脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑cAMP/PKA信号通路变化的研究

目的:探讨脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路变化。方法:30只SPF级雄性大鼠,随机分为正常组,脾气虚组,鱼藤酮高剂量组(2.0 m L/kg),中剂量组(1.5 m L/kg),低剂量组(1.0 m L/kg),每组6只。采用ELISA法检测各组大鼠下丘脑组织c AMP活性,Real Time PCR法和Westernblot法检测蛋白激酶(cyclic-AMP-dependent protein kinase,PKA)、糖原磷酸化酶(glyeogenphospholase,Gp)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase,PHK)的mRNA及其表达量。结果:与正常组大鼠比较,脾气虚证组及鱼藤酮3组大鼠的下丘脑组织c AMP活性及PKA、Gp、PHK mRNA和蛋白的表达均有不同程度的减弱,鱼藤酮中剂量组的结果与脾气虚证组最为相似。结论:脾气虚证大鼠与鱼藤酮损伤大鼠之间下丘脑c AMP/PKA信号通路的变化存在相关性,其中c AMP-PKA信号通路可能参与调控。     

浅谈脾气虚在肝纤维化中的作用

肝纤维化是慢性肝病进展的共同病理阶段,属于中医的"症积""胁痛"等疾病范畴。在慢性肝病的早期及中期阶段,由于正气不足,无力抵邪外出;病程日久,正虚加剧,脾气虚证为其常见证型,并贯穿疾病始终。目前临床使用的治疗肝纤维化有效方药中多含有"健脾""益气""扶正"等作用的药物。因此在临床治疗肝纤维化时应重视健脾益气。     

脾气虚血瘀在糖尿病并发症发生中的作用机理

糖尿病属于祖国医学的“消渴病”范畴。现代医学认为,本病是由于胰岛素绝对或相对不足,或胰岛细胞代谢作用缺陷所引起的以葡萄糖、氨基酸及脂质代谢紊乱的综合征。本病的严重性主要在于其有多种并发症,而这些并发症是导致糖尿病患者致残或死亡的重要原因,因此对糖尿病并发症发生机理的研究是当前研究的重要课题。目前,现代医学对糖尿病并发症病因病机的研究,已深入到分子生物学水平;中医学领域对糖尿病并发症病因病     

论“脾气虚”在冠心病合并中风发病中的作用

运用频数、决策树及神经网络等统计方法,对冠心病合并中风证候要素、证候特征及证候病机演变规律临床专家调查问卷的调查结果进行分析,显示脾气虚证候要素贯穿本病始终。从脾气虚角度探讨本病的病因病机,治疗以补益脾气为切入点,为临床提供理论支持。     

脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织cAMP/PKA-Gp信号通路变化的研究

目的:通过分别观察脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织c AMP/PKA-Gp信号转导通路相关蛋白的变化,探讨脾虚痰浊证的改变与c AMP/PKA-Gp信号转导通路的相关性。方法:16只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组和脾虚痰浊组,每组各8只,脾虚痰浊证模型采用喂养高脂饲料,时间6个月。造模结束后,首先通过大鼠的一般状态和生理情况的改变进行模型评价,再分别取胃、心和下丘脑组织。分别采用ELISA法检测痰浊证大鼠不同组织c AMP活性,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测PKA、CREB、PHK和Gp mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组大鼠比较,脾虚痰浊证大鼠胃、心及下丘脑组织c AMP活性和PKA、CREB mRNA和蛋白的表达均有所减弱(P0.01或P0.05);并且脾虚痰浊证大鼠胃和心组织Gp mRNA和蛋白的表达也均有所减弱(P0.01或P0.05);此外,脾虚痰浊证大鼠心组织的PHK mRNA和蛋白的表达与正常组比较也存在显著性差异(P0.01)。结论:脾虚痰浊证大鼠模型成立后,其胃、心及下丘脑组织的改变均与c AMP/PKA-Gp信号转导通路存在一定的相关性。     

加味逍遥散对HPRL大鼠多巴胺受体cAMP/PKA信号转导通路的研究

目的： 探讨以肝脾为核心,运用逍遥散加减方治疗实验性高催乳激素血症（HPRL）模型大鼠下丘脑多巴胺受体环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）信号转导通路机制的影响。 方法： 腹腔注射甲氧氯普胺,制作HPRL大鼠模型。随机分成6组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组（溴隐亭组）、逍遥散加减方高、中、低剂量组。给药30 d后,采用免疫组化法测定大鼠下丘脑PKA阳性表达的数量;采用酶联免疫的法测定大鼠血清cAMP的含量、采用免疫组化法及RT-PCR检测大鼠下丘脑多巴胺D1,D2受体。 结果： 与阴性对照组相比较,逍遥散加减各剂量组下丘脑PKA活性明显降低（P < 0.01）;下丘脑cAMP活性显著降低 （P < 0.01）、下丘脑多巴胺D1受体数量有增高趋势、D2受体数量显著增加（P < 0.01）。 结论： 逍遥散加减方对能通过多巴胺受体cAMP-PKA信号转导通路调节泌乳素水平。     

柴胡皂苷A 调节cAMP/PKA/CREB 信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的 基于cAMP/PKA/CREB 通路探讨柴胡皂苷A 对失眠大鼠的改善作用及机制。方法 将75 只SD 大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A 低剂量组（0.625 mg·kg-1）、柴胡皂苷A 高剂量组（2.500 mg·kg-1）、艾 司唑仑组（0.1 mg·kg-1）,每组15 只。采用腹腔注射苯丙氨酸（PCPA,0.1 mg·kg-1）复制失眠大鼠模型。观察大 鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相, 记录慢波睡眠第1 期（SWS1）、慢波睡眠第2 期（SWS2）、快速眼球运动睡眠期（REMS）时长以及总睡眠时长 （TST）;qRT-PCR 法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA 及钟控基因Rev-erbα、Rorα mRNA 的表达水 平;免疫荧光法测定海马组织NeuN 表达水平;ELISA 法测定脑组织中的cAMP 水平;Western Blot 法测定脑 组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα 及cAMP/PKA/CREB 通路相关蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模 型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长（P＜0.05）,睡眠持续时 间及SWS1、SWS2、REMS、TST 均明显缩短（P＜0.05）;神经元排列紊乱,NeuN 阳性神经元IOD 值明显降低 （P＜0.05）; 脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）; 脑组织 cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性 明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短（P＜0.05）,睡眠持续时间及 SWS1、SWS2、REMS、TST 均明显延长（P＜0.05）;神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN 阳性神经元IOD 值 明显升高（P＜0.05）;脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）;脑 组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 柴胡皂苷A 可能通过激活 cAMP/PKA/CREB 通路改善失眠大鼠的昼夜节律。     

补骨脂甲素介导cAMP/PKA/CREB信号通路调控促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂甲素不同剂量单体对大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:以成骨转化诱导液组作为阳性对照组,小牛血清组为空白对照组,用高、中、低3种剂量补骨脂甲素对大鼠骨髓间充质干细胞分别干预6、9、12 d。ELISA法检测第6、9、12天,大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量;ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂甲素能够上调PKA、CREB mRNA及蛋白表达,补骨脂甲素高剂量组效果最显著。结论:补骨脂甲素能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与cAMP/PKA/CREB信号通路的活化有关。     

脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路变化的实验研究

目的:观察脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路变化,探讨其信号通路变化与脾虚痰浊证的关系。方法:16只SD大鼠,每组8只,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组。全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDLC水平,ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测肝脏GP、CREB、PKA和PHK蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,TG含量显著增高,主动脉c AMP活性显著降低,GP、CREB、PKA、PHK mRNA含量显著下降,GP、CREB、PKA、PHK蛋白表达显著下降。结论:脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路的改变可能与调控血脂代谢相关基因GP、CREB、PKA、PHK的表达有关。     

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）减轻脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠肺水肿的作用和机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水（25 mL·kg^-1）,肺肠合治低（5 g·kg^-1）、中（7.5 g·kg^-1）、高（10 g·kg^-1）剂量组分别给予（麻黄汤+大承气汤）灌胃,阳性药组给予地塞米松（5 mg·kg^-1）,分别于LPS注射后0、8、16 h给药,共3次。给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红（HE）染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿（D/W）质量比;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清血管活性肠肽（VIP）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）、水通道蛋白5（AQP5）、VIP、环磷酸腺苷（cAMP）、磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）、蛋白激酶A（PKA）蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肺组织中VIP mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低（P<0.01）,肺组织AQP1、AQP5、cAMP、p-PKA/PKA明显降低（P<0.05,P<0.01）,VIP含量显著升高（P<0.01）,肺组织VIP蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高（P<0.01）,肺组织AQP1、AQP5、VIP、cAMP、p-PKA/PKA升高（P<0.05,P<0.01）,肺组织VIP表达升高（P<0.05,P<0.01）。结论 肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/cAMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关。     

脾气虚证动物模型初步规范化的造模方法和思路

讨论脾气虚证动物模型初步规范化的造模方法和思路。主要是通过增大造模量使模型动物在一定造模时间的前提下达到“精气夺”。（1）通过增大造模量途径夺其精气：①运用体质筛选法；②将苦寒药用于建立气虚证模型；③在耗气破气法的基础上，运用降气法；④运用广豆根、旋覆花、槟榔等药味；⑤增大造模用药量；⑥4℃给药；⑦运用前轻后重的两阶段造模法；⑧重视形成固有病理。（2）功能优化：①在目前脾虚证苦寒泻下、耗气破气、限量营养、劳倦过度、利血平5个较有代表性的造模要素中，本造模方法实际上集中反映或涉及了苦寒泻下、耗气破气、限量营养、利血平4种，有较强的代表性；②避免采用与目前建立肾虚证模型相同或类似的方法。     

六君子汤中陈皮对脾虚模型大鼠胃肠道调节的药效学研究

目的：研究六君子汤中陈皮对脾虚模型大鼠胃肠道调节的药效学过程,从而明确中药复方配伍后的药效物质基础及作用机制,为后期合理用药提供参考。方法：以脾虚证模型大鼠为研究对象,以胃肠激素水平、CD3细胞百分率及TFF3mRNA表达情况为主要指标,大鼠体质量变化、胃排空率及小肠推进率为辅助指标,追踪并鉴定陈皮胃肠动力调节及胃肠免疫作用的活性成分。结果：各批次六君子汤可显著改善脾虚模型大鼠的一般状态,对脾虚模型大鼠有促进胃排空及小肠推进作用,可显著升高血浆中MTL及血清中GAS的含量,降低血浆中VIP的含量,使小肠黏膜中CD3细胞百分率明显升高,TFF3mRNA的表达情况明显优于造模恢复组及长期造模组。结论：含有陈皮的六君子汤可通过调节胃肠激素水平从而改善脾虚症状引起的胃肠动力紊乱,能够升高免疫细胞的数量,增强TFF3mRNA的表达,可进而促进受损肠黏膜细胞的修复,增强肠黏膜防御能力。     

香砂六君子丸对脾虚痰浊大鼠小肠组织cAMP/PKA信号通路的影响

目的:通过观察香砂六君子丸对脾虚痰浊证大鼠小肠c AMP/PKA信号通路的影响,探讨香砂六君子丸治疗脾虚痰浊证大鼠可能机制。方法:24只SD大鼠,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组、香砂六君子丸治疗组(以下简称治疗组),每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠复制脾虚痰浊证动物模型,14 d后,治疗组采用香砂六君子丸灌胃治疗,空白对照组和脾虚痰浊模型组予等量生理盐水灌胃。灌胃60 d后采用ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测大鼠小肠GP、PHK和PKA mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,脾虚痰浊组小肠c AMP活性显著降低,与脾虚痰浊组相比,治疗组小肠c AMP活性显著升高;与空白对照组相比,脾虚痰浊组GP、PHK、PKA mRNA和蛋白含量显著下降,与脾虚痰浊组相比,治疗组GP、PHK、PKA mRNA和蛋白含量显著上升。结论:香砂六君子丸可能通过调控c AMP/PKA信号通路影响脾虚痰浊证大鼠。     

益气健脾中药对脾气虚大鼠一氧化氮信号通路及胃泌素水平的影响

目的观察一氧化氮（NO）信号通路及胃泌素（GAS）水平在大鼠脾气虚证进程中的变化及益气健脾中药的干预效应。方法将受试动物随机分为正常组、模型组（7、14、21 d组）、益气健脾组,每组10只。采用大黄法、力竭法及饥饿法复合建立脾气虚证大鼠模型,分时段测定各组大鼠胃肠组织、血清一氧化氮合酶（NOS）、NO、GAS动态表达水平。结果与正常对照组比较,模型大鼠胃肠组织及血清NOS、NO、GAS水平逐渐降低（P〈0.05,P〈0.01）,且以21 d组显著,而益气健脾组大鼠NOS、NO、GAS水平未见明显变化,且与模型21 d组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 NO、NOS、GAS在脾气虚的形成过程中主要以低水平表达为主,而益气健脾中药具有促进NO信号通路及GAS表达的作用。     

补中益气汤对脾气虚证大鼠血清胃泌素影响的实验研究

目的:探讨补中益气汤不同浓度、不同时间段对脾气虚证大鼠血清胃泌素的影响。方法:以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型,造模大鼠随机分成模型组,补中益气汤低、中、高剂量组,以及四君子汤组,在干预后不同时间(7、14、21d)观察各组血清胃泌素等指标。结果:与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组血清胃泌素含量升高(P<0.05,P<0.01),以中剂量组疗效显著;低剂量组变化不明显;四君子汤组血清胃泌素含量亦升高(P<0.05),但效果不如补中益气汤中剂量组(P<0.05)。结论:补中益气汤提高脾气虚证大鼠血清胃泌素含量可能是其治疗脾气虚证的机理之一。     

基于小鼠游泳计算机自动控制系统的人参抗疲劳作用研究

目的： 基于小鼠游泳计算机自动控制系统,考察人参的抗疲劳作用。 方法： 将小鼠随机分成5组,人参低、中、高剂量组每天分别灌胃给予2.5,5,10 g·kg^-1的人参水煎液,空白组和气虚模型组则灌胃给予等体积的蒸馏水,连续灌胃14 d,每天1次。除空白组给足量饲料外,其余4组限制饲料（125 g·kg^-1·d^-1）。选用已完善的小鼠游泳计算机自动控制系统,观察人参对游泳计算机自动管理系统的指标评价体系的影响及对气虚小鼠体重,运动后血乳酸（LAC）和尿素氮（BUN） 的影响。 结果： 10 g·kg^-1人参水煎液能延长气虚小鼠负重游泳的下沉时间（ST）和死亡时间（TD）,增加不动时间（IT）、游泳时间（SWT）、首次下沉时间（FST）、游泳距离（SWD）及不动时间比率（ITR）,减少游泳时间比率（SWR）;并能明显增加气虚小鼠体重;降低运动后的血乳酸（LAC）、血清尿素氮（BUN）。 结论： 人参能提高气虚小鼠的抗疲劳能力,且从行为学上看人参可使不动时间比率延长、游泳时间比率缩短而增加耐力。     

加减益胃汤治疗小儿脾胃阴虚厌食症的实验研究

目的：探讨小儿厌食症的发病机理及养阴益胃法防治小儿脾胃阴虚厌食症的作用机制。方法：采取小鼠胃排空、小肠推进试验以及检测幼龄厌食模型大鼠胃液酸度、胃蛋白酶活性和血浆胃动素（MTL）、神经降压素（NT）含量等。结果：加减益胃汤能显著促进小鼠胃排空和小肠推进功能，明显提高厌食模型大鼠胃蛋白酶活性，调节胃酸分泌；改善厌食模型大鼠MTL、NT紊乱状态，从而达到治疗小儿脾胃阴虚厌食症的目的。结论：加减益胃汤治疗小儿阴虚庆食症有效。     

血瘀气虚型中风患者通络益气颗粒治疗的临床研究

目的:探讨通络益气颗粒治疗血瘀气虚型中风患者临床疗效及应用价值。方法:将我院治疗的血瘀气虚型中风患者96例,采取随机数字表法分为治疗组和对照组,每组48例,对照组给予西医常规治疗,治疗组联合应用通络益气颗粒,观察治疗结果。结果:治疗组患者治疗总有效率高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗组患者神经功能缺损评分和日常生活能力评分改善幅度优于对照组,组间对比差异有统计学意义(P0.05)。治疗组患者治疗后血脂改善好于对照组,与对照组治疗后比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:采用通络益气颗粒治疗血瘀气虚型中风疗效可靠,能够改善患者神经功能缺损评分和日常生活能力评分,有效降低患者血脂浓度,值得在临床上推广使用。