乌司他丁对机械通气相关性肺损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨乌司他丁对机械通气相关性肺损伤(VILI)的保护作用及相关机制。方法 24只SD大鼠,随机分为对照组、VILI组和乌司他丁治疗组(VILI+乌司他丁组)。检测肺泡灌洗液中高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(IL)-6,肺组织中Toll样受体4(toll like receptor-4,TLR4)表达情况,肺湿干重比及肺病理损伤情况。结果 VILI组肺泡灌洗液中HMGB-1、TNF-α、IL-6水平、肺组织中TLR4表达、肺干湿重比和肺病理损伤评分均高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05);VILI+乌司他丁组肺泡灌洗液中HMGB-1、TNF-α、IL-6水平、肺组织中TLR4表达、肺干湿重比和肺病理损伤评分均低于VILI组,且差异有统计学意义(P0.05)。结论乌司他丁可能通过减少HMGB-1分泌,继而减少其通过TLR4刺激肺炎症反应产生水平,达到保护VILI所致肺损伤。     

肠内免疫微生态营养对大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤保护作用的研究

目的探讨肠内免疫微生态营养对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法将大鼠分为空白组、SAP-ALI组,肠内营养组(EN组)和肠内免疫微生态营养组(EIN组),大鼠SAP采用牛磺胆酸钠造模,EN及EIN组于造模成功后行相应肠内营养支持。72 h后处死大鼠后取肺脏,观察肺组织形态学变化、计算肺损伤评分和湿/干重比;免疫组化检测肺组织TLR 4、NF-κB p65的表达;ELISA法测定血清TNF-α、IL-1β含量。结果与空白组相比,SAP-ALI组肺损伤评分、肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β均明显升高(P0.05);免疫组化结果发现,与空白组相比,SAP-ALI组TLR 4、NF-κB p65表达显著增强(P0.05);与SAP-ALI组、EN组相比,EIN组TLR 4、NF-κB p65表达显著降低(P0.05);并且EIN组血清肺损伤评分、肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β与SAP-ALI组、EN组比较均显著降低(P0.05)。结论肠内免疫微生态营养有助于降低肠源性内毒素(LPS)的产生,进而降低TLR 4/NF-κB信号通路的激活,从而减轻SAP-ALI的病情。     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚对内毒索性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA和Toll样受体2(TLR2)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体重200～220g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=12),对照组(C组)、LPS组和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚组(P1组～P3组).C组腹腔注射生理盐水2ml;LPS组腹腔注射LPS 8mg/kg;P1组～P3组分别腹腔注射LPS 8 mg/kg和盐酸戊乙奎醚0.3、1.0和3.0 mg/kg.给药结束后6 h时开胸,心室取血,并取肺组织,采用ELISA法测定血清TNF-α和Ib-6的浓度,RT-PCR法测定肺组织TLR4 mRNA和TLR2 mRNA 的表达水平,并观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组、P1组～P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均升高(P<0.05);与LPS组比较,P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与P1组比较,P2组和P1组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05);P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).P2组和P3组肺组织病理学损伤程度明显轻于LPS组.结论 盐酸戊乙奎醚可通过下调肺组织TLR4 mRNA和耵JR2 mRNA的表达,降低炎性反应,从而减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.     

雷公藤甲素对内毒素致大鼠急性肺损伤的影响

目的 评价雷公藤甲素对内毒素(LPS)致大鼠急性肺损伤的影响.方法 雄性SD大鼠65只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组,对照组(C组,n=5):尾静脉注射生理盐水,同时腹腔注射1％二甲基亚砜(DMSO);LPS组(L组,n=15)和不同剂量雷公藤甲素组(TP1～3组,n=15):尾静脉注射LPS 5 mg/kg,同时腹腔分别注射1％ DMSO和雷公藤甲素25、50、100μg/kg.于给药前1h和给药后1、3、6、12 h时行动脉血气分析;给药后12 h时心脏采血后处死大鼠,取肺组织,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定血清和BALF中TNF-α浓度;测定肺组织湿重(W)和干重(D),计算W/D比;光镜下观察肺组织病理学结果,并进行弥漫性肺泡损伤评分(DAD评分);采用荧光定量PCR法测定肺组织Toll样变体4(TLR4) mRNA表达;采用Western blot法测定肺组织TLR4蛋白表达.结果 与C组相比,L组和TP1～3组给药后3、6和12 h时PaO2下降,DAD评分及W/D比升高,L组、TP1组和TP2组血清和BALF中TNF-α浓度升高,肺组织TLR4 mRNA及其蛋白表达上调,TP3组血清和BALF中TNF-α浓度降低,肺组织TLR4mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).与L组和TP1组相比,TP2组和TP3组给药后6和12 h时PaO2升高,DAD评分、W/D比、血清和BALF中TNF-α浓度降低,肺组织TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).与TP2组相比,TP3组血清和BALF中TNF-α浓度降低,肺组织TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).L组和TP1组间、TP2组和TP3组间血气指标、DAD评分及W/D比较差异无统计学意义(P＞0.05).TP1～3组肺组织病理学损伤较L组减轻.结论 雷公藤甲素可减轻LPS诱发的大鼠急性肺损伤,且与剂量有关,其机制与抑制TLR4表达的上调,减少TNF-α的释放有关.     

富氢液对脂多糖致小鼠急性肺损伤的影响

目的 评价富氢液对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的影响.方法 成年雄性C57BL/6小鼠32只,体重20 ～ 25 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=8):对照组(C组)、富氢液组(H2组)、急性肺损伤组(ALI组)和急性肺损伤+富氢液组(ALI+ H2组).ALI组和ALI+ H2组分别雾化吸入LPS25 μg(溶于PBS中)制备ALI模型,C组和H2组分别雾化吸入无菌PBS 50μl.H2组和ALI+H2组雾化吸入PBS或LPS后1和12 h时腹腔注射0.6 mmol/L富氢液5 ml/kg.LPS或PBS处理后24 h时,机械通气15 min,行动脉血气分析,计算氧合指数.然后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度,计数中性粒细胞(PMN).采用ELISA法检测BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和高迁移率族蛋白1(HMGB1)的浓度.然后处死小鼠,取肺组织,行病理学损伤评分,测定湿重/干重(W/D)比、髓过氧化物酶(MPO)和caspase-3的活性,计算细胞凋亡指数(AI).结果 与C组比较,H2组氧合指数、BALF总蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1的浓度和PMN计数、肺组织病理学损伤评分、W/D比、MPO和caspase-3的活性以及AI差异均无统计学意义(P＞0.05),ALI组和ALI+H2组氧合指数降低,BALF蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1的浓度、PMN计数、肺组织病理学损伤评分、W/D比、MPO和caspase-3 的活性以及AI均升高(P＜0.05);与ALI组比较,ALI+ H2组氧合指数升高,BALF总蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1的浓度、PMN计数、肺组织病理学损伤评分、W/D比、MPO和caspase-3的活性以及AI均降低(P＜0.05).结论 富氢液可减轻LPS致小鼠急性肺损伤,可能与其抗炎和抗凋亡作用有关.     

异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

蜕皮甾酮对急性肺损伤大鼠肺组织中Toll样受体4及肺表面活性蛋白A表达的影响

目的：观察蜕皮甾酮（EDS）对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织中TNF-α、肺表面活性蛋白A（SP-A）、Toll样受体4（TLR4）表达的影响,并探讨其机制.方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组、LPS组、EDS低（20 mg/kg）、中（30 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量治疗组（n=8）.腹腔注射LPS（10 mg/kg）诱导大鼠ALI模型,3个EDS治疗组于建模1 h后予不同剂量的EDS腹腔注射,其余两组注射等体积生理盐水.24 h后,取肺组织,用光学显微镜观察各组肺组织病理学改变;用Western blot测定肺表面活性蛋白A（SP-A）、Toll样受体4（TLR4）的表达;用ELISA测定各组肺组织中TNF-α含量,RT-PCR检测TNF-α mRNA表达水平.结果：肺组织病理学观察显示：LPS组可见肺间质充血、水肿,大量炎性细胞浸润,而EDS治疗组肺损伤明显改善,效果随EDS剂量的增加而增加.与正常对照组比较,LPS组肺组织的SP-A蛋白表达明显降低（P〈0.05）,而TNF-α含量、TNF-α mRNA表达、TLR4蛋白表达明显增加 （P〈0.05）.与LPS组相比较,不同剂量EDS治疗组肺组织SP-A蛋白表达均增加（P〈0.05）,而TNF-α含量、TNF-α mRNA表达、TLR4蛋白表达明显降低（P〈0.05）,其中EDS高剂量组比中、低剂量组效果明显 （P〈0.05）.结论：蜕皮甾酮对LPS诱导大鼠急性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制TLR4通路来降低肺组织中TNF-α炎性因子的表达,并促进抗炎物质SP-A释放有关.     

右美托咪定预处理对脂多糖致大鼠急性肺损伤时高迁移率族蛋白1的影响

目的观察右美托咪定(Dex)预处理对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)时高迁移率族蛋白1(HMGB1)的影响。方法采用尾静脉注射LPS方法制备大鼠ALI模型;将40只健康雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为4组:正常对照组(NR组)、LPS组(尾静脉注射LPS 5 mg/kg)、Dex组(腹腔分别注射右美托咪定25 μg/kg、50 μg/kg后, 尾静脉注射LPS 5 mg/kg)。NR组和LPS组给予等容量生理盐水。大鼠注射LPS 24 h后处死, 取颈动脉血记录动脉血氧分压(PaO2), 观察大鼠一般情况以及肺组织病理变化, 收集支气管肺泡灌洗液(BALF), 测定BALF总蛋白、白细胞介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;取大鼠肺组织称重, 计算肺湿干重比(W/D比);检测肺组织HMGB1、IL-1β和TNF-α的表达。组间比较在符合正态性分布和方差齐性下采用单因素方差分析。结果 LPS组和Dex组大鼠病态表现(呼吸浅快、精神萎靡、口鼻可见血性分泌物)更明显, PaO2[(98±7) mmHg比(66±9)、(79±5)、(83±7) mmHg...     

阿司匹林诱生型脂氧素A4对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响

目的 评价阿司匹林诱生型脂氧素A4 (ATL)对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤的影响.方法 雄性SPF级BALB/C小鼠30只,体重25～30 g,10～ 12周龄,采用随机数字表法,将其分为3组(n=10):对照组(NS组)气管内滴定生理盐水(LPS溶媒)1.5 ml/kg,1h后尾静脉注射50％无水乙醇(ATL溶媒)0.1 ml; LPS组气管内滴定LPS 3 mg/kg,1h后尾静脉注射50％无水乙醇0.1 ml; ATL组气管内滴定LPS 3 mg/kg,1h后尾静脉注射ATL 0.2 mg/kg.气管内滴定药物后24h处死,采集支气管肺泡灌洗液(BALF),计数总细胞数、多形核粒细胞比例、单个核细胞比例及其总蛋白、TNF-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-10的浓度;取肺组织,测定髓过氧化物酶(MPO)活性、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的磷酸化水平,并观察肺组织病理学结果,行肺损伤评分.结果 与NS组比较,LPS组和ATL组肺损伤评分、BALF中总细胞数、多形核粒细胞比例、TNF-α、IL-6、MCP-1浓度升高,单个核粒细胞比例降低,LPS组BALF中IL-10浓度降低,总蛋白浓度、肺组织MPO活性、p38 MAPK、JNK、ERK1/2的磷酸化水平升高(P＜0.05),ATL组BALF中总蛋白、IL-10浓度、肺组织MPO活性、p38 MAPK、JNK、ERK1/2的磷酸化水平差异无统计学意义(P＞0.05);与LPS组比较,ATL组肺损伤评分、BALF中总细胞数、多形核粒细胞比例和总蛋白、TNF-α、IL-6、MCP-1浓度降低,单个核粒细胞比例和IL-10浓度升高,肺组织MPO活性、p38MAPK和JNK的磷酸化水平降低(P＜0.05),ERK1/2的磷酸化水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ATL可减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,其机制与抑制p38 MAPK和JNK信号通路激活有关.     

姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎防治作用及其机制

目的:探讨姜黄素对重症急性胰腺炎(SAP)的防治作用及其机制。方法:将54只SD大鼠随机均分为:假手术组,SAP模型组(SAP组),姜黄素预处理+SAP组(姜黄素预处理组)。用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法制作SAP模型,分别于术后3,6,12 h测各组腹水量和以下各项观察指标:血清淀粉酶(AMY),IL-6,TNF-α水水平;胰腺的病理学损伤和评分和胰腺组织NF-κB p65和Toll样受体4(TLR4)的表达。结果:与假手术组比较,SAP组和姜黄素预处理组的腹水量、血清AMY,IL-6,TNF-α水平在各时间点均明显升高(均P<0.01),但姜黄素预处理组的以上各项指标的升高程度均不如SAP组明显,特别是在6 h和12 h时间点,两者间差异均有统计学意义(均P<0.05);除假手术组外,SAP组和姜黄素预处理组均呈典型SAP病理改变,但姜黄素预处理组各时间点的病理改变均较SAP组为轻,且姜黄素预处理组Schmidt评分在6 h和12 h时间点明显低于SAP组(均P<0.05);SAP组和姜黄素预处理组各时间点胰腺组织NF-κB p65和TLR4蛋白表达均较假手术组明显增加,但姜黄素预处理组两者的表达低于SAP组。结论:姜黄素对SAP有防治作用,其作用机制可能是其抑制NF-κB及TLR4信号通路的激活,缓解胰腺炎症,从而减轻SAP的病理损伤。     

右美托咪定对脂多糖诱导的脓毒症大鼠全身炎症反应和肺损伤的影响

目的观察脂多糖(LPS)对大鼠血浆和肺组织中的炎性因子和Toll样受体4(TLR4)表达的影响及右美托咪定的干预作用。方法雄性SD大鼠40只,250~300g,随机分为四组。Control组(n=10)生理盐水1ml·kg~(-1)·h~(-1)大鼠尾静脉泵注6h;DEX组(n=10)右美托咪定(负荷量6.5μg·kg~(-1)·h~(-1),10min;5μg·kg~(-1)·h~(-1)维持)大鼠尾静脉泵注6h;LPS组(n=10)经大鼠尾静脉注射7.5mg/kg的LPS后继续生理盐水泵注6h;LPS+DEX组(n=10)经大鼠尾静脉注射7.5mg/kg的LPS后泵注右美托咪定6h。以6h为实验终结点,并于此时行右心室取血和肺组织标本的制备。采用ELISA法检测血浆IL-1、IL-6、TNF-α浓度,Western blot法检测肺组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB蛋白含量;检测大鼠肺组织湿/干比(W/D);并用Murakami法评测肺损伤程度。结果与Control组比较,LPS组大鼠血浆IL-1、IL-6和TNF-α浓度明显升高,肺组织中的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白含量明显升高(P0.01),肺W/D明显升高;LPS+DEX组上述指标差异均无统计学意义。Control组和DEX组未见明显肺损伤,LPS组肺间质水肿、炎性细胞浸润明显,LPS+DEX组肺损伤程度明显减轻(P0.01)。结论 LPS的刺激可以明显升高大鼠血浆中炎性因子以及肺组织中TLR4的表达水平,右美托咪定的干预可以减轻这一趋势,缓解大鼠的全身炎症和肺水肿的程度。     

异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.     

谷氨酰胺对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的评价谷氨酰胺对内毒索性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法静脉注射脂多糖(LPS)5 mg·kg-1复制大鼠ALI模型。雄性SD大鼠50只随机分为5组(n=10):A组为对照组;B组为LPS组;C组、D组、E组为谷氨酰胺+LPS组,分别于LPS注射前1h时、LPS注射同时、LPS注射后1 h静脉注射谷氨酰胺0．75 g／kg。所有动物于注射LPS或生理盐水后4 h颈动脉放血处死,采用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织TNF-αmRNA表达,免疫组织化学方法检测肺组织TNF-α蛋白表达,HE染色,光镜下观察肺组织病理学变化。结果与A组相比,B组TNF-αmRNA表达上调(P<0．01),肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、上皮细胞表达增强(P<0．01);与B组相比,C组和D组肺组织TNF-αmRNA及TNF-α蛋白水平均降低(P<0．01),肺组织的炎症反应减轻。结论在静脉注射LPS前或同时给予谷氨酰胺可通过抑制ALI大鼠肺组织TNF-α的过度生成,减轻肺损伤。     

白细胞介素-10通过降低脂多糖诱导大鼠急性肺损伤高迁移率组蛋白1释放产生保护作用

目的 旨在研究白细胞介素（interleukin,IL）-10对高迁移率组蛋白l（high mobility group protein 1,HMGB1）释放的影响及其肺保护作用,进而探讨IL-10在治疗急性肺损伤中的可能机制. 方法 采用腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致大鼠脓毒症急性肺损伤模型,健康SPF级雄性SD大鼠72只,体重180 g～220 g,采用随机数字表法,随机分为对照组即磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution,PBS）组（P组,6只）、急性肺损伤组即LPS组（L组,30只）、PBS＋IL-10组（PI组,6只）、LPS＋IL-10组（LI组,30只）.P组和PI组腹腔注射等体积PBS的同时分别经由气道滴注5 ml的PBS和IL-10,L组和LI组腹腔注射LPS的同时分别经由气道滴注等体积的PBS和IL-10.L组和LI组注射LPS后的4、8、16、24 h和48 h分别检测各组大鼠肺湿/干重比（wet/dry weight ratio,W/D）和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中总蛋白浓度,酶联免疫吸附实验法检测BALF中炎性因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和IL-6水平,苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察肺组织的病理变化,Western Blot分析肺组织中HMGB1表达水平. 结果 腹腔注射LPS后,L组大鼠肺组织W/D和BALF中总蛋白浓度分别为（5.68±0.12） mg/L和（254±105） mg/L,与P组比较,分别增加了12％和297％（P＜0.05）,BALF中TNF-α和IL-6水平明显增加（P＜0.05）,HE染色显示在注射LPS后4h肺组织的细胞浸润达到峰值随后减少,肺组织中HMGB1水平升高（P＜0.05）;使用IL-10后,LI组肺组织W/D和BALF中总蛋白浓度分别为（5.28±0.14） mg/L和（109±48） mg/L,与L组比较,分别降低了7％和57％ （P＜0.05）,BALF中炎性因子水平降低（P＜0.05）,肺组织细胞浸润改善,HMGB1表达下调（P＜0.05）. 结论 IL-10对急性肺损伤具有保护作用,其机制可能为降低BALF中炎性因子的水平,下调晚期炎症介质HMGB1的表达,从而改善肺组织的细胞?     

μ阿片受体激动剂DAMGO对创伤-内毒素二次打击所致大鼠急性肺损伤的影响

目的探讨μ阿片受体激动剂DAMGO对创伤-内毒素二次打击所致大鼠急性肺损伤的影响。方法 SD成年大鼠32只,随机分为正常对照组(N组)、空白对照组(B组)、DAMGO组(D组)和DAMGO+μ阿片受体拮抗剂CTOP组(DC组)。采用双侧股骨中段闭合性骨折6h后腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)5 mg/kg造模。N组只麻醉不造模,B组造模15min后腹腔注射等量生理盐水,D组注射DAMGO 200 μg/kg,DC组注射CTOP 600 μg/kg,5 min后注射DAMGO200 μg/kg。药物注射6h后行动脉血气分析,观察并比较肺组织病理改变,检测肺组织干湿重比、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果二次打击后大鼠肺功能降低,肺组织出现了明显炎症反应。与D组比较,B、DC组动脉血PaO2、pH值明显降低;肺组织Smith评分明显升高(P0.05);肺组织干湿重比明显降低(P0.05);肺组织MDA、TNF-α、IL-6含量明显升高(P0.05),SOD活性明显降低(P0.05)。结论μ阿片受体激动剂DAMGO对创伤-内毒素二次打击所致大鼠急性肺损伤有一定保护作用。     

核因子-κB介导脂多糖诱导急性肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达

目的探讨核因子(NF)-κB在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤过程中对肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法采用腹腔注射脂多糖(LPS)致大鼠脓毒症急性肺损伤模型。取健康SPF级雄性SD大鼠72只,体重180~220g,采用随机数字表法,分为对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(L组,n=30)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)溶剂对照组(P组,n=6),PDTC治疗组(LP组,n=30)。各组分别给予腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)(C和P组)或LPS(L和LP组);P组和LP组在PBS或LPS注射前15min,给予腹腔注射PDTC 100mg/kg。C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的16h后各取6只大鼠检测其肺湿/干重比(W/D);C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的4h(T1)、8h(T2)、16h(T3)、24h(T4)和48h(T5)时各取6只大鼠经处理后采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中髓过氧化物酶(MPO)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法检测肺组织HMGB1的表达水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织的病理变化。结果与C组比较,L组肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显升高(P0.01),病理切片显示严重肺组织损伤,T2~T4时肺组织中HMGB1的表达水平明显升高(P0.05);使用PDTC治疗后,与L组比较,肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显降低(P0.01),病理示肺损伤程度明显减轻;T2~T4时肺组织HMGB1表达水平明显降低(P0.05)。结论在脂多糖诱导急性肺损伤中,被激活的NF-κB通过介导晚期炎症因子HMGB1的表达来参与急性肺损伤的发生与发展过程。     

右美托咪啶对脂多糖诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4mRNA表达的影响

目的 探讨右美托咪啶对脂多糖(LPS)诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,取外周血分离培养单核细胞,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8),A组:阴性对照;B组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml);C组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为0.5 ng/ml);D组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为5.0 ng/ml);E组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为50.0 ng/ml).孵育24 h后,收集上清液,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA的表达.结果 与A组比较,B组TNF-α、IL-1p、IL-6的浓度升高,TLR4 mRNA表达上调(P＜0.01);与B组比较,C组、D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低,TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与C组比较,D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低(P＜0.01),TLR4 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);D组和E组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪啶可通过下调TLR4 mRNA表达,抑制TLR4的合成,从而抑制LPS诱导大鼠外周血单核细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的生成与释放.

Abstract：

Objective To investigate the effects of different concentrations of dexmedetomidine on the expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) mRNA in rat peripheral blood monocytes exposed to lipopolysaccharide ( LPS ). Methods Peripheral blood monocytes isolated from male Wistar rats were seeded in 24-well plate in RPMI 1640 liquid culture medium in CO2 incubator at 37 ℃ and 5% CO2 for 2 h, and were randomly divided into 5 groups ( n = 8 each): group A negative control; group B was exposed to LPS 1 μg/ml and C, D and E groups were exposed to LPS 1 μg/ml + dexmetomidine 0.5, 5.0 and 50.0 ng/ml respectively. The monocytes were then incubated for 24 h. The concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in the supernatant of the cultured monocytes were detected by ELISA. The expression of TLR4 mRNA in the monocytes was detected by RT-PCR.Results Exposure to LPS significantly increased the expression of TLR4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL -6 in group B as compared with group A ( P ＜ 0.01 ). Dexmedetomidine attenuated the LPS-induced increase in the expression of TLR 4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in a dose-dependent manner ( P ＜0.05or 0.01 ). Conclusion Dexmedetomidine can inhibit the synthesis of TLR4 and inhibit the secretion and dilivery of TNF-α, IL-1β and IL-6 by down-regulating the gene expression of TLR4 in rat peripheral blood monocytes exposed to LPS.     

α-黑素细胞刺激素对慢性非细菌性前列腺炎大鼠HMGB1表达的影响

目的 探讨HMGB1在大鼠慢性非细菌性前列腺炎(CNP)发病中的作用和α-MSH治疗大鼠CNP的机制.方法 将30只大鼠随机分为正常对照组,CNP模型组和CNP+α-MSH治疗组,每组10只.H.E染色,光镜下观察各组前列腺组织的病理学表现,采用免疫组化的方法 检测HMGB1、TNF-α和IL-10在各组大鼠前列腺中的表达.Western blot检测HMGB1、TNF-α和IL-10定量变化的情况.结果 (1)所建立的大鼠模型的病理和病理生理学的改变符合CNP的特点;(2)HMGBl和TNF-α在模型组的表达均显著高于正常对照组(P<0.05);(3)治疗组大鼠的前列腺组织中HMGB1和TNF-α表达量显著降低(P<0.05);(4)治疗组大鼠IL-10的表达明显高于模型组(P<0.05).结论 HMGB1可能参与了大鼠慢性非细菌性前列腺炎的发病过程,α-MSH具有抑制炎症因子表达和促进抗炎性细胞因子IL-10表达的作用.     

盐酸戊乙奎醚在大鼠急性重症胰腺炎相关肺损伤中的作用

目的探讨盐酸戊乙奎醚在大鼠急性重症胰腺炎相关肺损伤(PALI)中的作用及对缺氧诱导因子(HIF)-1α相关炎症因子表达的影响。方法 40只健康雄性成年SD大鼠,应用随机数字法分为三组:假手术组(S组,n=8)、PALI模型组(ALI组,n=16)、盐酸戊乙奎醚+PALI模型组(P组,n=16)。ALI组和P组采用4%牛磺胆酸钠1ml/kg逆行性胰胆管注射法建立大鼠PALI模型。P组在建立模型后即刻给予大鼠腹腔内注射盐酸戊乙奎醚,S组和ALI组经腹腔注射等量生理盐水。造模后12h处死大鼠,取肺组织称重后计算肺湿干重比(W/D),光镜下观察胰腺及肺组织病理学评分,ELISA法测定肺组织HIF-1α、IL-1β、IL-6蛋白含量和血清胰淀粉酶含量,Western blot检测肺组织TLR4、NF-κB p65蛋白含量。结果 ALI组和P组大鼠的胰腺组织均存在广泛的中性粒细胞浸润、腺泡出血坏死和脂肪坏死。与S组比较,ALI组与P组胰腺病理评分、肺损伤评分、肺W/D明显升高,胰淀粉酶含量明显降低(P0.01);与ALI组比较,P组肺损伤评分、肺W/D明显降低(P0.05)。与S组比较,ALI组和P组大鼠肺组织HIF-1α、IL-1β、IL-6含量明显升高,肺组织TLR4、NF-κB p65含量明显升高(P0.01);与ALI组比较,P组肺组织HIF-1α、IL-1β、IL-6含量明显降低,TLR4、NF-κB p65蛋白含量明显降低(P0.05)。结论盐酸戊乙奎醚在不改变急性重症胰腺炎的胰腺组织损伤的情况下能够显著减轻急性重症胰腺炎相关肺损伤,机制可能与抑制HIF-1α等相关炎性因子的表达相关。