香参软胶囊对小鼠肝癌的抑制作用研究

目的：研究香参软胶囊对小鼠H22移植性肝癌腹水及其对SMMC7721荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法：昆明种小鼠腹腔注射H22肝癌细胞,建立肝癌腹水模型,观察香参软胶囊高（720mg·kg-1）、中（360mg·kg-1）、低（180mg·kg-1）剂量组灌胃给药对H22移植性肝癌腹水小鼠体征及生命延长率的影响;裸鼠右腋窝皮下接种SMMC7721细胞悬液,待察瘤块成形后给药。观察香参软胶囊高（720mg·kg-1）、中（360mg·kg-1）、低（180mg·kg-1）剂量组灌胃给药对SMMC7721荷瘤裸鼠肿瘤生长及其瘤重的影响。结果：与H22移植性小鼠肝癌腹水模型组比较,香参软胶囊高剂量组显著抑制腹围增长（P<0.01）,延长小鼠生存时间（P<0.01）;香参软胶囊中剂量组显著延长小鼠生存时间（P<0.05）。与SMMC7221荷瘤裸鼠比较,香参软胶囊各剂量组平均瘤重及肿瘤体积均小于模型组;香参软胶囊高剂量组能极显著抑制SMMC7721荷瘤裸鼠肿瘤生长,同时高剂量组对肿瘤生长的抑制作用略优于平消胶囊组。结论：香参软胶囊显著H22肝癌小鼠腹水生长,延长小鼠存活时间;香参软胶囊对裸鼠SMMC7721移植性瘤具有明显抑制作用。结果表明香参软胶囊具有较明显的抗肝癌作用。     

环磷酰胺衍生物SLXM-2对小鼠脑瘤B_(22)的抗肿瘤作用及机制

目的:研究环磷酰胺衍生物SLXM-2对小鼠脑瘤B22的抗肿瘤作用及对小鼠免疫系统的影响,并探讨其抑瘤作用的分子机制。方法:采用小鼠脑瘤B22移植性肿瘤模型评价SLXM-2的抑瘤作用,测定免疫器官的脏器指数和白细胞数量;通过Western Blot检测SLXM-2对细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:20,40 mg.kg-1 SLXM-2对小鼠脑瘤B22的抑瘤率分别为11.5%和53.9%;与阴性对照组相比,SLXM-2对小鼠免疫器官的脏器指数及白细胞数量无明显影响,可上调p53,p21,CDK7,Wee1,p-Cdc2(Tyr15),p-Cdc2(Thr 161)和CyclinB1等蛋白表达,下调CyclinE的表达,Cdc2,CDK2和Cdc25C表达水平变化不明显。结论:SLXM-2对小鼠脑瘤B22的生长有一定抑制作用,对小鼠免疫器官指数和白细胞数量没有影响;SLXM-2的抗肿瘤机制与调节p53,p21,Wee1,p-Cdc2(Tyr15)和CyclinE等蛋白表达有关。     

三肽化合物酪丝亮肽(YSL)对腹水型肝癌H_(22)小鼠免疫调节作用实验研究

目的观察三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对腹水型肝癌H22小鼠的抗肿瘤作用,观察YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。方法建立腹水型肝癌H22小鼠动物模型,观察YSL对腹水型肝癌H22小鼠生存时间的影响;以MTT法检测YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。结果YSL能够明显延长腹水型肝癌H22小鼠生存时间;YSL在5μg.kg-1和50μg.kg-1时可以促进腹水型肝癌H22小鼠T淋巴细胞的转化;YSL在0.5、5和50μg.kg-1时增强荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性。结论YSL可以延长腹水型肝癌H22小鼠的生存时间;促进荷瘤鼠的T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性。     

蝮蛇毒抗高凝状态酶对小鼠肝癌抑制作用及P53、C-myc表达的影响

目的：建立实验性小鼠肝癌原位移植模型，在此基础上研究蝮蛇毒抗高凝状态酶（AHCSE）的抑癌作用并探讨其可能的作用机制。方法：将小鼠肝癌H22细胞种植于小鼠腋窝皮下，传代后取癌组织块种植于小鼠肝脏，进行不同剂量蛇毒制剂治疗的探索。将荷肝癌H22小鼠分成4组：模型对照组、AHCSE低、中、高剂量组（0．5、1．0、2．0mg／kg），给药10d后，根据瘤重计算抑瘤率，用免疫组化SP法计算P53、C—MYC阳性细胞数。结果：0．5、1．0、2．0mg／kg AHCSE的肿瘤抑制率分别为35．57％、50．38％、53．89％，P=53阳性细胞数为64、51、45，Cmyc阳性细胞数为46、38、34。1．0、2．0mg／kg AHCSE对小鼠移植性肝癌H22有较明显的抑制作用。结论：AHCSE对小鼠原位移植肝癌H22的生长具有一定的抑制作用，其机制可能与抑制突变型P53、CMYC蛋白的表达有关。     

竹叶花椒提取物诱导BRL 3A细胞产生DNA损伤和凋亡的机制研究

目的 探讨竹叶花椒甲醇提取物(ZADCM)对大鼠肝细胞BRL 3A的DNA损伤和凋亡的潜在作用机制。方法 体外培养大鼠正常肝细胞(BRL 3A),CCK-8法测量细胞毒性,荧光探针测定ROS变化,微核实验检测细胞染色体损伤,彗星实验检测DNA损伤,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western blot测定DNA损伤相关蛋白以及凋亡相关蛋白表达量。结果 随着ZADCM浓度增加,细胞存活率下降,具有时间-剂量关系;ZADCM可以剂量依赖方式诱导细胞内ROS累积,导致染色体损伤与DNA损伤,表现为微核细胞率、细胞尾长、尾部DNA含量、OTM值以及γH2AX、p-ATM和p-Chk2表达量升高;并进一步诱导细胞凋亡。结论 竹叶花椒甲醇提取物可导致细胞存活率下降,直接诱导细胞内ROS升高,进一步引起细胞染色体损伤和ATM介导的DNA损伤,最终导致细胞凋亡。     

女贞子提取物的体内抗肿瘤作用

目的：观察女贞子中含有熊果酸和齐墩果酸粗提物的抗肿瘤作用。方法：采用小鼠移植性肿瘤模型，观察了女贞子提取物（Extract of Nu Zhen Zi,ENZZ）对H22肝癌、S180肉瘤荷瘤小鼠的抑瘤作用，对S180荷瘤小鼠的生命延长作用。结果：女贞子提取物对小鼠移植性肿瘤H22有抑制，ENZZ250mg/kg，500mg/kg，1000mg/kg组平均抑瘤率分别为41.49%、48.32%、45.45%，对S180肉瘤实体型有抑制作用，上述三个剂量的抑瘤率分别为37.50%、44.23%、46.15%；女贞子提取物对S180肉瘤腹水型，H22肝癌腹水型无生命延长作用。结论：女贞子提取物对移植性肿瘤H22肝癌、S180肉瘤有抑制作用。     

苯并芘诱导细胞转化过程中PP2A B56ε表达与DNA损伤修复功能的研究

目的：探讨蛋白磷酸酶2A-B56ε亚基（PP2A B56ε,由PPP2R5E基因编码）的表达在苯并芘诱导细胞转化过程中对DNA损伤修复功能的影响。方法实时荧光定量-PCR（QRT-PCR）检测BEAS-2B细胞（人正常肺上皮细胞）、和BEAS-2BT细胞（苯并芘诱导恶变的人肺上皮细胞）中PPP2R5E的mRNA转录水平;免疫印迹法（Western Blot）检测细胞中 B56ε编码蛋白的水平;中性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验,SCGE）检测喜树碱（ camptothecin,CPT）处理的细胞DNA断裂损伤及修复情况;免疫印迹法检测 CPT 处理诱导γH2AX（磷酸化组蛋白 H2AX）水平。结果与 BEAS-2B 细胞相比较,BEAS-2BT 细胞中PPP2R5E其mRNA水平及B56ε蛋白水平均显著高表达（P〈0.05）。与BEAS-2B细胞相比,经CPT处理恢复后,BEAS-2BT细胞尾距显著降低（P〈0.05）。表明BEAS-2BT细胞中H2AX的磷酸化水平明显降低。结论在苯并芘诱导细胞转化过程中PP2A B56ε通过介导γH2AX去磷酸化影响DNA损伤修复功能。     

半边莲煎剂对小鼠H22肝癌荷瘤细胞系C-erbB-2和P53表达的影响

目的观察半边莲煎剂对实验性小鼠H22型肝癌的抑制作用。方法小鼠右腋下皮下种瘤造成实体瘤模型,昆明种小鼠24只（♀♂各半）,随机分为3组,即中药组、西药组、对照组,每组8只。造模后分别给予半边莲煎剂灌胃、5-FU腹腔注射、生理盐水灌胃给药,连续给药14d。第15天以颈椎脱臼法处死,并将肿瘤组织取出称其质量,计算抑瘤率;制作小鼠肿瘤细胞切片,用免疫组织化学方法对肿瘤细胞切片进行染色,检测半边莲煎剂对肿瘤的抑制作用及对C-erbB-2和P53表达的影响。结果半边莲煎剂对小鼠肝癌细胞的生长抑制率为33．98％,C-erbB-2及P53在3组中均呈阳性表达,中药组C-erbB-2表达减弱,P53表达升高,与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论半边莲煎剂对小鼠H22型肝癌有明显的抑制作用,其机制可能与肿瘤细胞内C-erbB-2、P53蛋白表达有关。     

南蛇藤多萜通过抑制Chk1介导胃癌细胞DNA损伤并诱导其凋亡

目的从DNA损伤应答角度探讨南蛇藤多萜(the total terpenoids of Celastrus orbiculatus Thunb.,TTC)对胃癌细胞的抑制作用。方法CCK-8实验考察不同浓度(0、20、40、80、160、320 mg·L^-1)的南蛇藤多萜对胃癌细胞的毒性影响;克隆形成率实验检测TTC对胃癌细胞的克隆形成的影响;彗星实验分析南蛇藤多萜对胃癌细胞DNA的影响;Western blot实验检测DNA损伤相关蛋白γH2AX、Poly-PAR、p-Chk1以及cleaved-PARP1的影响。结果TTC在24 h,48 h,72 h对AGS和MKN-45细胞的IC 50分别是421.1、99.68、58.57 mg·L^-1和308.2、124.1、68.21 mg·L^-1;克隆形成实验表明5、10 mg·L^-1的TTC对AGS和MKN-45细胞的克隆形成抑制率分别为29.67%、61.46%和42.73%、64.39%;TTC能够加重胃癌细胞DNA损伤而同等剂量对正常胃粘膜上皮细胞GES-1细胞DNA几乎无损伤;TTC能够增加DNA单双链断裂Poly-PAR、γH2AX蛋白的表达;抑制Chk1的磷酸化水平表达,并增加cleaved-PARP1的蛋白表达。结论TTC能够抑制DNA损伤应答激酶Chk1的激活,从而诱导胃癌细胞DNA单双链断裂加剧最终诱导细胞凋亡。     

三种GC-1细胞DNA损伤模型的建立及比较分析

目的建立3种小鼠睾丸精原细胞株GC-1细胞DNA损伤模型并分析其异同。方法分别采用UVB辐照、D-半乳糖(D-Galactose,D-Gal)、博来霉素(bleomycin,BLM)刺激GC-1细胞不同时间,Western blot和免疫荧光法检测γ-H2AX表达及定位;免疫荧光法检测8-OHdG表达及定位;Western blot法检测p-p53和p21表达水平。结果UVB辐照和D-Gal处理后,γ-H2AX蛋白表达分别在4 h和6 h达高峰BLM刺激后,γ-H2AX蛋白表达逐渐上升且BLM浓度越高,其达到高峰时间越短。UVB辐照和BLM刺激后,胞核胞质内均有8-OHdG表达,且时间越长,核内表达越多;D-Gal处理后,8-OHdG主要表达在胞质,且在6 h达高峰。UVB辐照后,p-p53和p21蛋白表达不断上升,p21表达较滞后;D-Gal处理后,p-p53和p21表达分别在6 h和12 h达高峰;BLM刺激后,p-p53和p21蛋白表达呈同步上升趋势,BLM浓度越高,其达高峰时间越短。结论成功建立3种GC-1细胞DNA损伤模型,且D-Gal处理GC-1细胞DNA损伤较轻,而UVB辐照和BLM刺激DNA损伤较重。     

糙苏素的抗肿瘤作用及机制研究

目的:研究糙苏素的抗肿瘤作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用血清药理学与体内、外抑瘤实验相结合的方法,MTT法检测糙苏素含药血清对体外培养的人白血病K562细胞增殖的抑制作用,聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测K562细胞在糙苏素作用后端粒酶活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变;体内实验采用小鼠肝癌H22细胞株接种小鼠,连续给药14d,计算抑瘤率。结果:糙苏素含药血清在10%～50%剂量范围内对K562细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);糙苏素作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随糙苏素浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);K562细胞的DNA合成后期/分裂期(G2/M)细胞含量显著增高(P<0.01);糙苏素(2.5、5、10mg·kg-1)灌胃能显著抑制小鼠移植性肝癌H22细胞的生长。结论:糙苏素具有抗肿瘤作用,其作用是通过抑制肿瘤细胞的端粒酶活性而实现的。     

Indole-3-carbinol induces apoptosis through p53 and activation of caspase-8 pathway in lung cancer A549 cells

Indole-3-carbinol (I3C) has anti-tumor effects in various cancer cell lines. However, the anti-tumor effect of I3C on human lung cancers has been rarely reported. We investigated the anti-tumor effects and its mechanism of I3C on human lung carcinoma A549 cell line. Treatment of the A549 cells with I3C significantly reduced cell proliferation, increased formations of fragmented DNA and apoptotic body, and induced cell cycle arrest at G0/G1 phase. I3C increased not only the protein levels of cyclin D1, phosphorylated p53, and p21 but also the expression of Fas mRNA. Cleavage of caspase-9, -8, -3 and PARP also was increased by I3C. Treatment with wortmannin significantly suppressed both I3C-induced Ser15 phosphorylation and accumulation of p53 protein. The inhibition of caspase-8 by z-IETD-FMK significantly decreased cleavage of procaspase-8,-3 and PARP in I3C-treated A549 cells. Taken together, these results demonstrate that I3C induces cell cycle arrest at G0/G1 through the activation of p-p53 at Ser 15 and induces caspase-8 mediated apoptosis via the Fas death receptor. This molecular mechanism for apoptotic effect of I3C on A549 lung carcinoma cells may be a first report and suggest that I3C may be a preventive and therapeutic agent against lung cancer.     

黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:研究黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:以H22肝癌细胞接种于正常小鼠左前肢腋窝皮下复制肝癌H22荷瘤模型。实验分为模型对照、环磷酰胺(30mg·kg-1)和黄芩素高、中、低剂量(80、40、20mg·kg-1)组。灌胃给药,每天1次,连续15d。末次给药后处死小鼠,剥离完整的肿瘤组织称重,并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡率;按试剂盒说明书测定肿瘤组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的活性;RT-PCR测定瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平。结果:高、中剂量黄芩素可显著抑制模型小鼠体内肿瘤生长(P<0.01或P<0.05),抑制率分别为61.63%和44.65%;可显著提高G0/G1期细胞百分比(P<0.05),并减少S期细胞(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组比较,黄芩素高、中、低剂量组细胞凋亡率显著提高(P<0.01或P<0.05)。高、中剂量黄芩素可显著增强肿瘤组织中Capcase-3活性(P<0.01或P<0.05),抑制Bcl-2mRNA表达(P<0.01或P<0.05);高剂量黄芩素可显著提高肿瘤组织中BaxmRNA表达(P<0.05)。结论:黄芩素可促进肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与增强Capcase-3活性、提高Bax表达,并抑制Bcl-2表达有关。     

INO-1001, a novel inhibitor of poly(ADP-ribose) polymerase,enhances tumor response to doxorubicin

Summary Poly(ADP-ribose) synthetase inhibitor, INO-1001, is known to sensitize cells to radiation in vitro by inhibiting the repair of DNA damage. Recent evidence has suggested that PARP inhibition may also be a way of selectively targeting p53 deficient cancer cells. The present study tested INO-1001 for its in vivo effect on the chemoresponse of two p53 deficient tumors, human breast cancer MDA-MB-231 and murine mammary carcinoma MCa-K. Doxorubicin was used as the DNA damaging agent and tumor growth delay assay was used as the endpoint. Results showed that INO-1001 was highly effective in enhancing the anti-tumor effects of Doxorubicin for both MDA-MB-231 (EF = 1.88) and MCa-K (EF = 1.64). We conclude that PARP inhibitor INO-1001 has high potential for enhancing the anti-tumor effects of chemotherapy agents such as Doxorubicin against p53 deficient breast cancer.     

牛黄天龙方药对荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤作用的实验研究

目的了解中药复方牛黄天龙方药对荷瘤小鼠免疫功能方面的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型;分高、中、低3个剂量组灌胃给药,疗程结束后,取小鼠血清,检测白细胞介素-2（IL-2）及肿瘤坏死因子（TNF—α）水平;分离脾细胞培养,测定自然杀伤细胞（NK）,淋巴因子活化杀伤细胞（LAK）活性;分离睥细胞检测T淋巴细胞亚群。结果牛黄天龙方药具有明显增强H22荷瘤小鼠细胞免疫功能的作用并可延长荷瘤小鼠的生存时间（P〈0．05）。结论牛黄天龙方药对H22荷瘤小鼠具有显著免疫调节的抗肿瘤作用。     

Bisdemethoxycurcumin induces DNA damage and inhibits DNA repair associated protein expressions in NCI‐H460 human lung cancer cells

Nonsmall cell lung carcinoma (NSCLC) is a devastating primary lung tumor resistant to conventional therapies. Bisdemethoxycurcumin (BDMC) is one of curcumin derivate from Turmeric and has been shown to induce NSCLC cell death. Although there is one report to show BDMC induced DNA double strand breaks, however, no available information to show BDMC induced DNA damage action with inhibited DNA repair protein in lung cancer cells in detail. In this study, we tested BDMC‐induced DNA damage and condensation in NCI‐H460 cells by using Comet assay and DAPI staining examinations, respectively and we found BDMC induced DNA damage and condension. Western blotting was used to examine the effects of BDMC on protein expression associated with DNA damage and repair and results indicated that BDMC suppressed the protein levels associated with DNA damage and repair, such as 14‐3‐3σ (an important checkpoint keeper of DDR), O6‐methylguanine‐DNA methyltransferase, DNA repair proteins breast cancer 1, early onset, mediator of DNA damage checkpoint 1 but activate phosphorylated p53 and p‐H2A.X (phospho Ser140) in NCI‐H460 cells. Confocal laser systems microscopy was used for examining the protein translocation and results show that BDMC increased the translocation of p‐p53 and p‐H2A.X (phospho Ser140) from cytosol to nuclei in NCI‐H460 cells. In conclusion, BDMC induced DNA damage and condension and affect DNA repair proteins in NCI‐H460 cells in vitro. © 2015 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 31: 1859–1868, 2016.     

半边莲煎剂对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对P27和Survivin表达的影响

目的研究半边莲煎剂对肝癌H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法建立肝癌H22荷瘤小鼠实体瘤模型,将24只小鼠分为3组:生理盐水组、半边莲煎组和5-氟脲嘧啶组各8只。通过测定荷瘤小鼠的瘤质量、抑瘤率观察半边莲煎剂对肿瘤生长的影响,采用免疫组织化学技术检测P27和Survivin的表达情况。结果半边莲煎剂能使肝癌H22荷瘤小鼠的瘤质量减少,抑瘤率为33.98%,显著低于对照组(P<0.05);P27和Survivin在3组中均呈阳性表达,单因素方差分析表明:半边莲煎剂组P27表达增强,Survivin表达减弱,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),半边莲煎剂组与5-Fu组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论半边莲煎剂具有明显的抗肿瘤作用,其作用机制可能与P27和Survivin的表达有关。