单纯室间隔缺损与房间隔缺损患者血清蛋白质组学分析

目的应用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对单纯性室间隔缺损(ventrieular septal defect,VSD)、房间隔缺损(atrial septal defect,ASD)患者术前、术后及正常人血清蛋白质谱进行分析,得到高敏感性和特异性的血清蛋白,建立诊断模型指纹图谱。方法采用MALDI-TOF-MS技术分别检测27例单纯VSD、ASD患者与20名正常人血清蛋白相对含量,运用Flex Analysis和Bio Tools软件对两组血清蛋白质谱进行分析;筛选出差异蛋白,再通过分析软件对其进行交叉验证,得到具有诊断意义的特异性蛋白标志物。结果检测到蛋白质质荷比(M/Z)在600~10500 Da范围内,单纯VSD、ASD组与正常人组有差异的蛋白质峰为15个(P<0.05)。生物标记物可以将单纯VSD、ASD组与正常人准确地分组,其敏感性为91.5%,特异性为97.2%。结论MALDI-TOF-MS技术对单纯VSD、ASD组术前、术后及正常人组血清蛋白质谱进行分析,可以筛选出单纯VSD、ASD患者的特异性血清标志物。     

应用SELDI-TOF-MS技术分析肝癌患者血清蛋白质谱的手术前后变化

目的研究肝癌患者血清蛋白质谱的变化,从而筛选特异性生物标志物,建立肝癌诊断模型。方法选用IMAC30蛋白质芯片和SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术,对47例原发性肝癌患者手术前后和81名正常人的血清蛋白质谱进行分析。获得的蛋白质谱采用Ciphergen公司的Biomarker wizard和Biomarker Patterns软件分析,建立区分肝癌患者与正常人血清蛋白质谱诊断模型。结果通过对肝癌患者术前血清与正常人血清蛋白质谱分析,发现共有28个蛋白质表达量差异显著(P<0.05)。并获得分子量为9492.93Da的蛋白质组成的模板,可将肝癌与正常人正确分组,其敏感性为97.9%(46/47),特异性为97.5%(79/81)。术后血清蛋白质谱中,原高表达的蛋白质明显下调。结论血清中可以筛选到诊断肝癌的特异性生物标志物并可用于预后的判断。SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术为建立蛋白质模板用以早期诊断肝癌提供了可靠的技术平台。     

胃癌血清蛋白质谱的差异性研究

目的对比胃癌患者手术前后与正常人血清蛋白质谱的差异,筛选出诊断胃癌的特异性蛋白标志物。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术和CM10蛋白质芯片,对22例胃癌患者和18名正常人的血清蛋白质谱进行检测。结果通过对胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱分析,发现由5个蛋白质峰组成的生物标记物可将胃癌术前患者与正常人准确分组。结论建立胃癌的血清蛋白质谱,为胃癌蛋白质组学研究奠定一定的基础．建立了以8961．2404M／Z、3947．264M／Z、5919．7541M／Z、4103．348M／Z、8711．0363M/Z5个蛋白质峰组成的生物标记物检测胃癌。     

非小细胞肺癌化疗疗效相关血清小分子蛋白的初步研究△

目的:寻找非小细胞肺癌化疗耐药与敏感患者血清中的差异小分子蛋白,通过分离纯化进行质谱鉴定。方法:用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,分别检测14例化疗敏感和26例化疗耐药的非小细胞肺癌血清蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质谱。Clinprot磁珠分离纯化后,进行基质辅助激光吸附电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定。结果:SELDI-TOF-MS检测到100个有效蛋白峰,其中P<0.05的差异蛋白峰23个,联合质荷比(m/z)为3193.14Da和3263.61Da的差异蛋白建立预测非小细胞肺癌化疗耐药模型,敏感性90.23%,特异性98.56%。进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定,质荷比(m/z)为3263.61Da的蛋白为DNA结合相关蛋白。结论:SELDI-TOF-MS技术可以筛选非小细胞肺癌化疗疗效相关蛋白。     

蛋白质质谱在肺鳞癌早期诊断中的研究

目的 探讨应用血清蛋白质谱建立肺鳞癌患者的诊断模型,提高肺鳞癌早期诊断率.方法 应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱（Surface-enhanced desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）技术及其配套的蛋白质芯片对50例肺鳞癌患者和50例健康人血清中的蛋白质组图谱进行检测,结合相关软件建立决策分类树诊断模型,并评估该模型的诊断价值.结果 两组间有9个差异性表达蛋白峰,其中3个在肺鳞癌患者血清中高表达,m/z（质荷比）分别是9 194.06 Da,11 681.15 Da和51 370.19 Da,应用数据建立分类树模型,获得了一个由7个蛋白9 194.06 Da,51 370.1 Da,15 879.1 Da,6 624.57 Da,8 929.80 Da,11 681.1 Da,1 013.77 Da组成的标志蛋白组合模式.在训练组中,该模型的敏感性和特异性分别为92%和96%.结论 该模型对诊断肺鳞癌具有较高的灵敏度和特异度,值得临床应用.     

应用Clin Prot 系统分析结肠腺癌患者血清蛋白表达谱

目的 寻找可能与结肠腺癌相关的血清候选蛋白,为结肠腺癌的综合防治提供重要的理论基础和手段.方法 收集36 例结肠腺癌患者和22 例正常对照组血清,经Clinprot 磁珠纯化,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-FOF-MS） 分析建立相应的蛋白质指纹图谱,应用Clinpro Tools 生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱.对不同质荷比（M/Z） 的差异蛋白通过在数据库中的分析比对,筛选出可能与结肠腺癌发病相关的血清候选蛋白.结果 结肠腺癌和正常对照组血清样本蛋白丰度平均变异系数为0.229,与对照组比较,结肠腺癌组有15 种蛋白上调,7 种蛋白下调.选取差异最为明显的两个蛋白：M2369.93Da 和M6051.12,建立结肠腺癌组和正常对照组差异表达蛋白平均谱图,采用GA 模型算法,选取差异蛋白,结肠腺癌阳性和阴性识别率为79.7%,准确性结肠癌阳性组为96.1%,结肠癌阴性组为85.5%,预测能力为72.8%.结论 通过液体蛋白芯片飞行时间质谱系统作为分析工具,发现15种蛋白上调,7 种蛋白下调,这些蛋白可能为潜在的结肠腺癌肿瘤标志物.     

血清甲胎蛋白和铁蛋白联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的:探讨血清甲胎蛋白(AFP)和铁蛋白(SF)联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法:同时测定诊断明确的原发性肝癌患者(48例)及肝炎、肝硬化患者(36例)血清AFP及SF含量。并计算血清SF和AFP联合检测对诊断原发性肝癌的敏感性和特异性。结果:原发性肝癌组血清SF值高于肝炎肝硬化组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。血清AFP及SF平行联合检测对诊断原发性肝癌的敏感性为89.9%,特异性为69.5%。串联联合检测的敏感性为49.2%,特异性为93.6%。结论:血清SF和AFP联合检测能提高对原发性肝癌诊断的敏感性与特异性。     

血清中蛋白质组构型对烧伤瘢痕的诊断意义

目的 目前烧伤瘢痕机理尚不完全清楚,本研究旨在通过对血清中蛋白质组的质谱分析来阐述烧伤瘢痕血清蛋白质组的改变.方法 随机取浅度烧伤患者40例(Ⅰ度烧伤20例,浅Ⅱ度烧伤20例)、深度烧伤患者40例(深Ⅱ度烧伤20例和Ⅲ度烧伤20例)、40例正常人的血清各分为预备组和检测组.预备组血清与金属亲和表面芯片结合后,用蛋白芯片仪读取数据,用CipherGen公司提供的BioMarker Wizard及BioMarker Pattern软件分析可得到用于区分浅度烧伤患者、深度烧伤患者及正常人血清的树状分类规则,并用双盲法测试检测组以证实其准确性.结果 软件分析结果显示预备组中三类血清蛋白质在质荷比为5375Da,5717Da,4529Da,1225Da,1067Da,3883Da,66346Da 7处含量有显著差异,得到树状分类规则,其分类准确率为100%(120/120),灵敏度为100%(80/80),特异性为100%(40/40);对检测组进行双盲检测,结果显示准确度为100%(120/120),灵敏度和特异性分别为100%(80/80)、100%(40/40).结论 用SELDI-TOF-MS技术对正常人、浅度烧伤患者及深度烧伤患者进行比较蛋白质组学研究,发现在烧伤病理发展中有一组蛋白质有显著的差异.     

SELDI-TOF-MS技术在肝脏疾病腹腔积液差异蛋白研究中的应用

目的：探讨表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术在肝脏疾病腹腔积液差异蛋白研究中的应用价值。方法应用SELDI-TOF-MS技术对肝硬化及原发性肝癌患者腹腔积液蛋白质进行测定,应用质谱仪分析蛋白质波谱。结果原发性肝癌与肝硬化患者腹腔积液相比,质荷比为7852、11467的蛋白质波峰强度明显增强,差异有统计学意义（P＜0.05）,该蛋白质组对于肝癌患者腹腔积液的灵敏度为83.56%,特异性为89.82%。结论质荷比为7852、11467的蛋白质谱对于肝癌腹腔积液患者具有特征性。     

血清CA125在原发性肝癌及肝癌腹水变化中的意义

目的研究血清CA125水平在原发性肝癌及肝癌腹水变化中的意义,以及与AFP联合监测对于肝癌早期诊断的意义。方法回顾性研究我院2006年1月-2008年1月入院患者的临床资料(102例),原发性肝癌患者均为手术病理确诊;正常对照组选取我院同期门诊体检患者(78例);分析其血清CA125水平及AFP水平与肝癌诊断以及肝癌腹水分级的关系。结果血清CA125水平在原发性肝癌组(32.48±3.91)U/ml,与对照组(11.05±2.01)U/ml相比明显升高(P<0.05);血清CA125水平在对照组阳性率(0.02%)低于原发性肝癌组阳性率(39.6%);原发性肝癌CA125水平随着腹水增多逐渐增多,两者具有良好相关性(r=0.61,P<0.01);血清AFP水平与肝癌腹水无明显相关性,原发性肝癌AFP水平明显高于对照组(P<0.05)。血清CA125水平对于原发性肝癌诊断的敏感性(40.2%)和特异性(29.8%)都明显低于血清AFP对于肝癌诊断的敏感性(80.1%)和特异性(84.03%),联合检测两种肿瘤标志物可以提高原发性肝癌诊断的敏感性(87.4%),但是特异性有所降低(24.5%)。结论血清CA125...     

联合应用蛋白质芯片技术和前列腺特异抗原早期诊断前列腺癌的研究

目的应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术探讨联合前列腺特异抗原(PSA)早期诊断前列腺癌的方法。方法以病理确诊的45例前列腺癌和45例良性前列腺增生患者血清为研究对象,采用SELDI蛋白质芯片技术检测血清的蛋白表达图谱,分析差异蛋白,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清PSA,对所得差异蛋白联合PSA进行分析。结果在前列腺癌和良性前列腺增生患者血清中检测到9个差异蛋白(P<0.01),前列腺癌患者差异蛋白7个高表达,2个低表达。联合相对分子质量3771.14和4481.59两个差异蛋白诊断前列腺癌,其敏感性为86.67%,特异性为88.89%。3771.14蛋白与血清PSA诊断前列腺癌具有很强的互补性。结论通过SELDI蛋白质芯片技术可以筛选出前列腺癌的潜在标志蛋白,多个差异蛋白联合检测可以提高前列腺癌诊断的敏感性和特异性;联合3771.14蛋白与血清PSA可以更好地早期诊断前列腺癌。     

同一个体多种体液用于筛选卵巢癌早期诊断标志物的研究

目的采用蛋白质组学方法在卵巢癌患者的多种体液中同时筛选出共同异常的多肽,用于卵巢癌早期诊断的研究,并在卵巢癌患者的血清中进行验证,加深对卵巢癌癌变机制的理解。方法采用WCX磁珠结合MALDI-TOF-MS技术在卵巢癌患者的血清、腹水、尿液、囊液中进行比对筛选,将筛选出的异常改变的多肽峰在训练集和验证集血清中检验其诊断卵巢癌的灵敏度与特异度。结果四种体液中筛选出来卵巢癌患者血清中下调和上调的多肽峰分别为6081Da和4466DaP<0.05),经留一法验证,诊断卵巢癌的特异度为100%,敏感度为100%,盲法检测的诊断特异度为100%,敏感度为87.5%。结论同一个体的四种体液中同时筛选得到的肿瘤标志物具有较高的特异性,对卵巢癌的早期诊断具有一定价值。     

血清TSGF和CA199联合检测对消化道肿瘤诊断的意义

目的探讨肿瘤指标TSGF和CA199的联合检测对消化道肿瘤诊断的意义。方法临床明确诊断的消化道恶性肿瘤患者80例,经检查随访排除恶性肿瘤的健康体检者150例作为正常对照组,进行血清TSGF和CA199检测,计算并比较两者对消化道恶性肿瘤的诊断效率,行χ2检验。结果血清TSGF检测的灵敏度、特异性和准确性分别为76.3%、54.0%和61.7%,血清CA199检测的灵敏度、特异性和准确性分别为58.7%、77.3%和70.9%,前者的灵敏度高于后者（χ2=6.91,P〈0.05）,后者的特异性则高于前者（χ2=7.34,P〈0.05）。结论联合检测血清TSGF和CA199,可实现优势互补,显著提高消化道恶性肿瘤的诊断效率。     

应用SELDI—TOFMS技术筛选乳腺癌蛋白标志物

目的：应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术（ SELDI-TOF MS）筛选乳腺癌的特异性蛋白标志物,建立诊断模型。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪及CM10蛋白芯片检测35例乳腺癌患者标本及53例对照组标本（包括35例乳腺良性病变和18例正常人）的血清蛋白指纹图谱,Ciphergen Proteinchip 软件自动采集数据,Ciphergen Biomaker Wizard 软件筛选差异蛋白,Biomarker Pattern软件建立乳腺癌的分类树诊断模型。结果乳腺癌组及对照组血清蛋白质谱图共检测到59个蛋白质峰,其中19个蛋白峰表达差异具有显著性（P＜0．01）。以2个蛋白质峰（质荷比分别为M6636．62,M13889．6）建立的诊断模型,诊断的准确率达到94．3％,灵敏度和特异度分别为80．0％和71．7％。结论 SELDI-TOF MS技术可用于乳腺癌特异性蛋白的筛选,为其快速诊断奠定基础。     

血清降钙素原在呼吸机相关性肺炎中的临床诊断价值

目的：探讨血清降钙素原（PCT）在呼吸机相关性肺炎（VAP）诊断中的临床应用价值。方法对48例VAP确诊患者48 h内行PCT、C反应蛋白（CRP）、白细胞计数（WBC）、中性粒细胞百分比（N）及体温（T）测定。同时对60例非VAP患者和20例健康体检者进行相关指标测定。结果 VAP组PCT高于非VAP组及正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,非VAP组与正常对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）;PCT诊断VAP的敏感性为83.3%,特异性为88.3%。结论血清PCT在VAP的诊断中有较高的敏感性和特异性,优于传统的炎性指标,及时监测血清PCT可能有助于VAP的早期诊断和治疗。     

MUC1蛋白在非小细胞肺癌早期诊断中的临床价值

摘要：目的 探讨黏蛋白1（MUC1）在不同类型非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清和癌组织中的表达情况,并分析 其在NSCLC患者临床早期诊断及治疗中的预测价值。方法 收集2017年12月—2018年12月宁夏医科大学总医院 收治的 34 例肺鳞癌、65 例肺腺癌和 20 例非肺癌患者外周血及肺组织。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清 MUC1蛋白表达。所收取肺组织标本均经HE染色证实符合病理要求后,采用免疫组织化学染色法检测MUC1蛋白 表达。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清中MUC1蛋白预测不同类型NSCLC患者的临床价值。结果 肺鳞 癌和肺腺癌患者血清及癌组织中MUC1蛋白表达水平均高于非肺癌组（P＜0.05）。血清MUC1蛋白诊断肺鳞癌的最 佳临界值为33.23 U/mL,其诊断敏感度为52.94%,特异度为100%;肺鳞癌患者血清及癌组织中的MUC1蛋白阳性表 达率与病理分化程度、TNM分期、年龄、性别均无关（P＞0.05）;血清MUC1蛋白诊断肺腺癌的最佳临界值为31.31 U/ mL,其诊断敏感度为61.54%,特异度为95%;肺腺癌组中-低组织分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期组患者血清及癌组织MUC1 蛋白阳性表达率分别高于高组织分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期组（P＜0.05）。结论 NSCLC患者中MUC1蛋白呈高表达, 其对肺腺癌临床早期诊断及治疗可能有预测意义,对肺鳞癌无明显预测意义。     

血清免疫球蛋白IgM和C反应蛋白联合测定对新生儿早期感染性疾病的诊断价值

目的 探讨血清免疫球蛋白IgM和C反应蛋白(CRP)联合测定在诊断新生儿早期感染性疾病中的诊断价值.方法 采刚免疫比浊法测定206例发生感染性疾病的新生儿(感染组)、146例非感染病症新生儿(未感染组)的血清IgM和CRP水平.结果 感染组CRP水平与非感染组比较,差异无显著性(P＞0.05);感染组IgM水平与非感染...     

姜黄素对人正常肝细胞角蛋白1和内质网蛋白19表达的影响

目的应用双向凝胶电泳、质谱技术和蛋白免疫印迹研究姜黄素(Curcumin,CUR)对人正常肝细胞蛋白质组的影响。方法随机将人正常肝细胞L-02分成两组,对照组不作任何处理,姜黄素组以25μmol.L-1姜黄素处理L-02细胞24 h。用双向凝胶电泳建立姜黄素组和对照组的双向凝胶电泳图谱,并用Image Master 2D Platinum 6.0软件进行差异蛋白质组分析,所获得的明显差异蛋白质用MALDI-TOF-MS进行鉴定分析,最后用蛋白免疫印迹法进行验证。结果姜黄素作用于人正常肝细胞后,有2个蛋白质的表达发生明显变化,角蛋白1与内质网蛋白19表达均上调。结论上调角蛋白1和内质网蛋白19可能是姜黄素抗肿瘤、抗氧化作用的机制之一。     

Analysis of protein glycation products by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry

The term protein glycation summarizes non-enzymatic reactions between amino groups of proteins and sugars or sugar degradation products, leading to early glycation products (intact sugar attached) and advanced glycation end-products (AGEs). Protein glycation is involved in the progression of several diseases, such as diabetes, uremia, and atherosclerosis. However, qualitative and quantitative analysis of in vitro or in vivo glycated proteins is still a challenging task. The introduction of matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight technique (MALDI-TOF) changed mass spectrometry (MS) into a valuable tool for biomedical analysis, because the soft ionization procedure allows the measurement of proteins up to 100 kDa. In the last few years, MALDI-TOF-MS was applied to the investigation of glycation processes: the analyses of plasma proteins from diabetic or uremic patients allowed a precise determination of the average number of sugar residues attached to serum albumin or immunoglobulins of each patient. Thus, a more individualized diagnosis of each patient was achieved by MALDI-TOF-MS than by other diagnostic tools. In a similar way, the glycation rate of hemoglobin, isolated from diabetic blood and of beta-2-microglobulin isolated from amyloid plaques from uremic patients was determined. The application of MALDI-TOF-MS for in vitro studies revealed important new insights into glycation mechanisms. Whereas the measurement of the intact proteins allows the determination of the average glycation rate, peptide mapping prior to MALDI-TOF-MS can reveal the exact structures of the glycation products and the glycation site. Furthermore, when the unmodified peptide is used as internal standard, MALDI-TOF-MS can also be used for reliable, site specific relative quantification of defined glycation products.