鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓P物质表达的影响

目的研究鞘内联合应用吗啡和氯胺酮对神经痛大鼠脊髓P物质表达的影响。方法12只Wistar大鼠,体质量220~260 g,制备坐骨神经结扎模型并鞘内置管,随机分为4组(n=3):B组为空白对照组;C组鞘内注射生理盐水10μL;M组鞘内注射吗啡20μg;KM组鞘内注射吗啡10μg和氯胺酮25μg。坐骨神经结扎术后第4天开始鞘内给药,1次/d,连续7 d。用药7 d后处死大鼠,取腰段脊髓,免疫组化法测定脊髓P物质的含量。结果C组P物质表达明显低于B组(P<0.05)和KM组(P<0.01);KM组P物质表达明显高于M组(P<0.05)。结论鞘内联合应用吗啡和氯胺酮的抗伤害性作用,可能与其增加脊髓背角P物质的含量有关;脊髓背角P物质含量减少,可能介导慢性坐骨神经损伤后的痛敏持续状态。     

鞘内注射吗啡对大鼠细胞免疫功能及皮质酮的影响

目的观察大鼠鞘内注射吗啡后植物血凝素（PHA）-诱导的脾淋巴细胞增殖反应和血清皮质酮的改变及米非司酮（RU486）预处理后对其的影响。方法24只雄性健康SD大鼠随机分为3组（n=8）：对照组（NS）、吗啡组（M）、RU486预注组（RU486组）,分别鞘内注射生理盐水50μl,吗啡40μg／50μl和吗啡40μg,RU486组鞘内注射前30min前腹腔注入RU48620mg／kg。给药6h后抽取血样并取出脾脏制成单细胞悬液。用四氮唑蓝比色（MTT）法测定PHA-诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖反应,用酶联免疫法（EIA法）测定血清皮质酮浓度。结果与NS组比较,M组大鼠PHA-诱导的脾淋巴细胞增殖指数明显降低（P〈0．01）,血清皮质酮的浓度明显升高（P〈0．01）;与M组比较,RU486组PHA-诱导的脾淋巴细胞增殖指数无明显变化（P〉0．05）,与NS组和M组比较,RU486组血清皮质酮浓度均升高（P〈0．05）。结论鞘内注射吗啡可抑制大鼠细胞免疫功能;下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴不参与此过程的调节。     

自噬在雷帕霉素逆转脊髓吗啡耐受形成机制研究

目的研究鞘内注射雷帕霉素对大鼠吗啡耐受形成的作用。方法选择鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠32只,随机分为M组、C组、MR组和R组(n=8),M组2次/d,连续7 d鞘内注射吗啡20μg;C组2次/d,连续7 d鞘内注射生理盐水;M R组2次/d,连续7 d鞘内注射吗啡20μg,并于第3天第2次注射吗啡同时鞘内注射雷帕霉素2.3μg,连续3 d;R组2次/d,连续7 d鞘内注射生理盐水,并于第3天第2次注射生理盐水前鞘内注射雷帕霉素2.3μg,连续3 d。于鞘内注射前及第1、3、5、7天,第2次鞘内注药后30 min,采用电子Von Frey测痛仪测定机械缩足反射阈值(M WT),最后一次M WT测定结束后,随机取4只大鼠L4~6脊髓背角,采用Western blot测定自噬标记蛋白LC3Ⅱ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)及自噬调节信号相关蛋白Beclin-1的表达。结果与M组比较,MR组鞘内注射第3、5、7天后,MWT均升高(P<0.05),虽然MR组MWT有降低趋势,但在第7天M WT仅比第1天下降43%,表明第3天后雷帕霉素与吗啡合用能部分逆转吗啡耐受的形成。Western blot结果:与C组比较,M组、R组和MR组第7天脊髓背角Beclin-1、LC3Ⅱ与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均上调(P<0.05)。与M组比较,R组和MR组第7天脊髓背角Beclin-1、LC3Ⅱ与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著上调(P<0.01)。免疫组织化学结果:与M组比较,第7天MR组脊髓背角Beclin-1表达平均光密度值明显升高(P<0.01)。结论吗啡耐受开始形成时合用雷帕霉素可以部分逆转脊髓吗啡耐受的形成。     

氯胺酮对大鼠吗啡戒断症状的影响及其作用机理

目的　研究氯胺酮对大鼠吗啡戒断症状的影响及其可能的机理。方法　建立大鼠吗啡依赖模型 ,在用纳洛酮催瘾前 2min给予不同剂量的氯胺酮 ,观察其戒断症状的改变 ;用分光光度法测定戒断时大鼠一氧化氮 (NO)含量、一氧化氮合酶 (NOS)活性 ,用放射免疫法测定环鸟苷酸 (cGMP)含量。结果　 3个剂量的氯胺酮 (5、10和 2 0mg·kg- 1)均可缓解吗啡戒断时探究、扭体、湿狗样抖动、跳跃等运动反应 ,减少活动次数 ,抑制植物神经系统症状。10、2 0mg·kg- 1氯胺酮可显著减轻吗啡戒断所致的体重下降 ,小剂量氯胺酮 (5mg·kg- 1)可抑制吗啡依赖大鼠前额叶皮质、小脑的NOS活性和NO、cGMP含量的增高。结论　氯胺酮可缓解大鼠吗啡戒断症状 ,其作用机理可能与减弱大鼠吗啡戒断时NMDA NO cGMP通路效应有关。     

吗啡依赖及戒断大鼠脊髓和脑干中一氧化氮合酶基因的表达

目的　观察吗啡依赖或吗啡戒断大鼠脊髓和脑干中一氧化氮合酶 (NOS)基因表达的变化。方法　以 β actin为内参照 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定NOSmRNA的表达水平。结果　吗啡依赖大鼠脊髓和脑干NOS表达水平较正常对照大鼠降低 ,纳洛酮 ( 4mg·kg-1,ip)激发大鼠吗啡戒断症状 1h后脊髓和脑干中NOS表达水平明显升高 ,戒断 2h和 4h后NOS基因表达较 1h组减少。NOS抑制剂L N 硝基精氨酸甲酯 (L NAME ,10mg·kg-1)处理后大鼠吗啡戒断症状减少 ,同时脊髓和脑干的NOS基因表达水平较戒断 1h组明显降低。甲基东莨菪碱 ( 0 5mg·kg-1)处理组脊髓和脑干中NOS表达水平较戒断 1h组明显降低 ;选择性毒蕈碱受体M1拮抗剂 pirenzepine( 10mg·kg-1)处理组动物脊髓中NOS表达水平较戒断 1h组降低 ,而脑干中NOS表达水平没有改变 ;NMDA受体拮抗剂MK 80 1( 0 12 5mg·kg-1)处理后脊髓和脑干中NOS表达水平较戒断 1h组没有差异。结论　吗啡慢性处理后脊髓和脑干中NOSmR NA水平降低 ,抑制内源性NO生成和阻断毒蕈碱受体可以减少吗啡戒断所引起脊髓和脑干中NOS基因的表达     

吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体和κ受体mRNA表达的研究

目的 观察吗啡依赖戒断时大鼠脊髓和脑干μ受体和Κ受体mRNA表达以及毒蕈碱受体拮抗剂、NMDA受体拮抗剂和NOS抑制剂对些基因表达的影响。方法 用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）,以β-actin mRNA为内标检测μ受体和Κ受体mRNA的表达水平。结果 吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体mRNA表达明显升高,纳洛酮激发大鼠戒断反应1h后μ受体基因表达降低,4h后接近正常组,而脊髓和脑干Κ受体基因的变化与μ受体基因表达趋势相反。鞘内注射PKA抑制剂Rp-cAMPs和蛋白磷酸酶抑制剂calyculinA可以明显减少脊髓和脑干中μ受体和Κ受体基因表达,而PKA激活剂Sp-cAMPs则无明显影响;经NOS抑制剂l-N-硝基精氨酸甲酯（l-NAME)处理后,脊髓μ受体和Κ受体基因表达明显减少,经毒蕈碱（M）受体拮抗剂甲基东莨菪碱处理后,脊髓μ受体和脑干Κ受体基因表达也明显减少,而脊髓Κ受体和脑干μ受体基因表达变化不明显;经NMDA拮抗剂MK801和M1受体拮抗剂哌拉唑嗪处理后,脊髓和脑干μ受体和Κ受体基因表达较戒断1h组无明显差异。脊髓和脑干中β-actin基因表达各处理组之间没有差别。结论 吗啡依赖和戒断动物脊髓和脑干中μ受体和Κ受体基因表达发生改变,M受体拮抗剂和NOS抑制剂在吗啡戒断反应时减少μ受体和Κ受体基因表达可能是它们有效控制吗啡戒断症状的机制之一。     

褪黑素对吗啡戒断大鼠脑内CaM和CaMKⅡ活性的影响

目的 :观察褪黑素对吗啡戒断大鼠海马和脑干内CaM及CaMKⅡ活性的影响。方法 :以剂量递增法连续 5d皮下注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型 ,分别用流式细胞术和放射酶法检测脑内CaM及CaMKⅡ的活性变化。结果 :(1)与对照组比较 ,吗啡依赖大鼠海马和脑干内钙调蛋白活性明显升高 (P <0 .0 1) ,而CaMKⅡ活性则显著降低 (P <0 .0 5 )。纳洛酮催促戒断后海马和脑干内CaMKⅡ活性明显高于吗啡依赖大鼠 (P <0 .0 1) ,但钙调蛋白相对活性无显著变化 (P >0 .0 5 ) ;(2 )与吗啡依赖组比较褪黑素可使吗啡戒断大鼠海马和脑干内CaM及CaMKⅡ的活性明显降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :褪黑素对吗啡依赖大鼠戒断综合征的抑制作用可能与MT降低脑干和海马内CaM及CaMKⅡ活性有关。     

NO/cGMP信号通路在鞘内吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨NO/cGMP信号通路在鞘内吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用。方法大鼠建立鞘内置管的模型。随机分为9组,每组6只:SHAM组(假手术组)、CON组(对照组,生理盐水)、ITMP组(鞘内吗啡预处理,3μg·kg-1)、L-NAME+ITMP组(一氧化氮合酶阻断剂+鞘内吗啡预处理)、ODQ+ITMP组(鸟苷酸环化酶阻断剂+鞘内吗啡预处理)、KT5823+ITMP组(蛋白激酶G阻断剂+鞘内吗啡预处理)、L-NAME组、ODQ组、KT5823组。ITMP组于心脏缺血前,鞘内注射吗啡10μl 5 min,间断5 min,重复3次;CON组以相同的方式注射生理盐水;L-NAME+ITMP组、ODQ+ITMP组、KT5823+ITMP组分别于吗啡预处理前10 min鞘内注射L-NAME(30 nmol,10μl)、ODQ(11nmol,10μl)、KT5823(20 pmol,10μl);L-NAME组、ODQ组、KT5823组为阻断剂自身对照组。除SHAM组行假手术操作不做其他处理,其余各组大鼠均行左冠状动脉缺血30 min,再灌注120 min诱导心肌缺血/再灌注损伤。观察指标包括:血流动力学指标;心肌缺血危险区(AAR)、梗死区(IS)的体积、心肌梗死面积以IS/AAR表示。结果与CON组相比,ITMP组的IS和IS/AAR均明显下降(P<0.01);与ITMP组比较,L-NAME+ITMP组、ODQ+ITMP组、KT5823+ITMP组的IS和IS/AAR均升高(P<0.01)。与SHAM组比较各组MAP和RPP在缺血30 min降低(P<0.05),与基础值比较,除SHAM组外,其余各组MAP和RPP在缺血30 min降低(P<0.05)。结论 NO/cGMP的信号通路可能参与介导鞘内吗啡预处理,对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。     

γ-氨基丁酸对大鼠吗啡戒断症状的影响及其作用机理

目的研究γ-氨基丁酸(GABA)对大鼠吗啡戒断症状的影响及其可能的机理。方法建立大鼠吗啡依赖模型,在戒断症状高峰出现前30min侧脑室(icv)注入GABA或生理盐水(0.9%),观察其戒断症状的改变。用分光光度法测定戒断时大鼠血清及脑组织中一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性。结果GABA可缓解吗啡戒断时理毛、湿抖、扭体、咬牙、舔阴等运动反应,减少活动次数,抑制植物神经系统症状。Icv注入10μl(500μg·10μl-1)的GABA可抑制吗啡依赖大鼠血清及脑组织NO含量和血清中NOS活性的增高(P<0.05)。结论GABA可缓解大鼠吗啡戒断症状,其作用机理可能与阿片受体、中枢神经系统中NO的表达机制有关。     

吗啡依赖对小鼠海马内一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的·· :探讨吗啡依赖对小鼠海马不同亚区一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法·· :以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型 ,采用还原型辅酶Ⅱ -黄递酶(NADPH -d)组织化学法显示吗啡依赖组、纳洛酮催促戒断组和正常对照组小鼠海马CA1区、CA3区和齿状回NOS阳性神经元。结果·· :与对照组相比 ,吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组海马CA1区和齿状回NOS阳性神经元的数目均明显减少 (P<0.01) ,纳洛酮催促戒断组更为明显 ,而在CA3区无明显改变。结论·· :吗啡依赖和纳洛酮催促戒断小鼠海马CA1区和齿状回NOS活性降低 ,提示NO合成的能力下降 ,戒断期下降更明显。这些变化可能是吗啡依赖造成学习记忆功能下降的原因之一。     

依普拉芬对去卵巢大鼠血清一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的探讨人工合成的植物雌激素依普拉芬对去卵巢大鼠血清一氧化氮及一氧化氮合酶合酶的影响。方法6个月龄雌性SD大鼠60只分为假手术组（10只SD大鼠）和去卵巢组（50只）;再将去卵巢大鼠分为阴性对照组,依普拉芬高、中、低剂量组和雌激素对照组（各10只）,分别给予基础饲料和不同剂量的依普拉芬,12周后测定血清NO及NOS。结果与假手术组相比,去卵巢大鼠阴性对照组血清NO及NOS明显降低,依普拉芬组高于阴性对照组,与假手术组比较差异无统计学意义。同时低于雌激素组。结论NO及NOS参与了骨质疏松的病理生理过程;依普拉芬可以通过提高去卵巢大鼠血清NO及NOS浓度达到防治绝经后骨质疏松症的作用。     

戊四唑癫痫大鼠脑组织一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性变化

探讨一氧化氮在戊四唑癫病发机制中的作用。方法每天注射戊四唑建立在鼠癫痫模型,测定癫病发作后大鼠大脑皮质,海马一氧化氮和一氧化氮合酶活性变化,结果癫痫发作后海马ＮＯ含量和ＮＯＳ活性显著升高,结 戊四唑诱导的癫痫中具有致痫性。     

剥夺性弱视大鼠视中枢NO与NOS变化及bFGF对其表达的影响

目的研究不同培养条件下剥夺性弱视大鼠视中枢中一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)的变化,从而探讨NO在弱视形成过程中的作用并讨论碱性成纤维细胞因子(bFGF)对其表达的影响。方法14d大鼠30只随机分为3组,每组10只,Ⅰ、Ⅱ组为实验组,缝合其单侧眼睑30d,造成剥夺性弱视模型,Ⅲ组为正常对照组,同等条件下饲养30d后,3个组均切取外侧膝状体,Ⅰ组用bFGF培养液培养,Ⅱ、Ⅲ组用普通对照培养液培养,1周后取材作NO及NOS生化指标的测定。结果与Ⅲ组相比,单眼剥夺后,Ⅰ、Ⅱ组大鼠剥夺眼对侧外侧膝状体的NOS量显著降低(P<0.01),且Ⅰ组比Ⅱ组更低(P<0.01)。结论生后早期单眼剥夺可造成大鼠外侧膝状体中NO及NOS含量的降低,bFGF有清除氧自由基的作用,可降低体外培养的外侧膝状体中NO及NOS的含量。     

The role of nitric oxide in diabetes-induced changes of morphine tolerance in rats

Several neuroendocrine complications including diabetes change the morphine antinociception and the development of tolerance to the drug. Morphine antinociception was reduced significantly in morphine tolerant diabetic rats compared to the non-diabetic animals. The exact mechanism of this effect is not known. This study was performed to determine the role of nitric oxide (NO) on morphine tolerance in diabetic state. Nociceptive responses in alloxan-induced diabetic morphine tolerated rats were measured by the hot-plate test. The urinary nitric oxide level was measured spectrophotometrically with Griess reagent. For the conversion of nitrate to nitrite, vanadium chloride was used. The results showed that experimental diabetes increased morphine analgesia. Conversely, degree of tolerance to morphine was diminished in diabetic state. The urinary nitrite content in diabetic morphine tolerated rats was higher than non-diabetic groups. L-arginine significantly increased the NO production in diabetic morphine tolerated animals, whereas aminoguanidine decreased it. Appropriately, L-arginine increased the latency time of reaction to noxious stimuli in diabetic compared to non-diabetic rats. L-arginine-treated animals also showed more tolerance to morphine analgesia. As expected, aminoguanidine deducted the level of morphine tolerance in diabetic animals. It is suggested that NO has a modulatory role in the effects of diabetes on morphine analgesia and tolerance.     

年龄及人参皂甙 Rg1 对大鼠大脑皮层 NO 释放的影响

探讨了NO与衰老的关系及与Rg1抗衰老机制的关系。用Griess法,³H-L-精氨酸转化法分别研究大鼠大脑皮层细胞NO含量及NOS活性,观察其随龄变化及人参皂甙Rg1(Rg1)对老年鼠NO及NOS的影响。实验表明,成年鼠(9月龄)与青年鼠(3月龄)NO含量及NOS活性无显著性差异。老年鼠(27月龄)脑皮层NO含量明显高于青年鼠和成年鼠,NOS活性也明显增高。老年鼠给予Rg1后可显著减少大脑皮层NO含量和降低NOS活性。结果提示,NO与衰老关系密切,Rg1的抗衰老作用与其对NOS活性的抑制有关。     

银杏达莫注射液与川芎嗪对实验糖尿病肾病大鼠NO的作用

研究银杏达莫注射液（杏丁）、川芎嗪对实验糖尿病大鼠肾脏NOS系统的作用。方法：以链脲佐菌素（STZ）制备动物模型。实验大鼠分为四组：糖尿病对照组A（16只,分早、晚期对照各8只）,杏丁治疗糖尿病肾病组B（16只,分早、晚期对照各8只）,川芎嗪治疗糖尿病肾病组C（16只,分早、晚期对照各8只）,正常组D（16只,分早、晚期对照各8只）。分别测定第1周末尿微白蛋白（UAE）、肌酐清除率（Ccr）,各期尿及肾皮质NO2^-／NO3^-、肾皮质NOS活性、肾脏病理分析。结果：①第1周末肌酐清除率（Ccr）、尿微白蛋白（UAE）在A、B、C组均明显升高;②A组早期尿及肾皮质NO2^-／NO3^-、’肾皮质NOS活性明显升高,晚期明显下降;③B组、c组杏丁、川芎嗪治疗后均能使尿及肾皮质NO2^-／NO3^-、肾皮质NOS活性升高;④与A组比较B、C组早期治疗肾小球FN含量明显增加,B、C组晚期治疗则明显下降。结论：①糖尿病肾病早期NO增加,随之下降。②杏丁、川芎嗪能作用于糖尿病患者的NOS系统,使NO增加。杏丁、川芎嗪使NO增加的结果导致早期糖尿病肾脏的损害加重,晚期则有保护肾功能的作用。实验结果为临床正确使用杏丁、川芎嗪提供了理论依据。     

氯胺酮和吗啡硬膜外超前镇痛效果的临床对比研究

目的观察比较氯胺酮、吗啡超前镇痛对全子宫切除手术患者围术期应激反应及术后疼痛的影响。方法选择45例硬膜外麻醉下行全子宫切除术的患者,随机分为三组,C、K、M组硬膜外腔分别注入2%利多卡因5ml、2%利多卡因5ml＋氯胺酮30mg、2%利多卡因5ml＋吗啡1mg。术毕自控硬腺外镇痛（PCEA）,药物为0.2%罗哌卡因5ml/h。分别于术前、术后第1、2天晨抽取静脉血,用高效液相色谱法测定血浆去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）。记录术后不同时间点的疼痛视觉模拟（VAS）评分、首次按压止泵的时间、按压次数以及术后恶心、呕吐和皮肤瘙痒的发生率。结果 K、M两组PCEA泵首次按压时间明显延长,按压次数、止痛剂总消耗量明显减少;M组的不良反应发生率明显高于C、K组。三组患者的NE、E、在术毕第1天显著高于术前（P〈0.05）,术后第1、2天时K、M组NE、E显著低于对照组（P〈0.01）,K、M两组间无差异。结论小剂量氯胺酮、吗啡硬膜外腔超前镇痛能减轻全子宫切除手术后儿茶酚胺的增高反应,提高患者自控镇痛效果,氯胺酮没有阿片类药物的不良反应,用于超前镇痛优于吗啡。