mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的:观察膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用。方法:不同浓度的MK886作用于HL-60细胞不同时间后,CCK-8测定其对HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot法检测mPGES-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,ELISA法检测PGE2。结果:HL-60细胞株高表达mPGES-1。MK886可时间、剂量依赖性地抑制HL-60细胞mPGES-1表达和PGE2合成,同时细胞增殖受到抑制,凋亡增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。结论:MK886可抑制HL-60细胞增殖,诱导凋亡,其机制与下调mPGES-1表达、抑制PGE2合成和调控Bcl-2/Bax等有关。     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

细胞膜富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子维持急性髓系白血病HL-60细胞对多柔比星的敏感性

  目的　探讨细胞膜抗原富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子（SFPQ）在多柔比星（ADR）耐药的白血病细胞中的作用。方法　以急性髓系白血病细胞株HL-60及其ADR耐药株HL-60／ADR细胞为研究对象,通过免疫荧光法比较HL-60和HL-60／ADR细胞膜SFPQ表达丰度;应用单抗5D12封闭细胞膜SFPQ,通过MTT法测定5D12对HL-60、HL-60／ADR细胞增殖的影响,计算ADR的半数抑制浓度（IC50）和5D12对细胞增殖的促进率;流式细胞术检测5D12对罗丹明在细胞内蓄积的影响。结果　SFPQ在HL-60细胞膜表达高于HL-60／ADR细胞。5D12封闭膜SFPQ作用后,ADR作用HL-60细胞48 h的IC50由（0.19±0.03）μg／ml升高至（0.95±0.13）μg／ml,HL-60／ADR细胞的IC50由（4.41±2.42）μg／ml升高至（21.33±4.26）μg／ml。1、3、5、8、12 μg／ml的5D12作用细胞96 h后,HL-60细胞增殖促进率分别为（9.12±2.02）%、（16.63±0.92）%、（19.04±0.25）%、（24.17±0.53）%、（34.04±3.20）%,HL-60／ADR细胞分别为（7.40±2.23）%、（8.72±2.38）%、（10.47±3.78）%、（11.57±1.49）%、（13.97±0.91）%。结论　核蛋白SFPQ在HL-60细胞膜表达丰度高于HL-60／ADR细胞;该蛋白在细胞膜易位表达不改变药物在细胞内的蓄积,通过抑制细胞增殖维持HL-60细胞对ADR的敏感性。     

RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响

 目的 研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断（small interfering RNA, siRNA）对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法 制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果 siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48 h、72 h最明显,增生抑制率分别为53.2 %和51.5 %;S期细胞比值由（56.1±4.7）%降至（17.8±3.2）%,细胞阻滞在G0／G1期。结论 针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。     

姜黄素对白血病细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系

目的研究姜黄素（Cur）对K562细胞和HL-60细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系。方法用流式细胞光度术对K562细胞和HL-60细胞进行细胞周期检测，用蛋白免疫印迹检测细胞周期蛋白水平。结果姜黄素0—10mg／L作用24h可将K562细胞和HL-60细胞阻滞于G0／G1期，该期细胞比例增加；阻断细胞从S期向G2／M期转化，G2／M期细胞比例减少；姜黄素作用24h减少K562细胞和HL-60细胞Cyclin D1、Cyclin B1的蛋白水平，但几乎不影响K562细胞和HL-60细胞Cyclin A的蛋白水平。结论姜黄素扰乱K562细胞和HL-60细胞的细胞周期进程与Cyclin D1和Cyclin B1的蛋白水平减少有一定关系。     

曲古抑菌素A促进As2O3诱导HL-60细胞分化与分子机制的研究

目的：研究曲古抑菌素A能否促进小剂量三氧化二砷（As2O3）诱导HL-60细胞分化并对其机制进行初步探讨.方法：用MTT实验测定药物对细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞表面CD11b表达率观察药物对细胞的分化作用; RT-PCR方法检测p21和cyclin D3在mRNA水平的表达变化.结果：HL-60细胞经曲古抑菌素A和（或）小剂量As2O3作用24 h后,联合用药组较单用As2O3组能明显抑制细胞增殖,促进细胞分化,p21在mRNA水平表达增加,cyclin D3在mRNA水平表达降低.结论：曲古抑菌素A能促进小剂量As2O3诱导HL-60细胞的分化,其机制可能与细胞周期蛋白cyclin D3和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的表达变化有关.     

Cyclin D1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响

[目的]利用RNA干扰（RNAi）技术观测其对白血病K562细胞cyelin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒．通过壳聚糖介导转染K562细胞，Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclinD1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyelin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；细胞阻滞于G0／G1期，细胞凋亡明显。而m—pshRNA-790质粒并无上述生物学效应：[结论]cyclinD1基因表达下调可抑制K562细胞生长影响细胞周期分布并诱导细胞凋亡提示，因可能是白血病治疗的一个有效靶点。     

曲古抑菌素A对HL-60细胞分化的影响

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60分化的作用.方法 采用溴化四甲基偶氮唑蓝法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期;通过检测细胞分化特异性抗原CD11b的表达研究细胞分化作用;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测c-myc基因mRNA的表达.结果 经TSA作用后,细胞增殖受抑制,细胞周期阻滞在G0和G1期,P<0.01;TSA作用48 h后,细胞分化率达15.24%;c-myc表达随TSA作用时间延长而降低.结论 TSA对HL-60细胞具有抑制增殖和诱导分化作用.     

白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用

 目的　探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用。方法　用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7／IL-24及其选择性剪接体IL-24 delE5的表达。构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞。通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ／PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7／IL-24进行比较。结果　在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达。稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G0／G1期细胞比例由（24.46±3.99）%增至（42.69±3.04）%,细胞周期阻滞于G0／G1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制。与mda-7／IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义。结论　IL-24 delE5与mda-7／IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G0／G1期阻滞有关。     

hSulf-1过表达提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性

探讨人硫酸酯酶-1（human sulfatase 1,hSulf-1）基因过表达是否提高乳腺癌MCF-7细胞对PARP抑制剂AZD2281的敏感性。方法：采用不同浓度AZD2281处理细胞,并筛选AZD2281处理的最佳浓度。将携hSulf-1基因的重组腺病毒Ad5-hSulf1感染MCF-7细胞,以Ad-hSulf1和AZD2281单独或联合处理MCF-7细胞,以Ad5-EGFP处理为对照。采用流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin dependent kinase 4,CDK4）及磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）的表达,Transwell法、MTT法分别检测细胞的迁移及增殖。结果：AZD2281浓度为7 μmol/L时对MCF-7细胞的抑制作用趋于峰值,用于后续实验。Ad5-hSulf1+AZD2281联合处理与AZD2281单独处理相比,MCF-7细胞的G2/M期细胞比例明显增多[（22.15±0.17）% vs（17.44±0.57）%,P<001],细胞克隆形成率[（21.43±1.52）% vs（49.43±1.44）%,P<0.01]及细胞周期蛋白CDK4的表达[（0.67±0.02）vs（0.72±0.02）,P<0.05]、AKT的磷酸化水平[（0.17±0.003）vs（0.42±0.02）,P<0.01]均明显降低,同时细胞的增殖率和迁移能力也有明显下降[（57.69±4.83）% vs（79.35±5.44）%;（10.33±1.53）个vs（50.67±2.31）个,均P<0.01]。结论：hSulf-1过表达可明显提高乳腺癌细胞MCF-7对AZD2281的化疗敏感性,阻滞细胞周期于G2/M期,并更明显地抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,这一效应可能是通过调节细胞周期蛋白CDK4及AKT通路产生的。     

二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人恶性胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响.方法 采用MTT法、流式细胞术等方法检测DADS对U251细胞的增殖抑制及细胞周期的影响.免疫细胞化学、qRT-PCR与Western blot检测cyclin B1与c-Myc表达.结果 MTT法显示,15、30、45、60 mg/L DADS处理U251细胞48小时后,生长抑制率分别为22.0％、38.8％、49.2％、55.3％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术结果显示,15、30、45、60 mg/L DADS作用U251细胞48小时后,G2/M期细胞分别为(14.1±1.2)％、(25.0±0.6)％、(41.2±1.4)％、(53.5±3.3)％,较对照组(9.6±0.9)％差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫细胞化学显示,45 mg/L DADS处理U251细胞48小时后,cyclin B1与c-Myc蛋白平均光密度值分别从0.52±0.09、0.56±0.08显著下降至0.23 ±0.02、0.39+0.04 (P ＜0.05).qRT-PCR结果显示,cyclin B1与c-Myc mRNA表达分别下调42.0％与63.0％ (P ＜0.05).Western blot结果显示,cyclin B1、c-Myc蛋白与β-actin的平均灰度值比分别为1.12±0.14与1.20 ±0.15,明显低于对照组1.74 ±0.15与2.23 ±0.19(P ＜0.05).结论 DADS可明显抑制恶性胶质瘤U251细胞增殖与阻滞G2/M期,机制与下调cyclin B1、c-Myc有关.     

雷公藤多甙诱导SCID小鼠体内HL-60细胞凋亡的研究

目的观察雷公藤多甙对移植性人HL-60细胞白血病模型的作用。方法取体外培养的指数生长期HL-60细胞3×106个,经尾静脉注射重度联合免疫缺陷(SCID)的小鼠,构建SCID小鼠HL-60细胞白血病模型;将小鼠分为雷公藤多甙组、模型组和空白组;以雷公藤多甙1 mg/(kg.d)腹腔注射白血病小鼠10天后,观察各组小鼠生存期、血象、脾脏白血病细胞浸润情况,采用TUNEL方法检测脾脏细胞凋亡情况。结果成功构建重度联合免疫SCID小鼠HL-60细胞白血病模型;与模型组比较,雷公藤多甙组外周血白细胞总数[(4.7±1.6)×109/L,P<0.05]和HL-60细胞数[(4.3±1.7)%,P<0.05]均下降,脾脏中白血病细胞浸润程度明显减轻,脾脏细胞凋亡率[(21.6±2.4)%]增高(P<0.05),生存期[(52.6±5.3)天]延长(P<0.05)。结论雷公藤多甙可诱导SCID小鼠体内HL-60细胞凋亡,在体内具有抗白血病作用。     

紫杉醇放射增敏作用的分子机制

背景与目的：紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2／M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。方法：克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同剂量照射对KB细胞增殖抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因;荧光定量PCR验证芯片提示细胞分裂相关基因PRCl、cvclin B2的变化。结果：紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol／L药物协同射线作用时SERD。及SERD。分别为2．40±1．87、12．23±2．81。药物加照射处理后G1期细胞由48．32±2．40％下降为15．73±7．00％（P〈0．01）,G2／M期细胞由13．66±2．16％上升到52．51±5．02％（P〈0．01）。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRCl和Cyclin B2均下调表达,与芯片结果一致。结论：紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和Cyclin B2表达特异性下调．导致双极纺锤体形成受阻。细胞无法完成正常的分裂,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。     

曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用及分子机制

目的：观察曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用。方法：采用不同浓度曲古菌素A（75、150、300、600ng/ml）分别处理人结肠癌HCT-116细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达。结果：曲古菌素A（75、150、300、600ng/ml）组的细胞抑制率在24h、48h、72h分别为（11.88±1.7、24.17±1.40、37.32±1.85）%、（21.00±1.45、31.22±2.10、54.94±1.71）%、（37.69±2.67、43.86±3.20、71.93±5.79）%和（51.90±2.60、61.80±4.90、87.93±5.39）%,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率均明显高于对照组（P〈0.05）,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率比较也有统计学差异（P〈0.05）。不同浓度的曲古菌素A作用48h后细胞以G0期居多,细胞阻滞在G0/G1→S期。不同浓度的曲古菌素A作用细胞48h后,凋亡率分别为（4.6±0.55）%、（37.06±7.89）%、（65.53±5.55）%、（75.93±3.28）%,各曲古菌素A组细胞凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）。蛋白免疫印迹法显示曲古菌素A可下调CyclinD1表达、上调DMTF1表达。结论：曲古菌素A可明显抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

Inhibitory effects of prostaglandin A2 on c-myc expression and cell cycle progression in human leukemia cell line HL-60

The effect of prostaglandin A2 (PGA2) on c-myc expression was investigated in a human promyelocytic leukemia cell line, HL-60, which responded to PGA2 with a dose-dependent growth inhibition. Northern blot analysis indicated that treatment with PGA2 at 0.5 to 5.0 micrograms/ml remarkably reduced the steady state level of c-myc mRNA within 3 h, and then it gradually recovered according to the order of concentration of the drug. In contrast to c-myc, the level of class I HLA mRNA, as an internal control, was not diminished by PGA2 treatment. Further, this reduction of c-myc was not disturbed by cycloheximide, suggesting that this PGA2 action on c-myc expression is independent of de novo protein synthesis. Cytofluorometric analysis revealed that the exposure of HL-60 cells to PGA2 at 0.5 or 5.0 micrograms/ml arrested the cells in the G0-G1 phase of the cell cycle. This accumulation of the cells in G0-G1 phase continues until 24 or 36 h at 0.5 or 5.0 micrograms/ml, respectively. The G0-G1 arrest of the cell cycle was also recovered as the inhibition of c-myc was released. This recovery may be due to the loss of activity of PGA2 in culture medium. This study clearly showed that PGA2 treatment arrested HL-60 cells in the G0-G1 phase of the cell cycle and was associated with the reduction of c-myc mRNA.     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。     

Acteoside inhibits human promyelocytic HL-60 leukemia cell proliferation via inducing cell cycle arrest at G0/G1 phase and differentiation into monocyte

We investigated the in vitro effects of acteoside on the proliferation, cell cycle regulation and differentiation of HL-60 human promyelocytic leukemia cells. Acteoside inhibited the proliferation of HL-60 cells in a concentration- and time-dependent manner with an IC50, approximately 30 microM. DNA flow cytometric analysis indicated that acteoside blocked cell cycle progression at the G1 phase in HL-60 human promyelocytic leukemia cells. Among the G1 phase cell cycle-related proteins, the levels of cyclin-dependent protein kinase (CDK)2, CDK6, cyclin D1, cyclin D2, cyclin D3 and cyclin E were reduced by acteoside, whereas the steady-state level of CDK4 was unaffected. The protein and mRNA levels of CDK inhibitors (cyclin-dependent kinase inhibitors), such as p21(CIP1/WAF1) and p27(KIP1), were gradually increased after acteoside treatment in a time-dependent manner. In addition, acteoside markedly enhanced the binding of p21(CIP1/WAF1) and p27(KIP1) to CDK4 and CDK6, resulting in the reduction of CDK2, CDK4 and CDK6 activities. Moreover, the hypophosphorylated form of retinoblastoma increased, leading to the enhanced binding of protein retinoblastoma (pRb) and E2F1. Our results further suggest that acteoside is a potent inducer of differentiation of HL-60 cells based on biochemical activities and the expression level of CD14 cell surface antigen. In conclusion, the onset of acteoside-induced G1 arrest of HL-60 cells prior to the differentiation appears to be tightly linked to up-regulation of the p21(CIP1/WAF1) and p27(KIP1) levels and decreases in the CDK2, CDK4 and CDK6 activities. These findings, for the first time, reveal the mechanism underlying the anti-proliferative effect of acteoside on human promyelocytic HL-60 cells.     

雷帕霉素抑制人骨肉瘤MG-63细胞周期的实验研究

目的观察雷帕霉素对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖、周期及Cyclin D1基因表达的影响,探讨雷帕霉素抑制骨肉瘤细胞周期的可能机制。方法体外培养骨肉瘤MG-63细胞,用不同浓度的雷帕霉素（1、10、25nmol／L）干预MG-63细胞。采用水溶性四唑盐WST-8比色法检测MC-63细胞增殖的变化;流式细胞仪检测MG-63细胞周期;RT—PCR及免疫细胞化学SABC法检测MG-63细胞Cyclin D1基因表达的变化。结果雷帕霉素能显著抑制MG-63细胞增殖,呈时间依赖性,差别有显著性意义（P〈0．05）;流式细胞分析显示雷帕霉素能显著抑制细胞周期,使GO／G1期细胞增多（P〈0．05）;RT—PCR检测显示雷帕霉素对MG-63细胞Cyclin D1 mRNA表达无明显影响（P〉0．05）;免疫细胞化学分析雷帕霉素能显著抑制Cyclin D1蛋白的表达,差别有显著性意义（P〈0．05）。结论雷帕霉素能下调MG-63细胞Cyclin D1蛋白的表达,抑制MG-63细胞增殖及细胞周期。