莪黄汤对结肠癌SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响

目的:了解莪黄汤含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、cyclin D1蛋白表达的影响。方法:通过莪黄汤不同浓度含药血清处理SW480细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期,免疫组化及Western blot检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达。结果:MTT检测显示不同浓度莪黄汤含药血清在体外对结肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,呈时间依赖及浓度依赖关系;流式细胞检测显示莪黄汤可抑制SW480细胞增殖,并提示莪黄汤可能在S期发挥作用,阻止细胞进入G2/M期,其中7.14g/kg组抑制作用最明显;免疫组化及Western检测提示莪黄汤可降低β-catenin及其下游cyclin D1蛋白的表达。结论:莪黄汤可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制SW480细胞增殖发挥抗肿瘤作用。     

苦参碱抑制结肠癌细胞生长和迁移侵袭的作用研究

目的:观察苦参碱对人结肠癌SW480和SW480/M5细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭及AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测AKT、GSK3β和β-catenin及各自磷酸化蛋白水平。结果:苦参碱呈浓度及时间依赖性抑制SW480和SW480/M5细胞的增殖,在24、48、72 h对SW480细胞的半数抑制浓度依次为1 919、832.8、318.1μg/mL,对SW480/M5细胞的半数抑制浓度依次为2 417、947、581μg/mL。苦参碱呈浓度依赖性降低SW480和SW480/M5细胞的克隆形成率,苦参碱可抑制SW480和SW480/M5细胞的迁移和侵袭能力,800μg/mL苦参碱能抑制SW480和SW480/M5细胞内AKT和GSK3β蛋白磷酸化,诱导β-catenin的磷酸化降解。结论:苦参碱可抑制结肠癌SW480和SW480/M5细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力,其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路有关。     

臭牡丹总黄酮对A549细胞增殖迁移侵袭力及Wnt通路相关蛋白的影响

目的:观察臭牡丹总黄酮对β-catenin过表达A549细胞增殖、迁移、侵袭力以及Wnt通路相关蛋白的影响。方法:选取构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将其分为6组,分别为未转染细胞、未转染细胞+臭牡丹总黄酮、空载组、空载+臭牡丹总黄酮、β-catenin过表达组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮。MTT法检测各组细胞的相对存活率,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭力。Western Blot检测各组Wnt通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、c-myc、CyclinD1的表达。结果:转染β-catenin过表达的A549细胞增殖能力、迁移能力、侵袭力均明显增强(P0.05),并显著上调wnt通路相关因子β-catenin、C-Myc,CyclinD的蛋白表达,下调P-GSK-3β的蛋白表达(P0.05)。采用臭牡丹总黄酮干预后,能明显降低各组细胞的存活率,降低细胞向划痕区域迁移的能力,减少侵袭小室穿过基膜的细胞数(P0.05)。并下调β-catenin、C-Myc、CyclinD1表达(P0.05),上调P-GSK-3β表达(P0.05)。臭牡丹总黄酮的干预作用对转染β-catenin过表达细胞尤为明显。结论:转染β-catenin过表达的A549细胞其增殖、迁移、侵袭力均明显增强,能激活Wnt/β-catenin通路。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭力,其机制可能是通过抑制细胞中β-catenin的高表达从而调控下游的一系列因子而起到抑制Wnt/β-catenin通路的作用。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将对数生长期的人口腔癌KB细胞分为对照组及25、50、100、200μmol/L山柰酚处理组;采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time q PCR法检测Bcl-2及Bax基因表达,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达。结果:山柰酚对人口腔癌KB细胞的增殖有明显的抑制作用;与对照组比较,山柰酚各浓度组细胞凋亡率、Bax mRNA表达、Caspase-3活性均显著升高,Bcl-2 mRNA及β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达均显著降低(P0.05或P0.01)。结论:山柰酚具有抑制人口腔癌KB细胞增殖及诱导凋亡作用,该作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾清热活血方含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、周期及P-β-catenin表达的影响

目的:观察健脾清热活血方对人结肠癌SW480细胞凋亡、增殖、周期及P-β-catenin蛋白的影响,探讨该方防治结肠癌可能机制。方法:培养人结肠癌SW480细胞,分别予空白胎牛血清、不同浓度健脾清热活血方含药血清及PI3K阻断剂LY294002干预24 h,MTT法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及细胞周期,免疫荧光染色法检测P-β-catenin核内转位。结果:健脾清热活血方含药血清组细胞增殖抑制率及凋亡率显著高于空白对照组(P0.05);同时S期细胞比例显著升高、G1期细胞比例显著降低(P0.05)。健脾清热活血方含药血清组及LY294002组细胞P-β-catenin以膜表达为主,而空白对照组P-β-catenin以膜表达缺失及核内表达增加为主。结论:健脾清热活血方可能通过调控P-β-catenin核内转录,阻滞SW480细胞周期于G1期,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,从而发挥防治结肠癌的效用。     

姜黄素对人口腔黏膜上皮细胞系增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探究姜黄素对人口腔黏膜上皮细胞系增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:取生长至对数期的人口腔上皮癌Ca9-22细胞,分为对照组及5 μmol/L姜黄素处理组、10 μmol/L姜黄素处理组、20 μmol/L姜黄素处理组、40 μmol/L姜黄素处理组,分别于处理24、48、72 h后采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测不同浓度姜黄素对Ca9-22细胞凋亡的影响,Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-9活性,免疫印迹法检测β-catenin、C-myc、Wnt1、Bcl-2及Bax表达。结果:与对照组比较,不同浓度姜黄素均对人口腔上皮癌Ca9-22细胞的增殖有一定抑制作用,且与浓度、时间有关。5 μmol/L姜黄素处理组、10 μmol/L姜黄素处理组、20 μmol/L姜黄素处理组、40 μmol/L姜黄素组处理48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9活性及Bax mRNA表达均高于对照组,Bcl-2 mRNA及β-catenin、C-myc、Wnt1表达低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:姜黄素可抑制人口腔上皮癌Ca9-22细胞增殖并诱导Ca9-22细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路的表达有关。     

小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖凋亡及糖代谢影响研究

目的:探讨小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖、凋亡和糖代谢的影响。方法:用不同浓度的小檗碱处理MKN45细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC_(50)),分别采用24μmol/L的小檗碱(小檗碱组)、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535(FH535组)以及24μmol/L的小檗碱和FH535联合作用(联合组)MKN45细胞,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞糖代谢指标己糖激酶、丙酮酸激酶相对活性和培养液上清中乳酸相对含量,Western blot法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果:与未使用小檗碱作用的MKN45细胞比较,小檗碱可降低MKN45细胞的吸光度值且呈剂量依赖性,IC_(50)值为(24.38±2.81)μmol/L,因此选用24μmol/L的小檗碱用于后续实验。与对照组比较,小檗碱组、FH535组、联合组细胞A值均显著降低,细胞凋亡率均显著升高,丙酮酸激酶、己糖激酶及乳酸相对含量均显著降低,β-catenin和c-myc蛋白表达水平显著降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高,且联合组的各检测指标均较小檗碱组和FH535组变化明显。结论:小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂均能够抑制MKN45细胞增殖和糖酵解并诱导其凋亡,且二者具有协同作用。     

白皮杉醇对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468抗肿瘤作用及机制

目的:考察白皮杉醇(PIC)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖、凋亡及细胞周期的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法考察PIC(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞成活率的影响,并计算半抑制率(IC50);采用碘化丙啶(PI)染色观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞周期的影响;采用细胞凋亡检测(Annexin V-FITC/PI)双染法观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的诱导凋亡作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察不同浓度PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡蛋白的影响,并用Western blot对分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白进行检测。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,PIC(5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L^-1)可呈浓度依赖性地抑制MDA-MB-468细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),IC50为(39.4±4.6)μmol·L^-1;作用48 h,PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)呈浓度依赖性地升高MDA-MB-468细胞处于细胞周期G0/G1期细胞(P<0.01);呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-468细胞凋亡(P<0.01),其中,PIC(20.0μmol·L^-1)诱导细胞凋亡率为49.87%;PIC(10.0,20.0μmol·L^-1)可明显降低MDA-MB-468细胞中β-catenin及原癌基因(C-myc),黏附因子(CD44)蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01);PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)可显著抑制蛋白激酶B(Akt)磷酸化,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的磷酸化,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平(P<0.01);增强半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化β-catenin的蛋白表达(P<0.01)。结论:PIC可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-468细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而诱导其凋亡。     

汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响研究

目的:探讨汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:常规培养3种常见胃癌细胞株(SGC7901、BGC-823及MKN-45)至对数生长期,采用终浓度0、20、50、100、200μmol/L汉黄芩素处理24、48、72、96 h后采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞的凋亡率及迁移、侵袭能力,Western blotting检测各浓度汉黄芩素作用48 h后SGC7901细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子C-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)的蛋白水平。结果:汉黄芩素在20~200μmol/L范围内可呈浓度和时间依赖性抑制SGC7901、BGC-823及MKN-45细胞增殖。与汉黄芩素0μmol/L组比较,各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞凋亡率均升高,迁移距离和穿膜细胞数均降低(P0.05);除汉黄芩素20μmol/L组的β-catenin水平外,其余浓度SGC7901细胞β-catenin、C-myc及Cyclin D1蛋白水平均低于0μmol/L(P0.05),其作用呈量-效关系。结论:汉黄芩素对胃癌细胞的增殖有抑制作用,同时可诱导凋亡和抑制细胞侵袭和迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

参白解毒方基于Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的：研究参白解毒方对结直肠癌细胞增殖和迁移的药效及其作用机制。方法：用参白解毒方处理人结直肠癌细胞HT29、SW480和SW620,MTT和平板克隆形成实验检测细胞的增殖和自我更新能力;细胞划痕实验检测HT29细胞的迁移能力;实时定量PCR或Western Blot检测上皮-间充质转化（EMT）相关标记物（E-Cadherin、N-Cadherin和Vimentin）、Wnt5a和β-catenin的表达水平;实时定量PCR检测Wnt/β-catenin信号通路下游的结直肠癌肿瘤干细胞标志物CD44和CD133的表达水平。结果：参白解毒方可抑制结直肠癌细胞HT29、SW480和SW620的增殖（P<0.01,P<0.05）,减少HT29细胞形成克隆的数目（P<0.05,P<0.01）;细胞划痕实验结果表明参白解毒方可以显著抑制HT29细胞的迁移（P<0.05,P<0.01）,且具有剂量依赖性。实时定量PCR和Western Blot结果显示,参白解毒方可以剂量和时间依赖性的上调上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA和蛋白的表达,下调间质细胞标...     

Klf4抑制Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞增殖的研究

目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收集病毒上清,用其感染大鼠软骨细胞作为Klf4组,用PCDH-GFP慢病毒感染细胞作为对照组。采用CCK8法检测2组细胞生长增殖变化;采用Western blot方法,分别检测2组细胞中Klf4基因表达、增殖相关基因PCNA和CyclinD1蛋白表达、Wnt/β-catenin信号通路上下游基因表达情况。结果原代培养软骨细胞均强表达Col2a1和Sox9基因。慢病毒PCDH-GFP-Klf4和PCDH-GFP成功感染软骨细胞,Klf4基因在软骨细胞过表达。Klf4组软骨细胞生长明显受到抑制,PCNA和CyclinD1蛋白表达和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达均明显下调。结论过表达Klf4基因可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达而抑制软骨细胞增殖。     

鸦胆子油联合卡培他滨通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导人结直肠癌细胞周期阻滞和增殖抑制

目的:探讨鸦胆子油(Brucea javanica oil,BJO)和卡培他滨(Capecitabine,Cap)合用对体外培养的人结直肠癌LOVO和HT29细胞周期和增殖及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:以CCK-8比色法,检测不同浓度的鸦胆子油(0.0625、0.125、0.25、0.50和1.00mg/ml)、卡培他滨(0.025、0.050、0.100、0.200、0.400μM)作用不同时间(2h、12h、24h和48h)以及单独、联合应用对LOVO和HT29细胞增殖能力影响;PI染色分析鸦胆子油、卡培他滨以及联合应用对细胞周期的影响;免疫印迹法检测结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)和人正常结直肠粘膜细胞系,以及鸦胆子油、卡培他滨单用及合用对细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达影响;实时荧光定量PCR法检测结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)和人正常结直肠粘膜细胞系,鸦胆子油、卡培他滨单用及合用对细胞Wnt3a、β-catenin及其下游Cyclin D1和c-Myc mRNA含量的影响。结果:结直肠癌细胞系(SW620、LOVO、LS174T、HT29和SW116)中β-catenin蛋白和mRNA含量均明显高于正常结直肠上皮细胞系;0.25、0.50和1.00 mg/ml鸦胆子油作用12h(分别为:93.1%,90.8%和90.5%),24h(分别为:76.7%,71.1%和72.7%)可明显抑制LOVO细胞生长,且呈现时间和剂量依赖性的变化,同时抑制HT29细胞,卡培他滨与鸦胆子油作用相同;0.125、0.25、0.50和1.00mg/ml的鸦胆子油联合0.4μM卡培他滨比单独卡培他滨作用结直肠癌细胞系LOVO和HT29的细胞增殖率明显较低,且具有剂量依赖性,分别为:对LOVO分别为70.9%、67.0%、61.3%和55.7%;对HT29分别为70.1%、58.1%、48.3%和40.4%;1.00 mg/ml鸦胆子油和0.4μM卡培他滨合用于LOVO和HT29细胞48 h的增殖抑制率为55.7%和40.4%,明显低于单独使用0.4μM卡培他滨(72.5%和55.1%);DAPI染色证实,合用1.00mg/ml的鸦胆子油联合0.4μM卡培他滨比单独鸦胆子油和卡培他滨作用结直肠癌细胞系LOVO和HT29增殖抑制作用更强;联合使用明显增加两种细胞G1/G0期细胞数量,同时增加G2/M细胞数量;再者,联合使用明显抑制细胞Wnt3a、β-catenin蛋白和mRNA及其下游Cyclin D1和c-Myc mRNA含量表达。结论:鸦胆子油和卡培他滨合用可抑制结直肠癌细胞增殖,促进凋亡,该作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路和细胞周期阻滞实现的。     

左旋紫草素靶向Wnt/β-catenin通路抑制宫颈癌HeLa细胞增殖侵袭迁移的机制研究

目的?观察左旋紫草素对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移及Wnt/β-catenin通路蛋白的影响。方法?设置左旋紫草素浓度梯度为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L，干预HeLa细胞，MTS法检测细胞增殖活力，并筛选最佳干预浓度进行后续实验。后续实验中分为对照组、左旋紫草素 0.5、1、2 μmol/L组。划痕实验检测HeLa细胞24、48 h后细胞的迁移能力；Transwell实验检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后细胞侵袭能力；Western Blot检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后Wnt/β-catenin通路相关蛋白Wnt5a、β-catenin、p-LRP、LRP的表达。结果?左旋紫草素1、2、4、8 μmol/L在24 h可明显抑制HeLa细胞增殖（P<0.05，P<0.01），其抑制作用呈现浓度依赖性；与对照组比较，左旋紫草素0.5、1、2 μmol/L组细胞穿过率明显降低，细胞穿过基质胶的能力随着药物浓度的加大而降低（P<0.01），同时Wnt5a、β-catenin、p-LRP蛋白表达下降（P<0.05，P<0.01）。结论?左旋紫草素可通过下调Wnt/β-catenin信号通路，抑制HeLa细胞增殖、侵袭、迁移功能。     

桑根白皮素调控人结肠癌HCT116细胞周期阻滞及其抑制细胞增殖的体外研究

目的观察中药提取物桑根白皮素对结肠癌HCT116细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响,探讨其相关机制。方法体外以不同浓度桑根白皮素作用于HCT116细胞72 h,CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率和IC50,取25.4μmol/L和50.8μmol/L桑根白皮素作用于HCT116细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞增殖,镜下观测细胞形态并摄图;25.4μmol/L桑根白皮素作用于细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光显微镜下TUNEL法原位检测细胞凋亡;Western blot检测药物干预后β-catenin通路蛋白和细胞周期蛋白的表达变化。结果桑根白皮素对HCT116细胞增殖的抑制作用呈浓度/时间依赖性,72 h IC50为25.4μmol/L;桑根白皮素阻滞HCT116细胞周期于G0/G1期和G2/M期,对细胞凋亡无明显诱导作用;桑根白皮素显著降低β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc及细胞周期调控蛋白cyclin D1、cyclin B1的表达。结论桑根白皮素可阻滞HCT116细胞周期,抑制细胞增殖,其机制可能是通过下调β-catenin通路活性,并抑制细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin B1表达实现的。     

白屈菜红碱对黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究

目的探讨白屈菜红碱对黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的影响。方法高(8μg/ml)、中(4μg/ml)、低(2μg/ml)浓度的白屈菜红碱处理对数生长期的B16细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)、Annexin V-FITC/PI双染联合流式细胞术、实时定量聚合酶链式反应(real-time q PCR)及免疫印迹(western blot)法检测细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡相关基因及β-catenin、原癌基因(C-myc)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达水平。结果白屈菜红碱能有效抑制B16细胞的增殖,且能提高B16细胞的早期凋亡率及晚期凋亡率,与空白组比较,差异具有统计学意义(P0.05);与空白组比较,白屈菜红碱可显著升高半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Bax的基因表达水平,降低Bcl-2基因表达水平及β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表达水平(P0.05)。结论白屈菜红碱具有抑制B16细胞增殖及诱导凋亡作用,该作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

健脾复方通过Exo-Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移机制研究

目的:探究大肠癌侵袭转移中健脾复方对Wnt3a/5a调控Wnt/β-catenin信号通路的作用机制。方法:建立裸鼠人肠癌转移瘤模型,使用低、中、高剂量的健脾复方进行治疗干预,同时设阳性对照组及空白对照组,收集裸鼠血清,并保留瘤体,使用WB检测Exo-Wnt3a/5a、β-catenin、MMP-7、C-MYC、CyclinD1等信号分子。结果:β-catenin、MMP-7、C-MYC、CyclinD1在健脾复方高剂量组中表达水平最低,β-catenin异常表达与MMP-7、C-MYC、CyclinD1在大肠癌肿瘤细胞中出现高表达有明显正相关性(P<0.05)。结论:健脾复方可下调Wnt3a/5a,从而降低大肠癌细胞的增殖、侵袭,并增加对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用,从而控制大肠癌的发展及转移。     

木香烃内酯通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨木香烃内酯对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:不同浓度(10、20、40μmol/L)木香烃内酯作用结直肠癌细胞SW480,并设空白对照组、溶剂对照组和紫杉醇组,MTT和平板克隆实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot检测与增殖、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白、LASP1、PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。应用Lipofectamine~(TM)2000将真核表达载体pCDNA-LASP1和空载体pCDNA导入SW480细胞,观察LASP1过表达后木香烃内酯对SW480增殖、凋亡、迁移和侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。结果:与空白对照组比较,40μmol/L木香烃内酯组SW480细胞活力、细胞迁移和侵袭数量显著降低、凋亡率显著升高,CDK1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、LASP1、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达显著降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著升高。空白对照组和溶剂对照组各检测指标差异无统计学意义(P0.05)。LASP1过表达可逆转木香烃内酯对SW480细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K、AKT、mTOR蛋白表达的抑制作用,并逆转木香烃内酯对SW480细胞的凋亡促进作用。结论:木香烃内酯可能通过抑制PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的]探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。[方法]人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a c DNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a c DNA表达载体48 h后加入20μmol/L姜黄素,对照组转染pc DNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果]Western blot检测证实,转染pc DNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组(t=2.782,P=0.049)。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义(t=2.951,P=0.018)。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论]在SRA01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。     

不同浓度的Chir99021对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达的影响

目的:探讨不同浓度的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021对体外培养的大鼠软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达的影响。方法:新生24hSD大鼠8只(雌雄不限),取出关节软骨进行软骨细胞培养,细胞培养48h后进行软骨细胞免疫荧光鉴定。以不同药物浓度将软骨细胞分为四组,分别加入浓度为0.00μmol/L(对照组),0.75μmol/L,1.50μmol/L,3.00μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021进行干预。24h后分别观察不同浓度组细胞形态的变化,蛋白印迹分析法(Western blot)检测Ⅱ型胶原、β-catenin和PCNA蛋白的表达情况。结果:在0.00μmol/L(对照组),0.75μmol/L,1.50μmol/L,3.00μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021干预下,各组细胞数量明显逐渐增加,与对照组相比较,各加药组β-catenin和PCNA蛋白的表达逐渐上调(P0.05),而Ⅱ型胶原蛋白的表达逐渐下降(P0.05)。结论:不同浓度的Chir99021激活Wnt/β-catenin信号通路后明显促进了软骨细胞的增殖,却抑制了软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原。