136析革兰阴性杆菌ESBLs和AmpC酶的检测

随着抗生素的广泛使用,细菌的耐药性已成为人们关心的热点问题。已发现越来越多的革兰阴性杆菌对B-内酰胺类抗生素产生耐药性。细菌产超广谱B-内酰胺酶(ESBLs)和1-型β-内酰胺酶(AmpC酶)是革兰阴性杆菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的机制之一。其中AmpC酶对β-内酰胺酶抑制剂不敏感,使高产AmpC酶的菌株引起的感染更加难治。此外,出现AmpC酶由原来局限于染色体编码向质粒转移的趋势,大大提高了AmpC酶的横向传播能力[1]。为调查革兰阴性杆菌的产酶情况,我们对136株革兰阴性杆菌进行ESBLs和AmpC酶检测,并对检测结果进行分析。     

革兰阴性杆菌中超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的检测与分析

目的：了解革兰阴性杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶的产生情况，为临床用药提供参考依据。方法：用纸片扩散确证试验检测345株革兰阴性杆菌的ESBLs产生情况，同时用酶提取物三维试验检测其中194株菌的AmpC酶产生情况。结果：革兰阴性杆菌中，ESBLs阳性率为30．4％，主要产生菌为阴沟肠杆菌68．2％，大肠埃希菌45．9％，肺炎克雷伯菌31．0％；AmpC酶阳性率为11．9％，主要产生菌为阴沟肠杆菌29．5％，鲍曼不动杆菌18．2％。结论：在革兰阴性杆菌中ESBLs、AmpC酶产生情况已相当严重和普遍，应重视对这两类酶的检测。     

产ESBLs革兰阴性杆菌的检测及耐药性分析

目的：分析革兰阴性杆菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的现状和耐药性，指导临床合理使用抗生素。方法：采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）表型筛选和确认试验检测产ESBLs菌株，并采用K—B法对临床常用抗生素进行体外药敏试验。结果：67株革兰阴性杆菌中共检测到ESBLs阳性的菌株19株，阳性率为28．4％。结论：临床分离的革兰阴性杆菌中产ESBLs的菌株分离率较高，而且产酶株多重耐药，碳氢霉烯类为首选抗生素。     

革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药相关性

目的了解革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的情况及其耐药性，指导临床合理用药。方法K—B法检测184株革兰阴性杆菌对11种抗生素的耐药性；采用头孢西丁（FOX）药敏纸片进行AmpC酶的初筛，通过酶提取物三维试验方法确证产AmpC酶细菌；采用NCCLS推荐的纸片扩散确证试验检测184株革兰阴性杆菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况。结果184株革兰阴性杆菌中，AmpC酶阳性率为23．3％主要产生菌为鲍曼不动杆菌57．7％，铜绿假单胞菌37．5％，AmpC酶阳性菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、复方新诺明（SXT）、左旋氧氟沙星（LEV）、哌拉西林（PRL）、氨曲南（ATM）、头孢他啶（CAZ）、阿米卡星（AK）、头孢吡肟（FEP）、美洛培南（MEM）的耐药率分男11为94．7％、86．8％、84．2％、81．6％、71．0％、68．4％、68．4％、55．3％、50．O％、5．3％；38株大肠埃希菌和26株肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性率分别为42．1％、23．1％，ESBLs阳性菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、哌拉西林（PRL）、氨曲南（ATM）、复方新诺明（SXT）、头孢他啶（CAZ）的耐药率较高。对头孢吡肟（FEP）、阿米卡星（AK）、头孢西丁（FOX）、美洛培南（MEM）的耐药率较低，对左旋氧氟沙星（LEV）的耐药率大肠埃希菌则远高于肺炎克雷伯菌。结论在革兰阴性杆菌中，AmpC酶和ESBLs产生情况已相当严重，应重视对其的检测；产酶菌与非产酶菌对抗生素的耐药性有明显区别；临床用药以碳青霉烯类如美洛培南（MEM）为首选。     

革兰阴性杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测

目的检测革兰阴性杆菌临床分离株的AmpC酶和AmpC耐药基因,探讨产AmpC酶菌株的耐药情况。方法用超声破碎法提取102株细菌的β-内酰胺酶粗提物,进行三维试验,提取细菌总DNA,PCR扩增ampC结构基因和ACT-1、CMY-G1、CMY-G2、DHA、FOX耐药基因,MIC法药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 102株革兰阴性杆菌中三维试验和PCR检测AmpC基因同时阳性的有11株,确认产AmpC酶菌株11株,并全部为鲍曼不动杆菌。三维试验和PCR基因检测AmpC酶的检出率比较,差别无统计学意义（χ~2=1.125,P〉0.05）。ACT-1、CMY-G2、FOX、DHA、CMY-G1的检出率分别为14.7%、12.7%、4.9%、1.0%和0。对产AmpC酶菌株敏感度最高的是丁胺卡那霉素（90.1%）,其次是亚胺培南（54.6%）。结论三维试验和PCR基因检测对AmpC酶的检出率无明显差别,但仍存在假阳性与假阴性。产AmpC酶菌株耐药情况严重,提示临床慎重用药。     

12株产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药基因检测

目的 研究革兰阴性杆茵产β-内酰胺酶的基因型.方法 收集北京大学人民医院12株革兰阴性杆菌,用VITEK-2系统进行鉴定和药敏检测,对多种β内酰胺酶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增.耐药基因与pGEM-3zf载体连接转化至大肠埃希茼DH5d,筛选、鉴定阳性克隆后进行序列分析.结果 12株菌检测出CTX-M型、TEM型、SHV型、OXA型、PER型和IMP型耐药基因,其中1株鲍曼不动杆茵同时携带OXA型和PER型耐药基因.2株大肠埃希茵的耐药基因分别在CTX-M-14的基础上发生了1个位点的突变.结论 细菌携带一种或多种耐药基因导致多重耐药,基因突变可导致新的基因型产生.鲍曼不动杆菌产金属碳青霉烯酶或丝氨酸碳青霉烯酶对亚胺培南耐药.     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶检测的探讨

临床发现，越来越多的革兰阴性杆菌对三代头孢类抗生素耐药，其主要原因是细菌质粒介导产生的超广谱β－内酰胺酶（Extended Spectrum β－Ｌ；ESBLs）所致。研究发现。产ESBL细菌主要集中在肠杆菌科细菌，以肺炎在雷伯杆菌和大肠埃希氏菌为主，另外有阴沟肠杆菌、沙雷氏菌、产碱杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等其它革兰阴性杆菌也有报道。由于产ESBL的菌株往往携带多重耐药基因，表现在不仅β－内酰类抗生素耐药。而且对氨基甙类、喹诺酮类抗生素也耐药，给临床治疗带来极大困难。目前产ESBL菌株有增多趋势并可引起医院感染的暴发流行。所以，ESBL的检测在临床上具有重要意义。目前，尽管检测ESBL的方法众多，但仍无令人满意的统一方法。本文对目前实验室较常采用的单纸片琼脂扩散试验（SD）法、双纸片协同试验（CD法）和Etest三种方法检测ESBL作一初步探讨。     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及药敏分析

目的　了解本院常见的革兰阴性杆菌中超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)细菌的发生率和药敏情况 ,为防止产ESBLs细菌的传播和抗生素的合理应用提供依据。方法　细菌鉴定用Vitek - 32细菌鉴定仪 ,药敏试验用K -B法 ,ESBLs初筛用双纸片法 ,ESBLs确证用NCCLS 1 999年推荐的确证方法。结果　产ESBLs耐药菌占全部分离菌的 2 8 9% ,其中各细菌ESBLs发生率大肠埃希菌为 2 8 6 % ,肺炎克雷伯菌为 34 1 % ,阴沟肠杆菌为 4 0 5 %。另外有 1例铜绿假单胞菌、2例弗劳地枸橼酸杆菌、2例嗜麦芽窄食单胞菌产ESBLs。对试验所做抗生素 ,ESBLs阳性株比阴性株具有更高的耐药率和更严重的交叉耐药现象。结论　本院产ESBLs细菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌多见 ,ESBLs的发生率和菌种分布有上升趋势 ,ESBLs菌感染的治疗仍以亚胺培南为首选     

174株革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶检测分析

目的了解革兰氏阴性杆茵产超广谱β-内酰胺酶(ESBL).方法采用法国生物梅里埃VITEK32细菌分析系统对174株临床标本分离出的革兰氏阴性杆菌进行生化鉴定及药敏分析.结果检出产ESBL菌21株,为12.1%;其中大肠埃希氏菌13株;肺炎克雷伯菌5株;铜绿假单胞菌2株;阴沟肠杆菌1株;ESBL菌对β-内酰胺类、青霉素类、氨基糖甙类、喹诺酮类、磺胺类几乎全部耐药.但亚胺培南对ESBL菌有很强的抑菌作用.结论ESBL菌株产生来源于抗生素的滥用,从而导致交叉耐药菌及多重耐药茵的产生,所以合理选择抗生素,控制ESBL传播和流行具有深刻意义.     

用基因芯片技术检测三种革兰阴性杆菌中AmpC酶耐药基因

AmpC酶是山革兰阴性菌产生的一种广谱β-内酰胺酶,有着比EBLs更宽的底物谱且对酶抑制剂不敏感,能水解包括3代头孢菌素在内的多种β-内酰胺类抗生素,导致细菌严重耐药^[1]。其中质粒介导的AmpC酶引起的耐药,因其多重耐药性、质粒携带转移、耐药株广泛传播及新基因型的不断发现等,已日益引起临床抗感染治疗的高度重视^[2]。     

临床分离株中革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶菌的分布

目的 了解临床分离的革兰阴性杆菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的分布及耐药性. 方法 对临床分离的革兰阴性杆菌,采用CLSI标准检测产ESBLs菌株. 结果 120株革兰阴性杆菌分离出38株产ESBLs菌,阳性率32%,包括大肠埃希菌、克雷伯菌属、阴沟肠杆菌、弗劳地枸椽酸杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌.其中,第一位是大肠埃希菌 (53.8%, 21 /38),其次产酸克雷伯菌(35.3,6/17)、肺炎克雷伯菌(33.3%,7/20);药敏结果显示除对碳青酶烯类抗生素敏感外,ESBLs阳性株对多种抗生素的耐药率均较高,且明显高于ESBLs阴性株. 结论 本院产ESBLs菌分离率较高,主要以大肠埃希菌、产酸克雷伯菌、肺炎克雷伯菌为主.     

革兰阴性杆菌β-内酰胺酶表型和基因型研究

目的了解铜陵地区临床分离的革兰阴性杆菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)和金属β-内酰胺酶(MBL)的分布情况,并检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型鉴定。方法采用三维试验检测革兰阴性杆菌产ESBLs和AmpC酶,纸片协同法检测MBL,用聚合酶链反应(PCR)对ESBLs表型阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行TEM型、SHV型、CTX-M型三种耐药基因检测并克隆测序。结果356株革兰阴性杆菌检出产酶株90株,检出率25.3%。单产ESBLs革兰阴性杆菌57株,检出率16.0%,以肺炎克雷伯(31.6%)、大肠埃希菌(31.0%)检出率高;单产AmpC酶4株,检出率1.1%,其中阴沟肠杆菌3株;同时产ESBLs和AmpC酶16株,检出率4.5%,以鲍曼不动杆菌(12.5%)检出率最高;产MBL细菌13株,均为非发酵菌,以嗜麦芽窄食单胞菌检出率最高,为71.4%。17株ESBLs表型阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌有16株检出ESBLs耐药基因,其中CTX-M型15株(88.2%),TME型13株(76.1%),SHV型2株(11.8%),有11株细菌同时带有两种ESBLs基因,1株带有3种ESBLs基因。结论革兰阴性杆菌产生ESBLs、AmpC酶和MBL多种β内酰胺酶,铜陵地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX-M型为主。     

儿童革兰阴性杆菌耐药状况及ampC基因的检测与分析

目的了解某儿童医院222株革兰阴性杆菌的耐药现状及ampC基因的分布情况.方法采用Microscanwalkaway-4.0鉴定222株革兰阴性杆菌的药敏情况,行PCR扩增检测222株革兰阴性杆菌中ampC基因.结果 222株菌对IPM、AK、CIP、FEP、CAZ、ATM、CRO、CN、SXT、PIP的药物敏感率从高到低依次为:IPM 90.5%、AK 79.3%、CIP 68%、FEP50.9%、CAZ46.4%、ATM43.2%、CRO41.1%、CN 37%、SXT 35.5%、PIP 20.7%.154株细菌ampC基因阳性(占69.4%),对所检测的各药物的敏感率从高到低依次为:IPM 92.9%、AK 81.1%、CIP69.5%、FEP 55.2%、CN45.5%、CAZ 41.6%、ATM37%、CRO 34.4%、SXT 33.8%、PIP 13.6%.在革兰阴性杆菌中对PIP的耐药性与ampC基因的分布有关.结论革兰阴性杆菌的耐药状况严重,明确ampC基因的分布状况有助于临床抗菌药物的选用.     

下呼吸道感染患者革兰阴性杆菌耐药性分析

目的：分析我院下呼吸道感染患者的革兰阴性杆菌耐药情况;探讨对耐药菌感染的治疗方案。方法：用K-B法测定118株革兰阴性杆菌对14种抗菌药物的耐药率。结果：最常见的革兰阴性杆菌为铜绿假单胞菌,肺炎克雷伯菌,鲍氏不动杆菌,大肠埃希菌等;它们对14种抗菌药物有程度不同的耐药,产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的耐药性明显增高。结论：革兰阴性杆菌是下呼吸道感染的主要致病菌,监测革兰阴性杆菌耐药性对于临床合理使用抗菌药物十分重要;亚胺培南β-内酰胺类抗菌药物与β-内酰胺酶抑制剂复合制剂可作为ESBLs菌感染的选用药物,亚胺培南可作为首选药物。     

重症监护病房385株革兰阴性杆菌分析

目的了解重症监护病房(ICU)临床分离的革兰阴性杆菌的标本来源、菌种分布及对常用抗菌药物的耐药现状。方法对ICU分离的385株革兰阴性杆菌进行回顾性分析。结果385株革兰阴性杆菌79.0%来自痰标本。非发酵菌占分离菌的61.0%,鲍曼不动杆菌分离率最高,占27.0%。鲍曼不动杆菌耐药率除亚胺培南5.8%、哌拉西林/他唑巴坦48.1%外,其余多在80%以上;铜绿假单胞菌对三代头孢类耐药率43.2%~97.9%,对亚胺培南、阿米卡星的耐药率分别为42.1%和15.8%;肠杆菌科细菌对多种抗生素耐药率在40%以上,阴沟肠杆菌耐药性更为显著,亚胺培南表现良好的抗菌效果。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中超广谱β内酰胺酶(ESBL s)阳性率分别为53.2%和55.6%。结论非发酵菌已成为ICU病人感染的最常见病原菌,革兰阴性杆菌对常用抗生素耐药性已达到相当严峻的程度,合理使用抗生素十分重要。     

2003-2005年我院呼吸科革兰阴性杆菌产ESBLs菌株检测及耐药性分析

目的:了解我院呼吸科住院患者痰检阳性的革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及耐药情况,为临床用药提供参考.方法:对2003年1月-2005年12月我院呼吸科住院患者痰检阳性的革兰阴性杆菌用NCCLS表型确证试验检测ESBLs的检出率;用纸片扩散法进行药敏试验,按NCCLS2003年版标准判断结果,同时对结果进行回顾性分析.结果:3年中分离出692株革兰阴性杆菌,其中大肠埃希菌、阴沟肠杆菌以及肺炎克雷伯杆菌属单检产ESBLs菌株检出率分别为23.8%、20.O%和23.5%;严ESBLs菌株对除碳青酶烯类之外抗菌药物耐药率明显高于非产酶菌株,产酶菌株对亚氨培南、头孢哌酮/舒巴坦敏感性好,对阿米卡星、左氧氟沙星次之,对三代头孢高度耐药.结论:产ESBLs菌株的增多是革兰阴性杆菌耐药的重要原因之一,临床应加强细菌耐药性的监测及ESBLs的检测,合理应用抗菌素,以防止ES-BLs菌株的产生.     

转座子tnpU基因在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况

目的 研究转座子tnpU基因和β-内酰胺酶在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况.方法 用纸片扩散初筛试验、扩散确证试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型检查,头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,纸片协同试验筛选产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增转座子tnpU基因,并进行DNA测序;用MIC药敏法分析多重耐药革兰阴性杆菌的药物敏感性.结果 转座子tnpU的总检出率为25.5％,在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌占6.3％(3株)、肺炎克雷伯菌占8.3％(1株)、鲍曼不动杆菌占33.3％(20株)、铜绿假单胞菌占43.2％(16株);β-内酰胺酶表型检测中,ESBLs的检出率最高,转座子tnpU基因阳性的菌株大多数β-内酰胺酶表型为阳性;转座子tnpU基因阳性菌株对抗生素的耐药率显著高于转座子阴性菌株(P＜0.05).结论 转座子tnpU基因在非发酵菌中的分布较广泛,可能在多重耐药机制中起重要作用.     

100株革兰阴性杆菌耐药性分析

近年来，随着抗生素在临床上的广泛应用，大量耐药菌的产生已成为目前临床治疗很棘手的问题，尤其是院内感染的革兰阴性杆菌耐药情况更为突出。为了研究院内革兰阴性杆菌感染对临床常用抗菌药的耐药性，为临床用药提供参考，笔者于２０００年６月～２００１年７月对１００例本院重危病房病人标本中分离的１００株革兰阴性杆菌，用亚胺培南（IPM）等１２种抗生素对其进行了体外抗菌活性的测定。现将结果报告如下。１资料和方法１．１一般资料１００例重危病房病人中，男性７２例，女性２８例；年龄７～８４岁。菌株来源：１００株革兰阴性…     

革兰阴性杆菌耐药与产AmpC酶的检测及其与耐药的关系分析

目的了解274株革兰阴性杆菌的耐药现状及产AmpC酶与耐药的关系分析。方法采用microscan walkaway-4．0鉴定274株革兰阴性杆菌的药敏情况,并用酶粗提物头孢西丁三维实验检测AmpC酶。结果32株细菌产AmpC酶(占11．7％),其中阴沟肠杆菌13株(占30．2％)、产气肠杆菌2株(占22．2％)、不动杆菌6株(占21．4％)。274株菌对IPM、AK、CIP、FEP、CN、SXT、CAZ、ATM、CRO、PIP的药物敏感率从高到低依次为：89．4％、78.8％、69．3％、55．5％、45．9％、39．1％、36．9％、31．4％、30．3％、18．2％。结论革兰阴性杆菌的耐药状况严重,检测AmpC酶有助于临床抗菌药物的选用。     

常见两种革兰阴性杆菌的分布及耐药性分析

目的:分析我院院内常见两种革兰阴性杆菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的分布状况及其耐药特点,为临床细菌感染分析和合理使用抗生素提供依据。方法:对2007年12月~2008年9月我院门诊及住院患者标本,严格按操作规程采集、接种、培养、分离细菌并以ATB微生物鉴定系统鉴定到种,和ATB微生物药敏系统进行药敏试验并进行初筛试验。按照NC-CLS(2006)推荐的ESBLs确证试验对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs确证检测。WHONET 5.4软件进行数据分析,耐药率的比较采用χ2检验。结果:共分离出416株革兰阴性杆菌,其中:大肠埃希菌291株,肺炎克雷伯菌125株,以呼吸内科和泌尿科感染多见。大肠埃希菌对头孢噻吩、头孢噻肟、头孢呋新、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率分别为61.8%、56.7%、59.1%、19.2%、12.4%和34.4%,肺炎克雷伯菌对头孢噻吩、头孢噻肟、头孢呋新、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率分别为63.2%、36.8%、60.8%、36.8%、25.6%、12%和15.2%。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶株检出率分别是为55.3%和54.4%,对哌拉西林、替卡西林、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢呋新、阿米卡星、庆大霉素的耐药率显著高于非产酶株(P<0.01)。结论:大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率较高,分别为55.3%和54.4%。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产ESBLs的主要菌株,产ESBLs菌株的耐药性明显高于非产ESBLs菌株。治疗产ESBLs菌引起的感染最好选择亚胺培南和美罗培南,不宜选择青霉素类、头孢菌素类抗生素及氨曲南。