丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路

生物的细胞每时每刻都在接受来自细胞内外的各种各样信号。细胞感知这些信号后,通过细胞内信号分子的逐级传递作用,最终诱导产生一系列的细胞质、细胞核内事件和各种生理生化反应。研究表明,细胞内信号转导是一个有严密组织,并且是高度网络的过程。目前研究最多的     

中医药与p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路研究

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路广泛存在于哺乳动物细胞中,与机体多种生理病理过程(如糖尿病,心血管疾病,脑发育等)密切相关,是20世纪90年代以来生命科学研究的热点。MAPK分为4个家族,即细胞外调节激酶、c-jun氨基末端激酶、p38和大丝裂原活化蛋白激酶1/细胞外调节激酶5。综述近几年来从p38 MAPK信号通路角度进行的中医药研究,提示从细胞信号转导角度进行中医药研究有着十分广阔的发展前景。     

地塞米松抑制人肺成纤维细胞增殖和丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径

目的探讨地塞米松对人肺成纤维细胞周期和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用.方法不同浓度的地塞米松作用于培养的人肺成纤维细胞,采用直接计数法测定细胞的增殖,PI(propidium iodide)染色流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡,用特异的抗磷酸化抗体、Western印迹法分别检测c-Jun N-末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38蛋白的磷酸化,用特异的MAPK抗体分别检测相应的JNK、ERK和p38蛋白.结果1×10-7mol/L和1×10-6mol/L地塞米松抑制肺成纤维细胞增殖,4 d时细胞增殖分别减少了34%和72%,呈剂量依赖关系;地塞米松阻断肺成纤维细胞的细胞周期,G0/G1期细胞比率从(81.9±3.0)%增加到(90.1±1.4)%(P＜0.05),但地塞米松不能诱导肺成纤维细胞的凋亡;地塞米松抑制ERK的磷酸化,但不影响肺成纤维细胞中JNK和p38的激活.结论地塞米松能够抑制肺成纤维细胞的增殖,这种作用部分是通过抑制MAPK信号转导通路的ERK途径实现的,对JNK和p38途径影响较少;地塞米松不能直接诱导肺成纤维细胞的凋亡.     

丝裂原活化蛋白激酶在大黄素收缩大鼠胃平滑肌细胞中的作用

[目的]研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩信号转导途径中的作用机制。[方法]酶解法分离的大鼠胃平滑肌细胞经过培养后分为3个实验组:空白对照组、大黄素组、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(Calphostin C 大黄素)。通过Western blotring方法分析p44／42 MAPK在不同实验组中的表达量变化。[结果]磷酸化p44／42 MAPK的表达量在对照组最少,大黄素组最多,抑制剂组表达量较大黄素组少;三组表达量的差别具有显著性(P值均<0．01)。[结论]磷酸化p44／42 MAPK的表达量变化说明,在相同实验条件下,PKC受抑制后,磷酸化p44／42 MAPK的表达明显低于未受抑制的试验组。本实验结果提示, PKC到p44／42 MAPK信号转导通路参与了大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩活动的调节。     

胞外信号对破骨细胞中丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

骨质疏松是以骨量减少和骨的微细结构改变,使骨脆性增加且易于发生骨折的一种全身性内分泌代谢性疾病。破骨细胞(osteoclaso,OC)的骨吸收与(osteoblast,OB)的骨形成的平衡是维持骨不断更新,功能正常和结构完整的关键。任何引起成骨细胞OC生成增多或过度活化的因素均可使OC功能亢进,骨吸收超过骨形成,最终导致骨质疏松。抑制骨吸收是防治各种代谢性骨病的目标。     

丝裂原活化蛋白激酶在雷洛昔芬抑制前列腺癌细胞系PC3增殖中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在雷洛昔芬(RAL)引起雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞凋亡和细胞周期阻滞中的作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度RAL作用48、72、96、120 h后对PC3细胞生长抑制率.不同处理因素作用后流式细胞仪分析细胞周期分布和亚二倍体峰,TUNEL染色检测细胞凋亡.Western印迹检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun N端应力激活的蛋白激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)活性以及Bel-2、磷酸化Bcl-2(p-Bel-2)、Bax和半胱氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的表达.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测雌激素受体(ER)α、ERβ、细胞周期蛋白依赖激酶抑制蛋白(P21WAF1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)基因的表达.结果 RAL呈浓度依赖性抑制PC3细胞增殖.10-6mol/L RAL可以快速持续激活ERK1/2和p38,不激活JNK.处理因素作用48 h后,对照组、RAL、RAL+PD98059、RAL + SB203580组细胞凋亡率分别为0.9%±0.1%;22.9%±1.5%;15.2%±1.8%和9.7%±0.6%(P＜0.05).10-6 mol/L RAL使细胞阻滞在G1期,10 μm PD98059或SB203580预孵育1 h可减轻RAL此种作用.PC3细胞表达ERα和ERβ.RAL、RAL+PD98059、RAL+SB203580组中cyclinD1和P21WAF1基因表达分别为对照组的0.50±0.02、4.48±0.12倍;0.49±0.02、1.77±0.06倍;2.36±0.08、4.50±0.03倍(P＜0.05).Bcl-2、Bax和caspase-3(对照组、RAL、RAL+PD98059、RAL+SB203580)的表达分别是1、0.33±0.02、0.34±0.01、0.81±0.05;1、3.14±0.02、1.67±0.11、3.15±0.03;1、4.16±0.02、2.66±0.03、1.80±0.06.RAL作用1.5 h后p-Bcl-2增加,SB203580可以抑制RAL引起的p-Bcl-2增加.结论 RAL激活ERK1/2增加P21WAF1.基因表达,并激活p38抑制cyclinD1表达使细胞阻滞在G1期.RAL激活ERK1/2促进Bax表达,同时激活p38磷酸化Bcl-2使其表达减少,引起PC3细胞凋亡.     

糖尿病肾病与丝裂原活化蛋白激酶信号级联反应的相关性研究

糖尿病肾病是导致终末期肾病的主要原因。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,广泛存在各种真核细胞中,可将胞外刺激信号传递给胞核,是细胞应激和损伤反应的主要信号通路。该通路在糖尿病时被激活,与糖尿病肾病发病机制密切相关,本文就近年来该通路与糖尿病肾病(DN)关系的研究进展予以综述。     

乳腺癌与细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展

在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,MAPK异常活化导致细胞分化、凋亡功能的丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭能力增强,最终导致肿瘤转移。细胞外信号调节激酶(ERK)是MAPK家族极其重要的一员,它的信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心,其基本的信号传递步骤已明确,遵循MAPKs的三级酶促级联反应,即上游激活蛋白→MAPK激酶激酶(MAPKKK)→MAPK激酶(MAPKK)→MAPK。在ERKs的传递途径中,Ras作为上游激活蛋白,Raf作为MAPKKK,MAPK/ERK激酶(MEK)作为MAPKK,ERK即MAPK,即Ras-Raf-MEK-ERK途径,它是表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路最主要的通路之一,主要调节细胞增殖和生长。在恶性肿瘤尤其是乳腺癌的发生、发展、浸润和转移方面都起着重要的作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与细胞迁移

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)是一类存在于大多数真核细胞内,转导胞外信号引起细胞反应的丝/苏氨酸蛋白激酶,是细胞内一重要信号系统.其中,p38MAPK信号通路是MAPKs家族的重要组成部分,它经外界刺激应激而激活,故又称为MAPK应急信号通路,其在全身炎性反应、细胞分化及凋亡等方面具有十分重要的作用,近年研究发现p38MAPK信号通路也参与细胞迁移的调控.现就p38MAPK及其在细胞迁移中的作用的研究进展进行综述.     

缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在胃癌细胞系SGC7901中的过表达及其意义

目的　探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1　 (MKP 1)在缺氧胃癌细胞系SGC790 1中的表达及对缺氧诱导因子 1(HIF 1)的影响。方法　采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹检测MKP 1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC790 1中的表达 ;借助DNA重组技术构建MKP 1基因的正义真核表达载体 ;利用脂质体将正义真核表达载体和空载体转入SGC790 1细胞 ;双荧光素酶报告基因 (DualLuciferaseReporter,DLR)检测系统检测荧光素酶活性并采用ELISA法检测SGC790 1细胞培养上清血管内皮生长因子 (VEGF)的变化。结果　 (1)半定量RT PCR和Western印迹结果提示 ,MKP 1在胃癌细胞系SGC790 1中表达 ,缺氧时其表达上调 ;(2 )分别将MKP 1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC790 1细胞 ;转染 4 8h后 ,缺氧 12h磷酸化HIF 1α在正义真核表达载体转染细胞 (SGC790 1 MKP 1)中的表达低于空载体转染细胞 (SGC790 1 空载体 )和未转染细胞(SGC790 1)。 (3)报告基因试验显示常氧情况下 3、6和 12h荧光素酶活性在SGC790 1细胞、SGC790 1 空载体细胞和SGC790 1 MKP 1细胞中差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;缺氧情况下 ,SGC790 1 MKP 1细胞中荧光素酶活性在 3、6和 12h均明显低于SGC790 1细胞和SGC790 1 空载体 (P <0 .0 1)     

阻断MAPK通路对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究前列腺癌进展中细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的变化,探讨阻断此通路对前列腺癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法检测表皮生长因子（EGF）、PD98059对前列腺癌细胞系LNCaP、PC 3和DU145增殖的影响;用Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达和磷酸化ERK1/2水平的差异,以及EGF、PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：EGF促进LNCaP、PC 3和 DU145的增殖,PD98059抑制细胞增殖;Western blot结果显示,3株前列腺癌细胞的总ERK1/2无明显差异。在血清饥饿的状态下,LNCaP细胞无ERK1/2的活化,而PC 3和 DU145细胞ERK1/2处于持续活化的状态。PD98059能够阻断EGF对3株前列腺癌细胞ERK1/2的激活。结论：MAPK通路的持续活化在前列腺癌的恶性进展中起重要作用,阻断此通路可以抑制前列腺癌细胞的增殖。     

靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA对胃腺癌细胞生长的作用

目的 研究靶向蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶2(COX-2)短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用.方法 构建腺病毒载体pGSadeno-Akt1+COX-2(rAd5-A+C),体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后,噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞术评价转染后胃癌细胞的增殖活性.裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-A+C对SGC-7901生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术检测肿瘤细胞的原位凋亡.结果构建的rAd5-A+C重组腺病毒载体转染SGC-7901后,胃癌细胞的增殖活性明显被抑制.细胞周期分析显示对照组和空载组在G0/G1期,S期和G2/M期的细胞数占细胞总数分别为49.8%、35.2%、15.0%和50.8%、36.5%、12.7%;而治疗组在G0/G1期、s期和G2/M期的细胞数占细胞总数的68.1%、21.8%和10.1%.裸鼠皮下荷瘤模型显示rAd5-A+C可抑制肿瘤的生长和诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的Aktl和COX-2 shRNA可抑制人胃癌细胞的生长,这可能为胃癌靶向性联合基因治疗提供了新的策略.     

雄激素应答元件陷阱DNA诱导前列腺癌细胞LNCaP凋亡

目的：研究雄激素应答元件陷阱DNA(ARE decoy DNA)对前列腺癌细胞LNCaP生长活性和凋亡的影响。方法：人工合成双链硫代ARE decoy DNA并提取LNCaP细胞核蛋白．应用电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测ARE decoy DNA与雄激素受体的特异结合。2μg／ml ARE decoy DNA转染LNCaP细胞。48h后相差显微镜观察细胞超微结构变化：MTT比色法检测细胞生长活性;DNA Ladder检测细胞凋亡;流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率。结果：EMSA显示．ARE decoy DNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染ARE decoy DNA后．镜下可见部分细胞出现凋亡形态学的改变,有凋亡小体形成,细胞体外生长受到抑制．DNA Ladder可见明显梯形条带。转染后48h的凋亡率为22．5％。结论：ARE decoy DNA能竞争结合雄激素受体(androgen receptor,AR)。阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡。     

整合素连接激酶对裸鼠前列腺癌的影响

目的：探讨应用整合素连接激酶（ILK）特异siRNA敲除ILK基因对人DU145细胞系裸鼠原位前列腺癌生长及进展的影响。方法：将合成的ILK特异siRNA转染人DU145细胞系,应用逆转录PCR检测ILK在转录水平的表达情况;使用Western blot方法检测ILK在蛋白水平的表达情况。初步探讨敲除ILK基因后对人DU145细胞的黏附、侵袭性的影响及其对细胞骨架结构的影响。分别将ILK siRNA和对照DU145细胞注入裸鼠皮下,每5天1次,连续4周,检测裸鼠前列腺癌肿瘤的大小、分化程度、凋亡及增殖状态来观察ILK对前列腺癌生长的影响。结果：siRNA显著降低了ILK基因的表达,ILK mRNA及蛋白的表达分别被抑制87%与81%。与对照组相比,实验组DU145黏附力及侵袭力显著下降,实验组细胞骨架结构破坏明显。裸鼠种植DU145细胞后5周,实验组与对照组相比,细胞在裸鼠种植部位形成的肿瘤体积明显减小［（18.1±1.3） mm³ vs (157.6±9.7) mm³,P<0.01）］,分化程度变好［Gleason评分（5.8±0.2） vs （ 8.8±0.3）,P<0.05］,凋亡指数增加［（64.75±5.87） vs （38.57±3.45）,P<0.01］,增殖指数减小［(42.75±4.76） vs （88.57±7.57）,P<0.01］。结论：动物实验表明,特异性的抑制ILK能抑制人DU145细胞的黏附及其侵袭能力,破坏DU145细胞骨架的形成,诱导前列腺肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤细胞的增殖,从而在一定程度上抑制了肿瘤的生长及进展。     

细胞外信号调节激酶在不同转移性人前列腺癌细胞中被激活的调节机制

目的　探讨不同转移潜能的人前列腺癌细胞中与增殖分化密切相关的细胞外信号调节激酶（ERK）信号传导途径被激活的机制。方法　用细胞计数及MTT法检测外源性P2嘌呤受体激动剂ATP对人前列腺癌细胞PC-3M亚系1E8（高转移）和2B4（低转移）体外生长的影响。用特异性识别双磷酸化ERK1/2（p44/p42）的抗体及蛋白质印迹方法,检测细胞经ATP作用后ERK1/2的活化情况并研究其调节机制。结果　ATP可明显抑制1E8和2B4细胞的体外生长,第6和第8天的抑制率分别为1E854％和59％;2B467％和39％。ATP可激活1E8和2B4细胞内的ERK1/2激酶。ATP诱导的ERK1/2活化可被P2嘌呤受体拮抗剂苏拉明抑制,抑制率1E882%±9％;2B481%±6％。ERK1/2上游激酶MEK抑制剂PD98059可有效抑制ATP对ERK1/2的激活,抑制率1E894%±4％;2B491%±4％。ATP对ERK的激活受到G蛋白活性调节剂PTX的抑制,抑制率1E850%±3％,2B451%±4％。ATP对1E8细胞ERK1/2的激活水平高于2B4细胞。两种细胞对蛋白激酶C活性调节剂TPA作用的反应性不同。结论　不同转移性的人前列腺癌细胞亚系对外源性ATP激活ERK1/2信号传导通路的反应性间存在差异,提示肿瘤转移受到不同信号传导机制调节。     

树突状细胞负载前列腺癌细胞抗原后的抗肿瘤免疫作用

目的 探讨小鼠树突状细胞(DC)负载前列腺癌细胞株RM-1的裂解产物后,诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其抗肿瘤的免疫作用。方法 将RM-1细胞的裂解产物(T-lysate)作为肿瘤抗原负载小鼠骨髓来源的DC,构建DC瘤苗(T-lysate／DC),采用流式细胞术和四唑氮蓝(MTT)还原法检测其免疫活性;ELISA法检测其诱导细胞因子白介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)的作用;体内实验检测DC瘤苗的抗肿瘤免疫治疗作用和免疫保护作用。结果 DC负载RM-1细胞的裂解产物后,其主要组织相容性复合物(MHC-Ⅰ、Ⅱ)及共刺激分子(B7-1、B7-2)的表达明显增高;T-lysate／DC能够诱导小鼠产生RM-1特异性CTL,使细胞上清液中IL-2和IFN-γ水平升高,对小鼠具有免疫保护作用,并能有效抵抗肿瘤细胞的攻击;经T-lysate／DC治疗的荷瘤小鼠瘤体生长减慢,存活期延长,瘤体出现坏死和炎细胞浸润。结论 DC负载前内腺细胞解产物后,能够有效诱导搞肿瘤免疫反应,为前列腺癌的临床治疗提供了新策略。     

ERK1/2 及p38通路调节P2Y受体介导的前列腺癌细胞体外侵袭

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1／2)及p38激酶在P2Y嘌呤受体活化介导的前列腺癌细胞体外侵袭中的作用。方法 以脂质体法将负显性MAPK激酶1(KA-MEKl)及野生型p38磷酸酶(MKP-5)转染人前列腺癌细胞PC-3亚系1E8(高转移)和284(不转移)细胞,以Western印迹法检测细胞经P2Y嘌呤受体激动剂ATP刺激后ERK1／2及p38活化情况,并用体外侵袭实验检测在P2Y受体介导的前列腺癌细胞体外侵袭效应中ERK1／2及p38通路所起的作用。结果ATP可以激活ERK1／2及p38通路并促进前列腺癌细胞体外侵袭,这种侵袭促进效应可以分别被MEK1抑制剂PD98059及p38抑制剂SB203580所抑制。转染KA-MEK1及MKP-5使侵袭细胞数分别降低约40％及60％。如果加入抑制剂同时抑制ERKl／2及p38通路,细胞的侵袭能力被抑制约76％。结论 ERK1／2及p38通路在P2Y嘌呤受体活化所介导的前列腺癌细胞侵袭中起重要作用。     

Mechanism of Retinoic Acid and Mitogen-activated Protein Kinases Regulating Hyperoxia Lung Injury

Acute and chroniclunginjury are major causesresponsible for the mortality and morbidityin bothpretermand termneonates .Prolonged exposure tohyperoxia inthe developinglungis believedto playcritical roles in the development of acute and chro-nic lung injury[1]. Recent studies demonstratedthat mitogen-activated protein kinases ( MAPKs)play an i mportant role in hyperoxia-induced lunginjury[2]. The processes of lung growth,develop-ment ,injury and repair are extremely complex,in-volving a multit…     

蛋白质芯片技术在前列腺癌诊断中的应用

目的通过应用蛋白质芯片和生物信息学技术筛选前列腺癌患者的血清标志蛋白,诊断早期前列腺癌.方法以集团普查诊断的83例前列腺癌患者血清和95例正常人血清为研究对象.采用SELDI（surfaced enhanced laser desorption/ionization）蛋白质芯片技术检测血清的蛋白质谱.以蛋白质芯片阅读机读取谱图数据,后者应用Biomarker Wizard 和Biomarker Pattern软件进行分析比较.结果与正常人血清蛋白质谱比较发现,前列腺癌患者血清有18个标志蛋白,其中4个标志蛋白呈高表达（15 265,15 868,16 003,16 068）,14个标志蛋白呈低表达.Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件在设定条件下自动选取8个标志蛋白用于建立前列腺癌诊断的分类树模型.此模型可正确划分96.386%的前列腺癌患者和92.632%的正常人.结论 SELDI蛋白质芯片技术可筛选出前列腺癌标志蛋白并建立前列腺癌诊断分类树模型,可能成为前列腺癌诊断的有效方法.     

miRNA-29c抑制前列腺癌细胞系LNCaP的增殖和侵袭

目的观察miRNA-29c(miR-29c)对前列腺癌细胞系LNCaP增殖和侵袭能力的影响,探讨其潜在的应用价值。方法采用qRT-PCR观察雄激素依赖性(LNCaP)与雄激素非依赖性(LNCaP-AI)前列腺癌细胞中miR-29c的表达差异;采用miR-29c抑制物(anti-miR-29c)下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,绘制LNCaP细胞生长曲线,利用流式细胞仪测定细胞周期;Transwell侵袭实验分析miR-29c抑制前后LNCaP细胞的体外侵袭能力。结果 qRT-PCR显示LNCaP-AI细胞中miR-29c水平明显低于LNCaP细胞(P<0.05);下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,可明显促进LNCaP细胞体外增殖及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-29c的正常表达有利于抑制LNCaP细胞的体外增殖和侵袭,有望成为前列腺癌生物治疗的潜在靶点。