土木香内酯增效替莫唑胺抑制胶质瘤干细胞增殖的分子机制

目的:研究土木香内酯(ALT)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤干细胞增殖的作用及其机制。方法:取人胶质瘤细胞U87MG、U251MG进行培养,ALT、TMZ单独或联合干预。使用MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡通路蛋白Cleaved-caspase-9、Caspase-9、Bcl-2和Bcl-xl等表达量。结果:ALT和TMZ联合使用后胶质瘤干细胞生存率明显低于单独用药组差异有统计学意义(P0.05);ALT和TMZ联合使用后胶质瘤干细胞凋亡比例明显高于单独用药组,差异有统计学意义(P0.05);与单独使用TMZ相比,ALT与TMZ联合使用后,促凋亡蛋白Cleaved-caspase-9明显增强,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl明显降低,差异有统计学意义(P0.05)结论:ALT可增加TMZ抑制胶质瘤干细胞增殖的效果,且其主要通过上调促凋亡蛋白,下调抑凋亡蛋白实现。     

新城疫病毒联合替莫唑胺对胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨新城疫病毒（NDV）联合替莫唑胺（TMZ）对脑胶质瘤U87MG细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 将脑胶质瘤U87MG细胞随机分为对照组、药物组、病毒组和联合组。采用MTT法、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测NDV、TMZ和二者联合使用对U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用qRT-PCR法检测不同组U87MG细胞中MMP-2、caspase-3和caspase-9的表达,使用Western blot法检测不同组U87MG细胞中MMP-2的表达。结果 ①MTT法结果显示,与对照组相比,其余3组细胞增殖率显著降低,且呈剂量依赖,联合组细胞增殖抑制率高于二者单用,差异有统计学意义（P<0.05）。②划痕实验结果显示,24 h后病毒组和联合组细胞迁移率低于对照组及药物组,差异有统计学意义（P<0.05）。③侵袭实验结果显示,联合组侵袭细胞数低于其余3组,差异有统计学意义（P<0.05）。④qRT-PCR结果显示,处理24 h后病毒组及联合组细胞caspase-3表达高于对照组及药物组,处理48 h后联合组细胞MMP-2表达量低于对照组及药物组,差异有统计学意义（P<0.05）。⑤Western blot结果显示,与对照组相比,病毒组及联合组MMP-2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 NDV联合TMZ可显著抑制U87MG细胞增殖、迁移、侵袭,并在一定程度上促进细胞凋亡。     

替莫唑胺联合氟桂利嗪对胶质瘤细胞体外作用机制

目的:探讨替莫唑胺(TMZ)联合氟桂利嗪(FZ)对人脑胶质瘤细胞体外清除作用及可能机制。方法:用伊格尔培养基培养胶质瘤U87、U251、CHG-5、SHG-44细胞株,用CCK-8试剂检测并评价TMZ、FZ两者单药及联合用药处理后的U87、U251、CHG-5、SHG-44细胞增殖抑制率及观察TMZ的半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:FZ单独处理胶质瘤细胞株后能起到一定的抑制作用,而远远起不到治疗效果;在同类细胞中,TMZ单药作用细胞株后IC_(50)分别为(562.3±56.7)、(370.5±40.2)、(480.9±29.6)、(420.5±61.4)μg/mL。在不同浓度的FZ联合TMZ应用后TMZ IC_(50)均有不同程度下降(P0.05);与对照组、替莫唑胺、氟桂利嗪单药作用组比较,TMZ联合FZ用药诱导胶质瘤细胞凋亡率显著提高。结论:FZ可抑制胶质瘤U87、U251、CHG-5、SHG-4增殖,与TMZ联合应用后能提高化疗效果。     

联合顺铂提高对替莫唑胺耐药的多形性胶质母细胞瘤细胞药物敏感性的研究

目的 探讨多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)细胞中O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6 methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)的甲基化状态在替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药机制中的作用,并检测TMZ与周期非特异性化疗药顺铂(cisplatin,CDDP)联合应用对GBM细胞的增殖抑制效应.方法 将胶质瘤细胞系接种于DMEM培养基(含10％胎牛血清),MTT检测细胞增殖,甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测MGMT甲基化状态,Hoechst33342/PI检测凋亡,Chou-Talalay软件分析联合用药的机制.结果 U87MG细胞不具有MG-MT活性,无MGMT蛋白表达;T98G细胞具有MGMT活性,有MGMT蛋白表达;有MGMT活性的T98G细胞抵抗TMZ诱导的凋亡;MGMT抑制剂O6-BG提高了T98G细胞对TMZ敏感性;TMZ与CDDP联合用药效果在T98G细胞中更明显.结论 无MGMT活性的U87MG细胞对TMZ更敏感;有MGMT活性的T98G细胞对TMZ和CDDP的联合化疗更敏感.     

达托利司抑制替莫唑胺耐药恶性胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的探讨达托利司（DAC）抑制替莫唑胺（TMZ）耐药恶性胶质瘤细胞增殖的机制。方法采用浓度梯度递增法构建TMZ耐药U251细胞（U251R细胞）,并分为DAC组、DAC干预的表皮生长因子受体（EGFR）低表达组（KD组）、DAC干预的EGFR过表达组（OE组）和对照组。采用钙黄绿素和碘化丙啶双染色法、赫斯特染色法检测细胞死亡比例和凋亡比例。采用Westernblot法检测EGFR、B细胞淋巴瘤（Bcl-2）、切割半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved-Caspase3）蛋白表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测EGFRmRNA相对表达水平。结果DAC组和KD组细胞死亡比例、细胞凋亡比例、Cleaved-Caspase3蛋白表达水平均高于对照组,EGFR、Bcl-2蛋白表达水平均低于对照组,OE组细胞死亡比例、细胞凋亡比例、Cleaved-Caspase3蛋白表达水平均低于DAC组,EGFR、Bcl-2蛋白表达水平均高于DAC组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。DAC组和KD组EGFRmRNA相对表达水平均低于对照组,OE组EGFRmRNA相对表达水平均高于DAC组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论DAC能通过下调EGFR抑制TMZ耐药恶性胶质瘤细胞增殖。     

BC200通过介导脑胶质瘤细胞干性的维持抑制替莫唑胺的促凋亡作用

目的：探讨血清长链非编码RNA BC200在脑胶质瘤干细胞（GSCs）中的作用及相关作用机制。方法：神经干细胞培养液培养脑胶质瘤U87 MG细胞,并提取成球生长的GSCs;采用免疫荧光法检测GSCs干细胞标志性分子CD133和Nestin;小分子RNA（siRNA）转染沉默GSCs中BC200表达;替莫唑胺（TMZ）200 μmol·L-1处理GSCs 24 h,光镜下观察TMZ对GSCs悬浮细胞球形态的影响;采用Western blot方法检测CD133、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达变化。结果：分离提取的GSCs球状生长,细胞球表面CD133和Nestin呈阳性表达。TMZ处理GSCs 24 h,GSCs成球能力略微下降,未见细胞球状状态明显离散,Bax、cleaved cas-pase-3、Bcl-2未有明显变化（均P＞0.05）。沉默BC200后GSCs CD133表达显著下降（P＜0.05）。BC200沉默后,TMZ处理GSCs发现其成球能力明显减弱、细胞分散;cleaved caspase-3和Bax分别上调（45.36%±4.25%）和（63.23%±5.12%）,Bcl-2下调（31.22%±3.80%）,均P＜0.01。结论：BC200能够维持脑胶质瘤U87 MG细胞的干性,该效应可促进细胞对TMZ诱导凋亡的抵抗。     

黄芩素联合U0126促进人膀胱癌T24细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨黄芩素联合U0126促进人膀胱癌细胞系T24凋亡的分子机制.方法 用黄芩素和U0126处理人膀胱癌T24细胞株,(1)CCK8检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测T24细胞周期的变化;(3)显微镜观察细胞凋亡;(4)流式细胞仪检测早期细胞凋亡和晚期细胞凋亡;(5)Real Time PCR检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平;(6)Western blot检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平.结果 黄芩素或U0126浓度越高,T24细胞增殖能力逐渐下降(P<0.05);不同浓度的黄芩素刺激人膀胱癌细胞株T24,T24细胞数量随浓度上升而逐渐减少(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株S期的细胞数量显著低于黄芩素、U0126单独处理组(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株早期凋亡和晚期凋亡均显著高于黄芩素、U0126单独处理组(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株ERK1/2、Bcl-2和P38的mRNA表达水平显著低于黄芩素或U0126单独处理组(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞ERK1/2、P38的磷酸化水平以及Bcl-2的蛋白表达量均显著低于黄芩素或U0126单独处理组(P<0.05).结论 黄芩素和U0126均可显著抑制人膀胱癌细胞增殖,诱导T24早期凋亡和晚期凋亡且具有浓度依赖性,且两者具有协同效应.因此,黄芩素和U0126可用于治疗膀胱癌.     

脑神经胶质瘤细胞癌胚抗原相关细胞黏附分子1对替莫唑胺化疗敏感性的作用及其机制研究

目的 探究脑神经胶质瘤细胞癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)表达对替莫唑胺（TMZ）化疗敏感性的作用及其机制研究。方法 体外培养TMZ耐药人脑神经胶质瘤细胞系U251/TMZ细胞，采用空载质粒或siRNA转染U251/TMZ细胞，分为空载组、TMZ组、siRNA组及siRNA+TMZ组，转染48 h后，GFP荧光检测细胞转染效率。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞CEACAM1 mRNA的表达，MTT法检测U251/TMZ细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验和Western blotting检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 与空载组比较，siRNA组、siRNA+TMZ组CEACAM1 mRNA相对表达量降低（P <0.05），细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高（P <0.05）,Wnt1蛋白表达水平、β-catenin及c-myc蛋白相对表达量降低（P <0.05）；与TMZ组比较，siRNA组、siRNA+TMZ组CEACAM1 mRNA相对表达量降低（P <0.05），细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高（P <...     

榄香烯联合热疗对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的观察榄香烯联合热疗对人神经胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法将培养的U251细胞随机分为4组,其中A组加常规培养液,B、C、D 3组分别进行单纯热疗、单纯榄香烯及榄香烯联合热疗培养。分别通过细胞形态学、MTT法、DNA断端末端标记(TUNEL)法及流式细胞仪法,检测U251细胞增殖及凋亡情况。结果 B、C、D 3组细胞增殖抑制率及凋亡率均升高,但以D组最明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯联合热疗对胶质瘤U251细胞具有抑增殖及促凋亡作用。     

探索替莫唑胺联合amlexanox对胶质瘤细胞的作用效果及机制

目的:探索替莫唑胺（TMZ）联合amlexanox对胶质瘤细胞的作用效果及机制。方法:本研究分为体外和体内实验,其中体外实验分为4组:对照（NC）组、amlexanox组、TMZ组和TMZ+amlexanox 组,包括检测细胞增殖能力的cell counting kit-8（CCK-8）实验、检测细胞侵袭和迁移的细胞划痕和Transwell实验及检测核因子κ-B激酶抑制剂（IKBKE）及蛋白激酶B（Akt）通路蛋白质变化的 Western印迹实验;体内实验分为3组:NC组、TMZ组和TMZ+amlexanox组,包括颅内成瘤实验和免疫组织化学染色（IHC）实验。结果:与amlexanox组、TMZ组相比,TMZ联合amlexanox组U87 MG和原代细胞 增殖能力明显受抑制、划痕愈合面积显著降低（P< 0.01）。Transwell侵袭和迁移实验表明,TMZ+amlexanox组穿出小室细胞数量显著降低（P< 0.01）。Western印迹实验结果显示,TMZ联合amlexanox组 Akt和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活性明显受抑制。动物实验表明,TMZ联合amlexanox组裸鼠颅内肿瘤生长显著抑制（P < 0.01）,颅内肿瘤动物模型的生存时间延长（由21 d延长至31 d）;IHC 结果显示,TMZ联合amlexanox组肿瘤标本中磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）表达量明显下降。结论:TMZ联合amlexanox能显著抑制U87 MG和原代细胞增殖、迁移和侵袭能力,而且二者联合 能显著抑制裸鼠颅内肿瘤生长并延长裸鼠生存时间。该作用机制可能是amlexanox在一定程度上通过抑制IKBKE活性逆转TMZ诱导Akt激活,进而降低胶质瘤细胞对TMZ的耐药性。