刺五加皂苷对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用

目的:观察刺五加皂苷(acanthopanax senticosus saponins, ASS)对脊髓运动神经元缺氧损伤有无保护作用,并探讨其可能机制.方法:对胚鼠运动神经元进行原代分离培养,免疫组化鉴定后建立缺氧诱导的神经元凋亡模型.取运动神经元培养在24孔板中,每组10孔,分为4组:对照组,无缺氧损伤;缺氧损伤组;ASS保护组,缺氧前24 h加入50 μg/ml的ASS;神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)保护组,缺氧前24 h加入0.1 μg/ml的GDNF.倒置显微镜及电镜下观察细胞形态学变化;MTT法测定神经元细胞活性;检测细胞外液LDH释放量来观察ASS对神经元细胞膜稳定性的影响.提取细胞匀浆液,Western印迹法检测分析ASS对缺氧的运动神经元HIF-1α表达的影响.结果:形态学观察显示ASS、GDNF保护组神经元缺氧损伤较缺氧损伤组明显减轻.ASS保护组神经元的细胞活性(0.21±0.028)比缺氧损伤组(0.15±0.012)高(P<0.05),而LDH的释放量(28.6±1.309)比缺氧损伤组(40.7± 1.885)低(P<0.01);缺氧损伤组的神经元HIF-1α的相对表达量(0.72±0.027)比对照组(0.16±0.003)高(P<0.01),但ASS保护组HIF-1α的表达(1.15±0.016)最高(P<0.01).ASS对大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用与GDNF相仿.结论:ASS可以提高体外缺氧损伤的运动神经元的细胞活性,对细胞的缺氧损伤有明显的保护作用,其保护作用的发挥,可能与增强细胞膜的稳定性及提高细胞HIF-1α的表达有关.     

刺五加皂苷对化学诱导缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子-1α表达的影响及机制

目的探讨缺氧诱导因子（HIF）-1α在刺五加皂苷（ASS）对神经元缺氧保护中的作用及可能的调控机制。方法建立神经生长因子（NGF）诱导PC12细胞分化和氯化钴诱导化学缺氧的神经元缺氧模型。采用Western blot和RT-PCR方法分别检测ASS对缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的基因转录、蛋白表达及ERK1/2磷酸化的影响。结果正常培养的PC12细胞几乎没有HIF-1α mRNA的转录和表达,氯化钴的处理可显著增加HIF-1α mRNA的转录和表达,ASS可进一步增加缺氧PC12细胞中HIF-1α mRNA的转录和表达;ASS和NGF的预处理还可以增加磷酸化ERK1/2的表达。以上变化均有统计学意义（均P〈0.05）。ASS的上述作用与NGF作用的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论ASS对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞具有明显的保护作用,其作用可能与促进HIF-1α mRNA的转录和通过激活ERK1/2途径进而抑制HIF-1α降解从而增加其含量有关。     

人参皂苷单体对大鼠局灶性脑缺血再灌注的神经保护研究

脑组织对缺血缺氧非常敏感，即使是短暂的缺血缺氧都能引起一系列复杂的机体反应，最终导致细胞死亡。缺血中心区细胞死亡以坏死为主，而周围的半暗带区以凋亡为主，凋亡对脑梗死的发展有促进作用。减少脑缺血引起的细胞凋亡正是目前研究的热点。在缺血神经元的凋亡机制中，半胱氨酸蛋白水解酶（caspase）-3处于核心位置，凋亡的最后实施通过它的激活而实现。在再灌注时间窗内恢复供血并积极采取脑保护措施可减轻再灌注损伤。     

预缺氧对大鼠低压缺氧性脑损伤保护作用的实验研究

目的 探讨预缺氧对严重低压缺氧引起大鼠海马神经细胞损伤及学习记忆能力降低的保护作用.方法 ①Wistar大鼠分为对照组、单纯缺氧组、预缺氧复合缺氧组.光镜和电镜观察大鼠海马CA1区神经元形态变化;TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡.②单纯缺氧组和预缺氧复合缺氧组大鼠进行穿梭箱主动回避训练,随后进行低压缺氧,观察大鼠学习记忆能力的改变.结果 预缺氧复合缺氧组大鼠CA1区神经元病理改变较轻,神经元凋亡显著低于单纯缺氧组(P＜0.05);预缺氧复合缺氧组大鼠在严重缺氧后受电击次数和主动逃避时间的增加显著低于单纯缺氧组(P＜0.05).结论 缺氧引起大鼠海马CA1区神经元凋亡等病理改变,并导致学习记忆能力降低;预缺氧对海马CA1区神经元的缺氧性损伤具有保护作用,并能有效减轻严重缺氧所导致的学习记忆能力下降.     

刺五加叶皂苷B对急性心肌梗死大鼠的保护作用

目的 研究刺五加叶皂苷B (ciwujianoside B) 对大鼠急性心肌梗死的影响及其机制。方法 通过结扎大鼠左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型;观测以下指标：左室收缩压 (LVSP)、左室舒张末期压 (LVEDP)、左室压最大上升/下降速率 (±dp／dtmax)、动脉收缩压 (SBP)、动脉舒张压 (DBP)、平均主动脉压 (MAP)、心率 (HR)、心肌梗死范围 (MIS);肌酸激酶 (CK)、乳酸脱氢酶 (LDH)、天冬氨酸转氨酶 (AST) 活性;游离脂肪酸 (FFA) 及乳酸 (LA) 水平;超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 及白细胞介素-6 (IL-6) 水平。结果 与模型组比较,刺五加叶皂苷B可显著升高急性心肌梗死大鼠 LVSP、±dp/dt max、HR、SBP (P＜0.05),降低 LVEDP (P＜0.05),对 DBP、MAP 的增加不显著;刺五加叶皂苷B可明显缩小 MIS,降低血清 CK、LDH、AST 活性及 MDA、FFA、LA、TNF-α、IL-6水平 (P＜0.05、0.01);提高 SOD、GSH-Px 活性 (P＜0.05)。结论 刺五加叶皂苷 B 对大鼠急性心肌梗死具有明显保护作用,可能与其增强抗氧化酶活性,减少自由基损伤,纠正 FFA 代谢紊乱及 LA 堆积,抑制炎症反应等机制有关。     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

刺五加叶皂苷对实验性脑缺血大鼠的保护作用

目的观察刺五加叶皂苷(ASLS)对大鼠实验性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型,探讨ASLS对实验性脑缺血大鼠脑含水量、脑组织病理、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、钙离子(Ca2 )及乳酸(LA)的影响。结果ASLS能明显降低实验性脑缺血大鼠的脑含水量、改善脑组织病理变化,提高脑组织SOD活性,降低MDA、Ca2 、LA水平。结论ASLS对大鼠实验性脑缺血具有明显保护作用,可能与其抑制脂质过氧化物损害、提高抗氧化酶活性及降低LA酸中毒和细胞内钙超载有关。     

胚胎大鼠脊髓运动神经元体外培养方法的优化

目的建立一种胚胎大鼠脊髓运动神经元的体外分离培养方法。方法采用原代培养的方法,从孕15天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织中分离脊髓前角神经元,通过差速贴壁法纯化培养细胞,应用神经元特异性的烯醇化酶抗体和抗神经微丝抗体-SMI32单克隆抗体对培养细胞进行鉴定。结果纯化培养体系中神经元占培养细胞的90％以上,其中70％左右为脊髓运动神经元(spina lmotor neurons,SMNS)。结论通过差速贴壁法纯化分离培养的SMNS体外生长状态良好,纯度高,可作为神经科学领域的重要研究手段。     

骨髓基质细胞培养基对体外脊髓运动神经元的影响

目的:体外检测骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的条件培养基对脊髓运动神经元的影响。方法:体外培养SD大鼠的BMSCs,并收集其条件培养基。实验组脊髓运动神经元用条件培养基培养,对照组用NB培养液。观察两组运动神经元形态学指标,测量细胞突起长度。MTT法检测两组细胞活力。结果:实验组运动神经元的细胞活力、突起长度与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:BMSCs合成和分泌神经营养活性物质对脊髓运动神经元有维持存活和促进突起生长的作用。     

刺五加注射液对Hela细胞抑制作用的实验研究

目的：探讨刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的抑制作用。方法：采用MTT法测定了不同浓度的刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化。结果：刺五加注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好,作用时间越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论：刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用。     

葛根素对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究葛根素对培养SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的拮抗作用。方法:葛根素(50和100mg/L)预处理24h后作用于乳鼠心肌细胞A/R损伤模型,运用MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液中LDH和细胞内SOD活性及MDA含量。运用流式细胞术Annexin V-PI双染法测定细胞凋亡变化。结果:与A/R模型组比较,葛根素明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量;同时降低细胞的凋亡率。结论:葛根素对A/R损伤心肌细胞具有保护作用,其机制可能与清除自由基的产生有关。     

脊髓运动神经元嫌Golgi树突的再论证

以ＣＢ－ＨＲＰ法（前后肢５块肌注射）和Ｇｏｌｇｉ法，对同窝大鼠脊髓相应切片进行观察，佐以还原银切片分析。以前角外侧部细胞数相比，ＣＢ－ＨＲＰ切片是Ｇｏｌｇｉ切片的２倍。以标记或浸染的侧索内白质树突（ＷＭＤ）的表面密度相比，ＣＢ－ＨＲＰ胫骨前肌注射者是Ｇｏｌｇｉ切片的２．９倍。ＣＢ－ＨＲＰ各肌注射组的ＷＭＤ均能长达侧索周边部，其中不少形成软脊膜下边缘丛，即嫌Ｇｏｌｇｉ树突（ＧＢＤ）。前角内侧部细胞远达中央管室管膜的树突，是另一种ＧＢＤ。这两种ＧＢＤ均未能在Ｇｏｌｇｉ切片上显示。ＧＢＤ的存在改变了脊髓细胞构筑的基本概念，不同于比较解剖学的先前结论。     

抗运动神经元抗体对脊髓块生长的抑制及与人、鼠运动神经元的交叉反应

以１：１０兔抗猪脊髓前角运动神经元血清（ｒａｂｂｉｔａｎｔｉ－ｓｗｉｎｅｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｅｒｕｍ，ＲＡＳ）、正常兔血清（ｎｏｒｍａｌｒａｂｂｉｔｓｅｒｕｍ，ＮＲＳ）、肌肉提出物（ｍｕｓｃｌｅｅｘｔｒａｃｔｓ，ＭＥＴ，５０和１００μｇ／ｍｌ）、脑提出物（ｂｒａｉｎｅｘｔｒａｃｔｓ，ＢＥＴ，５０和１００μｇ／ｍｌ）分别作用于体外培养的新生大鼠脊髓组织块，５ｄ后观察神经突起的生长情况。结果表明，ＲＡＳ可明显抑制大鼠脊髓组织块生长（ＮＲＳ组有突起生长的脊髓块占３６．７％，ＲＡＳ组仅为１３．３％），而ＭＥＴ、ＢＥＴ均可明显促进大鼠脊髓组织块生长（ＭＥＴ及ＢＥＴ组有突起生长的脊髓块均占９６．７％）。同时比较ＲＡＳ对猪、人和大鼠脊髓的免疫组织化学交叉反应，证明ＲＡＳ对运动神经元（Ｍｎｓ）的免疫反应与动物的种属关系不大。     

硒对体外大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖和分化的影响

目的 :观察硒对体外大鼠胚胎脊髓神经细胞增殖和分化的影响。方法 :用Lowry法检测不同浓度硒作用下培养细胞的总蛋白含量 ,显微镜下观察神经细胞的形态并对集落形成率进行比较。结果 :低浓度 (1 0 μmol/L)的硒对神经细胞的增殖和分化有明显促进作用而高浓度的硒 (≥ 5 0 0 μmol/L)对其有抑制作用。 结论 :硒对神经细胞的增殖和分化具有双重性影响 ,其生物学作用性质与剂量有关。     

神经再生素对新生大鼠脊髓细胞凋亡的影响

目的：观察神经再生素对新生大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将新生SD大鼠一侧坐骨神经切断后，用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧端，海绵内加入神经再生素，术后3、6、12h用TUNEL法在光镜下检测L4－L5脊髓细胞凋亡情况，分别以神经生长因子和生理盐水作为阳性和阴性对照。结果：新生大鼠在坐骨神经切断后脊髓细胞出现大量凋亡，神经再生素组凋亡细胞数量较生理盐水组显著减少（P＜0．01）；神经再生素组与神经生长因子组之间凋亡细胞数量的差别无显著性意义（P＞0．05）。结论：神经再生素对受损的神经组织细胞有保护作用。     

二氢石蒜碱对大鼠高碳酸性脑缺氧损伤的保护作用

目的 :探讨二氢石蒜碱 (DL)对大鼠高碳酸性脑缺氧损伤的影响。方法 :将在体高碳酸性缺氧模型大鼠分为生理盐水组、尼莫地平组、DL 2 0mg/kg组和DL 40mg/kg组 ,记录并比较 4组动物停止、恢复人工呼吸后脑电图(EEG)出现、消失的时间及幅度。结果 :停止人工呼吸 2min后复氧 1 0min时EEG恢复幅度分别为 (32 .1 5± 33 .68) %、(75 .40± 1 7.1 2 ) %、(62 .50± 1 5 .81 ) %、(80 .0 0± 1 2 .2 6) % ,尼莫地平组、DL 2 0mg/kg组、DL 40mg/kg组与生理盐水组均有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,但尼莫地平组、DL 2 0mg/kg组、DL 40mg/kg组之间无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论 :DL对高碳酸性脑缺氧损伤有保护作用     

大鼠脊髓星形胶质细胞的体外培养与鉴定

目的:探讨大鼠脊髓组织星形胶质细胞体外培养、纯化和鉴定的方法。方法:于无菌条件下取新生1~2 d的SD大鼠脊髓组织,采用机械吹打及胰酶消化法制成细胞悬液,通过差速贴壁和恒温摇床震荡去除杂细胞,进行培养。用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色对所培养的细胞进行鉴定。结果:分离培养的细胞具有典型的星形胶质细胞的形态,传至第3代细胞纯度达95%以上。结论:成功建立了大鼠脊髓星形胶质细胞体外培养方法,为脊髓星形胶质细胞的实验研究奠定基础。     

大鼠脊髓钝挫伤后IL-6和Vim对运动功能恢复的影响

目的 用慢病毒干扰白介素6(interleukin-6,IL-6)的表达,观察脊髓钝挫伤(spinal cord contusion,SCC)后波形蛋白(Vim)的表达变化及其对大鼠运动功能恢复的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组(sham组),SCC实验组(SCC组),载体组(vetor组)和慢病毒组(IL-6-RNAi-LV组).改良Allen's法制备SCC模型,BBB评分评估术后大鼠的运动功能变化,免疫组织化学技术(IHC)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测IL-6、Vim的蛋白质定位和mRNA的表达变化.Gene MANIA预测IL-6和Vim的关系后构建慢病毒干扰IL-6的SCC模型进一步实验.结果 BBB评分显示SCC组,IL-6-RNAi-LV组,Vetor组在术后5、7、14、28 d较Sham组明显下降(P<0.05),而IL-6-RNAi-LV组在第5、7、14、28天的评分较Vetor组有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05).IHC结果显示IL-6和Vim表达在脊髓神经元中.另外,IL-6 mRNA在SCC后12 h达到峰值(P<0.05),Vim mRNA在SCC后7、14、28 d较sham组增高,进一步抑制IL-6后其在28 d与vector组相比有明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 在SCC后,抑制IL-6表达可以下调Vim,抑制胶质瘢痕形成,进而促进SD大鼠的运动功能恢复.     

神经生长因子对大鼠小脑皮质神经细胞缺氧、缺糖损伤的保护作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)对小脑皮质神经细胞缺氧、缺糖损伤的影响。方法　采用含 0 5mmol·L-1连二亚硫酸钠 (Na2 S2 O4)的无糖Earle’s液复制小脑皮质神经细胞缺氧、缺糖损伤模型 ,通过形态学观察、MTT法和LDH活性的测定研究NGF对小脑皮质神经细胞的保护作用。结果　NGF (5 0 ,10 0 μg·L-1)组小脑皮质神经细胞形态损伤明显减轻 ,细胞存活率升高 ,培养液中LDH含量明显下降。结论　NGF对缺氧、缺糖引起的小脑皮质神经细胞损伤具有保护作用。     

刺五加皂苷对外周刺激诱发的海马长时程增强效应的影响

目的：探讨刺五加皂苷（ASS）对大鼠海马CA1区长时程增强效应（LTP）的影响。方法：20只雄性SD大鼠随机分为对照组与ASS组,每组10只,两组单刺激（10～20 V,0.5 ms,1次/min,30 min）坐骨神经诱发海马CA1区场电位。强直刺激（35 V,0.5 ms,100 Hz,持续1 s,间隔10 s,4次）坐骨神经,诱发海马CA1区场电位LTP。ASS组在强直刺激前,于侧脑室内微量注入ASS 1.0μg/5μL,强直刺激后观察 其对LTP的影响。结果：电刺激坐骨神经可在海马CA1区诱发出潜伏期（172.33±1.65）ms和可重复出现的以负波为主的场电位,平均幅度（32.24±0.72）μV。对照组强直刺激后可出现持续时间2 h以上的LTP现象。ASS增强了强直刺激后海马CA1区LTP的诱导。结论：刺五加皂苷对大鼠海马CA1区LTP有明显促进作用,表明其可提高大脑学习、记忆能力。