雌激素对大鼠附睾上皮细胞非基因组作用及其机制研究

目的：研究雌激素对大鼠附睾上皮细胞非基因组作用及其机制。方法：青春期大鼠附睾上皮细胞,ＦＬＵＯ－３／ＡＭ标记,激光共聚焦显微镜技术观察。结果：１７β－雌二醇能快速诱导附睾上皮细胞内Ｃｑ＾２＋〖Ｃａ＾２＋〗ｉ升高,并且有剂量依赖性（１０＾－２～１０＾－９Ｍ）,无Ｃａ＾２＋液及２ｍＭ ＥＧＴＡ育附睾上皮细胞不影响雌二醇诱导效应;Ｃａ＾２＋通道阻活跃剂ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ、ｖｅｒａｐａｍｉｌ也不影响雌二     

缩胆囊素和谷氨酸对大鼠大脑皮质细胞内游离钙浓度的影响

为探讨胆囊收缩素八肽及中毒剂量谷氨酸对大鼠大脑皮质细胞内Ｃａ＾２＋２的影响及相互关系,以１０＾－１０、１０＾－８、１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ等浓度ＣＣＫ－８和１ｍｍｏｌ／ＬＧｌｕ分别或共同作用于大鼠大脑皮质细胞,以流式细胞仪检测「Ｃａ＾２＋」,并探讨其变化机制。（１）１０＾－１０ｍｏｌ／ＬＬＣＣＫ－８可增加「Ｃａ＾２＋」,１０＾－８、１０＾－６ｍｏｌ／ＬＣＣＫ－８无此作用;（２）１０＾－１０ｍｏｌ／ＬＣ     

乙酰胆碱对大鼠腹腔巨噬细胞内钙离子浓度和表面Ia抗原表达的影响

用Ｆｕｒａ－２作为荧光探针测定大鼠腹腔巨噬细胞（Ｍ）内钙离子浓度（［Ｃａ￣（２＋）］ｉ），ＡＰＡＡＰ桥联酶标法检测Ｍ表面Ｉａ抗原的表达。结果表明：５×１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ的乙酞胆碱（Ａｃｈ）可使Ｍ［Ｃａ￣（２＋）］ｉ；明显上升，可促进Ｍ表面Ｉ－Ａ和Ｉ－Ｅ抗原的表达，而阿托品（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）可阻断Ａｃｈ升高［Ｃａ￣（２＋）］ｉ的作用。阿托品、三氟啦嚎（ＴＦＰ，５０μｍｏｌ／Ｌ）、ＥＧＴＡ（６ｍｍｏｌ／Ｌ）均可阻断Ｍ促进ＭＩａ抗原表达的作用，ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶抑制剂（ＰＫＩ，２５μｇ／ｍｌ）对Ａｃｈ促进ＭＩａ抗原表达的作用无影响。     

去甲肾上腺素对大鼠腹腔巨噬细胞内IP_3、［Ca~（2＋）］_i和Ia抗原表达

本文应用细胞膜放射标记和离子交换层析法测定巨噬细胞（ＭФ）内肌醇－１，４，５－三磷酸（ＩＰ３）、用Ｃａ￣（２＋）指示剂的分光光谱法测定ＭФ内Ｃａ￣（２＋）浓度（［Ｃａ￣（２＋）］）、用ＡＰＡＡＰ桥联酶标法检测ＭФ表面Ｉａ抗原的表达，研究去甲肾上腺素（ＮＥ）对大鼠腹腔的ＭФ内ＩＰ３、［Ｃａ￣（２＋）］ｉ和ＭФ表面ｌａ抗原表达的影响。结果显示ＮＥ（１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ）可显著增高ＭФ中ＩＰ＿３含量（４４２±２２ｃｐｍ／１０￣６ｃｅｌｌｓ，对照组１０２±８ｃｐｍ／１０￣６ｃｅｌｌｓ，Ｐ＜０．０１）；ＮＥ可使ＭФ内［Ｃａ￣（２＋）］ｉ显著增高（３２２±７８ｎｍｏｌ／Ｌ，对照组９７±１７ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）；ＮＥ可显著增高ＭФ表面Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｅ抗原的表达（６４±８％、５８±６％，对照组５０±３％，４４±４％，Ｐ＜０．０１）。提示神经递质ＮＥ促进ＭФ表面Ｉａ抗原表达的作用可能是通过第二信使ＩＰ＿３和Ｃａ￣（２＋）介导的。     

体外阻断GR功能对鸡脾淋巴细胞活性及Dex免疫抑制的影响

用地塞米松（Ｄｅｘ）和ＲＵ４８６分别或联合与鸡淋巴细胞，ＣｏｎＡ－一起培养，检测了淋巴细胞掺入＾３Ｈ－胸苷（＾Ｈ－ＴｄＲ）量的变化，１０＾－５和１０＾－６ｍｏｌ／ＬＲＵ４８６可抑制淋巴细胞掺入＾３Ｈ－ＴｄＲ（Ｐ〈０．０１），而１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ则无明显影响（Ｐ〉０．０５）１０＾－５，１０＾－６和１０＾－７ｍｏｌ／ＬＤｅｘ地淋巴细胞掺入＾３Ｈ－ＴｄＲ有明显的抑制作用（Ｐ〈０．０１），１０＾－５ｍｏ     

长春新碱诱导的自噬性凋亡与细胞内游离Ca^2＋浓度的相关性研究

目的 研究长春新碱（ＶＣＲ）诱导的Ｌ－０２细胞自噬性凋亡细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）的变化,以及自噬特异性抑制剂３－ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｅ（３ＭＡ）对此自噬性凋亡和［Ｃａ＾２＋］ｉ的影响。方法 应用已建立的ＶＣＲ诱导的Ｌ－０２细胞自噬性凋亡模型,使用电镜、流式细胞术检测细胞;用Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ荧光探针经流式细胞仪测定Ｌ－０２细胞平均［Ｃａ＾２＋］ｉ。结果 电镜及流式细胞术检测证实     

粘附分子对CD3介导的胸腺细胞[Ca^2＋]i应答的影响

ＬＦＡ－１和ＩＣＡＭ－１广泛表达于各胸腺细胞亚群，但ＩＣＡＭ－１在ＰＮＡ￣＋细胞的表达下调。本文报道：用抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１和抗ＣＤ３单抗，分析了粘附分子ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１对抗ＣＤ３诱导的胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答的影响。结果显示，可溶性抗ＬＦＡ－１／ＩＣＡＭ－１可抑制ＣｏｎＡ刺激的胸腺细胞增殖，且以抗ＬＦＡ－１抗体的作用更为显著，在ＣｏｎＡ或抗ＣＤ３诱导的胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答中，抗ＬＦＡ－１单抗可明显抑制［Ｃａ￣（２＋）ｉ升高。但如果用二抗交联ＣＤ３和ＬＦＡ－１，胸腺细胞［Ｃａ￣（２＋）ｉ则显著高于单独交联ＣＤ３时的水平（Ｐ＜０．０１），而ＣＤ３与ＩＣＡＭ－ｌ交联却无此效应，此外，仅交联ＬＦＡ－１或ＩＣＡＭ－１也无诱导［Ｃａ￣（２＋）］ｉ应答的作用。提示在ＬＦＡ－ｌ与ＩＣＡＭ－１介导的胸腺细胞与胸腺基质细胞相互作用中，ＬＦＡ－１可为ＴＣＲ／ＣＤ３途径介导的胸腺细胞活化提供复合刺激信号。     

去甲肾上腺素影响单核细胞抗原提呈的机制

１０＾－１３～１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ的去甲肾上腺素体外作用时能促进人外周血单核细胞的抗原提呈功能（ＡＰＦ）。ＰＫＣ激活剂ＰＭＡ和抑制剂４ａ－ＰＤＤ分别能加强和抑制ＮＥ对Ｍｏｎ的ＡＰＦ的促进作用；异搏定能抑制ＮＥ的这种作用，而ＰＫＡ的抑制剂ＰＫＩ对ＮＥ的这种作用无。结果提示ＮＥ促进ＭｏｎＡＰＦ的机制可能涉及到Ｃａ＾２＋和ＰＫＣ，而与ＰＫＡ无关。     

去甲肾上腺素对大鼠体外抗体生成的影响

目的 观察不同浓度甲肾上腺素（ＮＡ，１０＾－１～１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）对大鼠体外抗体生成的影响，并初步探讨其作用机制。方法 在体外用百红细胞（ＳＲＢＣ）刺激大鼠肠系结Ｂ细胞转化成形成细胞（ＡＦＣ），然后检测其抗体生成量。结果 （１）１０＾－１０、１０＾－６、１０＾－８和１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ ＮＡ都能显著高于外抗体生成，其中１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＮＡ的作用最强。（２）γ受体激动剂异丙肾上腺素亦能明显     

内皮素对成年鼠离体心室肌细胞内游离钙浓度的影响及机制

目的和方法：采用分离的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠心室肌细胞,以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂负载,检测心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化,探讨内皮素－１（ＥＴ－１）对［Ｃａ２＋］ｉ的作用及其机制。结果：ＥＴ－１（１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）引起［Ｃａ２＋］ｉ升高分两个时相：快速相和持续相,可被ＥＴＡ的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）所阻断。移去细胞外液钙以及用百日咳毒素（２００ｎｇ／ｍＬ）处理１０ｈ后,ＥＴ－１仍引起快速相,但持续相消失。Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ（４μｍｏｌ／Ｌ）和异搏定（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对ＥＴ－１诱导［Ｃａ２＋］ｉ升高的作用无显著影响。结论：ＥＴ－１升高［Ｃａ２＋］ｉ是通过ＥＴＡ受体介导;快速相［Ｃａ２＋］ｉ升高主要由胞内Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ不敏感的钙池释放造成,与百日咳毒素敏感的Ｇ蛋白无关;持续相［Ｃａ２＋］ｉ升高主要由胞外Ｃａ２＋内流引起,不是通过电压依赖性Ｌ－型钙通道介导,与百日咳毒素敏感的Ｇ蛋白有关     

洛沙坦对大鼠心肌梗死时心肌细胞的作用

应用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流方法,分离培养成年大鼠心肌细胞（ＭＣ）,并借助同位素标记的底物掺入法,观察在不同处理因素下,洛沙坦对大鼠梗塞ＭＣ的ＲＮＡ（＾１４Ｃ－ＵＲ）的蛋白质（＾３Ｈ－Ｌｅｕ）合成率的影响。结果发现,在相同浓度的ＡｎｇⅡ（１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）的作用下,心肌梗塞对照组（ＣＭＩ）的ＭＣ,其＾１４Ｃ－ＵＲ和＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入率均显著高于假手术（ＳＯ）组;而两干预组（ＭＩ＋Ｌｏｓ组和Ｍ     

无镁液灌流大鼠海马脑片自发性癫痫样放电的药物敏感性

用常规海马脑片实验方法：撤除人工脑脊液中的Ｍｇ＾２＋、０．５ｈ内ＣＡ１区出现自发性痫样放电,１ｈ内于稳定,约１／３脑片波幅可稳定２ｈ左右,但放电频率呈缓慢增加,无Ｍｇ＾２＋灌流后１￣３ｈ间可以观察抗痫药的作用。苯妥英钠（ＰＨＴ）１００μｍｏｌ／Ｌ,氨甲酰氮卓（ＣＢＺ）１００μｍｏｌ／Ｌ,安定（ＤＺＰ）３０μｍｏｌ／Ｌ,苯巴双妥钠（ＰＢ）１００μｍｏｌ／Ｌ,丙戊酸钠（ＶＰＡ）１０ｍｍｏｌ／Ｌ及乙琥胺     

视黄酸对人外周血淋巴细胞CD25分子表达影响的研究

本实验采用分子杂交及流式细胞分析技术研究了视黄酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）对人外周血淋巴细胞ＣＤ２５分子表达和细胞功能的影响，结果显示，大剂量（２．５×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ处理ＰＨＡ活化４８ｈ淋巴细胞，其ＣＤ２５ｍＲＮＡ含量、ＣＤ２５阳性细胞百分率和膜表面ＣＤ２５分子数量均显著降低，淋巴细胞大部分受阻于Ｇ０／Ｇ１期，Ｇ２＋Ｍ期细胞仅占７．６％。而适量（２．５×１０－６～２．５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）ＲＡ作用后ＣＤ２５分子表达和Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增加。该研究提示ＲＡ对ＣＤ２５分子表达和淋巴细胞功能的影响有一定的剂量依赖性。     

低氧缺血海马神经元内Ca^2＋动态变化的LSCM测定

测定脑组织细胞内Ｃａ＾２＋深度是评价缺血引起神经元损伤的重要指标。本研究用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）和Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ荧光针标记技术，从单个活细胞水平检测因刺激诱发的海马神经神经元区Ｃａ＾２＋瞬间动态变化。结果显示低氧使人Ｃａ＾２＋浓度显著升高。谷氨酸引起Ｃａ＾２＋浓度升高缓慢但持续时间长。缺血对Ｃａ＾２＋浓度影响不显著。撤除葡萄糖则引起人Ｃａ＾２＋迅速降低。实验结果表明不同地缺血刺激因素     

尼可地尔降低血管平滑肌细胞内ATP诱导的游离钙浓度

目的：探讨尼可地尔对血管平滑肌细胞内游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响及机理。方法：培养的兔主动脉平滑肌细胞加入Ｆｕｒａ－２ＡＭ２５μｍｏｌ／Ｌ,在３７℃下孵育５０ｍｉｎ,［Ｃａ２＋］ｉ用荧光分光光度计检测。结果：ＡＴＰ（０１ｍｍｏｌ／Ｌ）诱导的［Ｃａ２＋］ｉ峰相和持续相增加可被尼可地尔抑制,且呈剂量依赖性,尼可地尔（１０μｍｏｌ／Ｌ）的抑制作用可被优降糖（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断（峰相：５３０±３１ｖｓ５４４±４１ｎｍｏｌ／Ｌ,持续相：３７０±１９ｖｓ３８１±１１ｎｍｏｌ／Ｌ,Ｐ＞００５）;在无钙溶液中,先给尼可地尔能显著抑制ＡＴＰ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ峰相增加。结论：尼可地尔抑制ＡＴＰ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ增加,可能与减少细胞外钙内流及细胞内钙释放有关。     

MCP-1 mcAb和Losartan拮抗Ang Ⅱ介导的VSMCs的增殖与迁移效应的实验研究

目的探讨单核细胞趋化蛋白－１单克隆抗体（ＭＣＰ－１－ｍｅＡｂ）或Ｌｏｓａｒｔａｎ 拮抗血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）介导的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增殖与迁移效应的可能性，为防治动脉硬化提供一定的理论依据。方法采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测 ＶＳＭＣｓ的迁移效应；以 ＭＴＴ法、~３Ｈ－ＴａＲ掺入法、~３Ｈ－脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应。将培养ＶＳＭＣｓ分为 ５组； ２％胎牛血清（ ２％ＦＣＳ）组、 ＡｕｇⅡ组（其浓度为 １０－１０～１０－６ｍｏｌ／Ｌ）、Ｌｏｓａｒｔａｎ组（其浓度为 １０－７～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）、ＭＣＰ－ｌｍｃＡｂ组（终浓度为 １０μｇ／ｍｌ）和阳性对照组（含５％的酵母多糖活化血清）。结果（１） ＡｕｇⅡ具有剂量依赖性的促进 ＶＳＭＣｓ的增殖与迁移效应；（２） ＭＣＰ－１ｍｃＡｂ或 Ｌｏｓａｒ－ｔａｎ能有效地拮抗ＡｕｇⅡ介导的ＶＳＭＣｓ增殖与迁移效应。结论 ＭＣＰ－１ｍｃＡｂ或Ｌｏｓａｒｔａｎ对动脉硬化性疾病可能具有较大的应用前景。     

牛磺酸对缺血大鼠心肌线粒体Ca^2＋—Mg^2＋—ATP酶活性与MDA …

目的和方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ,５ｍｇ／ｋｇ）诱导心肌缺血模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）中丙二醛（ＭＤＡ）含量、Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及牛磺酸（Ｔａｕ）的影响。结果：缺血组大鼠心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ升高８７．８３％、Ｃａ＾２＋－Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性分别降低３７．５６％和５０．２０     

SRBC膜提取物对猪PBMNC第二信使的影响

胰酶水解绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）释放膜表面活性蛋白组分Ⅲ（ＴＲＦ－Ⅲ），单独作用可使猪外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）胞内ｃＡＭＰ水平升高，以１００μｇ／ｍｌ浓度刺激达最高峰，由对照组０．９４±０．１４ｐｍｏｌ／Ｌ升高到２．７５±０．２５ｐｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）。如果ＰＢＭＮＣ事先与腺苷酸环化酶（ＡＣａｓｅ）抑制剂ＬｉC１孵育后再以ＴＲＦ－Ⅲ或ＰＡＨ刺激。ｃＡＭＰ增高受到抑制（Ｐ＜０．０１）；而ＥＤＴＡ－２Ｎａ（一种磷酸二酯酶ＰＤＥ抑制剂）对此ｃＡＭＰ升高无影响。结果提示，此ｃＡＭＰ升高主要是通过活化ＡＣａｓｅ水解ＡＴＰ生成ｃＡＭＰ，而不像是抑制ＰＤＥ减少ｃＡＭＰ降解引起的。ＴＲＦ－Ⅲ诱导猪ＰＢＭＮＣ胞内Ｃａ~(２＋)浓度升高，以１００μｇ／ｍｌ刺激２分钟升高最多，由对照组的２４２±７ｎｍｏｌ／Ｌ升高到３２３±１５ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）。以ＥＧ－ＴＡ除去胞外Ｃａ~(２＋)再以ＴＲＦ－Ⅲ或ＰＡＨ刺激，仅观察到小范围［Ｃａ~(２＋)］ｉ升高。看来这一过程包括了刺激胞内Ｃａ~(２＋)释放和胞外Ｃａ~(２＋)内流两种方式。以上结果证明，ＴＲＦ－Ⅲ对淋巴细胞功能影响与细胞内第二信使有关。     

分泌抗CRF单克隆抗体杂交瘤的建立及初步鉴定

采用淋巴细胞杂交瘤技术，获得了５株稳定分泌抗促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）的ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。５株单克隆抗体均为ＩｇＧ２，且均识别ＣＲＦ羧基端。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ、ＦＳＨ、ＮＰＹ、ＬＨ反应。５株杂支瘤腹水效价在１０－４～１０－５，亲和常数在５×１０７ｍｏｌ／Ｌ－１～１×１０９ｍｏｌ／Ｌ－１。     

山莨菪碱对蛛网膜下腔出血后基底动脉产生EDRF的作用及抗…

用山莨菪碱（６５４－２）防治蛛网膜下腔出血（ＳＡＨ）后脑血管痉挛，观察６５４－２对基底动脉中ＥＤＲＦ，ＭＤＡ，ＳＯＤ，ｃＧＭＰ，Ｃａ＾２＋，Ｎａ＾２＋的影响。结果表明，应用６５４－２后降低了基底动脉中ＭＤＡ产生及Ｃａ＾２＋Ｎａ＾＋的含量，与ＳＡＨ组比，ＥＤＲＦ释放增加，ＳＯＤ活性及ｃＧＭＰ水平提高，基底动脉内皮细胞受到保护，基底动脉收缩幅度减小。提示，６５４－２可通过保护内皮细胞，减轻氧自由基损伤