改良SDS-PAGE法分析尿蛋白组成

目的　建立一种快速的尿蛋白组分分析方法。方法　将薄层垂直平板SDS PAGE与高敏的银染色和微波技术相结合 ,建立改良SDS PAGE法 ,快速分析蛋白尿组成。结果　此法缩短分析所需的时间 ,使整个分析过程在 7h内就可以完成 ,并且提高蛋白条带的分辨率 ,使检测灵敏度达ng级水平。结论　改良SDS PAGE法分析尿蛋白组成简便 ,快速 ,灵敏度高     

微波技术在尿蛋白谱检测中的应用

蛋白尿是肾脏疾病的一个重要症状,其性质和组成(尿蛋白谱)是肾脏疾病诊断和治疗方案选择的重要参考指标之一[1]。尿蛋白谱的检测方法有多种,目前使用最为普遍的是十二烷基硫代硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)法,包括圆盘电泳和平板电泳[2-3]。根据临床和科研的需要,选择相应的方法来检测尿蛋白谱。SDS—PAGE法检测尿蛋白谱与其它临床检测相比较,整个检测流程为一天半,所需时间较长。电泳后凝胶的固定、染色和脱色费时,满足不了临床快速诊断的需要。另外在凝胶电泳后处理过程中,由于多次漂洗换液,使凝胶表面发生污染的可能性提高,影响最后的显色背景。本文介绍在SDS—PAGE垂直平板电泳法检测尿蛋白谱[4]的过程中采用微波技术,快速地分析尿蛋白谱。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳在心肌肌凝蛋白重链研究中的应用

本文分析了变性SDS－PAGE、非变性焦磷酸盐PAGE、梯度SDS－PAGE以及双向PAGE等分析心肌MHC的特点及其研究,介绍了分析骨骼肌MHC的SDS－PAGE方法以及从SDS－PAGE凝胶中回收蛋白质对纯化MHC及制备其特异性抗体用于病的研究、诊断及治疗的意义。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳在心肌肌凝蛋白重链研究中的应用

本文分析了变性SDS PAGE、非变性焦磷酸盐PAGE、梯度SDS PAGE以及双向PAGE等分析心肌MHC的特点及其应用研究 ,介绍了分析骨骼肌MHC的SDS PAGE方法以及从SDS PAGE凝胶中回收蛋白质对纯化MHC及制备其特异性抗体用于心脏病的研究、诊断及治疗的意义。     

重组人转化生长因子β 1在大肠杆菌中的表达及其活性检测

目的运用基因重组的方法，对人转化生长因子β1(TGF－β1)进行基因克隆，并在大肠杆菌中表达。同时检测其生物活性。方法以pBV220作为原核细胞表达载体，用限制性内切酶将pBSksTGF－β1中的TGF－β1cDNA片段定向重组到pBV200的多克隆位点上，经酶切分析，筛选构建了原核细胞表达性质粒pTGF－β1。将该质粒分别转化至大肠杆菌中，建立TGF－β1原核表达体系pTGF－β1－DH5α和pTGF－β1－JM109,进行温度诱导表达。结果表达产物经SDS－PAGE分析，Westernblot、SDS、PAGE光密度扫描检测证实，该体系可高效表达TGF－β1，其表达产物约占菌体可溶性蛋白的23％。用NRK细胞对表达产物进行活性检测证明，本研究生产的TGF－β1具有该蛋白的野生活性。结论TGF－β1原核表达体系的建立为TGF－β1的生产提供了高效的表达工程菌株，为进一步研究其分离纯化工艺提供了重要的实验模型。     

尿液蛋白质电泳分析的应用和进展

尿蛋白电泳技术通过分析尿蛋白组成成分,可帮助明确其来源及含量,从而有助于疾病的诊断和预后的判断。近年来,尿蛋白电泳技术在多方面取得了较大的突破和发展,使检测更加快速、操作更加方便、灵敏度更高,现就这方面的进展作一简要综述。     

人EGFR胞外段原核表达及免疫原性研究

目的：研究人EGFR胞外段在原核本质的表达，纯化条件以及对小鼠的免疫原性。方法：以既往构建包含人EGFR胞外段基因的表达质粒为基础，采用基因工程方法构建pET原核表达载体。在大肠杆菌中表达目的蛋白，表达蛋白在变性条件下，通过Ni^2 柱亲和层析纯化以包涵体形式存在的His-Tag融合蛋白，SDS－PAGE检测其纯度。去余His-Tag的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性。以复性蛋白免疫小鼠获得抗血清，western blotting及流式细胞仪器检测特异抗体的存在。结论：通过限制酶切分析及测序鉴定表明获得了人EGFR胞外段基因的pET原核表达载体，SDS－PAGE分析表明在IPTG诱导下可以表达90Kd目的蛋白其纯度大于95％，所产生抗体可以识别复性蛋白及表达于A549细胞上的EGFR。提示在大肠杆菌中表达的人EGFR胞外段重组蛋白具有免疫原性，可以进一步用于EGFR免疫研究。     

非浓缩尿SDS-琼脂糖凝胶蛋白电泳的临床应用

目的　探讨非浓缩尿蛋白电泳对早期肾损伤诊断的应用价值。方法　对 5 5例患者尿液标本分别进行尿蛋白半定量及尿蛋白 (U Pr)、尿微量白蛋白 (mAlb)、N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG) ,β D 半乳糖苷酶(GAL)定量测定 ,与非浓缩尿的十二烷基磺酸钠 琼脂糖凝胶蛋白电泳 (SDS AGE)结果进行分析比较。结果　与SDS AGE结果相比较 ,尿常规及全自动生化仪定量测定有关指标的灵敏度相对较低。结论　SDS AGE检测灵敏度高 ,方法简便 ,省时 ,扫描后可得半定量结果 ,且结果较直观 ,对早期肾损伤诊断有较大的应用价值。     

基质金属蛋白酶-2在急性心肌梗死患者血清中的表达

目的：探讨急性心肌梗死（AMI）患者血清基质金属蛋白酶－2（MMP－2）的表达与不稳定斑块的内在联系。方法：应用酶图（SDS－PAGE zymograph)和Western blotting的方法检测20例AMI患者发病后第1、3、7天血清中MMP－2的水平。结果：与对照组相比，AMI患者发病后的第1天血清MMP－2的表达2倍增高（P＜0．001），在发病后第3、7天血清中仍保持高水平MMP－2的表达，但与发病第1天相比差异无显著性意义（P＞0．05）。结论：血清MMP－2在急性心肌梗死患者中明显增高，进一步证实了不稳定的斑块破裂而导致AMI与MMP－2的内在联系。     

生物素-亲和素呈色法测定血清载脂蛋白多态性

目的 探讨用生物素-亲和素作呈色系统在检测血清载脂蛋白(ApoA)多态性时的灵敏性。方法 应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺垂直板电泳(SDS—PAGE)及免疫印迹分析技术，以ApoA单克隆抗体为一抗，生物素标记的抗IgG为二抗和链霉素亲和素-过氧化物酶系统检测ApoA多态性。结果 检测210例人群，检出率81．4％，检出最小量92ng。结论本法特异性强，灵敏度高。     

非变性PAGE对DIS80位点扩增片断多态性分析

目的：为了解广西壮族人群DIS80位点群体遗传资料。方法：使用PCR结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）银染技术分析300名广西壮族无关个体DIS80位点多态性。结果：观察到23个等位基因，74个基因型，杂合度、非父排除率、个体识别及多态信息含量分别为0．824、0．763、0．968、0．875。其基因型频率分布符合Hardy-weinberg定律。对5个家系相关个体分析符合孟德尔定律。结论：该方法具有快速、简便、灵敏度高特点。     

尿蛋白SDS-琼脂糖凝胶电泳方法建立及临床应用

目的　建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠 (SDS) 琼脂糖凝胶 (AGE)电泳方法。方法　分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型 4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验 ,确定最佳的分离条件 ,建立测定方法。结果　当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为4 0g/L ,SDS含量为 1g/L ,在pH 7.0的AMP 咪唑 HCl缓冲体系下进行电泳 ,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离。 5 7份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明 ,生理性蛋白尿 2 4例 ,中、高分子蛋白尿 5例 ,小分子蛋白尿 11例和混合型蛋白尿 17例。结论　本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点 ,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型 ,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值 ,适于基层实验室的常规开展。     

尿蛋白超薄琼脂糖凝胶电泳

尿蛋白超薄琼脂糖凝胶电泳陈晋，吴惠毅，沈来龙，李芹（连云港市第一人民医院中心实验室，江苏连云港２２２００２）我们对尿蛋白琼脂糖凝胶电泳进行了改良，用自制超薄琼脂糖凝胶为载体、改进了加样及染色步骤，使该法更加灵敏、快速、简易，现报道如下。１试剂１．１琼...     

慢性粒细胞白血病断裂点簇集区—abl融合基因的检测

应用改良的一步法ＲＮＡ提取方法分离慢性粒细胞白血病（慢粒）患者外周血或骨髓标本总ＲＮＡ，以慢粒急性红白血病变细胞株为阳性对照，急性早幼粒细胞性白血病细胞株为阴性对照，建立逆转录／套式聚酶链反应（ＲＴ／套式ＰＣＲ）检测断裂点簇集区－ａｂｌ融合基因，第一次ＰＣＲ的灵敏度为１：１０＾４水平，第二次ＰＣＲ后灵敏度提高至１：１０＾５，特异性扩增产物经用地高辛素记寡核苷酸探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交得到证实。     

曙红Y共振散射光法测定尿蛋白

摘要：目的：建立测定尿蛋白的曙红Y共振散射光法。 方法：在pH 3.0枸橼酸盐缓冲液（含SDS）介质中,于λex=λem=360 nm测定尿蛋白与曙红Y结合后产生的共振散射光强度。 结果：反应体系最适条件pH为3.0,曙红Y浓度0.04 mmol/L,SDS浓度为1.5 g/L,曙红Y-蛋白质共振散射光强度在蛋白质浓度0~1 600 mg/L范围内呈线性关系,直线回归方程为Y=2.89X+0.12,相关系数r=0.993,最低检测限为0.1 mg/L;日内变异系数（CV） 2.32%~3.12%,日间CV2.98%~3.68%;平均回收率101.2%;SDS对反应体系有显著增敏作用;与邻苯三酚红法比较结果一致,差异无显著性。 结论：曙红Y共振散射光法方法简单、成本低廉,结果准确可靠,为临床常规检测尿蛋白较好的方法。     

蛋白尿与尿激酶

作者对使用链激酶(SK)治疗的AMI者进行了肾功能研究。19名采用SK治疗的无并发症的AMI者在入院的头24h和第5-6天收集24h尿液进行尿蛋白分析和肌酐消除率测定。7名非SK治疗的AMI者(2例用TPA,5名无血栓形成)仅在入院的头24h进行尿蛋白检查。采用SDS/PAGE法进行选择性蛋白尿检查。全部患者在入院当天和第6天检查了血清尿素和肌酐。     

阴沟肠杆菌外膜蛋白缺失与头孢西丁耐药的关系

目的：了解阴沟肠杆菌外膜上的外膜蛋白与头孢西丁耐药的关系。方法：参照美国临床实验室标准化委员会M100－S9文件的确认试验测定超广谱β内酰胺酶（ESBLs）；超声破碎法提取ESBLs和外膜蛋白（OMP），紫外分光光度法测定ESBLs活性，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）分析OMP的成分。结果：头孢西丁耐药的9株阴沟肠杆菌菌株中，有6株菌株缺少分子量为180000蛋白区带，不产生头孢西丁水解酶，其中有5株产生ESBLs；2株菌株有18000蛋白区带，产生头孢西丁水解酶；1株菌株不缺少外膜蛋白，产生ESBLs，但不产生头孢西丁水解酶。对头孢西丁敏感的产ESBLs菌株，不产生头孢西丁水解酶，也不缺少外膜蛋白。结论：18000外膜蛋白缺失与阴沟肠杆菌对头孢西丁耐药有密切关系。     

一种高灵敏分析ATP酶的改良方法

本文报道了一种用复合孔雀绿试剂分析ＡＴＰ酶的改良方法，本方法灵敏度高，用０．５ｍｌ全血可分析红细胞总ＡＴＰ酶，Ｃａ、Ｍｇ－ＡＴＰ酶友及Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶活力等，用本方法测定５５岁以上年龄组５０人，Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅ比活＝０．１３７，ＳＤ＝０．１１８，本方法操作简单，可用于基础医学研究及临床应用。     

克隆人肥胖基因表达产物瘦素的分子量及特异性鉴定

目的对克隆的人肥胖(OB)基因蛋白表达产物－瘦素(Leptin)进行分子量及特异性鉴定。方法以商品Leptin为阳性对照,同时设有未经热诱导的对照组(OB－c)及克隆人肥胖基因重组表达产物试验组(OB－h)。本文采用SDS－PAGE对大肠杆菌所表达的蛋白产物进行分子量测定,同时用Westernblotting试验对其产物进行了特异性鉴定。结果经SDS－PAGE检测,在21.5～14.4ku之间有一明显蛋白表达条带,对照组在相同的位置上未见明显蛋白表达。试验组OB－h蛋白表达产物分子量的位置与商品Leptin的位置基本一致。经Westernblotting试验,在硝酸纤维素膜上,商品Leptin阳性对照及OB－h试验组大约16ku的位置上可见到两条明显的与抗人Leptin多克隆抗体呈特异性结合反应染色条带。结论人的OB基因克隆后,在大肠杆菌中能特异的表达人的Leptin蛋白质。     

快速提取真菌DNA用于PCR扩增

多聚酶链反应（PCR）现已广泛用于医学真菌的研究，但真菌DNA的提取多采用经典的蛋白酶K、酚－氯仿提取的方法，费时且操作步骤复杂，我们参阅国外文献[1]，加以改进，建立一种快速且操作简便的真菌DNA提取方法，可用于PCR扩增，现介绍如下：1材料与方法1．1材料1．1．1提取缓冲液含：200mmol／LTris－HCl，pH8.5，250mmol／LNaCl，25mmol／LEDTA，0．5％SDS。1．1．2参照文献[2]设计一对医学真菌所共有的18SrDNA的一对寡核着酸序列，合成引物，由上海细胞研究所合成，序列如下：B2F：5‘－ACTTTCGATAGGATAG．3’B4R…