川崎病急性期Th1/Th2细胞功能状态的初步研究

目的：探讨川崎病（KD）患儿急性期Th1/Th2细胞的功能状态及其在KD免疫发病机制中的作用。方法：急性期KD患儿32例,健康对照组16名,KD患儿分别于静脉滴注丙种球蛋白（IVIG）治疗前后直接取血备检,未经任何体外丝裂原刺激培养。采用流式细胞术胞内标记法检测外周血CD4＋T细胞白细胞介素（IL）-4和干扰素（IFN）-γ阳性表达率;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及荧光定量PCR检测外周血CD4＋T细胞中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、T-bet、GATA-3、SOCS-1和SOCS-3等Th相关的细胞因子及转录因子基因mRNA的表达。结果：①急性期KD患儿Th2细胞比例明显高于健康对照组[（3.40±1.13）%vs（0.48±0.15）%,P〈0.01],Th1细胞比例无明显变化[（11.9±2.0）%vs（12.6±2.3）%,P〉0.05],Th1/Th2比值显著低于健康对照组（6.5±1.4vs33.8±6.2,P〈0.01）;②急性期KD患儿外周血CD4＋T细胞中Th1细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-6和IL-10）基因mRNA表达水平均明显高于健康对照组（P〈0.01）,IVIG治疗后部分基因有不同程度的恢复（P〈0.01）;③急性期KD患儿CD4＋T细胞明显过度表达Th细胞相关的转录因子（T-bet/GATA-3）和调节因子（SOCS-3/SOCS-5）（P〈0.01）。结论：急性期KD患儿Th细胞普遍活化,可能与KD免疫功能紊乱有关。     

Treg/Th17细胞分化失衡与炎症性肠病

炎症性肠病（IBD）的病因和发病机制尚未完全明确,初始CD4~＋T细胞分化异常在其发生、发展过程中起重要作用。初始CD4~＋T细胞可分化为调节性T细胞（Treg细胞）和Th17细胞,Treg/Th17细胞间的失衡将导致包括IBD在内的多种自身免疫病的发生。初始CD4~＋T细胞周围的细胞因子和芳香烃受体对维持该平衡起重要作用。本文就Treg细胞和Th17细胞及其与IBD的关系作一综述。     

川崎病患儿免疫功能的检测及临床价值

目的 总结川崎病(KD)的细胞免疫及体液免疫特征,探讨细胞免疫及体液免疫功能在川崎病发病机制中的作用及临床检测价值.方法 速率散射比浊法检测196例川崎病患儿的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、补体C3、C4水平,流式细胞仪免疫荧光法检测T细胞亚群、自然杀伤细胞、B细胞变化.统计学方法采用x2检验、2个独立样本的t检验及Spearman等级相关分析.结果 196例川崎病患儿中,典型川崎病172例,不完全性川崎病24例,静脉注射免疫球蛋白(IVIG)无反应型17例,IVIG敏感型179例,合并冠状动脉病变(CAL) 34例;IVIG无反应型川崎病的CAL发生率(52.9％)显著高于IVIG敏感型(14.0％)(x2=16.45,P＜0.05).与健康对照组相比,急性期川崎病组CD19细胞绝对值(1165±556)/μl、CD4/CD8比值(2.19±0.77)、IgM (1.41 ±0.45) g/L、IgA (0.81 ±0.35) g/L、补体C3 (1.31 ±0.26) g/L显著升高(P均＜0.05),CD8细胞(671 ±308 )/μl、自然杀伤细胞(337±233)/μl绝对值显著降低(P均＜0.05);川崎病患儿中,IVIG无反应型的CD19细胞绝对值、CD4/CD8比值、IgM、补体C3水平分别高于IVIG敏感型(P均＜0.05),CD8、自然杀伤细胞绝对值则低于后者(P均＜0.05),合并CAL者的CD19细胞绝对值、CD4/CD8比值、IgM、IgA水平高于无CAL者(P均＜0.05),CD8、自然杀伤细胞绝对值低于后者(P均＜0.05);典型川崎病与不完全性川崎病相比,上述各项指标的差异无统计学意义(P均＞0.05);CAL严重程度分级与急性期CD4/CD8 (Th/Ts)比值呈正相关(P＜0.05).结论 川崎病急性期存在细胞及体液免疫功能的紊乱,均参与了川崎病的发病机制,细胞免疫功能紊乱更为显著;其中IVIG无反应型及合并CAL的川崎病免疫紊乱更显著;IVIG无反应型有更高的CAL发生率;CD4/CD8比值与川崎病血管损伤的严重程度有关.     

川崎病冠状动脉病的预防和治疗进展

川崎病（Kawasaki disease,KD）是一种好发于婴幼儿的病因未明的发热性疾病,1967年由日本川崎富作医生首次描述,并命名为“皮肤黏膜淋巴结综合征”。40多年来,川崎病已经引起越来越多的关注,目前该病已在世界绝大多数国家或地区有报道。有关其流行病学调查、发病机制、诊断标准和治疗方法的临床研究取得了重大的突破和进展。川崎病的主要危险是心脏并发症,冠状动脉病变是导致患儿死亡的主要原因,在发达国家或地区,KD所致的冠状动脉并发症已取代风湿热成为小儿最常见的后天性心脏病,并且可能成为成人后缺血性心脏病的危险因素之一。我国在KD的临床诊治中也积累了丰富的经验。但由于KD的发病原因和机制至今还不清楚,有关其临床的诊断和治疗还有一系列问题有待研究解决。     

系统性红斑狼疮患者外周血Th17细胞与调节性T细胞的变化

目的 探讨外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的变化.方法 选取32例SLE活动期患者作为SLE活动组、30例SLE稳定期患者作为SLE稳定组及25名健康者作为对照组,采用流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法,分别从蛋白质水平与mRNA水平检测其外周血CD4+T细胞IL-17及FoxP3的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 SLE活动组外周血CD4+T细胞IL-17蛋白质(1.01±0.22)％及mRNA(2.04±0.63)表达水平显著高于SLE稳定组(0.48±0.16)％、(1.12±0.34)及健康对照组(0.41±0.12)％、1(P＜0.01),但SLE稳定组与健康者对照组差异无统计学意义(P＞0.05).SLE活动组外周血CD4+T细胞FoxP3蛋白质(2.36±0.54)％及mRNA(0.42±0.16)表达水平显著低于SLE稳定组(4.34±0.95)％、(0.87±0.28)及健康对照组(5.09±1.17)％、 1(P＜0.01),SLE稳定组又低于健康对照组(P＜0.05).结论 SLE患者外周血中可能存在Th17/调节性T细胞的失衡,且失衡程度可能与病情活动性相关.     

Notch1信号调控调节性T细胞在川崎病中的作用

目的探讨Notch1信号对川崎病患儿调节性T细胞(Treg)的影响及在血管损伤机制中的作用。方法以2019年3月至2021年6月收治的42例川崎病患儿为研究对象, 分别于急性期及输注丙种球蛋白(IVIG)治疗后取样送检, 对照组为32名同年龄健康儿童。采用流式细胞术检测外周静脉血CD4+CD25hiFoxp3+ Treg数量及叉头螺旋翼状转录因子(Foxp3)、细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、Notch1蛋白表达水平;免疫共沉淀-定量PCR技术鉴定CD4+ T细胞Foxp3基因启动子组蛋白H4乙酰化(H4Ac)及Notch1受体胞内结合域1(NICD1)、重组信号结合蛋白J(RBP-J)、p300结合水平;荧光定量PCR分析早老素1(PSEN1)、主导控制样蛋白1(MAML1)、RBP-J和Foxp3 mRNA表达;ELISA检测血浆中IL-10、TGF-β蛋白浓度。采用t检验、Pearson相关分析法进行统计分析。结果①与健康对照组相比, 急性期川崎病患儿CD4+CD25hiFoxp3+ Treg比例显著降低[(4.3±1.5)%...     

静脉注射丙种球蛋白无反应型川崎病Th17细胞的变化及意义

目的 探讨Th17细胞在静脉注射丙种球蛋白(IVIG)无反应型川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 选取KD患儿45例,其中IVIG敏感型KD 35例,IVIG无反应型KD 10例,同年龄健康对照组30名.KD患儿分别于IVIG治疗前后直接取血备检,IVIG无反应型KD分别在病程第8、9、11天取血备检.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CD4~+T细胞白细胞介素(IL)-17A/F、转录因子ROR-γt mRNA表达;采用流式细胞术检测外周血Th17细胞占CD4~+T细胞比例.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th17细胞相关的细胞因子IL-17A和IL-6的表达.结果 ①急性期KD患儿CD4~+T细胞IL-17A/F表达明显高于对照组(P<0.01);②急性期IVIG无反应型KD患儿CD4~+T细胞内IL-17蛋白、IL-17A/F mRNA、Th17细胞转录因子ROR-γt的基因表达明显高于IVIG敏感型KD,经IVIG治疗后敏感型KDTh17细胞相关因子表达明显降低(P<0.01),无反应型KD Th17细胞相关因子仍持续高表达(P>0.05);③急性期KD患儿治疗前IL-17A和IL-6血浓度明显高于对照组(P<0.01),其中IVIG无反应型KD活化细胞因子水平明显高于1VIG敏感型KD组(P<0.01).经治疗后均有下降趋势,但IVIG无反应型KD仍高于敏感型KD(P<0.01);④甲泼尼龙冲击治疗IVIG无反应型KD当天退热.血浆IL-6,IL-17A较前明显降低,C反应蛋白(CRP)恢复快,能够迅速控制血管炎性反应.结论 Th17细胞过度活化可能是导致IVIG无反应型KD的原因之一.     

Th17细胞和调节性T细胞在系统性红斑狼疮患者中的研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及联系两者的细胞因子白细胞介素(IL)-6的变化及其与病情活动的相关性,探讨Th17细胞、调节性T细胞在SLE发病机制中的作用.方法 收集103例SLE患者及28名健康者,SLE活动性的判断采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法,其中非活动组(SLEDAI≤9分)患者37例,活动组(SLEDAI＞9分)患者66例.用四色分选流式细胞仪检测外周血Th17细胞、调节性T细胞百分数,用流式细胞仪微球捕获芯片技术(CBA)检测血清IL-6浓度,并分析其与病情活动的相关性.统计学处理采用t检验、秩和检验和Spearman相关分析.结果 ①SLE患者组Th17细胞[(1.2±1.1)%]、IL-6[(35±92)pg/ml]显著高于健康对照组[(0.6±0.4)%、(6±3)pg/ml],而调节性T细胞[(1.6±1.2)%]显著低于健康对照组[(2.6±1.8)%].②SLE活动组Th17细胞[(1.6±1.7)%]显著高于SLE非活动组[(1.0±0.7)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组调节性T细胞[(1.5±1.3)%]显著低于SLE非活动组[(2.1±2.0)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组Th17/调节性T细胞(0.68±0.34)显著高于SLE非活动组(0.24±0.20)与健康对照组(0.13±0.09,P均＜0.05),SLE活动组IL-6[(41±22) pg/ml]显著高于SLE非活动组[(32±28) pg/ml]与健康对照组(P均＜0.05);SLE非活动组与健康对照组之间Th17细胞、调节性T细胞、Th17/调节性T细胞、IL-6差异均无统计学意义(P＞0.05).③Th17细胞百分数与SLEDAI呈正相关,调节性T细胞百分数与SLEDAI呈负相关,Th17/调节性T细胞与SLEDAI呈正相关,IL-6浓度与SLEDAI评分之间呈正相关,Th17细胞与调节性T细胞呈负相关.结论 SLE患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及IL-6浓度较健康对照组显著增高,并与疾病活动性密切相关,说明Th17细胞、调节性T细胞可能在SLE的发生、发展中起重要作用.

Abstract：

Objective To study the changes of Th17 cell, regulatory T cell (Treg) and interleukin (IL)-6 in the peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and their relationship with disease activity. Methods Percentage of Th17 and Treg in the peripheral blood of 103 patients with SLE and 28 healthy volunteers were detected by flow cytometry. The concentration of IL-6 in SLE patients and healthy volunteers was detected by cytometric bead array (CBA). The disease activity of SLE was measured by SLEDAI. SLE patients were divided into two groups: stable SLE (SLEDAI≤ 9, n=37) and active SLE (SLEDAI＞9, n= 66). The change of Th17, Treg, IL -6 and their relationship with disease activity were analyzed. Nonparamentric tests, t -test and spearman correlation were used for statistical analysis. Results The percentage of Th17 cells and the concentration of IL-6 in the peripheral blood in patients with SLE was higher than that in normal controls [respectively for (1.2±1.1)%, (35±92) pg/ml and (0.6±0.4)%, (6±3) pg/ml, P＜0.05]. However, the percentage of Treg in patients with SLE was lower than that in normal controls [respectively for (1.6±1.2)%,(2.6±1.8)%, P＜0.05]. The percentage of Th17, Th17/Treg IL-6 level in active SLE patients was higher than those in inactive SLE and those in normal controls (P＜0.05). However, the percentage of Treg in active SLE was lower than that in stable SLE patients and that in normal controls (P＜ 0.05). The percentage of Th17, Th17/Treg and concentration of IL-6 was positively correlated to disease activity(P＜0.05). But the percentage of Treg had negative correlation with the percentage of Th17 and disease activity (P＜0.05). Conclusion Th17, Treg and serum IL-6 in SLE patients are abnormal and they maybe contribute to the pathogenesis of SLE.     

类风湿关节炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞变化及其临床意义

目的 通过检测类风湿关节炎(RA)患者外周血,Th17细胞和调节性T细胞的变化,探讨其在RA发病机制中的作用及其临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)检测57例RA患者和32名健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-17+CD4+T细胞(Th17细胞)与Foxp3+CD25+CD4+T细胞(调节性T细胞)占CD4+T细胞的百分比,分析其与RA临床及实验室指标的关系.统计学处理采用t检验和方差分析,相关分析采用Pearson直线相关分析.结果 RA组Th17细胞占CD4+T细胞的百分率较健康对照组明显升高[(4.2±2.2)%和(2.3±1.4)%,P=0.000],调节性T细胞降低[(3.9±1.6)%和(7.0±2.2)%,P=0.000],Th17细胞/涮节性T细胞比值显著升高(1.15±0.62和O.34±0.17,P=0.000).RA早期组与非早期组外周血Thl7细胞、调节性T细胞及,Th17调节性T细胞比值比较,差异无统计学意义(P均>0.05).相关性分析显示RA患者Th17细胞及Th17细胞/调节性T细胞比值与关节压痛数、患者疼痛模拟视觉评分(VAS)、RA28关节疾病活动评分(DAS)28评分等病情活动指标呈正相关(P均<0.05),而调节性T细胞与上述病情活动指标无明显相关性(P均>0.05).单因素回归分析显示Th17细胞、Th17细胞/调节性T细胞比值、DAS28评分及病程对RA患者骨侵蚀有显著影响(P均<0.05).经抗风湿药物治疗后,RA患者Th17细胞阙节性T细胞比值降低.结论 RA患者Th17细胞明显增多,调节性T细胞减少,Th17细胞/调节性T细胞比例明显增高.可能是RA发病的重要原因,通过抗风湿药物治疗可调节Th17细胞/调节性T细胞亚群平衡.

Abstract：

Objective To analyze the level of Th17 and Treg cells in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis(RA),and to investigate its role in the pathogenesis of RA and the clinical significance.Methods Flow cytometry(FCM)was used to analyze the ratio of interleukin(IL)-17+CD4+T (Thl7)cells and Foxp3+CD25+CD4+T(Treg)cells in CD4+T cells from the peripheral blood of 57 RA patients and 32 normal controls.T-test and Chi-square test were used for inter-group comparison and Pearson's linear analysis was used for correlation analysis.Resuits Compared with normal controls.the level of both IL-17+CD4+T cells and the ratio of Th17/Treg in RA patients increased significantly.while the level of Foxp3+CD4+CD25+T cells decreased markedly[(4.2±2.2)%vs(2.3±1.4)%,P=0.000;1.15±0.62 I)5 0.34±0.17,P=0.000;(3.9±1.6)%vs(7.0±2.2)%,P=0.000].Compared with early RA(persistent for 2 years or less)patients,the levels of Th17,Treg and the ratio of Th17/Treg in chronic RA(duration for more than 2 years)patients didn't markedly changed(P>0.05).The level of Th17 cells and the ratio of Th17/Treg was directlycorrelated with disease activity parameter (including tender ioint counts,visual analog seale of patients,disease activitv score in 28 joints,etc).Regression analysis discovered that risk factors of bone erosion were the level of Th17 cells,the ratio of Th17/Treg,disease activity score in 28 joints and disease duration.Antirheumatic drugs could decreascthe ratio of Th 17/Treg.Conclusions Treg cells is decreased in RA patients while Th7 cells is increased in patients with RA.Th17/Treg ratio goes up significantly as well.Change of T celt subsets,especially Th17 and Treg cells are important for the pathogenesis of RA.Th17 and Treg cells could aggrevate disease activity and bone destruction throughout the whole disease process.Anti-rheumatic medications is effective by regulating Th17/Treg subset balance.     

免疫球蛋白G4相关性疾病患者外周血辅助性T细胞17/调节性T细胞失衡与细胞因子的关联分析

目的:探究IgG4相关性疾病（IgG4-RD）患者外周血淋巴细胞亚群表型特征及辅助性T细胞（Th）17/调节性T细胞免疫失衡与细胞因子水平的相关性。方法:收集2016年1月至2020年6月于山西医科大学第二医院风湿免疫科住院资料完整的初发IgG4-RD患者31例,留取临床及实验室资料,并选取年龄、性别匹配的30名健康体...     

GW1929对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞SOCS1和SOCS3表达及炎症反应的影响

目的 观察过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)激动剂GW1929对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞SOCS1、SOCS3表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)生成的影响.方法 ox-LDL(50 mg/L)、GW1929(20 μmol/L)作用于小鼠腹腔巨噬细胞4h后,采用Real-time PCR技术观察各组SOCS1及SOCS3 mRNA的表达.采用Western blot技术观察ox-LDL作用于小鼠腹腔巨噬细胞6h后,SOCS1及SOCS3蛋白的表达.最后ELISA法测定ox-LDL作用于小鼠腹腔巨噬细胞24h后,各组培养液上清中TNF-α、IL-10、IFN-γ的浓度.结果 ox-LDL组巨噬细胞SOCS1及SOCS3 mRNA和蛋白的表达明显高于对照组与GW1929组(P＜0.05),而ox-LDL+ GW1929组SOCS1的表达明显高于ox-LDL组(P＜0.05),SOCS3的表达却明显低于ox-LDL组(P＜0.05).ox-LDL组细胞培养液中TNF-α、IFN-γ及IL-10的浓度以及TNF-α/IL-10、IFN-γ/IL-10比值均明显高于对照组及GW1929组(P＜0.05),加入GW1929 24 h后培养液中TNF-α、IFN-γ及IL-10的浓度以及TNF-α/IL-10、IFN-γ/IL-10比值均明显低于ox-LDL组(P＜0.05).结论 ox-LDL促进了小鼠腹腔巨噬细胞SOCS1和SOCS3 mRNA及蛋白的表达增多,而PPARγ激动剂可能通过进一步上调SOCS1而不是SOCS3的表达,以对抗过度的炎症反应,调节促炎/抗炎反应的平衡.     

A new polycythaemia vera-associated SOCS3 SH2 mutant (SOCS3F136L) cannot regulate erythropoietin responses

Recently several different JAK2 exon12 mutations have been identified in V617F negative polycythaemia vera (PV) or idiopathic erythrocytosis (IE) patients. The patients present with erythrocytosis, ligand-independent cell growth and low serum erythropoietin (EPO) levels. Within this group, a deletion of amino acids 542–543 (N542-E543del) of JAK2 is most prevalent. We have previously shown that in the presence of JAK2^V617F, suppressor of cytokine signalling 3 (SOCS3) is unable to negatively regulate EPO signalling and proliferation of V617F-expressing cells. Here we report a PV patient heterozygous for the somatic JAK2^N542-E543del mutation and a previously unreported germline mutation within the SH2 domain of SOCS3 (F136L). Interestingly, the SOCS3^F136L mutation was detected in a Japanese myeloproliferative disorder patient cohort at double the frequency of healthy controls. Cells expressing SOCS3^F136L had markedly elevated EPO-induced proliferation and extended EPO-induced JAK2 phosphorylation. Additionally, compared to wild-type SOCS3, mutant SOCS3 had an extended half-life in the presence of JAK2 and JAK2^N542-E543del. Our findings suggest that this loss-of-function SOCS3 mutation may have contributed to disease onset by causing deregulated JAK2 signalling in the presence of a constitutively active JAK2^N542-E543del mutant.     

SOCS1基因与肝细胞癌的关系研究进展

SOCS1基因位于16p12-p13.1,它编码蛋白SOCS1并属于SOCS蛋白家族,通过抑制JAK—STAT信号转导通路发挥作用,其失活机制主要是甲基化和杂合性缺失。SOCS1在肝细胞癌中广泛甲基化和表达明显降低,提示SOCS1可能是抑癌基因,在肝细胞癌的发生发展中起十分重要的作用。     

GPRC5A、SOCS3及STAT3在非小细胞肺癌的表达及相关性分析

目的本研究旨在探讨GPRC5A、SOCS3、STAT3在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达与NSCLC临床特征的关系及三者之间的相关性。方法运用免疫组织化学Elivision法检测GPRC5A、SOCS3、STAT3在92例NSCLC中的表达情况,随机抽取40例的癌旁正常组织作为对照,并对三者进行相关性分析。结果在NSCLC中GPRC5A、SOCS3、STAT3的阳性表达率分别为43.4%(40/92)、44.6%(41/92)、76.0%(70/92),而在癌旁组织中三者的阳性率分别是77.5%(31/40)、100%(40/40)、32.5%(13/40),三者与NSCLC的分化、分期、淋巴结转移密切相关(P0.05),GPRC5A与SOCS3在NSCLC中呈正相关(r=0.537,P0.05)、SOCS3与STAT3呈负相关(r=-0.369,P0.05)。结论 GPRC5A、SOCS3、STAT3在NSCLC的发生和发展中起重要作用,且三者之间存在显著相关性,为深入研究其调控路径提供了依据,为肺癌的靶向治疗提供了新的思路。