巢式多聚酶链反应检测肺炎支原体

巢式多聚酶链反应检测肺炎支原体①郭纪全②唐英春张天托张扣兴（中山医科大学附属第三医院内科；广州，５１０６３０）主题词聚合酶链反应；肺炎支原体／分析中图号Ｒ３７５；Ｑ５２３肺炎支原体（ＭＰ）感染的病原学诊断过去主要依靠培养法，血清学试验或基因探针等方法...     

聚合酶链反应对儿童结核性脑膜炎的检测及意义

聚合酶链反应对儿童结核性脑膜炎的检测及意义周红平饶兆英（江西省儿童医院中心实验室南昌３３０００６）随着全球结核病发病率的提高，儿童结核性脑膜炎的发生率也相应增多。典型的儿童结脑诊断并不困难，但对早期或不典型的儿童结脑在诊断上就有一定困难。传统的结核杆...     

多聚酶链反应对早期梅毒的诊断价值

目的：探讨检测早期梅毒的实验诊断方法，方法：用多聚酶链反应（PCR）法对92例硬下疳无硬下疳症状的早期性病患者进行梅毒螺旋体基因扩增，同时对患者作血清抗体检测进行对照。结果，PCR法检测阳性率在硬下疳期为100％，无硬下疳患者为5．2％；而血清抗体阳性率在病程长于2周硬下疳患者为83％，短于2周者几乎测不到抗体，无硬下疳患者均阴性。结论：PCR检测对梅毒的早期诊断有重要意义。     

多聚酶链反应及其在传染病学中的研究进展

<正> 近年来,在传染病的基础和临床研究中,特异核酸序列分析的重要性日益增加,聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)或称体外基因倍增技术,是一种由引物介导的特异性 DNA 序列的酶扩增新方     

多重降落PCR检测痰标本肺炎链球菌与b型流感嗜血杆菌

目的:建立可同时检测痰标本中肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)与b型流感嗜血杆菌(Hae-mophilus influenzae type b,Hib)的多重降落PCR。方法:以Sp cpsA基因、Hib capⅡ区为靶标设计引物,并用Primer-BLAST在线软件检测其特异性,多重降落PCR检测492份痰标本,并以标准菌株作为对照,结果与细菌培养法进行比较。结果:所建立的多重降落PCR对Sp、Hib的检测下限分别达6.3 pg、0.2 pg;与细菌培养法相比,灵敏度及总灵敏度均达100%,检测Sp、Hib特异性分别为94%、98%,总特异性达92%。结论:所建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可作为Sp、Hib感染的快速诊断与流行病学研究的备选手段。     

多聚酶链反应检测血清HBVDNA的临床观察

聚合酶链反应（PolymerasechainReaction，PCR）是新近建立的一种体外基因扩增技术，具有高灵敏度、高特异性、简便和快速等优点，国外已应用于遗传，肿瘤及传染病等多种疾病的临床诊断。近年来，国内用于检测HBVDNA，丰富和更新HBV感染的认识，对HBV感染的临床诊断及研究有广阔的前景。我院从1992年7月至1993年6月应用PCR技术对284例各型HBy感染者及20名正常人直接检测血清中HBVDNA，进行临床观察及其HBVDNA与乙型肝炎血清标志物间的关系，以探讨PCR技术在乙型肝炎病毒感染中的应用。1．材料与方法1．1检测对象3o4例为近一…     

Rapid detection of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae in nasopharyngeal swabs by multiplex PCR

Objective To establish multiplex PCR-based assays for detecting H.influenzae and H.parainfluenzae.And the PCR-based assays were applied to detect the carriage rates of H.influenzae and H.parainfluenzae in nasopharyngeal swab specimens which were collected from healthy children.Methods Multiplex primers for species-specific PCR were designed by using DNAstar soft based on the sequences of 16S rRNA genes from genus Haemophilus to detect H.influenzae and H.parain fluenzae.Results The sensitivity of the 16S rRNA PCR assay for detecting H.influenzae and H.parainfluenzae was 97.53％ and 100％ respectively,and the specificity was 95.89％ and 96.63％ respectively.Youden's Index on the ability to detect H.influenzae and H.parainfluenzae was 0.9342 and 0.9663 respectively.666 nasopharyngeal swab specimens were collected from healthy children.The detection rates of H.influenzae and H.parainfluenzae were 14.11％ and 16.07％ respectively by using isolation and culture methods.The detection rates of H.influenzae and H.parainfluenzae were 43.54％ and 57.96％ respectively by 16S rRNA PCR assays.The carriage rates of serotypes a,b,c,d,e,f and non-typeable isolates were 0％ (0/666),0.15％ (1/666),1.20％ (8/666),0.15％ (1/666),1.20％ (8/666),1.80％ (12/666),95.50％ (636/666) respectively.Conclusion The multiplex PCR assays were very rapid,reliable and feasible methods for detection of H.influenzae and H.parainfluenzae in pharyngeal swab specimens which were compared to conventional isolation and culture methods.95.5％ of H.influenzae strains in healthy children were nontypeable.The encapsulated or typable strains were mainly three serotypes which was c,e,and f serotype.     

聚合酶链反应阵列同时定量检测37种白血病融合基因

目的建立一种同时定量检测多种白血病染色体易位形成的融合基因的荧光实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）方法,了解阵列式PCR的应用可行性。方法组合使用82条引物,设立66个PCR平行管,同时定量检测37种白血病常见融合基因形成的125种剪切体和4种白血病常见的原癌基因活化。实时定量PCR采用Eva Green荧光染料法,用ABL基因做内参,用比较Ct法进行相对定量。用此方案对31例白血病患者标本进行检测,其中6例慢性粒细胞白血病（CML）患者做治疗前后或治疗过程中不同时间的对比检测,28人次与多重巢式PCR方案的检测结果进行对照。结果我们建立的PCR阵列方案有较大的线性检测范围（10^2～10^8拷贝／μl）,有较高的检测灵敏度（232拷贝／μl）和精确性;在31例患者标本的检测中,共检测到14种融合基因类型和所有4种原癌基因活化;检测到一例同时有5种融合基因阳性和两种原癌基因活化的患者;和多重巢式PCR检测结果的对比显示本方案灵敏度略低于巢式PCR,但差异没有统计学意义（P=0．009）;6例CML患者标本的检测显示治疗后患者标本中BCR／ABL融合基因及WT1和EVI1原癌基因表达量均呈现不同程度的降低,与临床治疗情况符合;基因定量分析的结果表明本方案能够对常见白血病融合基因和癌基因活化情况进行定量分析,在白血病的诊断及疗效监测中有应用价值。结论PCR阵列法同时定量检测多种白血病融合基因适于白血病初诊患者融合基因的筛查及微小残留病（MRD）的检测,对于检测同时有多种融合基因存在的病例及治疗过程中融合基因的变异情况更为有用。     

流感嗜血杆菌16S rRNA和p6基因PCR检测结果比较

目的 比较流感嗜血杆菌(Hi) 16S rRNA和p6基因的PCR检测结果的差异.方法 以Hi的16S rRNA基因及外膜蛋白p6基因作为靶基因,设计特异性引物分别对临床标本分离的43株Hi进行PCR快速检测. 结果 34株16S rRNA基因扩增出538bp大小DNA片段,检出率为79%;43株p6基因均扩增出296bp大小DNA片段,检出率为100%.同时,其他细菌对照株16S rRNA和p6基因扩增均未出现假阳性结果.结论 相比于16S rRNA基因,p6基因对Hi检测和鉴定更具特异性,可用于临床对Hi感染疾病的快速诊断和流行病学研究.     

荧光偏振和多重聚合酶链技术在肺炎支原体、肺炎衣原体检测中的应用

目的:应用多重聚合酶链反应和荧光偏振检测技术建立一种方便可靠、简单经济的肺炎支原体、肺炎衣原体DNA同步检测方法.方法:以与肺炎衣原体、肺炎支原体16SRNA序列互补的特异、无交叉反应的两对引物在同一反应体系中行多重聚合酶链反应扩增阴阳性对照及521例患儿咽喉分泌物,将荧光偏振检测技术与模板指导的DNA末端延伸反应(TDI -FP)结合,对样本PCR扩增产物进行进一步检测,并与测序方法结果比较.结果:应用多重聚合酶链反应和TDI -FP技术检测患者521例,肺炎衣原体感染阳性121例,肺炎支原体感染阳性113例,与测序检测方法符合率100%,其中肺炎衣原体、肺炎支原体双重感染阳性10例.结论:建立了基于荧光偏振技术检测肺炎衣原体、肺炎支原体的新方法,具有良好的特异性,方便简单,无需标记探针,可用于临床检测.     

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的 评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值.方法 比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果 用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体(CT)感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.结论 CT-DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力.     

Identification of Streptococcus species and Haemophilus influenzae by direct sequencing of PCR products from 16S-23SrDNA intergenic spacer regions

目的：利用16S-23SrRNA间区的特征建立一种简单、快速的细菌分类方法。方法：以化脓性链球菌16SrRNA的3'端和23SrRNA的5'端的保守区中合成3对引物,PCR扩增16S-23SrDNAISRs,纯化后直接测序,在GenBank上查找对应细菌的ISRs序列。用DNAMAN软件进行系统进货分析。结果：链球菌属为单拷贝16S-23SrRNAISRs片段,编码1个tRNA^Ala基因。流感嗜血杆菌各生物型出现2个大小相似的ISRs片段。与GenBank上的资料比较,7株链球菌归属5个种,流感嗜血杆菌均为b型。结论：ISRs作为细菌分类新的目标基因具有属、种、型和株特异性与灵敏性。     

婴幼儿奶粉中病原菌多重PCR检测研究

目的建立婴幼儿奶粉中常见病原菌的多重PCR检测方法。方法根据阪崎肠杆菌外膜蛋白A（ompA）基因和金黄色葡萄球菌耐热核酸酶（nuc）基因序列，设计两对特异性引物。对反应条件进行优化，建立针对婴幼儿奶粉中常见病原菌的多重PCR检测方法，并对奶粉进行模拟检测。结果两对引物能特异扩出282bp和482bp的目的条带；在优化条件下，可同时检测模拟样品中两菌DNA，灵敏度达到10^3CFU／ml。结论与传统方法比较，研究建立的多重PCR方法敏感、特异，为快速检测奶粉中病原菌提供了有效手段。     

聚合酶链反应在流感嗜血杆菌肺炎诊断中的应用研究

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）在流感嗜血杆菌（Hi）肺炎诊断中的应用价值。方法：应用Hi种特异性PCR和b型Hi(Hib）特异性PCR及选择性Hi培养基，对83例婴幼儿肺炎急性期鼻咽深部分泌物（NPA）和51份血标本，及37份健康婴幼儿咽拭子标本进行检测。结果：83份NPA标本培养阳性20份（24.1%），Hi-PCR阳性36份（43.4%），其中Hib-PCR阳性19份（22.9%），Hi-PCR阳性而Hib-PCR阴性17份（20.5%）；51份血标本培养均阴性，Hi-PCR和Hib-PCR均阳性6份；37份对照咽拭子培养阳性3份（8.1％），Hi-PCR阳性6份（16.2%），Hib-PCR均阴性。结论：健康婴幼儿咽部不定型Hi携带率较高，肺炎NPA标本以Hib-PCR检测为宜。