦参碱可抑制SW480和SW480/M5细胞的迁移和侵袭能力,800μg/mL苦参碱能抑制SW480和SW480/M5细胞内AKT和GSK3β蛋白磷酸化,诱导β-catenin的磷酸化降解。结论:苦参碱可抑制结肠癌SW480和SW480/M5细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力,其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路有关。     

斑蝥酸钠诱导非小细胞肺癌H1975细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探究斑蝥酸钠(Sodium cantharidate, SCA)对非小细胞肺癌H1975细胞增殖和凋亡的影响并探究其相关机制。方法:人非小细胞肺癌H1975细胞分为空白对照组(生理盐水)、斑蝥酸钠4、8、16μmol/L组。药物处理24 h和48 h后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测各组细胞存活率;集落克隆试验检测细胞增殖能力;Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞核变化;Western Blot法检测斑蝥酸钠对H1975细胞蛋白激酶B(AKT)通路磷酸化和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白及抑凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、促凋亡蛋白BCL-2相关X蛋白(BAX)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,4、8、16μmol/L的斑蝥酸钠组H1975细胞的增殖能力受到显著抑制,细胞存活率、侵袭、迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。磷酸化AKT、mTOR蛋白的表达下调,BCL-2/BAX比值明显降低,cleaved-Caspase-3蛋白的表达明显上调(P<0.05)。结论:斑蝥酸钠能抑制人非小细胞肺癌H1975细胞增殖,侵袭迁移,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT/mTOR通路,调控BCL-2和BAX的表达有关。     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480增殖的影响

目的:探讨健脾化瘀方基于PI3K/Akt通路抑制大肠癌SW480增殖的相关机制。方法:取对数生长期的SW480细胞,噻唑蓝(MTT)检测不同质量浓度健脾化瘀方(0.25,0.5,1,2,4,8 g·L~(-1))对SW480细胞增殖的影响;不同质量浓度健脾化瘀方(1,2,4 g·L~(-1))培养24 h,另设空白组,流式细胞仪检测对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),p27,细胞周期素D1(Cyclin D_1),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中PI3KⅢ,Akt,p27,Cyclin D_1,Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用,且呈现量效和时效关系。与空白组比较,健脾化瘀方作用于SW480细胞后明显促进细胞凋亡,细胞周期阻滞于G0/G1期,健脾化瘀方明显降低PI3K,Akt,Cyclin D_1,Bcl-2基因及蛋白的表达,明显升高p27,Bax基因及蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用,其机制可能是通过下调PI3K和Akt的表达,从而影响下游的Cyclin D_1,p27,Bcl-2,,Bax的表达,引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡。     

白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P0.01),降低p62表达水平(P0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。     

保和消积方体外对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

目的：探讨保和消积方对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响,在mRNA和蛋白水平上阐明其分子机制。方法：选取对数生长期的胃癌SGC7901细胞作为研究对象,分为空白对照组和不同浓度（0.5、1、2、4、8、12和16 mg/mL）组,采用噻唑蓝（MTT）法检测不同时间（24、48、72 h）SGC7901细胞增殖情况;采用Transwell小室迁移试验检测SGC7901细胞的迁移能力;利用流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡情况;定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测胃癌SGC7901细胞增殖、迁移、血管生成相关的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,作用不同时间后不同浓度的保和消积方组的胃癌SGC7901细胞增殖抑制率显著增加（均P<0.05）,穿膜细胞数显著降低（均P<0.05）,显著抑制了微管的形成（均P<0.05）,AKT、mTOR、PI3K、VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低（均P<0.05）。结论：保和消积方通过抑制AKT、mTOR、PI3K、VEGF的mRNA和蛋白表达,从而抑制了SGC7901胃癌细胞增殖、迁移,促进了胃癌细胞的凋亡。     

PTEN在白藜芦醇对体外直肠癌细胞生长和凋亡的影响

分析第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在直肠癌细胞系中的相对表达水平,以及白藜芦醇对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制。利用Western blot检测PTEN在人直肠癌细胞株Caco-2和SW480及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;不同浓度的白藜芦醇作用体外SW480细胞后,CCK-8法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响;Western blot检测Caspase-3,PTEN,p53以及AKT蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建慢病毒介导特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调SW480细胞中PTEN的表达,检测下调PTEN的表达后是否影响白藜芦醇对体外直肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。结果表明,与NCM460细胞相比较,PTEN在Caco-2和SW480中的表达量均显著下调,差异有统计学显著性(P0.001);白藜芦醇对体外直肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇对SW480细胞中Caspase-3,PTEN和p53蛋白的表达均有明显上调作用,而抑制磷酸化AKT的表达;shRNA PTEN可明显下调PTEN在SW480细胞中的表达,同时降低白藜芦醇对SW480细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。提示白藜芦醇可通过上调PTEN的表达从而调控体外直肠癌细胞增殖和凋亡。     

黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

虎杖苷通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡的初步研究

通过观察虎杖苷对宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。不同浓度的虎杖苷(50,100,150μmol·L~(-1))处理HeLa细胞后,采用MTT法检测虎杖苷对HeLa细胞增殖的抑制作用,AO/EB染色法荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学变化;Annexin/PI双标记法检测HeLa细胞凋亡率;流式细胞仪分析HeLa细胞周期分布;RTPCR和Western blot法检测HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。结果显示,虎杖苷显著抑制HeLa细胞增殖,且具有一定剂量依赖性;虎杖苷能够引起HeLa细胞发生S期阻滞,促进细胞凋亡,显著下调HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。表明虎杖苷具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

南蛇藤提取物联合miR-302通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)联合miR-302对人食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。方法实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人正常食管上皮细胞Het-1A及不同食管癌细胞株中miR-302表达情况。将miR-302mimic和阴性对照mimiccontrol转染至人食管癌TE-1细胞中,q RT-PCR检测质粒转染后TE-1细胞中miR-302的表达情况。单独或联合使用COE作用TE-1细胞,CCK-8实验检测TE-1细胞增殖情况,Transwell实验检测TE-1细胞侵袭和迁移能力,Westernblotting分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达情况。结果食管癌细胞株中miR-302的表达明显低于正常食管上皮细胞(P0.05)。转染miR-302mimic能够有效提高TE-1细胞中miR-302的表达(P0.05)。单独使用COE或过表达miR-302可抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移(P0.05),下调PI3K和p-Akt蛋白表达;二者联合使用对TE-1细胞增殖、侵袭和迁移抑制及对PI3K和p-Akt蛋白表达下调作用更显著(P0.05)。结论 COE联合miR-302可协同抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨乌梅丸含药血清对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:观察乌梅丸含药血清对人胰腺癌SW1990细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法:制备乌梅丸含药血清,体外培养胰腺癌细胞株SW1990,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选乌梅丸含药血清最佳作用时间用于后续实验;将SW1990细胞分为空白组和乌梅丸低、中、高组(含药血清2%、4%、8%),利用平板克隆实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验分别检测其克隆形成、迁移和侵袭能力;流式细胞术检测乌梅丸含药血清对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SW1990细胞中凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素C(Cyt C),活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中PI3K,磷酸化(p)-PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,作用72 h,乌梅丸低、中、高组吸光度A显著降低(P<0.01),与乌梅丸低组比较,乌梅...     

解毒散结方水提物对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度解毒散结方水提取物对人结直肠癌SW480细胞凋亡的影响,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法:体外培养结直肠癌SW480细胞株,给予不同浓度解毒散结方水提取物,通过流式细胞分析及Hoechst染色分析SW480细胞的凋亡情况;采用ELISA法检测不同时间段SW480细胞培养上清中IL-2、IL-6、IL-10的浓度变化;利用Western-blot检测SW480细胞株中STAT3蛋白表达水平。结果:给予解毒散结方水提取物培养的SW480细胞株能检测到明显的细胞凋亡和形态学改变,在培养48 h后,其凋亡率显著高于对照组(P0.05);在SW480细胞培养液中加入解毒散结方水提取物培养后,其上清中IL-2、IL-6、IL-10浓度显著降低(P0.05);Western-blot结果显示,给予解毒散结方水提取物处理后的细胞系,其细胞中STAT3蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:解毒散结方水提取物能诱导结直肠癌SW480细胞株发生凋亡,其机制可能是通过抑制JAK/STAT3信号通路中STAT3蛋白的表达,下调细胞炎症相关因子如IL-2、IL-6、IL-10的表达来实现的。     

款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法 MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、Cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测miR-99a表达。在Eca109细胞中转染miR-99a、anti-miR-99a并使用80 mg/L款冬花多糖进行处理,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果款冬花多糖抑制Eca109细胞增殖、迁移、侵袭及MMP2、MMP9、CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P0.05),促进miR-99a表达(P0.05)。过表达miR-99a抑制Eca109细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达,减少细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数(P0.05)。低表达miR-99a部分逆转款冬花多糖对细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的抑制作用。结论款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

人参皂苷Compound K通过调控AKT/mTOR通路诱导人肝癌细胞自噬作用的研究

目的探讨人参皂苷Compound K(人参皂苷CK)对人肝癌细胞BEL-7404自噬的作用及对AKT/mTOR通路的影响。方法采用MTT法检测人参皂苷CK对BEL-7404增殖的抑制作用;MDC染色、单荧光GFP-LC3质粒转染细胞和透射电子显微镜观察人参皂苷CK对BEL-7404自噬的影响;Western blot检测人参皂苷CK对细胞自噬相关蛋白和AKT/mTOR通路蛋白的作用。结果人参皂苷CK能够抑制人肝癌细胞BEL-7404增殖,诱导细胞自噬,促进Beclin-1、LC3Ⅱ的表达,下调AKT/mTOR通路相关蛋白AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达;加入AKT/mTOR通路抑制剂MK2206后,能够进一步抑制AKT、p-AKT、 mTOR、p-mTOR表达,上调Beclin-1、LC3Ⅱ的表达。结论人参皂苷CK可以通过调控AKT/mTOR通路诱导人肝癌细胞BEL-7404自噬。     

槲皮素对5-FU诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬调控机制研究

目的:探讨槲皮素(Que)调控5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬的作用及机制。方法:采用浓度递增诱导法建立5-FU耐药细胞株SW480/5-FU,MTT法设置Que高、中、低剂量组(10、20、40 μmol/L)和对照组。MTT法检测各组细胞的5-FU耐药性,TUNEL染色法检测细胞凋亡,免疫荧光检测细胞自噬活性,Western blot检测细胞p糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体(ABCG2)、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR蛋白表达。结果:5-FU抑制SW480/5-FU细胞的半抑制浓度(IC₅₀)明显高于SW480细胞(P<0.05),耐药指数(RI)=13.74。与对照组相比,Que中、高剂量组5-FU抑制SW480/5-FU细胞的IC₅₀明显下降(P<0.05),耐药逆转倍数分别为2.27和4.03。与对照组相比,Que中、高剂量组细胞抑制率、凋亡率和自噬活性明显升高(均P<0.05),蛋白的表达均明显升高(均P<0.05),P-gp、MRP1、ABCG2、p62、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论:Que可以以剂量依赖性的方式逆转SW480/5-FU细胞的5-FU耐药性,诱导细胞自噬,其作用机制可能与抑制AKT/mTOR的磷酸化有关。     

蛇床子素通过PI3K-AKT信号通路诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的观察蛇床子素对人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖和凋亡的影响并探讨其相关机制。方法采用CCK-8法检测HaCaT细胞增殖情况;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测HaCaT细胞周期变化及细胞凋亡水平;采用Western blotting检测蛇床子素对Ha CaT细胞磷酸肌醇3激酶(PI3K),人磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K),蛋白激酶B(AKT),磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl相关X蛋白(Bax),Cleaved-caspase3表达的影响。结果在所选质量浓度范围内(20、40、60μg/mL),蛇床子素对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用且能显著促进HaCaT细胞的凋亡;其中,20、40、60μg/mL质量浓度组蛇床子素可明显抑制PI3K和AKT的磷酸化,但对PI3K和AKT的表达无明显影响;蛇床子素能促进促凋亡蛋白Bax,Cleaved-caspase3的表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论蛇床子素能抑制HaCaT细胞增殖,促进细胞凋亡,可能与其能抑制PI3K和AKT的磷酸化,阻断PI3K-AKT通路,激活下游相关促凋亡蛋白有关。