激光共焦扫描显微镜在针灸经络研究中的应用(推荐一种现代科学研究手段)

本文介绍了激光共聚焦扫描显微镜系统的工作原理、优良性能及其在生物学中的应用。与普通光学显微镜相比，共焦显微镜具有可获得高质量的荧光图象和三维重组图象，可对细胞内离子浓度变化进行测量，可进行胞间通讯研究等优势，将该仪器引入针灸经络的研究将对针灸经络研究提供更多的手段。     

活体激光扫描共聚焦显微镜在睑缘蠕形螨检查中的应用

目的 对比活体激光扫描共聚焦显微镜(IVCM)与传统的光学显微镜对睑缘蠕形螨的检出阳性率,评价其临床应用价值。方法 收集2020年10月—2021年2月期间就诊于中国中医科学院西苑医院眼科门诊的患者93例(186只眼)。对同一患者分别使用IVCM法与光学显微镜法检测蠕形螨感染情况,记录不同方法检测出的蠕形螨的阳性率、漏诊率和检出蠕形螨数量的分布情况,比较光学显微镜检查法检测上、下睑缘的检出率。结果 (1)阳性率：2种方法检测蠕形螨均为阴性的患者8例(8.60%)。IVCM检测阳性83例(89.25%),高于光学显微镜检测阳性的56例(60.22%),差异有统计学意义(χ²=20.755,P=0.000)。(2)上、下睑缘检出蠕形螨阳性率：光学显微镜法检出上、下睑蠕形螨均为阳性或均为阴性的患者84例(90.32%),不一致的患者9例(9.68%)。(3)漏诊率：IVCM法漏诊3例(3.23%),低于光学显微镜法漏诊24例(25.81%),差异有统计学意义(χ²=19.107,P=0.000)。(4)蠕形螨数量的分布情况：2种检查方法检xu出不同...     

激光共聚焦显微镜技术在中药研究中的应用

激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)是近年来发展起来的一种高精度显微镜,具有高分辨率、高灵敏度、三维重建等优点,作为现代化的显微成像系统,被广泛应用于生物、医药、化工等研究领域,在中药研究中发挥日趋重要作用。本文概述了LSCM技术的基本原理及其在中药组织形态、组织结构、遗传育种、药效学等方面的应用,并对该技术存在问题及在中药研究领域的应用前景进行了讨论和展望。     

针灸基础实验领域中小动物活体成像技术的应用与研究现状

随着影像技术的发展,小动物活体成像技术在生物医药研究中应用越来越广,为探索针灸治病机制、经络实质和腧穴的特异性提供了更有效的研究工具.围绕活体成像技术,介绍医学研究中应用较广泛的活体成像技术的特点及其在针灸基础实验领域中应用所取得的相关研究成果,使针刺研究在活体可视化的状态下,更加客观的揭示针刺的作用机制,消除了过去多次试验过程中所产生的个体差异的误差,为影像技术在针刺研究中找到更好的契合点提供了些许帮助,并讨论影像技术在针灸中的发展趋势.     

激光共聚焦显微技术及其在抗肿瘤药物研究中的应用

激光共聚焦显微镜(1aser scanni con focal microscope，ISCM)是一项集激光技术、电子技术、光学设计及计算机于一体的高科技产品，由激光器、荧光显微镜、共聚焦探测系统和图像分析系统等几部分组成，是近代生物医学图像分析仪器最重要的发展之一，它是在荧光成像基础上加装激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，使用紫外线或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，在亚细胞水平上观察诸如Ca2 、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的工具。     

激光共聚焦显微镜比较观察甾体皂苷Trilliuo、Lc253、Lc239对培养心肌细胞内[Ca2+]i的作用

目的：薯蓣皂苷元的皂苷为许多抗心血管中药中的主要活性成分，具有重要研究价值。本研究以经人工合成获得的薯蓣皂苷元皂苷同系物甾体皂苷Trilliuo(署蓣皂苷元葡萄糖苷、Lc253[薯蓣皂苷鼠李糖(1→2)葡萄糖苷]、Lc239(薯蓣皂苷元[鼠李糖(1→2)，葡萄糖(1→3)]葡萄糖苷)为研究对象，通过考察它们对培养心肌细胞钙离子释放的影响，分析其构效关系。方法：利用激光共聚焦显微镜测定加入fluo3—AM培养的心肌细胞中的钙离子变化情况。结果：Lc253能明显增强心肌细胞节律性和呈浓度依赖性增加心肌细胞静息钙离子水平，加入CaCl2 10mmol/L or KCl 60 mmol/L后钙离子荧光峰强度仍维持在较高水平；而Trilliuo and Lc239在10^—5mmol/L浓度时，对心肌细胞静息钙离子水平作用不明显，在高浓度胞外Ca^2 或K^ 情况下，抑制心肌细胞内钙离子升高；其作用特点与verapamil相似，具有钙离子通道阻断作用。结论：研究结果显示三种甾体皂苷对细胞内钙离子浓度有所差异，结构中连接糖的数目与调孔钙内流的活性有重要的相关性。这些皂苷类化合物对钙离子通道的活性有潜在的开发价值。     

HPLC、HPLC-MS在经方成分分析及Co-IP、激光共聚焦在经方药理机制研究中的应用

经方用药精妙、临床疗效卓越,为历代医家所尊崇,也是科学研究者的重点研究对象。经方药物组成多样、成分复杂。经方的现代研究面临药理作用机制复杂、有效成分不明确等问题,从而制约了经方在现代医学领域的推广以及国际化的进程。HPLC及HPLC-MS联用技术广泛被应用到药物的分析、质控,同样适用于经方的成分分析。文章介绍了HPLC及HPLC-MS联用技术在经方成分及含量的鉴定中的应用,包括经方样品的前处理、经方成分的定量、定性分析以及经方的药物代谢研究等方面。免疫共沉淀技术可用于检测经方对蛋白之间的相互作用的影响,激光共聚焦技术可用于观察经方对蛋白、离子等的分布、转移的影响。结合免疫共沉淀与激光共聚焦技术,能更好地解析经方药理作用的分子机制,因此,文章对免疫共沉淀及激光共聚焦技术在经方现代药理研究中的应用也进行了介绍。     

透明质酸修饰的包载人参中3种成分纳米脂质载体抗肿瘤活体靶向与组织分布研究

目的采用人肝癌SMMC-7721细胞移植裸鼠,研究包载人参3种成分(齐墩果酸、熊果酸、人参皂苷Rg3,OUR)的透明质酸(hyaluronic acid,HA)修饰的纳米脂质载体(HA-OUR-NLC)在荷瘤小鼠体内的分布情况。方法以FITC和DiR为荧光探针,采用荧光内窥式共聚焦成像和小动物活体成像技术动态监测HA-OUR-NLC靶向到各组织器官的行为过程。结果 HA-OUR-NLC可明显提高齐墩果酸、熊果酸、人参皂苷Rg3在肿瘤中的相对摄取率(RUE),分别达到2.51±1.23、2.27±1.43和2.77±0.25,表明经过HA修饰的纳米粒可增强药物在肿瘤中的摄取。Di R-HA-OUR-NLC组荷瘤裸鼠肿瘤区域可以明显观察到较强的荧光信号,显著高于DiR-OUR-NLC组。结论 HA-OUR-NLC能够在肝肿瘤部位富集,可明显提高给药系统的肿瘤靶向性。     

针刺“足三里”对大鼠胃血流影响的激光多谱勒血流成像的初步观察

目的:观察针刺对胃脏血流灌注的影响,探讨激光多谱勒血流成像技术在针灸内脏效应研究中的应用价值。方法:应用激光多谱勒血流灌注成像仪(LDPI)观察针刺大鼠“后三里”穴后胃脏血流灌注和微循环分布的改变。结果:激光多谱勒血流图对针刺前后的胃脏血流分布的改变显示清晰。自然状态下,胃脏激光多谱勒血流图呈现出从胃小弯向胃大弯放射状血流分布的扇形特征。不针刺对照组在观察的时间内胃部血流量有逐渐减少的趋势。针刺“后三里”穴后,胃脏血流灌注明显增加,除扇形分布的血管血流量较高外,其它部位的微循环血流量也明显增多,停针10 min时血流增加最多。结论:LDPI能以图像的形式显示针灸对胃脏的血管反应,该新技术方法在针灸内脏效应的研究方面将有一定的应用价值。     

用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测六君子乙酸乙酯部位对食管癌Eca9706细胞增殖的抑制作用

目的:研究六君子乙酸乙酯部位对食管癌Eca9706细胞增殖的影响。方法:MTT法检测六君子乙酸乙酯部位对食管癌Eca9706细胞株生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡小体。结果:在6.25²00μg/ml范围内,不同浓度六君子乙酸乙酯部位能有效抑制Eca9706细胞增殖。用27.66μg/ml、93.00μg/ml、133.70μg/ml的六君子乙酸乙酯部位作用Eca9706细胞48小时,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义,并且在激光共聚焦显微镜下观察到凋亡小体。结论:六君子乙酸乙酯部位能显著抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

基质辅助激光解吸电离成像质谱法可视化分析制川乌炮制过程生物碱空间分布的研究

目的 采用质谱成像显微镜可视化分析制川乌炮制过程中6个生物碱的变化情况。方法 准备不同炮制时间(9个时间点)的制川乌样品,用明胶溶液包埋后冷冻,制备30 μm厚度的切片样品进行实验。根据乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱共6种标准品的质谱信号,选取α-氰基-4-羟基肉桂酸为基质,采用升华法涂覆基质后再进行喷雾。质谱数据采集质量范围为m/z 200~800,使用DHB溶液在m/z 100~900进行质量校正,以1 000 Hz频率的正离子模式进行基质辅助激光解吸-质谱成像(MALDI-MSI)。通过超高效液相色谱(UHPLC)测定不同炮制时间样品中6个生物碱的含量,用含量测定结果验证质谱成像结果的准确性。结果 质谱成像技术可以区分制川乌不同炮制程度的样品,并且可以实现生物碱空间分布的可视化分析。结论 质谱成像技术可运用于制川乌炮制过程质量研究,为中药炮制研究提供一种新思路。