肾综合征出血热病毒感染沙鼠肾细胞病毒滴度的动态观察

肾综合征出血热(HFRS)病毒已知能在VeroE-6、A-549、人胚肺二倍体传代细胞和地鼠肾、大白鼠肺等原代细胞稳定传代.我们经筛选,发现长爪沙鼠肾细胞方较敏感,并用于生产HFRS疫苗,为了解HFRS病毒在此细胞中的增殖规律,我们将生产疫苗的Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型)二株病毒感染沙鼠肾细胞,以观察病毒的增殖情况.     

肾综合征出血热病毒持续感染细胞的建立

已经发现多种细胞或细胞株对HFRSV有敏感性,如绿猴肾传代细胞(Vero-E6),人肺癌传代细胞(A549,人胚肺二倍体细胞(2BS)及大白鼠肺原代细胞,长爪沙鼠肾原代细胞,地鼠肾原代细胞等,但未见HFRSV在地鼠肾传代细胞(BHK 21)上呈持续感染状态,现将HFRSV浙37株病毒在BHK21细胞上连续传代的结果报道如下.\     

Vero-E6、MDCK、293细胞对SARS冠状病毒敏感性的研究

目的 研究Vero—E6、MDCK、293细胞对SARS冠状病毒的敏感性，为该病的病原学研究、诊断和疫苗制备奠定基础。方法 用Vero—E6、MDCK及293细胞对广东省部分SARS病人的咽拭子标本进行分离培养，并对分离物使用电镜、间接免疫荧光(IFA)及荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)的方法分别检测细胞和(或)培养上清波中的病毒含量。结果 感染SARS病人的咽拭子标本后，Vero—E6细胞出现病变(CPE)最早，电镜中可观察到Vero—E6细胞中大量的病毒颗粒，IFA试验感染病毒的Vero—E6细胞与SAPS病人的恢复期血清呈强阳性反应，FQ—PCR结果显示Vero—E6感染细胞内的病毒含量10^8拷贝／ml，高于293细胞(10^6拷贝／ml)及：MDCK(104拷贝／ml)。结论 三种细胞对SARS相关病毒的敏感性不同，Vero—E6是SARS相关病毒最敏感的宿主细胞。     

肾综合征出血热病毒对人胚肾原代细胞感染作用的研究

近年来对该病进行了广泛研究,但其发病机理尚不清楚.为了搞清肾综合征出血热病毒(HFRSV)对肾组织的损伤机理,本文首次选用易饲养、敏感、高效的人胚肾原代细胞直接攻击HFRSV.为确保结果的准确性,改用了胶原酶温和消化法,取得令人满意的结果.现将结果报告如下.     

肾综合征出血热病毒气溶胶动物实验感染研究

为了研究HFRSV的吸入感染性和动物与动物间空气传播感染,用TK_2型气溶胶发生器发生H8205株病毒气溶胶,引入动态气溶胶暴露装置并对实验动物进行暴露.以AGI微生物气溶胶采样器进行采样,以Vero-E_6细胞空斑法分析病毒含量,对病毒耐气溶胶化和吸入病毒剂量进行了测定.对染毒动物产生气溶胶引起交叉感染能力进行了观察.结果表明:HFRS病毒雾化30min回流液病毒存活50%,AGI冲击5分钟其效价下降不明显.数种动物对该病毒气溶胶比较敏感.在本实验装备和条件下其气溶胶乳小鼠吸入0.065pfu全部感染;离乳小鼠吸入0.72pfu几乎全部感染;乳小鼠半数吸入致死量(ILD50)为0.57pfu.从乳小鼠脏器组织分离出了HFRS病毒.结果认为,气溶胶传播是HFRS流行的重要危险因素.     

肾综合征出血热Vero传代细胞疫苗的研究

目的研究肾综合征出血热(HFRS)Vero传代细胞疫苗。方法将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z10(Ⅰ型)、Z37(Ⅱ型)适应到Vero细胞上进行连续传代，并用不同代次的Vero细胞适应株制备Vero传代细胞疫苗。结果Z10、Z37，株感染Vero细胞后第1代即可达到较高病毒滴度，并且在Vero细胞中持续传代适应，病毒滴度分别维持在6．25～6．75和6．50～7．00logTCID50／ml之间，较为稳定。用不同代次的Vero细胞适应株制备而成的HFRS Vero细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高，反向间接血凝效价从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的阴性上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的1：2上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64；疫苗病毒滴度(logTCID50／ml)从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的4．25上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的6．50，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的6．25上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的7．50。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论HFRS Vero传代细胞疫苗的生产，疫苗株在Vero细胞中的连续传代适应起关键性作用。     

肾综合征出血热病毒细胞免疫研究进展

肾综合征出血热病毒细胞免疫研究进展吴海彦（综述）姚楚锋（审校）肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）的发病机理，目前尚不清楚。有人认为，ＨＦＲＳ病毒感染机体的各器官组织，引起病变，是病毒直接作用的结果；有的则认为，ＨＦＲＳ病毒感染机体，导致免疫功能紊乱，是引起疾...     

吉林省实验动物感染肾综合征出血热病毒情况分析

目的了解吉林省实验动物鼠类感染。肾综合征出血热（HFRS）病毒的情况。方法直接免疫荧光法（FAT）检测病毒携带情况，并做分型检测；RT—PCR方法测序、分型；间接免疫荧光法（IFAT）检测密切接触者隐性感染情况。结果1999年检测实验大白鼠平均携带病毒率为32％，分型检测为家鼠型；小白鼠、豚鼠均未检测到HFRS病毒。2001年检测实验大白鼠、小白鼠均为阴性；密切接触者平均隐性感染率为34．1％。2006年，大白鼠携带病毒率为16．59％，并且分离到4株HFRS病毒。结论吉林省实验大白鼠存在HFRS病毒感染，密切接触者存在隐性感染。     

不同狂犬病毒毒株在Vero细胞上培养的病毒滴度与免疫原性比较

在狂犬病疫苗生产过程中 ,所用毒种的病毒滴度和免疫原性与疫苗的效力关系极大。目前 ,我国地鼠肾细胞狂犬疫苗生产过程中所用的毒株主要是ａＧ株。为选择高病毒滴度、高免疫原性的Ｖｅｒｏ细胞适应株 ,我们对几种狂犬病毒毒株在Ｖｅｒｏ细胞上的病毒滴度、免疫原性进行了比较。1　材料与方法1.1　生产用毒株　狂犬病毒ＣＴＮ -Ｖ6株、狂犬病毒ＣＴＮ-Ｖ10 Ｍ3 株、狂犬病毒ＣＴＮ -ＢＨＫ3 株、狂犬病固定毒ａＧ株 ,均由中国药品生物制品检定所提供 ,毒力在 7.5～ 8.0ＬｏｇＬＤ50 /ｍｌ之间。1.2　细胞株　非洲绿猴肾Ｖｅｒｏ细胞 ,来源于…     

肾综合征出血热病毒耐雾化和冲击的稳定性观察

采用测定ＨＦＲＳＶ喷雾液和ＨＦＲＳＶ气溶胶采样液的病毒浓度方法，确定ＨＦＲＳＶ的气溶胶存活力和感染力，结果在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞上，ＨＦＲＳＶ空斑大小均匀，乳小鼠脑腔接种ＨＦＲＳＶ，动物反应剂量基本呈线性关系（ｒ＝０．８８，Ｐ〈０．０５），ＭＩＣＬＤ５０＝５７０ｐｆｕ。研究表明，ＨＦＲＳＶ用ＴＫ发生器雾化３０ｍｉｎ，存活５０％，提示该病毒耐雾化能力强，ＡＧＩ强样器采样冲击５ｍｉｎ，存活５０％，而冲击     

发凝集试验快速检测肾综合征出血热病毒抗原的实验诊断

应用肾综合征出血热病毒的单克隆抗体A25-1、A19和A5等量混合液标记活性炭,然后与肾综合征出血热病毒的陈株、湖北珠巨细胞病毒和呼吸合胞病毒作凝集试验。结果仅陈株和湖北株产生特异性凝集,而巨细胞病毒和呼吸合胞病毒不产生凝集。阻断试验的结果为阴性,说明炭凝集试验．可以用于肾综合征出血热的快速诊断。     

β-丙内酯在Vero细胞HFRS疫苗中的应用

目的 探讨β-丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热纯化疫苗的最佳条件。方法 采用不同终浓度的β-丙内酯和不同的灭活时间对疫苗进行灭活，用细胞培养法进行病毒增殖试验，以确定灭活效果。应用高效液相色谱法分析β-丙内酯的最佳水解条件和3批双价Vero细胞出血热纯化灭活疫苗β-丙内酯残留虽。检测3批双价纯比灭活疫苗的免疫效果。结果 疫苗经终浓度为1：2000和1：4000的β-丙内酯作用24h，均可完全灭活病毒；疫苗中的β-丙内酯在37℃水浴下，随着水解时间的延长，其含量逐渐下降，水解2h后已无β-丙内酯检出；3批经β-丙内酯灭活的双价Vero细胞出血热纯化疫苗均未检出β-丙内酯残留，在家兔体内诱导产生针对汉滩型和汉城型病毒的中和抗体效价均达到1：20。结论 肾综合征出血热纯化疫苗经终浓度为1：4000β-丙内酪4℃灭活24h，然后再于37℃水浴中水解2h，既可达到完全灭活病毒且无β-丙内酯残留的目的；采用此方法灭活的双价Vero细胞肾综合征出血热纯化疫苗保持良好的免疫原性。     

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗接种效果观察

现已知我国半数地区间时存在着姬鼠和家鼠二种型别的肾综合征出血热(HFRS)的混合流行,因此,有必要研制能同时预防这二种型别的疫苗。目前我国用于生产疫苗的三株HFRS病毒,对同型各毒株均表现较好的中和作用,但对异型病毒的交叉中和作用较差。经人体免疫三针后,对同型病毒的中和抗体阳转率可达90%,而对异型病毒的阳转率仅30%左右。因而,在我国,研制双价HFRS疫苗的工作早已被提出来了。本文报道我们研制的双价HFRS沙鼠肾灭活疫苗免疫人体的结果。材料与方法一、疫苗:由杭州天元生物药业公司生产的双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗(批号双-4),制造疫苗的毒种为Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型),病毒在沙鼠肾原代细胞培养后,经β-丙内脂灭活,内含0.1%人血白蛋白和0.5mg/ml氢氧化铝佐剂,先分别制成Ⅰ型和Ⅱ型的单价疫苗,再按不同比例混合而成双价疫苗。     

从早产儿脐带血中分离出肾综合征出血热病毒

为了进一步验证肾综合征出血絷（ＨＦＲＳ）病毒在人体内存在垂直传播的途径，采用间接免疫荧光法和病毒分离技术对一位临产前患ＨＦＲＳ的孕妇及其早产儿进行了ＨＦＲＳ病毒垂直传播的探讨。结果从早产儿脐带血中分离出一株ＨＦＲＳ病毒，并且从孕妇血、早产儿脐带血和早产儿血中都测到ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。由于血标本的采集是在无菌条件下进行，可排除其他传播途径，从而认为早产儿感染ＨＦＲＳ病毒是通过母婴垂直传播的。     

水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验

目的 建立水痘带状疱疹病毒中和抗体测定方法。方法 用VZV1毒种制备中和抗原，以50pfu左右病毒量加待测血清36℃和1h，接种Vero-E6单层细胞，烛缸法培养10d后，用结晶紫染色，计数pfu；以中和后pfu减少50％的血清最高稀释度为中和抗体滴度。结果 VZV1在Vero-E6细胞上形成的蚀斑呈椭圆形，平均Φ0.85mm，边界清晰；经试验3只VZV1免前家兔血清中和抗体滴度＜1：2，免后分别为1：16、1：31、1：64；5份中和抗体阳性血清经重复测试3次，中和抗体最多相差1个滴度；24份血清同时测定VZV中和、荧光、酶示抗体的GMT比值为1：1．83：46．25。结论 VZV蚀斑减少中和试验特异性、重复性良好，可用于VZV疫苗免疫效果考核。     

肾综合征出血热病毒在革螨体内增殖的动态观察

目的：进一步观察革螨体内肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）有否增殖。方法：用直接细胞培养动态观察革螨体内ＨＦＲＳＶ滴度。结果：发现鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性和阴性革螨,均在不同子代革螨体内测出ＨＦＲＳＶ滴度（１０＾－１～１０＾－６）;动态观察发现子代革螨病毒滴度较母代革螨高１０＾－３～１０＾－５。用抗Ｍｐ和Ｎｐ结构蛋白单克隆抗体检测发现,随着病毒滴度增加而毒力增强。结论：该研究结果从病毒学和分子生物学上