反义myb寡核苷酸对内皮素诱导动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

合成反义和正义ｃ－ｍｙｂ１８－ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ·Ｌ－１～１２０μｍｏｌ·Ｌ－１）的增加而增加。用１２０μｍｏｌ·Ｌ－１反义ＯＤＮｓ抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受抑制细胞ｍｙｂ水平较同期对照组或正义ＯＤＮｓ组低。以上为反义ＯＤＮｓ抑制外源性生长因子或细胞因子诱导靶基因的高表达和细胞增殖提供了新的线索，同时为探讨癌基因表达调控与动脉ＳＭＣｓ增殖的关系提供了一种新方法。     

缺氧诱导大鼠肺动脉PDGF和c－myc基因表达增强

为了研究生长因子和原癌基因在缺氧所致肺血管结构重建中的作用，我们选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠，置于低压仓内模拟海拔５０００米高度持续缺氧７天和１４天。与平原对照组相比，缺氧７天时肺动脉血小板源生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）基因表达水平略有升高，而后有下降趋势；缺氧１４天时ＰＤＧＦ－Ｂ链３．５ｋｂｍＲＮＡ表达显著升高。点杂交结果显示：ｃ－ｍｙｃ原癌基因正常时表达水平很低。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ可见缺氧７天时有２．２ｋｂｍＲＮＡ转录，缺氧１４天时其含量进一步增加为正常的６倍。结果表明，缺氧过程中，ＰＤＧＦ－Ａ链和Ｂ链是顺序表达的，其表达水平与缺氧性肺血管结构重组过程有一定相关。ＰＤＧＦ的促增殖作用是通过ｃ－ｍｙｃ基因产物实现的。     

支架置入兔颈动脉后平滑肌细胞增殖及c—myc基因的表达

目的 观察兔颈动脉内支架置入后,血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖及c-myc原癌基因的表达。方法 将国产铂－铱合金支架置入16只家兔颈动脉,术后7、14、30和90d处死动物,行苏木素伊红（HE）和Masson三色染色、c-myc蛋白免疫组化染色及原位杂交。用透射电镜观察术后14d,VSMC超微结构的变化。结果 术后7d,中膜VSMC由收缩型变为合成型,内弹力板消失,偶见炎性细胞浸润,1例血管腔内出现不完全血栓形成。术后14d,新生内膜增生明显,主要由合成型过渡型VSMC组成。术后30d,新生内膜增生更加明显,主要为收缩型和少量过渡型VSMC及细胞外基质组成。术后90d,内弹力板恢复为弯曲的连续状,其上附着多层内皮细胞,VSMC为收缩型,术后14d透射电镜显示,合成型VSMC呈圆形或椭圆形,粗面内质网及线粒体非常丰富。支架置入后,兔颈动脉新生内膜中c-myc蛋白免疫组化及原位杂交均呈阳性,正常对照血管呈阴性。结论 兔颈动脉内置入支架后,可引起VSMC中c-myc基因表达增强,其与VSMC的增殖密切相关,在支架内再狭窄的形成中发挥重要作用。     

反义myb寡核苷酸对内皮素诱导动脉平滑肌细胞增殖抑制…

合成反义在正义ｃ－ｍｙｂ１８ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ．Ｌ＾－１－１２０μｍｏｌ．Ｌ＾－１）的增加而增加。用１２０μｍｏｌ．Ｌ＾－１反义ＯＤＮ抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受掏细胞ｍｙｂ水平较同期对照组或正义ＯＤＮ组低。以上为反     

c-sis反义寡核苷酸对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨从血小板源生长因子-B链(PDGF-B)的基因水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:给肺动脉平滑肌细胞(VSMC)分别施加不同剂量的c-sis癌基因反义寡核苷酸(ASON), 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线;采用流式细胞术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果:中、大浓度ASON对细胞增殖有明显抑制作用。在中浓度的ASON作用下, 加入PDGF-BB能促进VSMC的增殖。ASON干预前后, VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化, 以G₀＋G₁期细胞增多、S+G₂＋M期细胞减少为特征。各组的G₀＋G₁期细胞均显著多于对照组(P＜0.05)。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G₀＋G₁期细胞有显著差异(P＜0.05)。结论:中、大剂量ASON能明显抑制肺VSMC的增殖, 可使G₀＋G₁期细胞数明显增多, 且与ASON有剂量依赖关系。     

人反义c—myc重组逆转录病毒表达载体pLNC—aM2和pLNC—aM …

ｃ－Ｍｙｃ在血管平滑肌细胞增殖，迁移和表型转换中起着关键作用。为更好地调研ｃ－ｍｙｃ分子中不同区域的作用效应，了解ｃ－ｍｙｃ的转录调控机制，进而找出最佳的反义封闭靶区域，为ＶＳＭＣ增殖和其他增生性疾病的基因治疗提供依据。     

PKC-α反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及c-myc和c-fos表达的影响

为探讨PKC α反义核酸对CNE 2Z细胞增殖及c myc、c fos表达的影响 ,采用脂质体 (LP)介导法 ,用 0 0 1～1 0 0 μmol/L各浓度PKC α反义核酸 (asODN)转染CNE 2Z ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测CNE 2Z生长指数(growthindex ,GI)及其体外增殖能力 ;免疫组化法检测PKC α、及c myc、c fos的表达。结果表明 :PKC αasODN 0 0 5～ 1 0 0 μmol/L各浓度组CNE 2ZGI显著降低 (P <0 0 5 ) ,且呈量效依耐关系 ;其中 1 0 0 μmol/L和 0 5 0 μmol/LPKC αasODN对CNE 2Z生长有非常显著抑制作用 (P <0 0 1) ;0 5 0 μmol/LPKC αasODN组CNE 2Z软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P <0 0 5 ) ,并可下调其PKC α、c Myc、c Fos的表达 (P <0 0 5 )。结果提示 :LP介导PKC αasODN转染CNE 2Z细胞 ,可有效阻断CNE 2ZPKC α的表达 ,抑制其体外增殖能力 ,下调c myc、c fos蛋白表达 ;PKC αasODN可能通过下调c myc、c fos表达发挥作用     

AMPK激活剂抑制PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的: 观察血小板源性生长因子(PDGF)及一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷(AICAR)干预后血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖变化,探讨PDGF对平滑肌细胞的促增殖效应及激活AMPK抑制增殖机制。 方法: SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞经PDGF及AICAR干预24 h、48 h、72 h后,分为A组(AICAR)、P组(PDGF)、A+P组(AICAR+PDGF)和对照组,4个组用MTT法测量细胞的增殖情况;并检测不同AICAR作用时间下(30 min、1 h、3 h、6 h、12 h)AMPK的活化情况和mTOR 的蛋白活性,以及上述各组中AMPK活化和mTOR 蛋白活性。结果: (1)与对照组相比,PDGF干预组的MTT值显著增加(P<0.05),AMPK激活组能显著抑制PDGF诱导的MTT值的增加效应(P<0.05);(2) AICAR可诱导细胞AMPK的磷酸化水平增加(P<0.05),AICAR的诱导效应有随药物干预时间增加而逐渐增强的趋势;(3)与对照组相比, AICAR干预后p-mTOR表达活性显著减弱(P<0.05),随着药物干预时间延长,p-mTOR表达也呈逐渐减弱的趋势;(4)各组干预12 h后分别检测p-AMPK表达强度,与对照组比较,P组显著减弱(P<0.01),A+P组显著增强(P<0.01),而A+P组与P组比较,A+P组强于P组(P<0.01),A组较对照组显著增强(P<0.01);检测p-mTOR表达强度,与对照组比较,P组显著增强(P<0.05),A+P组较低(P<0.05),A+P组低于P组(P<0.05),A组低于对照组(P<0.05)。结论: PDGF刺激能促进VSMCs增殖,该促增殖效应可被AMPK激活剂AICAR所抑制;细胞mTOR活性下调可能参与AMPK活化诱导的抑制VSMCs增殖的作用。     

PDGF-B反义寡脱氧核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的：探讨PDGF-B反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对大鼠肝星状细胞（HSCs）增殖及Ⅰ型胶原合成的影响。方法：合成了特异性的PDGF-B硫代磷酸ASODN及其对照错义寡脱氧核苷酸(MSODN)，并将其加入至培养的HSCs。采用MTT法检测PDGF-B ASODN对HSCs的增殖抑制作用，RT-PCR检测PDGF-B和collagen-Ⅰ mRNA的表达，流式细胞仪与ELISA法分别检测PDGF-B的表达和Ⅰ型胶原的合成。 结果：PDGF-B ASODN在终浓度为10 μmol/L，作用HSCs-T6细胞48 h时，能明显地抑制其增殖，降低PDGF-B和collagen-ⅠmRNA的表达；FCM与ELISA分析表明，HSCs表达PDGF-B和合成Ⅰ型胶原都明显低于对照组，而对照组寡脱氧核苷酸在相同浓度下未见抑制效应。结论：PDGF-B ASODN可以抑制HSCs的增殖、Ⅰ型胶原的合成、内源性PDGF-B的表达，可能成为一种有用的抗肝纤维化基因治疗的药物。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞的分离及电压门控性钾电流的记录方法

目的介绍一种大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的急性分离方法并观察电压门控性钾电流电生理特性。方法应用胶原酶和木瓜蛋白酶联合消化法获得大鼠PASMCs,利用全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压门控性钾通道(Kv)电流。结果在相差显微镜下观察大鼠PASMCs呈舒展梭形,边界清晰,有完整的细胞膜,胞浆均匀,数量多,活性好。结论用酶急性分离的大鼠PASMCs,容易进行全细胞膜片钳记录,方法简单、稳定、可靠。     

MAPK抑制剂在高浓度葡萄糖介导大鼠动脉血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂在高浓度葡萄糖(HG)介导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖反应中的作用及其可能的调控机制。方法:将HG处理的血管平滑肌细胞给予MAPK特异性抑制剂PD098059预处理,通过测定3H-亮氨酸和3H-胸苷掺入率,观察其对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响。结果:HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸和3H-胸苷掺入率明显增高;这种作用可被MAPK特异性抑制剂PD098059所抑制。结论:MAPK激活在HG致平滑肌细胞增殖反应中具有明显促进作用,但这种作用可被MAPK信号途径的特异性抑制剂所抑制。     

大鼠提睾肌缺血再灌注损伤时血管平滑肌细胞和内皮细胞的增殖与凋亡

目的研究大鼠提睾肌缺血再灌注后血管平滑肌细胞和内皮细胞的增殖和凋亡。方法以免疫组织化学SP法和末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)对大鼠提睾肌缺血再灌注后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax、P53和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达进行观察研究。结果缺血再灌注后 ,血管平滑肌细胞和内皮细胞均有Bcl-2、Bax、P53和PCNA的表达 ,在平滑肌细胞 ,Bcl-2阳性细胞数量明显高于Bax和P53。PCNA阳性细胞明显增多。在内皮细胞 ,Bax和P53的表达最强 ,TUNEL阳性细胞率最高。结论大鼠提睾肌缺血再灌注可造成平滑细胞的增殖和内皮细胞的凋亡 ,其结果可能与微循环障碍有关。     

含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义

目的 :探讨辛伐他汀对体外培养兔血管平滑肌细胞增殖的影响及意义。方法 :16只雄性新西兰兔随机分为血清对照组和三个不同剂量的辛伐他汀亚组 (每日分别给予辛伐他汀 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg) ,7天后采血并混合每组 4只兔血 ,无菌分离制备三亚组的辛伐他汀含药血清。采用内皮素 1(ET 1)刺激正常喂饲原代培养兔主动脉血管平滑肌细胞的方法 ,建立血管平滑肌细胞增殖模型。采用MTT及3H TdR法检测各组辛伐他汀含药血清对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 :与不含药的正常对照组相比 ,不同亚组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖 (P <0 .0 1～0 .0 5 )。结论 :兔口服辛伐他汀后的血清具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用     

串珠素对大鼠平滑肌细胞增殖的影响及其机制的研究

目的 观察串珠素对于大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells。VSMCs）增殖反应的影响以及细胞信号转导机制。方法以^3H-TdR掺人法测定VSMCs增殖。Westem blot方法检测FAK表达。结果 Perlecan加强碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）引起的VSMCs增殖反应，并诱导粘着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）表达上调。Perlecan抗体消除Perlecan促进bFGF致VSMCs增殖反应，并抑制FAK表达。结论 串珠素增强bFGF致大鼠平滑肌细胞的增殖反应，其机制涉及FAK表达上调。     

缺氧对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其传递途径

本文观察了低氧对离体培养成年牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）＾３Ｈ－ＴｄＲ参入的影响，并用异搏定、Ｈ７、ＰＭＡ和ＥＧＦ进行干预实验，对ＭＳＣ增殖中信息传递途径作了初探。结果显示：（１）缺氧２４ｈ，ＰＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入显著增高。（２）异搏定及Ｈ７显著降低低氧Ｈ－ＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，而ＰＭＡ及ＥＧＦ显著增加ＨＳＭＣ＾３ＨＴｄＲ参入。（３）Ｈ－ＳＭＣ对ＰＭＡ和ＥＧＦ反应强于常氧Ｎ－ＳＭＣ；     

Effect of Sustained Tension on Bladder Smooth Muscle Cells in Three-Dimensional Culture

Previous studies demonstrated that bladder cells respond to changes in their mechanical environments by exhibiting alterations in cellular functions, such as hypertrophy or fibrosis. In the present study, we hypothesize that changes in smooth muscle cell (SMC) behavior triggered by mechanical stimuli may represent a phenotypic shift between contractile and synthetic phenotypes. Using a custom-made device, rat bladder SMCs were cultured in three-dimensional (3-D) collagen gels and exposed to sustained tension. When compared to no-tension controls, SMCs exposed to tension exhibited significantly (p < 0.05) higher expression of alpha-smooth muscle actin (α-SMA), while cell population density was similar in both groups. In addition, both mean and median aspect ratios of SMCs in 3-D collagen constructs exposed to tension were significantly (p < 0.05) greater than those of cells cultured under no externally applied tension, indicating that there are more elongated, spindle-shaped cells in the tension group. These SMCs in 3-D cultures exposed to tension also exhibited cellular alignment along the direction of applied tension. Since contractile SMCs are known to exhibit greater expression of phenotypic marker proteins as well as a more elongated morphology, we concluded that sustained tension on cells is an important mechanical stimulus for maintenance of the contractile phenotype of bladder SMCs in vitro.     

脑脉通对家兔体外主动脉血管平滑肌细胞的影响

对家兔主动脉血管平滑肌细胞进行体外培养，观察中药复方脑脉通对其传代细胞的影响。结果显示：脑脉通能降低平滑肌细胞的分裂指数，抑制其生长；而且随药物浓度的增高，其作用增加。提示脑脉通能减轻动脉粥样硬化的病变，并可预防其粥样硬化斑块的形成     

生长抑素抑制内皮素刺激的家兔血管平滑肌细胞增殖

为探讨生长抑素（ＳＳＴ）对内皮素（ＥＴ）刺激细胞增殖的作用其机理，本工作在培养的兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上发现，１０＾－８ｍｏｌ／ＬＥＴ刺激细胞增殖（＾３Ｈ＝ＴｄＲ参入增多）和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）激活，１０＾－８ｍｏｌ／ＬＳＳＴ单独作用可抑制细胞增玩具增殖但不曩ＭＡＰＫ活性。ＳＳＴ不仅呈浓度依赖性地抑制ＥＴ刺激的ＶＳＭＣ增殖（Ｐ〈０．０１），而且亦抑制ＥＴ刺激的细胞ＭＡＰＫ激     

人血管平滑肌细胞种植构建工程生物血管的实验研究

了解猪血管去细胞后平滑肌细胞种植情况,为猪血管用于血管组织工程提供资料。取猪颈动脉,生物酶预处理猪血管,在自行设计制作的新型动力性生物反应器中,用原代培养的人平滑肌细胞种植在去细胞血管基质材料内,HE染色及银染检测平滑肌细胞种植效果。结果表明生物酶预处理血管后,HE染色及银染检测可见血管腔平滑肌细胞形态正常,沿血管长轴分布,提示经生物酶预处理的猪血管人平滑肌细胞能成功种植,可望构建实用的组织工程血管。