人胎盘型谷胱甘肽S－转移酶在胃癌及癌前病变组织中的表达

人胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶在胃癌及癌前病变组织中的表达齐春会，郭山春，李华，李春海谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＥＣ２，５，１，１８；ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴｓ）能够催化亲核活性物质与谷胱甘肽（ＧＳＨ）相结合，是一组具有结合、解...     

细胞凋亡与谷胱甘肽－S－转移酶、谷胱甘肽－S－转移酶－π关系的研究

经ＣＳＣ、ＤＥＮ、ＭＮＵ等致癌物转化和未转化的凋亡Ｒａｔ－１细胞谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴｓ）、谷胱甘肽－Ｓ－转移酶－π（ＧＳＴ－π）活性均较其相应的未凋亡细胞显著增高（Ｐ＜０．０５～０．０１）。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实，上述凋亡细胞ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平也增高，这可能是导致ＧＳＴｓ和ＧＳＴ－π活性增高的主要原因。由于ＧＳＴｓ可催化谷胱甘肽（ＧＳＨ）与众多亲电子物质结合而有重要解毒功能，故推测培养细胞因营养匮乏引起凋亡时，其自身代谢产生的有毒物质无法及时被清除而积聚，可能启动了细胞自身的防御体系，行使自我保卫功能，从而刺激ＧＳＴｓ活性增高。     

人结核杆菌热休克蛋白70启动子对外源基因在分枝…

利用聚合酶链反应技术（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增得到１５０ｂｐ的人结核杆菌热休克蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）７０启动子和约６５０ｂｐ的外源基因日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ片段，并采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定了人结核杆菌ＨＳＰ７０起始密码ＡＴＧ上游１５０ｂｐ的启动子序列，在     

红细胞作载体的谷胱甘肽过氧化物酶用于脑缺血—再灌注的研究

目的和方法：采用红细胞（Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ，ＲＢＣ）作为谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－Ｐｘ）的载体，将包载ＧＳＨ－Ｐｘ的ＲＢＣ（ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ）用于兔脑缺血－再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ－Ｒ）研究。结果：包入采用低渗透析法，渗透压达到１３２ｍＯｓｍ。采用５１Ｃｒ标记法测定的兔ＲＢＣ的循环半寿期为（１３４±１５）ｄ（ｎ＝６），ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ的半寿期为（７３±２５）ｄ（ｎ＝５）。２，３，５—氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）染色结果表明，ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ对Ｉ－Ｒ损伤的脑组织有明显的保护作用。ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ对一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）浓度的升高有抑制作用。结论：采用ＲＢＣ作ＧＳＨ－Ｐｘ的载体是可行的     

抗人肿瘤坏死因子—α单链抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

目的：将抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，以期得到ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合表达蛋白。方法：将限制性内切酶酶切拼接法获得的Ｅ６ＳｃＦｖ基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物，光密度扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证表达产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，Ｅ６ＳｃＦｖ表达产物约为５２ｋｕ左右，与预期的结果相符；光密度扫描结果表明，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白占菌体总蛋白的４０％；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实，在相应分子量处，有ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的显色印迹；进一步对表达产物的形式分析，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的表达产物为包涵体形式。结论：在大肠杆菌中成功地表达了抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因与谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）基因的融合蛋白     

血清肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌诊断的临床评价

对１１０例原发性肝癌，１２例肝良占位病变，３２例肝硬化及８３例健康献血员，检测了ＧＳＴ－π（人胎盘谷胱甘肽Ｓ－转移酶），α＿１－ＡＴ（α抗胰蛋白酶），ｓｌｇＡ（血清分泌型免疫球蛋白Ａ），γ－ＧＴ（γ－谷胺酰转移酶），Ｆｅｒｒ（铁蛋白），结果表明各项肿瘤标志物均具有较高的敏感性和一定的特异性。尤其是对ＡＦＰ阴性原发性肝癌的诊断有较明显的价值。本研究表明血清ＧＳＴ－π，ｓＩｇＡ，γ－ＧＴ和ＡＦＰ联合检测对肝癌诊断有特殊的意义，可提高ＡＦＰ阴性肝癌的检出率，并对判别肝良恶性占位性病变有较大的诊断价值。五项指标建立了原发性肝癌线性判别函数，显示出显著的判别效果，正判率为９０．２％，提示联合检测可显著提高原发性肝癌的临床检出率。     

HBsAg PreS1肽段的基因工程表达与分离纯化

目的 用基因工程的方法表达和纯化ＨＢｓＡｇ－ＰｒｅＳ１（１～６５）太。方法 以ＨＢＶ全基因为模板,ＰＣＲ扩增ＰｒｅＳ１（１～６５）基因,导入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体ｐＧＥＸ ４Ｔ－１,构建ｔａｃ启动子控制下的ＧＳＴ－ＰｒｅＳ１（１～６５）融合蛋白表达质粒,转化大肠杆菌ＢＬ２１宿主。结果 工程菌ＢＬ２１ ＰｒｅＳ１（１～６５）产物为可溶性蛋白,表达量约为菌体总蛋白的２０％。用ＮＢＳ－ＢＩＯＦＬ     

肺癌中GST—π免疫组化表达意义

肺癌中ＧＳＴ┐π免疫组化表达意义郑肇巽作者单位：南京医科大学第一附属医院，南京２１００２９人胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）首先由Ｍａｎ－ｎｅｒｖｉｋ〔１〕从胎盘组织中提纯报道后，ＧＳＴ－π在肿瘤病变中异常表达作为一种肿瘤标志物，目前已引起许多...     

具有谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活力的抗体酶研究──单克隆抗体的制备及化学诱变

将２，４－二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）专一地与底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）巯基反应，合成了半抗原ＧＳＨ－Ｓ－ＤＮＰ；通过蛋白质连接技术（戊二醛法）将此半抗原偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上，制备出全抗原。用吸收光谱测得每个ＢＳＡ分子上平均连接３３个半抗原。用全抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过淋巴细胞杂交瘤技术，制备出抗ＧＳＨ的单克隆抗体杂交瘤细胞系４Ａ４、６Ａ６、１Ｃ８和４Ｇ３等。将其中的４Ａ４培养上清经５０％（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀、ＤＥＡＥ－５２纤维素离子交换柱层析和ＢｉｏｇｅｌＰ－２００凝胶过滤分离得到４Ａ４ＩｇＧ抗体，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检验纯度大于９０％。４Ａ４ＩｇＧ可变区中的丝氨酸（Ｓｅｒ）经苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化，再用硒化氢（Ｈ２Ｓｅ）处理，则Ｓｅｒ转变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ），使４Ａ４ＩｇＧ引入该催化基因。化学诱变后的４Ａ４ＩｇＧ具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）活性，其活力是世界上最好的ＧＰＸ模拟物ＰＺ５１的１１００倍，是游离ＳｅＣｙｓ的２．２×１０４倍，已达到天然酶活力的数量级水平。经初步应用，该抗体酶可防止自由基对心肌线粒体的损伤。     

GST-人可溶性成纤维细胞生长因子受体1融合蛋白在酵母细胞中的表达及活性测定

目的：表达重组人可溶性成纤维细胞生长因子受体１（ｓｏｌｕｂｌｅ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１，ｓＦＧＦＲ１），研究其对成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）生物学活性的拮抗作用。方法：采用逆转录－ＰＣＲ（ＰＴ－ＰＣＲ）技术自人肺成纤维细胞获得ｓＦＧＦＲ１　ｃＤＮＡ，测序确证后，将其克隆人酵母细胞表达载体ｐＹＥＸ４Ｔ－１；重组质粒转化入酵母细胞（ＤＹ１５０）中进行诱导表达，表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ鉴定。利用 ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖抑制实验检测重组人 ｓＦＧＦＲ１的生物学活性。结果：经 ＣｕＳＯ４诱导，酵母细胞表达出重组谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）－ｓＦＧＦＲ１融合蛋白，此蛋白在凝胶上表现为 １条约 ６０ｋＤ的阳性区带，在 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ实验中可被ＧＳＴ特异性抗体识别。重组ＧＳＴ－ｓＦＧＦＲ１融合蛋白的粗提物在体外能够桔抗ＦＧＦ介导的促ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖的活性。结论：重组ＧＳＴ－ｓＦＧＦＲ１融合蛋白在酵母表达系统中得到有效表达，并具有很好的生物活性。     

肝癌组织GSTM1基因的缺失突变

目的探讨在肝癌发生的过程中谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｍ１基因（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴＭ１）基因是否发生缺失突变。方法应用ＰＣＲ技术检测４６对肝癌组织和癌周肝组织的ＧＳＴＭ１基因型。结果肝癌组织ＧＳＴＭ１空白基因型的频率为７８．２６％,癌周肝组织则为６５．２２％（Ｐ＜０．０５）。６例肝癌组织的ＧＳＴＭ１空白基因型由癌周肝组织的非空白基因型转变而成,占１３．０４％。根据Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ定律,推出ＧＳＴＭ１基因的缺失突变率为３８．８９％。结论在肝癌发生的过程中,ＧＳＴＭ１基因发生了缺失突变。     

荷人鼻咽癌裸鼠全血GSH－PX和CAT活性的检测

用ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠（ｎｕｄｅｍｉｃｅ，ＮＭ）复制鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）模型，检测不同病期荷人ＮＰＣＮＭ全血谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－ＰＸ）和过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）活性，结果发现早期荷瘤鼠全血ＧＳＨ－ＰＸ活性明显高于正常裸鼠（Ｐ＜０．０１），然后随着病情发展有所下降，但中或晚期荷瘤鼠全血ＧＳＨ－ＰＸ活性仍高于正常水平（Ｐ＜０．０１）．而荷瘤鼠在潜伏、早和中期全血ＣＡＴ活性与正常裸鼠比较未见明显差异（Ｐ＞０．０５），仅在晚期荷瘤鼠全血ＣＡＴ活性明显低于正常裸鼠（Ｐ＜０．０１）．结果提示ＧＳＨ－ＰＸ和ＣＡＴ活性的改变与ＮＰＣ的发生和发展有关。     

胎盘型谷胱苷肽S转移酶—一种新的肿瘤标志物

自从发现胎盘型谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ－π）为大鼠肝脏化学致癌中敏感的癌前标志酶以来，现已证实在许多人体肿瘤中表达增加，尤其是胃肠道癌及癌前病变，病变与ＧＳＴ－πｍＲＮＡ水平表达一致，还与肿瘤化疗的耐药性密切相关。因此，ＧＳＴ－π可作为一种新的肿瘤标志物，用于一些肿瘤的早期诊断及为肿瘤的化疗提供指导。     

Heymann肾炎致病原受体相关蛋白在大肠杆菌中的表达

为研究Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎致病原的病理表型和免疫复合物形成机理，应用ＤＮＡ重组技术，将Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）致病原受体相关蛋白（ＲＡＰ）的ｃＤＮＡ克隆到表达质粒ｐＧＥＸ中，构建重组表达质粒ｐＧＥＸ－Ｒ９３，经限制性内切酶图谱分析，ＤＮＡ测序，鉴定插入子ＲＡＰ－ｃＤＮＡ正确克隆到ｐＧＥＸ表达框架后，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经ＩＰＴＧ诱导，高效表达了谷胱甘肽巯基转移酶－受体相关蛋白（ＧＳＴ－ＲＡＰ）融合蛋白，蛋白产量占大肠杆菌总蛋白量的３９．４％。经ＧＳＴ－Ｓｅｐｈｏｓｅ４Ｂ亲和层析得到高度纯化的ＧＳＴ－ＲＡＰ。免疫印迹分析证明，针对ＧＳＴ－ＲＡＰ的抗血清能特异地识别肾皮质天然抗原４４０００α蛋白，免疫组化分析显示ＧＳＴ－ＲＡＰ抗血清特异性识别大鼠肾近曲小管刷状缘抗原。     

Ebselen对阿霉素致的小鼠亚急性心、肝、肾组织损伤的保护作用

以小鼠为模型，模拟阿霉素临床用药方式，研究具有过氧化物酶样活性的Ｅｂｓｅｌｅｎ的保护作用。通过测定心脏、肝脏、肾脏中脂质过氧化物（ＬｉｐｉｄＰｅｒｏｘｉｄｅｓ，ＬＰＯ）含量、硒谷胱甘肽过氧化物酶（ｓｅｌｅｎｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＳｅＧＳＨＰｘ）活性和血清中肌酸磷酸激酶（Ｇｒｅａｔｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｋｉｎａｓｅ，ＣＰｋ）活性及观察各脏器组织学变化，提示Ｅｂｓｅｌｅｎ能提高心肌抗氧化能力，即ｓｅＧＳＨＰｘ／ＬＰＯ比值，降低ＬＰＯ含量，防止和减轻阿霉素对心脏的脂质过氧化损伤。阿霉素对肝脏有轻微的组织学损伤，但完全可以受到Ｅｂｓｅｌｅｎ的保护。阿霉素对肾脏无明显的损伤作用。     

Hela—MSH2^—细胞的生物学特性

凝胶阻滞实验证实转染了本实验室构建的ｈＭＳＨ２反义ＲＮＡ表达质粒的Ｈｅｌａ细胞（Ｈｅｌａ－ＭＳＨ２＾－细胞），其细胞抽提物中Ｇ．Ｔ碱基对和Ａ．Ｃ碱基对错配合蛋白表达明显降低，该细胞系细胞与母本Ｈｅｌａ细胞在生长速率方面无差异，但经十几次传代后，其生长速率加快给两倍，出现了次磺酸磷酸核糖转移酶（ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｈｇｐｒｔ）自发突变率升高，但不     

精神分裂症患者血中SOD,GSH—PX,GSH及LPO的变化及临床意义的研究

应用超氧化物歧化酶超微量快速测定法、血中谷胱甘肽过氧化物酶活力测定法（ＤＴＮＢ）、二硫双硝基苯甲酸定量测定法和血清中丙二醛与硫代巴比土酸定量测定法（ＴＢＡ）测定４０例精神分裂症病人血中超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活力，还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量，并与简明精神病量表（ＢＰＲＳ）总分、因子分、病人性别进行相关分析。结果表明：精神分裂症病人中血ＳＯＤ活力明显升高，与ＢＰＲＳ总分及五个因子分呈直线正相关，而ＧＳＨ－ＰＸ活力正常。ＧＳＨ含量明显下降，且与ＢＰＲＳ总分及因子３、４、５的分数呈直线负相关。血中ＬＰＯ含量正常。     

Arg—Gly—Asp—Ser序列肽抗血小板聚集及抑制血栓形成的作用

本研究采集精氨酰－甘氨酰－天冬氨酸（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ，ＲＧＤ）序列肽精氨酰－甘氨酰－天冬氨酰－丝氨酸四肽（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ，ＲＧＤＳ）观察其小血板聚集功能，实验性血栓形成以及对纤维蛋白溶解系统的影响，结果表明ＲＧＤＳ显著抑制了血小板聚集功能，一分钟聚集抑制率，最大聚集抑制率随药物体外作用浓度增加而增加（０．０５～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ）同时聚集速率显著下降，体内给予ＲＧＤＳ（８μｍ     

乳腺癌中胎盘型谷胱甘肽S—转移酶基因的扩增与异常表达

在国内首次制备并用光敏生物素方法标记胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｃＤＮＡ探针，应用斑点杂交技术检测２４例乳腺癌ＧＳＴ－π基因ＤＮＡ扩增与ｍＲＮＡ异常表达。结果发现，２４例乳腺癌中，３例（１２．５％０存在ＤＮＡ扩增，７例（２９．２％）ｍＲＮＡ异常表达，ＤＮＡ扩增和ｍＲＮＡ表达之间存在正相关性，二者均与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无明显相关，但ｍＲＮＡ异常表达与乳腺癌ＥＲ表达呈现负相关性，     

乳腺癌中胎盘型谷胱甘肽S－转移酶基因的扩增与异常表达

在国内首次制备并用光敏生物素方法标记胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｃＤＮＡ探针，应用斑点杂交技术检测２４例乳腺癌ＧＳＴ－π基因ＤＮＡ扩增与ｍＲＮＡ异常表达。结果发现，２４例乳腺癌中，３例（１２．５％）存在ＤＮＡ扩增，７例（２９．２％）存在ｍＲＮＡ异常表达，ＤＮＡ扩增和ｍＲＮＡ表达之间存在正相关性，二者均与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无明显相关，但ｍＲＮＡ异常表达与乳腺癌ＥＲ表达呈现负相关性。结果证实人乳腺癌中既存在ＧＳＴ－π基因ＤＮＡ扩增，又存在ｍＲＮＡ异常表达，提示ＧＳＴ－π与乳腺癌有密切关系。