熊果酸对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞周期及凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸对口腔鳞状细胞癌(Tca8113)的生长抑制情况及其对细胞周期和凋亡的作用。方法用浓度0、10、20、30、40、50μmol/L的熊果酸对口腔鳞状细胞癌进行干预,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡。结果 (1)熊果酸对Tca8113细胞的增殖抑制具有时间--剂量依赖性,各实验组细胞增殖抑制率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)各浓度组熊果酸将细胞阻滞于S期,浓度30、40、50μmol/L的熊果酸总凋亡率分别为30.76%、43.77%及70.15%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论熊果酸在体外抑制口腔鳞状细胞癌生长,呈时间--剂量依赖性,并阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。     

普洱茶水提取物体外抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖并诱导凋亡的研究

 目的   研究普洱茶水提取物（Pu-erh tea extract,PTE）对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用及其作用机制。 方法   采用四甲基偶氮唑盐比色法检测PTE对Tca8113细胞和牙周膜成纤维细胞生长和增殖的抑制作用,用倒置相差显微镜观察PTE作用后细胞的形态变化,利用流式细胞术分析PTE对舌鳞癌细胞的作用机制。实验数据采用GraphPad Prism 5.01软件进行统计分析,应用单因素方差分析对数据进行比较。 结果   在PTE作用时间相同的情况下,随着其浓度的增加,Tca8113细胞存活率明显降低,当PTE浓度为125.00 μg/ml时,细胞存活率下降最为显著（F=1 283,P<0.000 1）。而当PTE浓度相同的情况下,随着作用时间的增加,Tca8113细胞存活率也随之降低,并且在作用12 h时差异最显著（F=111.6,P<0.000 1）。PTE对正常牙周膜成纤维细胞无明显抑制作用。显微镜观察发现,舌鳞癌细胞经PTE处理后出现皱缩、变圆、脱离贴壁状态;而牙周膜成纤维细胞形态无变化。流式细胞术检测发现,舌鳞癌细胞经浓度为125.00 μg/ml的PTE作用12 h后,细胞凋亡率为27.65%±0.47%。 结论   PTE能通过诱导细胞凋亡抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖,提示其具有防治舌鳞癌的作用。     

野黄芩苷对人舌鳞癌 Tca8113 细胞凋亡及 caspase-8表达的影响

目的 探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌 Tca8113 细胞凋亡的可能机制。方法 将体外培养的人舌鳞癌Tca8113 细胞分成对照组和不同浓度野黄芩苷组（浓度分别为 80、 120、 160 mg/L）, 每组设 3 个复孔。采用 Tunel检测细胞凋亡情况; 采用免疫细胞化学法和 Western blot 法检测 caspase-8 蛋白表达情况。结果 （1） 80、 120、 160 mg/L 野黄芩苷组 Tca8113 细胞凋亡率高于对照组（ [ 17.63±0.25） %、（36.23±0.36） %、（51.84±0.58） % vs（4.45±0.27） %, P < 0.05]。（2）与对照组相比, 80、 120、 160 mg/L 野黄芩苷组 caspase-8 蛋白的表达增加（0.283±0.040 vs 0.474±0.031、 0.592±0.077、 0.781±0.020, P < 0.05）。结论 野黄芩苷能明显诱导舌鳞癌细胞 Tca8113 的凋亡, 可能与上调 caspase-8 蛋白表达有关。     

Cyclooxygenase-2 expression in oral squamous cell carcinoma

Cyclooxygenase (COX), the key enzyme in prostaglandin cascade, is expressed in two isoforms: the constitutive COX-1 and the inducible COX-2. Hyper-expression of COX-2 has been implicated in the pathogenesis of colon-rectal cancer in humans but it appears to play a significant role as a tumour progression factor also in other forms of human cancer, including oral cancer. The aim of this study was to analyze the expression of COX-2, at the protein level, in 45 cases of oral squamous cell carcinoma. Standard immunohistochemical streptavidin-biotin peroxidase analysis was carried out with highly specific antibody against human COX-2 and cell specific markers, in 45 oral squamous cell carcinomas. Our study revealed a moderate to high COX-2 expression in 35 out of the 45 oral squamous cell carcinoma specimens (77.8%). COX-2 expression appeared particularly abundant in the superficial ulcerated layers of relatively well differentiated carcinomas. However, we were unable to assess any statistically significant association between COX-2 hyper-expression and tumor site, tumor grading, tumor size, presence of lymph node metastases, tumor stage and age at onset, respectively. Interestingly, COX-2 expression was detected not only in areas of epithelial dysplasia adjacent to the primary layers (86% of the cases) but also in normal-appearing epithelium at the boundaries of squamous cell carcinoma (77%), indicating a possible involvement in tumour progression by the apparently normal tissue surrounding the lesion. Moreover, intense COX-2 staining was observed in endothelial cells of intra-tumour vessels and extra-tumour vessels adjacent to the tumour nests, in a high proportion of cases (82%). COX-2 positivity was associated with CD34 and VEGF positivity, indicating that these vessels were probably neo-formed ones. From this study as well as from other works, it appears that indeed COX-2 is over-expressed in this important human malignancy. However, further studies are necessary to understand the exact magnitude of this over-expression and, mostly, the possible role of COX-2 in the pathogenesis and progression of oral cancer.     

青蒿琥酯抑制Twist1蛋白表达和血管再生以及降低口腔鳞癌细胞Tca8113转移的作用

目的 研究青蒿琥酯抑制Twist 1表达、降低口腔鳞癌细胞的转移及对血管生成的抑制作用.方法 采用50、100、150、200 μg·mL-1的青蒿琥酯体外培养的口腔鳞癌细胞,然后分别采用Western blot法、MTT法、划痕实验及流式细胞仪检测不同浓度的青蒿琥酯干预对口腔鳞癌细胞Twist1表达、增殖、迁移及凋亡的影响;采用鸡胚尿囊膜检测青蒿琥酯对鸡胚尿囊膜血管生成的影响.结果 与对照组对比,青蒿琥酯可抑制Twist1蛋白的表达、口腔鳞癌细胞的增殖和迁移,且存在时间和剂量依赖性;青蒿琥酯可引起细胞的凋亡,处理组的细胞凋亡率显著高于对照组;青蒿琥酯对鸡胚尿囊膜血管新生有一定的抑制作用(P＜0.05).结论 中药青蒿琥酯可抑制Twist 1蛋白的表达、细胞增殖、迁移,同时可有效抑制血管再生.     

对eIF4E与bFGF在喉鳞癌中表达的研究

目的 :通过检测eIF4E与bFGF在喉鳞癌 (LSCC)中的表达 ,探讨二者与喉鳞癌的关系及其相互之间的内在关系。方法 :采用免疫组织化学法检测 5 2例喉鳞癌组织 ,2 0例喉黏膜不典型增生组织 ,30例喉良性增生组织及 10例正常喉黏膜组织中eIF4E与bFGF基因蛋白的表达情况。结果 :免疫组织化学法结果示 :eIF4E与bFGF在喉鳞癌中表达的阳性率分别为 10 0 .0 %、82 .7% ,均显著高于对照组。bFGF的高表达与颈淋巴结转移相关。结论 :过度表达的eIF4E是喉鳞癌恶性改变及判断其恶性程度的一个分子标志 ;bFGF的过度表达与喉癌的生长、转移及恶性程度相关 ;二者在喉癌中的表达具有相关性 ,可为喉鳞癌的基因治疗提供一定的理论基础     

PTTG、bFGF和VEGF在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨垂体瘤转化基因（PTTG），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及血管内皮生长因子（VFGF）在子宫内膜异位症中表达及意义。方法应用免疫组织化学技术，检测48例子宫内膜异位症及30例正常子宫内膜组织中PTTG、bFGF及VEGF的表达水平。结果在子宫内膜异位症中，PTTG、bFGF及VEGF的阳性表达率分别是81．2％、77．1％及66．7％，其阳性率及表达等级均明显高于正常子宫内膜组织（P〈0．01）。三者均呈正相关关系。结论子宫内膜异位症中PTTG的表达明显高于正常子宫内膜组织，而高表达的PTTG可刺激bFGF和VEGF的表达，三者共同促使子宫内膜异位症的发展。     

人口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌p21表达的研究

目的：探讨p21基因表达与口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌发生、发展的关系。方法：应用免疫组织化学技术（S-P法）检测p21基因在20例正常口腔黏膜组织、38例糜烂型口腔扁平苔藓和38例口腔鳞状细胞癌标本中的表达。结果：38例口腔糜烂型扁平苔藓患者中p21阳性表达率为34.21%（13/38）;在口腔鳞状细胞癌组织p21阳性表达率为60.53%（23/38）和正常组织中检测到p21的表达为10%,口腔鳞状细胞癌组织、口腔扁平苔藓、正常组织之间的p21基因的表达差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：p21基因的表达与上皮细胞的分化状态有关。p21在口腔鳞状细胞癌中高度表达,可能与口腔扁平苔藓预后及癌的发生发展有关,p21蛋白可以作为一种可靠的标志物,指导临床治疗和判断预后,对癌的早期诊断具有重要价值。     

乙酰肝素酶在口腔鳞状细胞癌的表达及与肿瘤转移的关系研究

目的：探讨乙酰肝素酶（heparanase,Hpa）在口腔鳞状细胞癌（oralsquamous cell carcinoma）表达及与肿瘤颈淋巴结转移的关系。方法：鳞癌组为52例VI腔鳞癌组织标本,正常对照组为16例正常口腔黏膜组织。RT-PCR法检测鳞癌组和正常对照组乙酰肝素酶mRNA的表达．免疫组化法对16个正常淋巴结、口腔鳞癌患者的52个淋巴结细胞进行角蛋白（cytokeratin,CK）检测。结果：鳞癌组HpamRNA检出30例,阳性表达率为57．7％,高于正常对照组的1例,仅占6.3％（χ^2=13．053,P〈0．01）。鳞癌组23例低分化标本中HpamRNA阳性20例,阳性率为87．0％,显著高于高中分化标本,29例中10例阳性（34.5％）（χ^2=14．470,P〈0．01）。鳞癌组24例B．4标本中HpamRNA阳性19例,阳性率为79．2％,显著高于T1～2标本,28例中11例阳性（39．3％）（χ^2=8．421,P〈0．01）。鳞癌组淋巴结中角蛋白阳性28例。阳性率为53．8％。显著高于正常对照组的0％（χ^2=-14．646,P〈0．01）。HpamRNA阳性鳞癌组30例中淋巴结中角蛋白阳性22例,阳性率为73．3％．显著高于HpamRNA阴性鳞癌组22例中淋巴结中角蛋白阳性的6例,阳性率为27．3％（χ^2=10．835,P〈0．01）。结论：13腔鳞癌Hpa表达高于正常组织,与肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结转移呈显著相关性。     

基质金属蛋白酶-14与细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-14和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的临床意义,并分析二者的相关性。方法选取2012年1月至2014年6月于我院口腔颌面外科诊治的69例OSCC患者作为OSCC组,同时选取43例口腔正常新鲜组织标本作为对照组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测组织中的MMP-14及EMMPRIN mRNA的表达含量。结果 MMP-14mRNA、EMMPRIN mRNA在OSCC组中的相对表达量明显高于其在对照组中的相对表达量,差异具有统计学意义(t=8.198、9.624,P<0.01);OSCC组患者在年龄、性别因素中的MMP-14、EMMPRIN mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),在伴有淋巴结转移的患者中均明显升高(t=2.909、2.156,P<0.05);且MMP-14、EMMPRIN mRNA在Ⅲ~Ⅳ期、中低分化的OSCC中表达均明显升高,差异具有统计学意义(t=3.376、2.667、3.027、2.399,P<0.05);MMP-14与EMMPRIN mRNA表达含量间相关系数为r=0.821,二者呈正相关性(P<0.01)。结论 OSCC组织中MMP-14和EMMPRIN的高表达状态均与肿瘤的病理分期、分化程度及淋巴结转移因素关系密切,两者的表达具有正相关性,提示MMP-14和EMMPRIN均参与了OSCC的浸润及转移过程,通过检测EMMPRIN及MMP-14mRNA表达含量可能有助于OSCC的病变程度及预后转归判断。     

口腔鳞癌E-cadherin表达与淋巴结转移的相关性分析

目的: 检测粘附分子E-cadherin 的表达与口腔鳞癌淋巴结转移的关系.方法: 应用免疫组织化学方法,检测40 例口腔鳞状细胞癌标本中E-cadherin 的表达.结果: E-cadherin 在正常粘膜及口腔癌中呈不同程度表达,染色程度与淋巴结转移之间有显著的相关性.结论: 伴有淋巴结转移的口腔鳞癌中E-cadherin的表达明显低于无淋巴转移者, E-cadherin的表达可作为预测口腔鳞癌淋巴结转移、判断预后的一项指标.     

苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株p21和survivin基因表达的影响

目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用Western blot和RT-PCR检测p21和survivin基因的转录和表达。结果实验表明苯丁酸钠对Tca8113细胞株增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导Tca8113细胞株G1期阻滞和细胞凋亡;苯丁酸钠能使p21的mRNA及蛋白质表达升高,同时survivin的mRNA及蛋白质表达下降。结论苯丁酸钠通过刺激p21表达增加和抑制survivin的表达,从而抑制Tca8113细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡;并且p21mRNA水平的上升和survivin mRNA水平的下降变化呈负相关(rs=-0.548,P<0.01),二者蛋白表达的变化亦如此(rs=-0.514,P<0.01)。     

环氧化酶2和Ki-67在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性研究

目的 研究Ki-67和环氧化物酶2(COX-2)在口腔鳞状细胞癌中的表达及相互关系.方法 采用免疫组化方法检测28例口腔扁平苔藓组织(15例单纯扁平苔藓、13例伴异常增生)、28例口腔鳞状细胞癌组织及15例正常口腔黏膜组织中Ki-67、COX-2的表达.结果 COX-2在正常口腔黏膜组织中不表达、Ki-67组织仅为低表达或不表达;口腔鳞状细胞癌组、单纯增生组和异常增生组COX-2和Ki-67的高表达率明显高于正常口腔黏膜组[COx-2分别为64.3％ (18/28)、33.3％ (5/15)、30.8％ (4/13)比0(0),67.9％(19/28)、26.7％ (4/15)、30.8％ (4/13)比0(0),均P＜0.01],口腔鳞状细胞癌组COX-2和Ki-67的高表达率明显高于单纯增生组和异常增生组(均P ＜0.01).口腔鳞状细胞癌中COX-2的表达阳性率为85.7％(24/28),Ki-67为85.7％(24/28);二者表达呈正相关(r=0.8,P＜0.05).结论 Ki-67和COX-2在口腔鳞状细胞癌发生、发展中起着重作用,二者表达呈正相关,在口腔鳞癌的发生发展中有协同作用.     

细胞凋亡指数在口腔鳞状细胞癌中的变化

目的 探讨细胞凋亡与口腔鳞状细胞癌(OSCC)预后之间的关系.方法 由活检或外科手术获得诊断的OSCC组织标本经末端脱氧核苷酸转移酶介导的UTP缺口标记(TUNEL)染色以鉴定凋亡细胞,并由阳性细胞百分比表示细胞凋亡指数(AI).结果 化疗后AI显著升高(P＜0.01).虽然未经治疗病例AI在活检组织和外科手术切除组织间没有发生显著变化,但AI的升高与良好预后有关(P＜0.05).结论 AI的升高有可能作为判断未经治疗OSCC患者预后的有用指标.     

口腔鳞癌中Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达相关性的研究

目的研究Cyc lin D1和Bc l-2在口腔鳞癌组织和正常口腔粘膜中的表达及意义。方法用免疫组织化学S-P法对62例口腔鳞癌手术切除标本和10例正常口腔粘膜标本中Cyc lin D1和Bc l-2基因蛋白的表达情况进行检测。结果口腔鳞癌组织中Cyc lin D1表达率67.7%(42/62),正常口腔粘膜组织中未见表达,两组间差异有显著性(P<0.05);Bc l-2在正常口腔粘膜组织中也未见表达,在癌组织中Bc l-2蛋白阳性表达率58.1%(36/62),两组间差异也有显著性(P<0.05)。结论Cyc lin D1和Bc l-2两种蛋白在癌组织中存在过表达,口腔鳞癌组织中Cyc lin D1与Bc l-2的表达呈正相关。过表达的Cyc lin D1与Bc l-2可作为评价口腔鳞癌组织分级的参考指标之一。     

p16在人口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨抑癌基因p16在口腔扁平苔藓(OLP)、口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化S-P法检测26例正常口腔黏膜组织、40例糜烂型OLP组织及40例OSCC组织p16基因的表达,并分析其临床意义。结果 p16蛋白在26例正常口腔黏膜中22例阳性表达,占84.62%,40例糜烂型OLP组织中21例p16蛋白阳性表达,占52.50%4,0例OSCC组织中9例p16蛋白阳性表达,占22.50%。p16蛋白在正常口腔黏膜组织及OSCC组织中的表达与糜烂型OLP组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。p16阳性表达与OSCC组织分化程度无相关关系。结论 p16与OLP向OSCC转变有关,p16基因在OSCC的发生发展中起重要作用。     

奥沙利铂诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达的研究

目的探讨铂类抗癌药——奥沙利铂体外对诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法应用MTT法检测奥沙利铂不同浓度(32、64、128、256μmol/L)对Tca8113细胞增殖的影响,并确定半数抑制浓度(IC50);应用免疫细胞化学法观察奥沙利铂作用于Tca8113细胞过程中凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果一定浓度的奥沙利铂作用于Tca8113细胞24、48及72小时,可见survivin表达有不同程度增强。结论奥沙利铂体外能诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达上调,可能是奥沙利铂化疗耐药性的机制之一。     

Histone deacetylase inhibitors in oral squamous cell carcinoma treatment

Introduction: The involvement of the histone deacetylases (HDACs) family in tumor development and progression is well demonstrated. HDAC inhibitors (HDACis) constitute a novel, heterogeneous family of highly selective anticancer agents that inhibit HDACs and present significant antitumor activity in several human malignancies, including oral squamous cell carcinoma (OSCC).

Areas covered: This review summarizes the current research on the anticancer activity of HDACis against OSCC. The review also presents the molecular mechanisms of HDACis action and the existing studies evaluating their utilization in combined therapies of OSCC.

Expert opinion: The currently available data support evidence that HDACis may provide new therapeutic options against OSCC, decreasing treatment side effects and allowing a more conservative therapeutic approach. Future research should be focused on in vivo and clinical evaluation of their utilization as combined therapies or monotherapies. Before HDACis can be brought into clinical practice as treatment options for OSCC, further evaluation is needed to determine their optimal dosage, the appropriate duration of treatment and whether they should be used in combination or as stand-alone therapeutics.     

Over-expression of Gadd45a enhances radiotherapy efficacy in human Tca8113 cell line

Aim:

To investigate the effect of the growth arrest- and DNA damage-inducible Gadd45a gene on the radiosensitivity of human tongue squamous cell carcinoma cell line to ionizing radiation (IR).

Methods:

Short interfering ribonucleic acid (si-RNA) targeting Gadd45a or an irrelevant mRNA (nonsense si-RNA) was chemically synthesized. The constructed si-RNAs were transfected into Tca8113 cells and Gadd45a expression was determined using quantitative real-time PCR and Western-blot. After 24-h exposure to IR at a dose rate of 4 Gy/min, apoptosis of Tca8113 cells was detected using flow cytometry, and radiosensitivity was measured using MTT assays.

Results:

IR apparently increased the expression of Gadd45a at mRNA and protein levels in Tca8113 cells. The effect was efficiently inhibited by transfection with Gadd45a si-RNA (P<0.01). Furthermore, silencing Gadd45a gene significantly increased cell viability and decreased the percentage of apoptotic cells during irradiation, which indicated that IR-induced Gadd45a over-expression could increase the radiosensitivity of Tca8113 cells.

Conclusion:

These results indicated that targeting Gadd45a may have important therapeutic implications in sensitizing Tca8113 cells to IR.     

AURKA基因在口腔鳞癌中的表达及意义

目的 检测极光激酶A(AURKA)基因在口腔鳞癌中的表达及意义.方法 收集20例口腔正常组织及42例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织,采用Real-Time PCR检测AURKA基因在不同口腔组织中的表达.结果 AURKA mRNA在OSCC中高表达,且不同分化程度,不同临床分期,组间差异有统计学意义.不同年龄,不同性别,组间差异无统计学意义.结论 AURKA在OSCC中高表达,AURKA作为激酶可能直接或间接地激活多种致癌蛋白或使多种抑癌蛋白失活,从而推动肿瘤的发生发展.