鞘磷脂合酶的生物学功能及与动脉粥样硬化的关系

鞘磷脂是细胞膜及血浆脂蛋白中的重要脂质,有着广泛而重要的生物学功能,并与动脉粥样硬化的发生发展密切相关,其含量改变已成为动脉粥样硬化的独立危险因素之一;而鞘磷脂合酶是鞘磷脂合成的关键酶,其表达水平及活性高低直接影响到动脉粥样硬化的病理过程,有可能成为动脉粥样硬化治疗的新靶点。该文就鞘磷脂合酶的结构、生物学功能、在动脉粥样硬化形成过程中的作用,及其作为AS治疗潜在靶点的研究近况进行了全面的综述。     

鞘磷脂及神经酰胺对人结肠癌细胞(HT-29)的影响

目的　研究鞘磷脂及其代谢产物神经酰胺对人结肠癌细胞的影响。方法　采用噻唑蓝 (MTT)显色法、细胞核分裂指数和3H TdR掺入试验方法 ,所设剂量分别为鞘磷脂 5、10、2 0、40 μg ml和神经酰胺 6 2 5、12 5、2 5、5 0 μmol L ,分别以无水乙醇和二甲基亚砜 (DMSO)为溶剂对照。结果　鞘磷脂对HT 2 9细胞的生长无明显作用 ,神经酰胺对HT 2 9细胞的生长有明显抑制作用。在MTT试验中 ,不同浓度神经酰胺对HT 2 9细胞的 7d抑制率分别为 3 9%、85 %、98%和98% ;在核分裂指数试验中 ,随着神经酰胺剂量的增高 ,其核分裂指数明显降低 ;在3H TdR掺入试验中 ,可见随着神经酰胺剂量的增高 ,3H TdR掺入到HT 2 9细胞中明显的减少 ,与阴性对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　鞘磷脂对HT 2 9细胞生长无明显作用 ,神经酰胺对HT 2 9细胞的生长增殖有明显抑制作用 ,这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一。     

地昔帕明对兔动脉斑块细胞凋亡及内质网应激的影响

目的观察地昔帕明(DES)对动脉粥样硬化(AS)模型兔斑块内细胞凋亡及内质网应激的影响。方法腹主动脉球囊损伤及高脂饲料喂养12周建立兔AS模型,最后4周随机分为AS和AS+DES组,同时设立普通饲料喂养的正常对照(NC)组和DES组,DES剂量为4 mg·kg~(-1)·d~(-1),对照组以生理盐水代替灌胃治疗。12周末,观察各组兔血清血脂水平,UPLC法测定血浆及主动脉酸性鞘磷脂酶(ASM)和神经酰胺含量,TUNEL染色测定凋亡细胞,Western blot检测GRP78和CHOP蛋白表达。结果 DES干预对正常兔和AS模型兔的TG、TC、HDL-C、LDL-C、ox-LDL水平无明显影响,但可降低血浆和主动脉ASM、神经酰胺含量及腹主动脉斑块凋亡细胞数量,下调斑块组织的GRP78和CHOP蛋白表达。结论 DES可通过抑制ASM活性,下调神经酰胺水平,改善内质网应激,从而减少AS斑块内的细胞凋亡,缓解AS斑块形成。     

酸性鞘磷脂酶在酒精性肝病中的作用CSCD

鞘磷脂酶(sphingomyelinase,SMase)是鞘磷脂代谢的关键酶,通过水解磷酸二酯键产生第二信使神经酰胺(ceramide,Cer),参与调节机体多种生化反应。依据SMase生物活性的最适宜pH环境,将其分为酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASMase)、中性SMase和碱性SMase。其中生物体内ASMase的含量及生物学活性均占比最高,是SMase最重要也是分布最广的亚型^([1])。     

080 甘氨酸转运子：由基因敲除揭示的主要药理作用

基因敲除实验揭示了体内高亲和力甘氨酸转运子（GLYT）的功能。研究纯合型敲除小鼠发现，GLYT可能是调节抑制性甘氨酸神经传递的特异性临床靶标。杂合型小鼠的分子及行为学分析揭示，GLYT1抑制剂在治疗某些神经和精神疾病方面的潜力。     

“鞘磷脂变阻器”在细胞中的作用机制研究

鞘磷脂代谢产物在细胞中具有重要的生理学意义。其代谢产物中神经酰胺和鞘氨醇具有抑制细胞生长、促进细胞凋亡的作用。而1-磷酸鞘氨醇（S1P）则具有促进细胞增殖、分化的作用。鞘磷脂代谢产物的动态平衡决定着细胞的生存和死亡。据此有人提出了“鞘磷脂变阻器”的概念。深入探讨鞘磷脂代谢产物．不但能从分子层面去更多了解细胞的生存机制,而且能为临床提供疾病治疗的新靶点。     

四逆汤对大鼠肠缺血再灌注后肠粘膜细胞凋亡的影响及神经酰胺机制

目的　研究四逆汤(SND)对大鼠肠缺血再灌注 (II/R后肠粘膜细胞凋亡的影响,并从神经酰胺信使通路探讨其抗凋亡机制。方法　24只SD大鼠随机分为 3组(n=8):对照组(仅分离不阻断肠系膜上动脉)、模型组 (阻断肠系膜上动脉 1h后再灌注 3h)、SND组(每天 3g·kg-1 SND灌胃,连续 3天后手术)。取回肠末端组织行电镜检查;检测肠粘膜组织SOD活性、MDA及神经酰胺含量的变化,TUNEL法检测肠粘膜上皮细胞的凋亡指数,RT PCR法分析肠粘膜组织鞘磷脂酶(SMase)基因表达的变化。结果　模型组电镜下可发现许多典型凋亡的上皮细胞,凋亡指数达 30 82%6 34%,SND预处理后凋亡指数为 14 91%±5 40%,明显低于模型组(P<0 01);模型组SOD活性明显低于对照组 (<0 01),MDA与神经酰胺含量以及SMase的基因表达明显高于对照组(P<0 01),且神经酰胺含量与凋亡指数具有良好的正相关 (r=0 852,P<0 01),与SOD活性具有负相关(r= -0 775,P<0 01 )。SND预处理能明显增强SOD活性,降低肠粘膜组织MDA及神经酰胺含量,减少肠粘膜组织SMase的基因表达(P<0 01)。SND组凋亡指数与神经酰胺的含量亦呈显著的正相关 (r=0 832,P<0 01 )。结论　SND具有抗II/R后肠粘膜细胞凋亡的作用,其作用与它清楚氧自由基、抑制SMase的基因表达、减少神经酰胺的生成有关。     

自噬基因Atg5的缺失对精子成熟的影响

目的探讨自噬蛋白Atg5在维持附睾生理功能及精子的成熟过程中发挥的作用。方法通过基因敲除技术构建附睾头4-5段主细胞Atg5特异性敲除小鼠模型,根据基因型分为三组:对照组(野生型)、杂合敲除组以及纯合敲除组。8周龄时,做合笼实验并记录致孕率和产仔数,14周龄时通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化,并通过病理组织染色观察小鼠附睾组织的形态学变化,以及通过Western blot和免疫荧光技术检测三组模型鼠中ATG5蛋白表达和自噬通路变化情况。结果与对照组、杂合敲除组相比,纯合敲除组小鼠的附睾头4-5段主细胞Atg5特异性敲除后,自噬标记蛋白LC3-Ⅰ以及p62得到积累,自噬过程成功阻断;但纯合敲除组小鼠的附睾组织形态、精子活力、精子数目、产仔率和致孕率均无变化。结论在正常条件下(无外界刺激),Atg5特异性敲除导致附睾头4-5段的自噬过程阻断后,对小鼠附睾的生理功能和精子成熟过程没有影响。     

一氧化氮合酶抑制剂和增强剂的高通量筛选

目的建立一氧化氮合酶(NOS)活性的高通量检测方法，筛选调节NOS活性的药物。方法通过NADPH荧光值的变化，间接反映NOS活性。通过对反应体系的优化，调整各反应底物(NADPH，L-Arg，NOS)及抑制剂(L-NNA)的浓度，建立高通量筛选模型并对5 600个样品进行筛选。结果方法简便、容易操作、灵敏度高、结果稳定，发现了一批对NOS具有抑制或增强作用的化合物。结论此法适用于高通量药物筛选。     

CYP2C19基因多态性在中草药物代谢性质筛选中的初步研究

目的：体外测定三个CYP2C19基因型（CYP2C19＊1、CYP2C19＊2、CYP2C19＊3）酶动力学常数和药物抑制常数,研究CYP2C19基因多态性对药物代谢的影响。方法：以CEC（3-cynao-7-ethoxycoumarin）作为CYP2C19特异性荧光底物进行酶学反应,检测CYP2C19三个多态性酶的活性,使用非线性回归方法计算酶促反应动力学参数Km值,Vmax值和内在清除率Clint值（Vmax/Km）。通过将特异性荧光底物CEC,待检测中草药物以及其他用来模拟体内环境的相关实验条件相组合进行体外酶抑制反应,分析待检测的19种中草药物对CYP2C19基因多态性的抑制效应,并计算其IC50值。结果：抑制筛选实验表明：2C19参与代谢的底物和已知抑制剂均对其有抑制作用,多数中草药物对CYP2C19抑制作用微弱或者无抑制作用;化学结构或治疗作用类似的同类药品对CYP2C19的抑制情况不一;不同基因型被同一种药物抑制程度也不尽相同,甚至差别较大。结论：建立了高效、稳定、简便的荧光高通量药物筛选平台,为后期研究CYP2C19应用于创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测奠定了基础,为临床潜在药物相互作用提供前期实验依据。     

小檗碱对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用研究

目的:研究小檗碱对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:选用昆明种小鼠,均分为6组,即正常、模型、联苯双酯和小檗碱高、中、低剂量(40、20、10mg.kg-1)组。连续灌胃给药5d后腹腔注射0.1%CCl4(10mL.kg-1)致小鼠急性肝损伤,测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组比较,小檗碱各剂量组均能显著降低小鼠血清ALT和AST活性(P<0.05或P<0.01),升高小鼠肝脏SOD活性(P<0.05或P<0.01),降低肝脏MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:小檗碱对CCl4所致的小鼠急性肝脏损伤有保护作用,其机制与提高小鼠的抗氧化能力有关。     

两种入路方法行全膝关节置换术的比较

目的探讨微创外科手术(MIS)行全膝关节置换术(TKA)两种入路方法的比较。方法50例全膝关节置换术患者随机分为经小切口股内侧肌入路组(MMV)25例和经小切口髌骨内侧旁入路组(MPM)25例;分别对切口长度、外侧支持带松解率、手术时间、术后引流量、术后血红蛋减少量、直腿抬高时间、术后活动度、疼痛评分和功能评分进行比较。结果MMV组外侧支持带松解率(8.7%)明显低于MPM组(26.5%)(χ2=2.772,P<0.01);MMV组手术时间(98±9)min明显高于于MPM组(68±10)min(t=12.199,P<0.01);MMV组直腿抬高时间(4±2)d明显低于MPM组(8±2)d(t=9.750,P<0.01);MMV组起始下地行走时间(6±2)d明显低于MPM组(11±3)d(t=9.550,P<0.01)。结论经微创中股入路行全膝置换术,术后膝关节功能恢复快,早期疗效满意。     

鱼龙草颗粒止咳祛痰抗炎作用实验研究

目的 探讨鱼龙草颗粒对小鼠的止咳、祛痰、抗炎作用,阐明鱼龙草颗粒药效学作用机制,为临床使用提供理论依据.方法 将150只小鼠（做3个试验,每个试验50只,每个试验分5组,每组10只）随机分为空白对照组（去离子水,0.2 ml/只）、阳性药物组（磷酸可待因30 mg/kg或盐酸氨溴索0.05 g/kg或阿司匹林0.2 g/kg）和观察组（鱼龙草颗粒）中高剂量组（12.0 g/kg）、中剂量组（6.0 g/kg）、低剂量组（3.0 g/kg）三剂量组,按分组剂量每天上午9：00左右,每只小鼠灌胃给药1次,连续给药5d后进行实验：①小鼠SO2引咳试验：用SO2刺激小鼠呼吸道15 s引起小鼠咳嗽反应,观察3种不同剂量组及磷酸可待因组小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数;②小鼠气管酚红分泌排泄试验：利用酚红注射后可在小鼠气管分泌排泄机制,腹腔注射2.5％酚红氯化钠注射液30 min,空气栓塞处死小鼠,取出气管,测量3种不同剂量组及盐酸氨溴索组小鼠气管对酚红分泌排泄量;③小鼠二甲苯所致耳廓肿胀试验：利用二甲苯外涂可引起小鼠耳廓炎症反应方法,给予小鼠右耳涂抹二甲苯（100％浓度）,4h后处死小鼠,取下左右耳,对3种不同剂量组及阿司匹林组称重.以上3种试验均设空白对照组并与3种不同剂量组及阳性药物组进行对比观察.结果 ①小鼠SO2引咳试验结果显示：在延长小鼠咳嗽潜伏期方面,高、中剂量组与空白组比较,差异有统计学意义[（60±17）、（58±15）s比（50±18）s] （P ＜0.05）;在减少小鼠咳嗽次数方面,高、中剂量组与空白组比较,差异有统计学意义[（15±5）、（16±9）次/3 min比（35±10）次/3 min] （P ＜0.01）,与低剂量组[（20±7）次/3 min]比较差异有统计学意义（P＜0.05）;磷酸可待因组[咳嗽潜伏期（68±15）s、咳嗽次数（12±6）次/3 min]与空白组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.证明鱼龙草颗粒可延长小鼠咳嗽潜伏期、明显减少咳嗽次数.②空白对照组、鱼龙草颗粒高中低剂量组、盐酸氨溴索组酚红量分别为（1.03±0.37）、（1.59±0.23）、（1.56±0.21）、（1.43±0.26）、（1.55±0.22） mg/L.小鼠气管酚红分泌排泄试验结果显示：高、中剂量组与空白组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;低剂量组与空白组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;盐酸氨溴索组与空白组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.③小鼠结果显示：高、中、低3种剂量组及阿司匹林组4组与空白组比较,差异均有统计学意义[（8.2±2.0）、（10.0±1.1）、（10.9±1.6）、（8.0±1.1）mg比（14.2±1.7）mg]（均P＜0.01）.结论 小鼠的SO2引咳试验、气管酚红分泌排泄试验、二甲苯所致耳廓肿胀试验显示：鱼龙草颗粒对小鼠具有明显的止咳、祛痰、抗炎作用,其临床疗效有待进一步观察.     

骨疼静胶囊对热板法及尾部加压法致小鼠疼痛的影响

目的研究骨疼静胶囊对热板法致小鼠疼痛及对尾部加压法致小鼠疼痛的影响。方法取体重19~22 g雌性小鼠,随机分组;分别灌服大中小剂量骨疼静胶囊混悬液,颈复康颗粒混悬液和同体积的0.5%CMC。按热板法及尾部加压法测定小鼠痛阈,并计算痛阈提高值。结果骨疼静胶囊组和颈复康颗粒组可显著提高小鼠痛阈(P<0.01);骨疼静胶囊组和颈复康颗粒组可显著提高在小鼠30 min和60 min的压痛痛阈(P<0.01)。结论骨疼静胶囊有显著的镇痛作用。     

复方双参合剂对小鼠耐缺氧和抗运动疲劳能力的影响

目的：研究复方双参合剂对小鼠耐缺氧和抗疲劳的作用。方法：50只小鼠随机分为空白组（生理盐水10 ml·kg~（-1））、丹参组（丹参提取物0.2 g·kg~（-1））、人参组（人参皂苷0.1 g·kg~（-1））、复方双参组（丹参提取物0.2 g·kg~（-1）＋人参皂苷0.1 g·kg~（-1））和红景天组（阳性对照,红景天提取物0.6 g·kg~（-1））,每组10只。连续灌胃给药20 d后,测定小鼠常压密闭缺氧存活时间、减压缺氧存活率和负重游泳时间,并测定小鼠运动后血清尿素氮含量、肝糖原含量、血乳酸含量和乳酸脱氢酶活性。结果：与空白组相比,复方双参组小鼠常压密闭缺氧存活时间显著延长,延长率为45.95%（P〈0.01）;小鼠运动后血清尿素氮含量及乳酸堆积显著减少（P〈0.01）,肝糖原含量及乳酸脱氢酶活性显著增加（P〈0.01）,其作用强于红景天组。减压缺氧条件下,给药组存活率较空白组显著提高（P〈0.05或0.01）。红景天组与复方双参组与其他给药组相比,小鼠负重游泳时间显著延长（P〈0.05或0.01）。结论：复方双参合剂能显著增强小鼠耐缺氧和抗疲劳的能力。     

桂产藿香蓟乙醇提取物抗炎作用及其机制研究

目的：探讨桂产藿香蓟乙醇提取物的抗炎作用及其作用机制。方法：采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀,观察桂产藿香蓟乙醇提取物对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响;采用角叉菜胶致小鼠足肿胀法,观察桂产藿香蓟乙醇提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响,并分别测定小鼠炎性组织中丙二醛（MDA）、前列腺素E2（PGE2）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;采用角叉菜胶致大鼠足肿胀法,观察桂产藿香蓟乙醇提取物对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的影响,同时测定大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和白介素-6（IL-6）的含量。结果：与空白对照组比较,桂产藿香蓟乙醇提取物能显著抑制小鼠耳廓肿胀及足肿胀（P〈0.05或0.01）,其中高、中、低剂量组（6.0,3.0,1.5g·kg-1）耳廓肿胀和足肿胀抑制率分别为29.24%,16.42%,11.21%和28.66%,18.79%,13.13%,并能降低小鼠炎足中炎性组织PGE2、MDA含量,提高其SOD活力（P〈0.05或0.01）;显著抑制大鼠的足肿胀（P〈0.05或0.01）,其中在3h时高、中、低剂量组（6.0,3.0,1.5g·kg-1）的足肿胀抑制率分别为43.69%,36.01%,23.29%,并能显著降低肿胀足大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量（P〈0.05或0.01）。结论：桂产藿香蓟乙醇提取物抗炎作用显著,其机制可能与清除氧自由基、减少炎症因子和致炎细胞因子的释放有关。     

口服异氟烷、七氟烷对小鼠的麻醉作用观察

目的:观察口服异氟烷(Iso)、七氟烷(Sev)对小鼠的镇痛及催眠等麻醉作用。方法:按分层随机设计,将180只小鼠分为18组(n=10),分别用于热板实验、扭体实验(各60只):对照组(生理盐水(NS)组),Iso1、Iso2、Iso3组(1、2、3mL·kg-1),Sev1、Sev2组(5、10mL·kg-1)。催眠实验(60只):对照组(NS组),Iso1、Iso2、Iso3组(6、8、10mL·kg-1),Sev1、Sev2组(20、40mL·kg-1)。小鼠Iso、Sev灌胃后用热板和扭体实验观察小鼠热板痛阈值(HPPT)和扭体次数的变化情况,以评估镇痛作用;用催眠实验的睡眠时间变化情况评估催眠作用。结果:与对照组比较,Iso(1～3mL·kg-1)、Sev(5、10mL·kg-1)灌胃能增加HPPT值,减少扭体次数(P<0.05,P<0.01);Iso(6～10mL·kg-1)、Sev(20、40mL·kg-1)灌胃后能延长睡眠时间(P<0.01)。结论:在本实验条件下,小鼠Iso、Sev灌胃可产生有效的催眠和镇痛等麻醉作用。     

杨桃根醇提物对糖尿病模型小鼠的血糖及抗氧化能力的影响研究

目的:研究杨桃根醇提物(ACLRE)对糖尿病模型小鼠的血糖及抗氧化能力的影响。方法:通过对小鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型。将小鼠分成5组,即正常、模型、格列本脲及ACLRE高、低剂量组,分别灌胃给药14d,在第0、7、14天时测定小鼠的空腹血糖值;并于第14天处死小鼠,测定小鼠血清及肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)值。结果:与模型组比较,ACLRE高、低剂量组均能显著降低糖尿病模型小鼠的空腹血糖(P<0.01),且杨桃根醇提物高剂量组小鼠血清及肝脏中的SOD活性升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.01)。结论:ACLRE能显著降低糖尿病模型小鼠血糖,提高机体SOD活性,降低体内MDA含量,从而提高其抗氧化能力,是一种潜在的治疗糖尿病及其并发症的药物。     

糙苏素的抗肿瘤作用及机制研究

目的:研究糙苏素的抗肿瘤作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用血清药理学与体内、外抑瘤实验相结合的方法,MTT法检测糙苏素含药血清对体外培养的人白血病K562细胞增殖的抑制作用,聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测K562细胞在糙苏素作用后端粒酶活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变;体内实验采用小鼠肝癌H22细胞株接种小鼠,连续给药14d,计算抑瘤率。结果:糙苏素含药血清在10%～50%剂量范围内对K562细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);糙苏素作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随糙苏素浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);K562细胞的DNA合成后期/分裂期(G2/M)细胞含量显著增高(P<0.01);糙苏素(2.5、5、10mg·kg-1)灌胃能显著抑制小鼠移植性肝癌H22细胞的生长。结论:糙苏素具有抗肿瘤作用,其作用是通过抑制肿瘤细胞的端粒酶活性而实现的。     

黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:研究黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:以H22肝癌细胞接种于正常小鼠左前肢腋窝皮下复制肝癌H22荷瘤模型。实验分为模型对照、环磷酰胺(30mg·kg-1)和黄芩素高、中、低剂量(80、40、20mg·kg-1)组。灌胃给药,每天1次,连续15d。末次给药后处死小鼠,剥离完整的肿瘤组织称重,并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡率;按试剂盒说明书测定肿瘤组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的活性;RT-PCR测定瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平。结果:高、中剂量黄芩素可显著抑制模型小鼠体内肿瘤生长(P<0.01或P<0.05),抑制率分别为61.63%和44.65%;可显著提高G0/G1期细胞百分比(P<0.05),并减少S期细胞(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组比较,黄芩素高、中、低剂量组细胞凋亡率显著提高(P<0.01或P<0.05)。高、中剂量黄芩素可显著增强肿瘤组织中Capcase-3活性(P<0.01或P<0.05),抑制Bcl-2mRNA表达(P<0.01或P<0.05);高剂量黄芩素可显著提高肿瘤组织中BaxmRNA表达(P<0.05)。结论:黄芩素可促进肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与增强Capcase-3活性、提高Bax表达,并抑制Bcl-2表达有关。