赤芝孢子粉和子实体主要化学成分变异规律研究

目的:揭示产地、品种、采收部位和潮次、破壁技术对赤芝孢子粉和子实体中总三萜、总多糖、总蛋白含量的影响。方法:收集龙芝1号、沪农1号、市售赤芝孢子粉和子实体,分别采用硫酸-蒽酮比色法、香草醛-冰醋酸比色法和Lowry法测定其中总多糖、总三萜、总蛋白的含量。结果:全国6个主产区的破壁孢子粉总多糖为0.40%~2.25%,总三萜为1.36%~3.15%,总蛋白为0.74%~1.91%;浙江主栽赤芝品种子实体总多糖、总三萜、总蛋白质量分数分别为0.25%~1.42%,0.44%~1.42%,1.82%~3.67%,未破壁孢子粉分别为0.41%~0.91%,0.09%~0.12%,0.78%~0.90%,破壁孢子粉分别为1.03~2.25%,1.89%~3.15%,0.96%~1.04%。结论:全国不同主产区的灵芝破壁孢子粉化学成分含量存在显著差异,浙江产区总多糖和总三萜含量较高,福建产区总蛋白含量较高;浙江主栽赤芝品种龙芝1号总三萜含量较高,沪农1号总多糖含量较高;破壁孢子粉中总三萜与总多糖含量高于子实体,子实体菌柄中总多糖含量大多高于菌盖,菌盖中总三萜含量显著高于菌柄;2潮采收的菌盖和菌柄中总多糖含量高于1潮相应的部位,但总三萜含量大多低于1潮;孢子粉破壁可显著提高总三萜和总多糖的提取和溶出率。     

六种不同来源灵芝的质量差异性研究

目的:比较六种不同产地灵芝中灵芝酸A、B,灵芝多糖及灵芝总三萜的含量差异。方法:利用UPLC法对灵芝酸A、B的含量进行测定;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;利用有机溶剂提取灵芝三萜,以熊果酸为对照品,紫外-可见分光光度计在548.1nm波长下测定其吸光度测定总三萜的含量。结果:不同产地灵芝中灵芝酸A、B,灵芝多糖及灵芝总三萜含量具有明显差异。结论:由于不同的栽培条件,地理气候条件等许多因素的影响,各地人工栽培的灵芝的主要成分之间存在明显不同。     

不同品种灵芝主要活性成分分析

目的:对不同品种灵芝子实体中4类活性成分进行测定分析,为灵芝品种专用化育种提供依据.方法:采用紫外分光光度法测定灵芝样品总多糖、总三萜和蛋白质含量;采用反相高效液相色谱法测定灵芝样品麦角甾醇含量.结果:不同品种灵芝子实体中总多糖、总三萜、蛋白质均为含量较高的主要成分,但麦角甾醇的含量极低;4类成分在不同灵芝品种中含量差异显著,含量之间未发现有相关性.结论:灵芝多糖、三萜、蛋白质这3类各具典型功效的主要成分含量测定对灵芝子实体的质量控制均有重要的意义,并且可为制剂生产、临床应用的专用品种选育提供科学依据.     

灵芝不同生长阶段三萜酸含量变化研究

目的:揭示不同生长发育阶段灵芝生长与灵芝三萜酸含量的相关性,探索灵芝的最佳采收时期。方法:对不同生长发育阶段的灵芝,采用"烘干恒重法"测定干重,HPLC测定灵芝10种三萜酸的含量。采用Alltima C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,柱温15℃。结果:灵芝总三萜酸的含量在灵芝现蕾期、菌盖形成期变化不明显,弹孢前期最高,在弹孢后期显著降低。灵芝酸A是灵芝子实体内含量最高的灵芝三萜酸,7种灵芝酸的含量均在弹孢前期最高。结论:对灵芝生长和不同生长发育阶段灵芝三萜酸含量变化研究发现灵芝子实体最佳采收时期应该是灵芝弹孢前期。     

HPLC测定不同产地灵芝中9种三萜酸

目的:建立HPLC测定灵芝子实体中9种三萜酸的方法.方法:采用Alltima C18色谱柱(4.6 mm × 150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04％甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温15℃.结果:灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、赤芝酸A、灵芝烯酸D、灵芝酸C1的线性范围分别为6.81～40.88,6.38 ～38.25,6.75～40.50,6.38～ 38.25,5.95 ～ 35.65,5.90 ～ 35.25,7.00 ～ 42.00,6.20 ～ 37.15,6.05 ～ 36.4 mg· L-1(r=0.999 4,0.999 2,0.999 4,0.999 2,0.999 2,0.994 5,0.999 0,0.999 2,0.998 4),加样回收率分别为102.1％,102.3％,100.6％,103.3％,104.1％,103.2％,96.42％,102.5％,101.5％,RSD为1.5％,0.96％,1.9％,1.3％,1.7％,2.5％,0.62％,2.9％,1.3％.测定了31个不同地区、不同栽培条件下灵芝样品的三萜含量.结论:该方法可行、重复性好,可定量测定灵芝中三萜酸的含量.     

超临界CO2萃取灵芝子实体中的三萜类成分

目的：筛选超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件。方法：采用RP—HPLC测定灵芝酸B的含量、可见分光光度法测定灵芝总三萜含量，设计正交试验优化超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分的工艺条件。结果：超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件：萃取压力为25MPa，萃取温度为45℃，萃取时间为1．5h，夹带剂（95％乙醇）用量为3mL·g^-1。结论：超临界CO2萃取灵芝子实体中三萜类成分具有萃取效率高、萃取时间短、操作简单等优点，其方法可靠，切实可行。     

反相高效液相色谱法测定赤芝中灵芝酸的含量

 目的 研究不同地区栽培赤芝及好生赤芝灵芝酸类成分的含量差异。方法 应用反相高效液相色讲法分离测定了赤芝中4种化学成分[灵芝酸A(Ⅰ),灵芝酸C(Ⅱ),灵芝酸D(Ⅲ),灵芝酸E(Ⅳ)],对不同地区2种好生赤芝和不同地区4种栽培赤芝子实体中该4种成分定量分析。色谱柱YWG-C〈sub〉18〈/sub〉(250 mm×4.6 mm,10 μm),甲醇水-乙酸(49.5:49.5:1)为流动相,流速1.0 ml·min〈sup〉-1〈/sup〉,柱温为室温,检侧波长250 nm;4种成分的线性范围分别为(0.098～3.138)μg,(0.091～2.913)μg,(0.089～2.850)μg和(0.089～2.850)μg,回收率分别为93.93%,96.83%,93.0l%,90.40%。结果 栽培赤芝和野生赤芝子实体中4种灵芝酸成分的总含1分别为0.799～3.555 mg·g〈sup〉-1〈/sup〉和1.619～2.360 mg·g〈sup〉-1〈/sup〉。结论不同地区栽培赤芝之间和不同地区野生赤芝之间灵芝酸含量差异较大;裁培赤芝中灵芝酸含1不低于野生赤芝中灵芝酸含量。本法可作为控制灵芝生药质量的一种很好方法。     

超临界CO_2萃取法和醇回流法提取灵芝中三萜类成分的比较

目的:比较超临界CO2流体萃取法(CO2-SFE)和醇回流提取法提取灵芝中三萜类成分的优劣。方法:通过HPLC图谱、RP-HPLC法测定的灵芝酸B含量、可见分光光度法测定的灵芝三萜含量、固形物含量等4个指标综合评价这两种提取方法。结果:超临界CO2流体萃取法和醇回流提取法这两种方法得到的三萜类成分的色谱图具有相似的峰形,灵芝三萜和灵芝酸B含量相近,固形物含量以醇回流法较高。结论:超临界CO2流体萃取法与传统的醇回流提取法提取效果相似,可以取代醇回流提取法提取灵芝子实体中三萜类成分。     

一测多评法定量分析灵芝及灵芝孢子粉中单体三萜成分的应用

目的:建立灵芝及灵芝孢子粉中灵芝酸A、灵芝酸C_2的一测多评含量测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,以灵芝酸A为内标物,建立其与灵芝酸C_2的相对校正因子,并进行含量测定,实现一测多评。采用外标法测定10批灵芝及灵芝孢子粉中灵芝酸C_2含量验证一测多评法的准确性。结果:采用外标法、一测多评法测得灵芝酸C_2含量的平均相对误差为1.07%,含量计算值与实测值无统计学差异(P0.05)。结论:建立的校正因子在不同实验条件下重现性良好,在对照品缺乏的情况下,以灵芝酸A为内参物建立灵芝孢子粉中2种指标成分含量测定的一测多评法可行。     

超临界CO2萃取灵芝子实体中的三萜类成分

目的：筛选超临界CO₂萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件。方法：采用RP-HPLC测定灵芝酸B的含量、可见分光光度法测定灵芝总三萜含量，设计正交试验优化超临界CO₂萃取灵芝子实体中三萜类成分的工艺条件。结果：超临界CO₂萃取灵芝子实体中三萜类成分的最佳工艺条件：萃取压力为25 MPa，萃取温度为45 ℃，萃取时间为1.5 h，夹带剂(95%乙醇)用量为3 mL·g^-1。结论：超临界CO₂萃取灵芝子实体中三萜类成分具有萃取效率高、萃取时间短、操作简单等优点，其方法可靠，切实可行。     

灵芝子实体与菌丝体及破壁菌丝主要活性成份的比较

目的:对人工栽培的灵芝子实体、茵丝体及破壁处理菌丝体的主要化学成分进行测定分析,为灵芝药材品质及检测产品质量提供依据.方法:用硫酸蒽酮法测定灵芝多糖含量;采用齐墩果酸作对照,香草醛一冰醋酸显色,分光光度计测吸光值测定三萜化合物.结果:无论多糖还是三萜化合物,菌丝体含量均高于子实体,破壁处理高于未处理.     

灵芝破壁孢子粉中总三萜酸含量测定

灵芝孢子为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.exFr.) Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang的子实体发育后期弹射释放出的种子,是灵芝的生殖细胞.孢子内含有脂肪油、三萜酸类、多糖等;孢壁含有纤维索2.36～3.52％,几丁质52.08％～57.64％[1],矿物元素硅9.2mg/g和钙713μg/g等,使得孢壁坚硬有韧性[2],结构复杂且耐酸、碱,孢子内含物的有效成分在体内难以释放,影响临床疗效[3],故采用现代工艺技术进行破壁,称破壁孢子粉.近代药理研究证明灵芝破壁孢子粉有抗肿瘤、增强免疫、降血糖、降血脂、镇静、清除自由基、抗辐射、促进新陈代谢、延缓衰老[4-6]等作用,而灵芝三萜类化合物涵盖了绝大部分孢子粉的药理活性.因此,对破壁孢子粉中三萜酸含量进行测定有利于控制其质量.文献报道的总三萜酸测定方法有5％的香草醛-冰醋酸溶液、高氯酸溶液显色法[7-10]、硫酸无水乙醇检测法[11]等.但上述方法都忽略了脂肪油对三萜酸含量测定的干扰,从而影响了测定结果的准确性.本文采用萃取法对灵芝破壁孢子粉三萜酸提取液进行除油预处理,既消除脂肪油对三萜酸测定的干扰,义避免显色过程的不平行性对结果的影响,使测定结果更准确的反映破壁孢子粉中总三萜酸的含量.     

灵芝孢子粉的质量研究

目的:建立灵芝孢子粉的质量标准。方法:采用显微观察法、含油率测定法、TLC法、酚-硫酸法测定多糖含量,HPLC法测定腺苷含量及薄层-分光光度法测定总三萜含量,对灵芝孢子粉的质量进行了较全面的研究。结果:采用上述方法,可以有效控制灵芝孢子粉的内在质量。结论:可以通过测定灵芝孢子粉的破壁率、含油率,TLC特征斑点及多糖含量、腺苷含量、总三萜含量等指标,有效控制灵芝孢子粉的质量。     

一种灵芝孢子粉收集器的研究

目的:开发一种方便实用、低本高效的灵芝孢子粉收集器,收集优质灵芝孢子粉.方法:利用白卡纸或油光纸等通用材料,生产灵芝孢子粉收集器,以温度、湿度为主要指标比较孢子粉采集器对灵芝生长环境的影响,并调查集粉效果.结果:研发的灵芝孢子粉采集器能有效地把灵芝子实体与外界相对隔离,形成一个基本封闭的独立空间,阻止了孢子粉的自由飘散;孢子粉采集器的使用对灵芝生长的温度与湿度等环境影响小,不仅不会影响灵芝子实体发育,而且因采集器内空气相对湿度变化更趋平缓而更有利于孢子粉的散发.结论:该灵芝孢子粉采集器孢子粉收集效率高、质量好,大面积应用时灵芝孢子粉产量可达孢子粉与灵芝子实体总量的38.3%.     

长白山林下仿野生栽培紫芝主要活性成分研究

目的:对长白山林下仿野生栽培紫芝子实体中3类活性成分进行分析研究,为其开发利用提供依据。方法:以长白山林下仿野生栽培紫芝子实体为研究对象,采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱法对超临界CO2萃取得到的紫芝油中三萜类成分进行分析,采用气相色谱-质谱法分析紫芝油中脂肪酸类物质的组成,采用苯酚-硫酸法测定提取紫芝油后的残渣中多糖含量。结果:长白山林下仿野生栽培紫芝油中含有较丰富的三萜酸类成分,总三萜占紫芝油质量的40%,并初步分析了其中含有Ganoderic acid A等15个三萜酸的结构;紫芝油中共检出15种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸占68.9%,含量较大的为油酸和亚油酸;经测定提取紫芝油后的残渣中多糖含量为0.79%;结论:本品中含有丰富的多糖、三萜和脂肪酸这3类活性成分,表明长白山林下仿野生栽培紫芝具有很大的应用开发价值。     

药用拟层孔菌子实体提取物的抗肿瘤活性研究

目的:测定药用拟层孔菌子实体的石油醚粗提物、乙酸乙酯粗提物和甲醇粗提物的总三萜及总甾醇含量;研究3种粗提物及从乙酸乙酯粗提物中分离得到的三萜类单体化合物的体内抗肿瘤活性。探讨其抗肿瘤活性与总三萜和总甾醇含量的关系。方法:通过分光光度法测定3种粗提物的总三萜和总甾醇含量。通过H22荷瘤小鼠移植模型的体内抗肿瘤实验,观察该真菌子实体的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物及三萜类单体化合物的抗肿瘤活性进行评价。结果:乙酸乙酯粗提物中总三萜含量和总甾醇含量最高,石油醚次之。从乙酸乙酯层分离得到5个单体化合物:去氢齿孔酮酸,3-酮基-去氢硫色多孔菌酸,去氢齿孔酸,阿里红酸A和阿里红酸C。在体内实验中,乙酸乙酯层抑瘤率效果最佳,当浓度达到1 000mg·kg~(-1)时抑瘤率为64.65%,与阳性药5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抑瘤率(59.98%)接近,并且免疫器官指数均有一定的变化。单体化合物2(3-酮基-去氢硫色多孔菌酸)抑瘤率为75.13%,与阳性药物CTX(81.76%)抑瘤率接近,比阳性药5-Fu高。其余4种单体化合物也有一定作用效果。结论:乙酸乙酯提取物及这5种单体化合物能有效抑制肿瘤的生长,并且对机体的免疫力有较好的促进作用,该5种单体化合是药用拟层孔菌子实体的抗肿瘤活性成分,药用拟层孔菌的抗肿瘤活性成分可能是三萜类化合物。     

HPLC法测定不同品种及段木栽培灵芝子实体中麦角甾醇含量

目的:以麦角甾醇为测定指标,建立灵芝子实体质量评价的HPLC方法,对不同品种及段木栽培灵芝子实体中麦角甾醇的含量进行比较研究。方法:采用HPLC法定量分析17个不同品种及14个不同段木树种的栽培灵芝子实体。色谱柱:Diamonsil C18,流动相:乙腈,流速:1.0 mL/min,柱温:40℃,检测波长:282 nm。结果:确定了灵芝子实体中麦角甾醇的提取方法和HPLC含量测定方法。不同品种麦角甾醇含量范围为0.093%～0.243%,其中韩芝-2号、圆芝、明-1、野生1号同时具有较高的麦角甾醇含量和转化率;不同段木树种麦角甾醇含量范围为0.080%～0.227%,以白栎、杨梅的麦角甾醇含量及转化率均较高。结论:本方法操作简便、结果准确,可用于灵芝子实体中麦角甾醇的含量测定和灵芝质量评价研究,为人工栽培灵芝的品种及段木树种的选择提供了参考。     

不同品种灵芝中三萜类化合物的比较研究

本研究利用HPLC对同一灵芝菌种不同生长阶段及不同品种灵芝子实体中三萜类化合物的含量和图谱进行了分析.结果表明在液体发酵7天左右的灵芝菌丝体中灵芝三萜类化合物的含量极低,而不同生长阶段的灵芝子实体中的三萜类化合物的变化较小,孢子粉中三萜类化合物的含量较子实体中低.不同品种的灵芝子实体中三萜类化合物的种类和含量存在差异,黑芝中几乎不含三萜类化合物.     

海南产不同种类灵芝活性分析及其总三萜含量分析

目的比较海南产不同种灵芝子实体中总三萜(TGT)含量,分析比较灵芝子实体乙醇粗提物的生物活性。方法以齐墩果酸为对照品,用香草醛-高氯酸显色,测定海南产17种灵芝子实体总三萜含量,并采用PNPG法、DPPH法和MTT法测定海南产17种灵芝乙醇粗提物的α-糖苷酶抑制活性、抗氧化活性和抗肿瘤活性。结果海南产17种灵芝子实体总三萜含量在0.274%～0.975%,其中黄边灵芝含量最高,橡胶灵芝含量最低。对浓度为25 mg/ml的海南产17种灵芝乙醇粗取物活性进行测定,结果显示,喜热灵芝、南方灵芝、茶病灵芝和紫光灵芝乙醇粗提物对α-糖苷酶的抑制率均达到了65.0%以上,阿卡波糖(5 mg/ml)对α-糖苷酶的抑制率为32.3%;浓度为25 mg/ml的喜热灵芝、布朗灵芝、大青山灵芝、紫光灵芝及热带灵芝乙醇粗提物对DPPH清除率均大于75.0%,坏血酸(5 mg/ml)清除率为84.6%;赭漆灵芝、橡胶灵芝、吊罗山灵芝和栽培赤芝等一半以上灵芝乙醇粗提物有一定的抗肿瘤活性。结论海南产不同灵芝TGT含量差异较大,其生物活性差别也较大,灵芝乙醇粗提物的α-糖苷酶抑制活性、抗氧化活性及抗肿瘤活性与其TGT含量无显著相关。     

松杉灵芝的化学成分研究(Ⅱ)

目的研究松杉灵芝子实体的化学成分。方法采用硅胶、凝胶色谱法进行分离纯化,波谱法进行结构鉴定。结果从乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离得到8个三萜类化合物。结构鉴定为:灵芝醇A(ganoderiol A,Ⅰ)、灵芝酮三醇(ganodermanontriol,Ⅱ)、灵芝三醇(ganodermatriol,Ⅲ)、灵芝酸C(ganodericacid C,Ⅳ)、灵芝酸A(gan-odericacid A,Ⅴ)、赤芝酮A(lucidone A,Ⅵ),赤芝酸C(lucidenicacid C,Ⅶ)、赤芝酸LM1(lucidenic acid LM1,Ⅷ)。结论化合物Ⅰ～Ⅷ均为首次从松杉灵芝中分离得到。