RGD修饰紫杉醇脂质体的制备及其肺癌靶向治疗研究

目的:制备RGD修饰载紫杉醇(paclitaxel,PTX)脂质体(RGDLP-PTX),研究其理化性质,并探究其肺癌靶向治疗作用。方法:采用薄膜分散法制备RGDLP-PTX。荧光分光光度法研究A549细胞和NCI-H446细胞对普通脂质体(LP)和RGD修饰脂质体(RGDLP)的摄取效率。噻唑蓝实验研究不同紫杉醇浓度对A549细胞和NCI-H446细胞的细胞毒性;流式细胞仪检测RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的凋亡诱导作用。用A549细胞构建肺癌裸鼠异位肿瘤模型,研究RGDLP-PTX的体内抗肿瘤作用。结果:RGDLP-PTX的粒径为(106.3±15.2)nm,电位为(6.23±2.2)mV;A549细胞对RGDLP-PTX的摄取效率是LP-PTX的4.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);NCI-H446细胞对RGDLP-PTX的摄取效率是LP-PTX的3.8倍,差异有统计学意义(P<0.01);RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性;在相同紫杉醇浓度下,RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的增殖抑制率显著强于LP-PTX和游离紫杉醇,差异有统计学意义(P<0.01);RGDLP-PTX,LP-PTX和游离紫杉醇诱导肺癌A549细胞的凋亡率分别为48.3%,27.4%和35.5%,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.01);NCI-H446细胞凋亡率分别为41.3%,22.8%和34.1%,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。RGDLP-PTX,LP-PTX和游离紫杉醇对肺癌肿瘤的抑制率分别为69.3%,47.5%和24.4%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:RGD修饰载紫杉醇脂质体能够高效抑制肺癌细胞的增殖和肿瘤的生长,是一种有效的肺癌靶向给药系统。     

pH敏感多肽修饰载紫杉醇脂质体的制备及评价

目的制备p H敏感多肽修饰载紫杉醇脂质体(p HS-LP-PTX),并评价其体外性质。方法采用薄膜分散法制备PHS-LP-PTX,MTT实验考察脂质体对MCF-7细胞和Hep G2细胞的毒性,通过细胞摄取实验考察脂质体与肿瘤细胞的结合能力。结果所制备的p HS-LP-PTX在p H6.4时平均粒径为125.5±13.4 nm,Zeta电位为10.47±2.53 m V,24 h内具有良好的血清稳定性。MTT结果显示:p H6.4时,p HS-LP-PTX的细胞毒性优于各对照组。体外细胞摄取实验表明:p H6.4时,MCF-7细胞和Hep G2细胞对p HS-LP-PTX的摄取效率优于p H7.4时和普通脂质体。结论紫杉醇脂质体经过p H敏感多肽修饰后,能增强脂质体在酸性环境下的细胞穿透能力,是一种良好的p H敏感型肿瘤靶向给药系统。     

脑靶向性紫杉醇脂质体的制备与靶向性研究

目的:为达到靶向治疗脑胶质瘤的目的,制备具有脑靶向功能的紫杉醇脂质体。方法:以卵磷脂和两亲性材料PL-GA-PEG为脂质体材料,同时在其表面引入靶向基团(angiopep),利用纳米沉淀的方法制备紫杉醇脂质体,借用尼罗红荧光探针分子检测紫杉醇脂质体被脑胶质瘤细胞U87MG的摄取情况,而后应用MTT检测法测定其对U87MG细胞增殖的影响。结果:所制备的紫杉醇脂质体的具有纳米级结构,纳米颗粒的大小为100nm左右,经荧光成像发现,靶向性的紫杉醇脂质体比非靶向性紫杉醇脂质体更容易被U87MG细胞摄取,相比于其他的紫杉醇药物形式,靶向性紫杉醇脂质体对U87MG细胞的IC50值明显降低(相对于PTX降低3.4倍,相对于NP-PTX降低3.8倍)。结论:紫杉醇脂质体适合作为体内运输的药物载体材料,其对脑胶质瘤细胞U87MG具有一定的靶向性,且靶向性的紫杉醇脂质体对U87 MG细胞的增殖具有强的抑制作用,有望用于脑部疾病的靶向性治疗。     

透明质酸修饰载紫杉醇靶向脂质体抑制脑肿瘤干细胞的初步评价

目的:制备透明质酸修饰载紫杉醇(paclitaxel,PTX)靶向脂质体(HALP-PTX),考察其对脑胶质瘤肿瘤干细胞的亲和力和抑制效果。方法:采用薄膜分散法制备HALP-PTX,细胞摄取实验研究胶质瘤干细胞对脂质体的摄取。MTT实验研究不同紫杉醇药物对肿瘤干细胞的增殖抑制率。构建原位移植瘤动物模型,考查不同脂质体对荷瘤裸鼠的生存期的影响。结果:肿瘤干细胞对HALP的摄取能力显著大于普通脂质体(LP),脑肿瘤干细胞对经透明质酸修饰的脂质体的摄取效率是普通脂质体的2.8倍,差异有统计学意义(P<0.01);HALP-PTX对肿瘤干细胞的生长的抑制作用显著强于LP-PTX,HALP-PTX能够显著延长荷瘤裸鼠的中位生存期,生理盐水组、PTX组、LP-PTX组和HALP-PTX组的中位生存期分别为19,23,29,41 d。结论:与PTX以及LP-PTX相比,HALP-PTX能够更加有效的被脑肿瘤干细胞识别和摄取,抑制肿瘤细胞的增殖,具有更强的抗肿瘤作用。     

RGD多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性研究

目的 :研究RGD(精氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸 )多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性。方法 :将长循环脂质体 ,通过共价键反应与RGD基元多肽进行结合 ,然后研究其在荷瘤小白鼠体内的肿瘤靶向性。结果 :RGD结合型长循环脂质体在Colon26荷瘤小白鼠体内具有较好的肿瘤靶向性。结论 :含RGD基元多肽结合型长循环脂质体可能成为一种新型的受体介导靶向制剂     

多肽修饰脂质体靶向药物递送系统研究进展

目的介绍近年来多肽修饰脂质体靶向药物递送系统的研究进展。方法查阅和归纳总结近几年相关文献。结果阐述了精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）多肽、丙氨酸-脯氨酸-精氨酸-脯氨酸-甘氨酸（APRPG）多肽、细胞穿透肽（CPP）、血管活性肠肽（VIP）等修饰脂质体的研究进展。多肽修饰的包载药物的脂质体可以增加药物在体内的选择性,减少药物毒副作用,提高药物治疗指数。结论多肽分子是机体内一类重要的生物活性物质,将其作为导向物以配体-受体特异性结合的方式应用于靶向药物递送系统,具有良好的研究价值和应用前景。     

多肽修饰脂质体靶向药物递送系统研究进展

目的 介绍近年来多肽修饰脂质体靶向药物递送系统的研究进展。方法 查阅和归纳总结近几年相关文献。结果 阐述了精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽、丙氨酸-脯氨酸-精氨酸-脯氨酸-甘氨酸(APRPG)多肽、细胞穿透肽(CPP)、血管活性肠肽(VIP)等修饰脂质体的研究进展。多肽修饰的包载药物的脂质体可以增加药物在体内的选择性,减少药物毒副作用,提高药物治疗指数。结论 多肽分子是机体内一类重要的生物活性物质,将其作为导向物以配体-受体特异性结合的方式应用于靶向药物递送系统,具有良好的研究价值和应用前景。     

K237修饰的紫杉醇热敏脂质体的制备、处方优化和体外释放度研究

目的：以紫杉醇（PTX）为模型药物,构建K237修饰的热敏脂质体（K237-PTX-TSL）,系统研究K237-PTX-TSL的制备工艺、理化性质,处方优化和体外释放特性。方法：采用NH2末端PEG化技术合成靶向磷脂材料DSPE-PEG-K237,采用薄膜分散法制备K237修饰的紫杉醇热敏脂质体（K237-PTX-TSL）,HPLC法测量药物的包封率和载药量;采用马尔文激光粒度仪测定K237-PTX-TSL的粒径及粒径分布和Zeta电位;利用差示扫描量热法（DSC）测量相变温度（Tm）;采用透析袋法测量相变温度下的释药规律并拟合释放曲线。结果：优化的处方为：DPPC：DSPG：MSPC：DSPE-PEG-NHS=9：1：1：1,药脂比为1/20,磷脂浓度为5.0%,DSPE-PEG-K237占处方磷脂总量为1%。制备得到的K237-PTX-TSL包封率为（94.23±0.76）%;粒测得K237-PTX-TSL粒径为（88.3±4.7） nm,电荷为-4.5 mv,PDI值为0.13±0.01;K237-PTX-TSL的相变温度为40.805℃,K237-PTX-TSL在42℃时的体外释放最优拟合为一级动力学模型,方程为In（100-Q）=-0.063 8t+4.713 0（r=0.994 4）。42℃时20 min内紫杉醇累计释放度为72.45%,60 min的累计释放度为98.84%。结论：K237修饰的热敏脂质体载药量和包封率较高、粒径较小,热敏释药性质良好,1 h内药物基本释放完全。     

紫杉醇长循环脂质体及其抗肿瘤作用的研究

目的：探讨紫杉醇长循环脂质体（PSL）的急性毒性、抗肿瘤作用和稳定性。方法：制备PSL,其中含有聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE）和油酸。PEG-DSPE用于延长脂质体的血液循环时间,油酸用于降低脂质体的粒度。利用激光粒度/Zeta电位测定仪和Sephadex（350色谱柱,观察和测定了PSL的粒度分布、Zeta电位和包封率。在冷藏（7℃）避光条件下保存1年,观察其理化性质的改变。结果：PsL粒径为（138．6±4．6）nm,Zeta电位为（-31．6±7．9）mv,包封率可达（97．8＋2．6）％（n=3）。静脉注射后,与游离紫杉醇相比。长循环脂质体显著提高了紫杉醇的抗肿瘤作用,同时显著减轻了紫杉醇的急性毒性。在本试验条件下,保存1年,粒度、包封率几乎无改变,但紫杉醇含量下降8．2％。结论：PSL包封率高、粒度小,有可能成为一种较好的抗肿瘤药物。     

靶向递药系统长循环脂质体的研究进展

长循环脂质体作为一种新型的纳米载药系统,因其能实现血液中长滞留、高浓度靶向富集于病灶部位,在肿瘤的治疗中显示了独特的优势。通过查阅国内外相关文献并进行归纳总结,现就长循环脂质体及其制备方法、质量评价、药动学及药效学等进行综述。     

RGD修饰载紫杉醇脂质体用于抗脑胶质瘤的体外研究

目的制备RGD修饰载紫杉醇脂质体并考察其体外抗脑胶质瘤治疗效果。方法采用薄膜分散法制备RGD修饰载紫杉醇脂质体（RGD—LP-PTX）,考察其理化性质。用鼠源性脑胶质瘤c6细胞考察肿瘤细胞对脂质体的摄取效率。MTT实验考察脂质体对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果制备得到的RGD—LP粒径在120nm左右,PD,〈0.3。C6细胞对RGD．LP的摄取能力显著〉LP;RGD-LP-PTX对C6细胞的生长的抑制作用显著强于LP。结论经过RGD修饰后,脂质体具有良好的脑胶质瘤细胞靶向性,且能够显著增强栽药脂质体对脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用。     

紫杉醇磁性脂质体纳米粒的制备

目的研究一种制备高载药量的紫杉醇磁性脂质体纳米粒的最佳条件，并对其质量进行检测。方法 通过共沉淀法制备Fe₃O₄纳米粒，同时施加超声处理减少粒子的软团聚合，增加粒子的分散度，对粒子表面进行改性，增加与脂质的结合，最后通过微乳液-低温固化法合成紫杉醇磁性脂质体纳米粒，并通过反相高压液相色谱法检测药物的载药量和包封率。结果紫杉醇磁性脂质体纳米粒为球形或近似球形，其悬浮液样品和冻干样品的粒径约在150～170 nm，药物包封率为98.29%。结论本法制备的粒子具有高质量磁化率、良好磁响应性，符合作为纳米磁靶向给药系统的条件。     

In vitro and in vivo evaluation of WGA-carbopol modified liposomes as carriers for oral peptide delivery

Surface modification of liposomal nanocarriers with a novel polymer-lectin conjugate was proposed for enhancing the systemic uptake of encapsulated peptide and protein therapeutics after oral administration. Wheat germ agglutinin (WGA) was covalently attached to carbopol (CP) using the carbodiimide method. The prepared WGA-CP conjugate retained the biological cell binding activity of WGA without any evidence of cytotoxicity to Caco-2 monolayers. Cationic liposomes in the size range of 100 nm were prepared by the lipid film hydration method followed by probe sonication and surface modification with negatively charged WGA-CP. The uptake of WGA-CP liposomes by Caco-2 cells was significantly higher than that of non-modified or CP liposomes. The uptake was dependent on the surface concentration of WGA, temperature, and incubation period and was significantly inhibited in the presence of chlorpromazine and 10-fold excess of free WGA. These results suggest the involvement of active transport mechanism for the cellular uptake of the modified liposomes, mediated mainly by binding of WGA to its specific cell membrane receptors. Dual channel confocal microscopy confirmed the simultaneous association and internalization of the polymer conjugate and the liposomal carrier by Caco-2 cells and intestinal membrane of rats. In addition, the pharmacological efficacy of calcitonin, a model peptide drug, was enhanced by more than 20- and 3-fold following peroral administration of calcitonin-loaded WGA-CP liposomes when compared to non-modified and CP liposomes, respectively.     

紫杉醇脂质体B细胞免疫抑制作用的实验研究

目的:研究紫杉醇脂质体对B细胞增殖及免疫功能的抑制作用。方法：分别用不同浓度紫杉醇脂质体 （1,2.5,5,10,20 ng?mL-1）对体外培养的多发性骨髓瘤细胞XG-7作用24 h后,采用CCK-8活细胞计数法检测细胞增殖， 同时用ELISA法检测细胞培养上清IgG水平及BAFF含量。结果:紫杉醇脂质体作用24 h后,对XG-7细胞增殖具有抑制作用, 细胞增殖活性随浓度增加逐渐降低,紫杉醇脂质体浓度为5 ng?mL-1以上时对细胞增殖有明显的抑制作用，且细胞培养上 清的IgG含量明显减少，与空白对照组相比差异有显著性（P<0.05），BAFF含量随药物浓度增加而有所降低，但降低不 明显,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05)。结论：紫杉醇脂质体可以抑制B细胞增殖并且抑制其IgG分泌，因此可 能具有治疗自身免疫性疾病潜在的临床价值。     

紫杉醇脂质体B细胞免疫抑制作用的实验研究

目的:研究紫杉醇脂质体对B细胞增殖及免疫功能的抑制作用。方法：分别用不同浓度紫杉醇脂质体 （1,2.5,5,10,20 ng?mL-1）对体外培养的多发性骨髓瘤细胞XG-7作用24 h后,采用CCK-8活细胞计数法检测细胞增殖， 同时用ELISA法检测细胞培养上清IgG水平及BAFF含量。结果:紫杉醇脂质体作用24 h后,对XG-7细胞增殖具有抑制作用, 细胞增殖活性随浓度增加逐渐降低,紫杉醇脂质体浓度为5 ng?mL-1以上时对细胞增殖有明显的抑制作用，且细胞培养上 清的IgG含量明显减少，与空白对照组相比差异有显著性（P<0.05），BAFF含量随药物浓度增加而有所降低，但降低不 明显,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05)。结论：紫杉醇脂质体可以抑制B细胞增殖并且抑制其IgG分泌，因此可 能具有治疗自身免疫性疾病潜在的临床价值。     

紫杉醇脂质体B细胞免疫抑制作用的实验研究

目的:研究紫杉醇脂质体对B细胞增殖及免疫功能的抑制作用。方法：分别用不同浓度紫杉醇脂质体 （1,2.5,5,10,20 ng?mL-1）对体外培养的多发性骨髓瘤细胞XG-7作用24 h后,采用CCK-8活细胞计数法检测细胞增殖， 同时用ELISA法检测细胞培养上清IgG水平及BAFF含量。结果:紫杉醇脂质体作用24 h后,对XG-7细胞增殖具有抑制作用, 细胞增殖活性随浓度增加逐渐降低,紫杉醇脂质体浓度为5 ng?mL-1以上时对细胞增殖有明显的抑制作用，且细胞培养上 清的IgG含量明显减少，与空白对照组相比差异有显著性（P<0.05），BAFF含量随药物浓度增加而有所降低，但降低不 明显,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05)。结论：紫杉醇脂质体可以抑制B细胞增殖并且抑制其IgG分泌，因此可 能具有治疗自身免疫性疾病潜在的临床价值。     

紫杉醇脂质体B细胞免疫抑制作用的实验研究

目的:研究紫杉醇脂质体对B细胞增殖及免疫功能的抑制作用。方法：分别用不同浓度紫杉醇脂质体 （1,2.5,5,10,20 ng?mL-1）对体外培养的多发性骨髓瘤细胞XG-7作用24 h后,采用CCK-8活细胞计数法检测细胞增殖, 同时用ELISA法检测细胞培养上清IgG水平及BAFF含量。结果:紫杉醇脂质体作用24 h后,对XG-7细胞增殖具有抑制作用, 细胞增殖活性随浓度增加逐渐降低,紫杉醇脂质体浓度为5 ng?mL-1以上时对细胞增殖有明显的抑制作用,且细胞培养上 清的IgG含量明显减少,与空白对照组相比差异有显著性（P<0.05）,BAFF含量随药物浓度增加而有所降低,但降低不 明显,与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05)。结论：紫杉醇脂质体可以抑制B细胞增殖并且抑制其IgG分泌,因此可 能具有治疗自身免疫性疾病潜在的临床价值。     

紫杉醇长循环热敏脂质体对Lewis肺癌荷瘤鼠的药效学

目的:考察紫杉醇长循环热敏脂质体(PLTL)对Lewis肺癌荷瘤小鼠的药效学。方法:构建Lewis肺癌荷瘤肿瘤模型,随机分为5组:对照组、加热组、紫杉醇注射液(PTX)组、紫杉醇普通热敏脂质体(PTL)组和PLTL组。治疗期间观察小鼠生活状态,检测瘤重抑瘤率;将肿瘤组织切片进行HE染色,观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪和TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡率;分析荷瘤小鼠生存状况,绘制荷瘤小鼠生存曲线。结果:PTX、PTL组和PLTL组的瘤重抑廇率分别为46.15%、51.48%和70.12%,流式细胞术和TUNEL法显示PTX、PTL和PLTL均可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,且凋亡率逐渐增强;肿瘤组织切片HE染色发现,PLTL可明显抑制肿瘤生长,并在肿瘤局部产生炎症反应;生存实验分析显示PLTL可减小紫杉醇的毒副作用,延长小鼠生存期。结论:PLTL与PTX和PTL相比,PLTL具有明显的热敏靶向性,PLTL与局部热疗相结合可显著增强紫杉醇的抗癌活性。