Megalin mRNA在胆石症病人胆囊上皮细胞的表达变化及其意义

目的 探讨和分析Megalin mRNA在胆石症病人胆囊上皮细胞的表达变化及其意义.方法 检测62例胆结石和38例胆囊息肉病人胆囊内皮细胞的Megalin mRNA表达水平,应用RT-PCR分析Megalin的表达.结果 发现胆结石病人胆囊上皮细胞表达Megalin mRNA水平远低于胆囊息肉病人的水平,同时检测两组病人血清胆固醇水平的结果 显示血清胆固醇无差别.结论 胆囊上皮吸收胆固醇机制可能在胆结石的病理发生过程中有重要的意义.     

肾小管上皮细胞转分化与肾小管间质纤维化

肾小管上皮细胞转分化（EMT）是肾间质纤维化（R1F）的重要发病机制之一，TGF—β1等细胞因子可促进EMT从而促进RIF形成，而HGF、BMP-7可抑制EMT而减轻肾纤维化。本文重点介绍EMT在肾间质纤维化中的病理学意义、分子机制及治疗干预的研究。     

法舒地尔对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 观察法舒地尔对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响并探讨其机制。 方法 将实验性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、法舒地尔治疗组。3个月后处死动物,PAS染色法观察肾小球病理变化,Masson染色法观察肾间质病理变化;免疫组化观察肾脏皮质ROCKⅠ、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的变化和β连环蛋白（β-catenin)的细胞定位改变;Western印迹法观察肾脏皮质p-MYPT1、α-SMA、E-cadherin、胞膜β-catenin蛋白的变化;实时定量PCR法观察ROCKⅠ、E-cadherin和总β-catenin的mRNA变化。 结果 法舒地尔治疗可改善肾间质纤维化状况。与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肾皮质内p-MYPT1、α-SMA蛋白表达增强（均P < 0.01）;E-cadherin、胞膜β-catenin的蛋白表达减弱（均P < 0.01）;ROCK1、总β-catenin mRNA表达增强（均P < 0.01）;E-cadherin mRNA表达减弱（P < 0.01）。与糖尿病组相比,治疗组p-MYPT1、α-SMA蛋白表达减弱 （均P < 0.01）;E-cadherin、胞膜β-catenin的蛋白表达增强（均P < 0.05）;ROCK1、β-catenin mRNA表达减弱（均P < 0.01）;E-cadherin mRNA表达增强（P < 0.01）。 结论 法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性减轻糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化和肾间质纤维化,该作用可能与法舒地尔恢复肾小管上皮细胞的黏附特性与紧密连接复合体有关。     

肾小管上皮细胞模拟缺血缺氧时黏附力的改变

目的：直接测定模拟缺血缺氧时肾小管上皮细胞－基底膜黏附力。方法：用细胞流变学新手段－微管吸吮技术,对培养肾小管上皮细胞在模拟单纯缺血、单纯缺氧和同时缺血缺氧时与人工基底膜之间的黏附力进行测定。结果：模拟缺血缺氧时肾小管上皮细胞与人工基底膜之间黏附力较正常时明显降低（P＜0．001）.结论：微管吸吮技术是定量研究肾小管上皮细胞黏附力及其改变的有效手段。肾小管上皮细胞与基底膜直接黏附力下降验证了国内外传统研究对其黏附力改变的间接推测。     

缬沙坦抑制人类肾小管上皮细胞转分化的初步研究

目的：探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂缬沙坦（ｖａｌｓａｒｔａｎ,Ｖａｌ）在人类肾小管上皮细胞系（ＨＫＣ）转分化中的作用。方法将培养的ＨＫＣ细胞分为（１）无血清培养培养对照组;（２）阳性对照组（ＭＣＰ－１＋ＡＡＩ组）：培养液中加入马兜铃酸－Ｉ（ＡＡＩ）和单核细胞趋化蛋白－１）ＭＣＰ－１）：（３）Ｖａｌ组：培养液中加入Ｖａｌ;（４）ＭＣＰ－１＋ＡＡＩ＋Ｖａｌ组。应用间接酶标免疫组织化学方法（ＩＥＩ）检     

肾小管上皮细胞表型转化在肾小管间质纤维化中的作用

肾小管间质纤维化(tubulointerstitial fibrosis,TIF)几乎是所有慢性肾脏疾病进行性发展的共同通路[1],是导致终末期肾病(ESRD)的主要病理基础.TIF以肾小管萎缩及消失、肾间质慢性炎细胞浸润、肾间质纤维化为特征[2].大量的研究表明,在各种原因引起的慢性肾脏疾病中,肾间质纤维化都可作为肾功能恶化的一个十分准确的预测指标,肾间质纤维化的程度与肾功能的相关性比肾小球硬化与肾功能的相关性更为密切,故小管间质纤维化的发生机制正越来越受到人们重视.     

顺铂与肾小管上皮细胞凋亡

顺铂剂量依赖的肾毒性而限制了其临床治疗肿瘤的效果。研究发现,顺铂通过线粒体途径和死亡受体途径诱导的肾小管上皮细胞凋亡在顺铂引起的肾毒性中发挥着重要作用。     

肾小管上皮细胞转分化在肾间质纤维化中的作用

肾间质纤维化（ｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ,ＲＩＦ）几乎是所有各种肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同途径。Ｒｉｓｄｏｎ［１］、Ｓｃｈａｉｎｕｃｋ［２］、Ｓｔｒｉｋｅｒ［３］等对人类疾病中的肾脏病理性改变及试验动物肾小球损害模型进行的大量研究表明,各种慢性肾小球疾病病人的肾小球滤过率（ＧＦＲ）下降率与肾小管萎缩之间存在着显著的正相关。Ｂｏｈｌｅ［４］等分析了大量病人的肾活检标本,又一次发现间质炎症细胞浸润的程度而非小球中炎症细胞的浸润程度与肾小球疾病的ＧＦＲ下降相关［５］。…     

牛磺酸减轻碘海醇诱导的人肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨牛磺酸能否减轻碘海醇导致的HK-2细胞（人近端肾小管上皮细胞）损伤及作用机制。 方法 不同碘浓度（25、50、100、125 gI/L）的碘海醇作用HK-2细胞6 h;碘浓度为100 gI/L的碘海醇作用HK-2细胞不同时间（2 h、4 h、6 h）,观察细胞损伤程度。选用碘海醇（100 gI/L、6 h）作为刺激组,用不同浓度牛磺酸（3、12、24 mmol/L）共孵育进行干预。细胞增殖-毒性试剂盒（CCK-8）测定细胞活力。Hoechst33342染色、荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。流式AnnexinⅤ-FITC-PI双染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性比色法观察细胞凋亡。Western印迹检测Bcl-2、Bax的表达。流式DCFH-DA细胞内标记法测定细胞内活性氧（ROS）。 结果 碘海醇呈碘浓度和时间依赖性诱导HK-2细胞活力下降、凋亡增加（P ＜ 0.05）。碘海醇（100 gI/L、6 h）导致HK-2细胞ROS升高（P ＜ 0.05）。牛磺酸呈浓度依赖性增加HK-2细胞活力,减轻凋亡。牛磺酸（3、12、24 mmol/L）干预组与碘海醇刺激组比较,细胞活力分别为（88.0±1.00）%、（91.33±0.58）%、（95.67±1.52）%比（76.67±1.53）%（均P ＜ 0.05）;细胞凋亡率分别为（8.84±1.75）%、（7.86±1.82）%、（6.30±1.50）%比（11.98±0.39）%（均P ＜ 0.05）;caspase-3的活性分别为（1.33±0.10）、（1.27±0.0）、（1.10±0.04）比（1.42±0.1）（均P ＜ 0.05）。牛磺酸上调HK-2细胞Bcl-2表达,降低了细胞内ROS的升高（均P ＜ 0.05）。 结论 碘海醇可致HK-2细胞凋亡增加。氧化应激参与了HK-2细胞损伤。牛磺酸通过减轻细胞内氧化应激、促进Bcl-2表达上调,减轻碘海醇诱导的HK-2细胞凋亡和损伤。     

改良的大鼠近端肾小管上皮细胞分离纯化方法

目的　建立纯度高、操作简便的大鼠近端肾小管上皮细胞分离纯化方法。 方法 Wistar大鼠无菌取肾前先心脏抽血替代原位肾脏灌注,分离肾皮质,经Ⅰ型胶原酶消化后用45% Percoll分离液制备细胞悬液直接连续密度梯度离心。所得细胞用含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基原代培养并传代,根据细胞形态、细胞角蛋白18（CK18）和水通道蛋白1（AQP1）免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶化学染色进行鉴定。 结果 此简化方法获得的肾小管细胞中肾小球掺杂明显减少,培养4～5 d后细胞融合长满,呈典型上皮样细胞的鹅卵石状,其CK18、AQP1免疫细胞化学染色及碱性磷酸酶化学染色几乎均呈阳性,证实所培养细胞为近端肾小管上皮细胞。 结论 改良后的分离纯化方法可获得大量高纯度近端肾小管上皮细胞,操作简便。     

糖尿病肾病早期白蛋白尿与Megalin的表达变化

目的:通过链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠Megalin的表达变化,了解糖尿病肾病时肾小管重吸收白蛋白的能力与Megalin的关系.方法:将SD大鼠分为正常对照组(N组)和糖尿病肾病组(DN组).DN组以55 mg/kg体重的剂量一次性腹腔注射1%STZ,N组一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液.在实验的2、4、6周分别处死两组的5只大鼠,并测量大鼠的血糖、24 h尿量、24 h尿白蛋白量、24 h尿肌酐浓度、血清肌酐和尿素氮、体重和肾脏重量,计算肌酐清除率和肾脏肥大指数,应用免疫组化和RT-PCR技术观察各组大鼠2、4、6周的肾小管Megalin表达.结果:第2周DN组的Megalin表达水平与N组相比有显著下降(P＜0.05),与第6周比较DN组Megalin表达逐渐降低,且有统计学差异(P＜0.05).结论:STZ腹腔注射所致大鼠糖尿病肾病的24 h白蛋白尿增加与肾小管近端的Megalin表达呈显著负相关关系.Megalin表达的降低不是一过性,也不能自行恢复,不加干预会随着病程延长而逐渐加重.     

瘦素对人肾小管上皮细胞表型转化及纤维连接蛋白表达的影响

目的:通过观察瘦素(leptin)刺激对人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,探讨瘦素对HK-2细胞转分化的作用。方法:将体外培养的HK-2细胞分为对照组和不同浓度瘦素作用组。倒置显微镜下观察HK-2细胞形态学变化;实时荧光定量RT-PCR法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和FN mRNA的表达水平;免疫细胞化学法检测HK-2细胞表达α-SMA的阳性细胞百分数;酶联免疫吸附法(ELISA)检测HK-2细胞培养液上清中FN的表达。结果:分别用50、100、200 ng/ml瘦素作用HK-2细胞48 h后,(1)HK-2细胞逐渐由椭圆形变成长梭形,类似肌成纤维细胞的形态;(2)RT-PCR结果表明,瘦素作用可以下调E-cadherin mRNA的表达,同时上调α-SMA、FN mRNA的表达。(3)免疫细胞化学结果表明,对照组HK-2细胞几乎不表达α-SMA,随着瘦素作用浓度的增加,α-SMA阳性的HK-2细胞百分数逐渐增多;(4)ELISA结果表明,对照组HK-2细胞有基础水平的FN分泌,各瘦素作用组上清液中FN的表达水平较对照组显著增加,且呈一定的剂量依赖关系。结论:瘦素可诱导肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞,分泌细胞外基质,从而可能参与肾间质纤维化的发生发展。     

红花黄色素对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害的作用

目的:探讨红花黄色素对马兜铃酸(aristolochic acid,AA)导致人肾小管上皮细胞系(HK-2)损害的保护作用。方法:以90%DMEM培养液加10%小牛血清培养HK-2细胞,加入不同浓度的红花黄色素和AA(终浓度为20μg/m)培养48 h。实验分为4组:(1)对照组:培养液不加AA;(2)AA组:在培养液中加入AA;(3)红花黄色素低浓度治疗组:在培养液中加入AA和红花黄色素(终浓度为50 mg/L);(4)红花黄色素高浓度治疗组:在培养液中加入AA和红花黄色素(终浓度为100 mg/L)。采用MTT法观察HK-2细胞活性;透射电镜观察细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;采用实时定量荧光PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3 mRNA的表达情况。结果:AA组HK-2细胞的活性显著抑制;治疗组细胞活性明显增加,而且随着红花黄色素浓度的增加其作用愈趋明显。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加(P<0.05),红花黄色素治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3 mRNA的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3 mRNA的表达较AA组降低。结论:红花黄色素可明显提高HK-2细胞抵抗AA导致的细胞损伤,保护HK-2细胞。     

人近端肾小管上皮细胞黏附分子CD146表达对细胞凋亡的影响

目的：探讨人近端肾小管上皮细胞（HK-2）黏附分子CD146表达与细胞凋亡的关系。方法：体外培养的HK-2N胞在不同浓度葡萄糖和不同浓度甘露醇刺激下分别作用24h、48h、72h,经流式细胞仪（FCM）检测各组HK-2细胞CD146的表达和凋亡率的变化。结果：正常糖浓度下HK2微弱表达CD146,且延长作用时间对表达无影响;随糖浓度升高,CD146表达上调,细胞凋亡率也增高,延长刺激时间可促进CD146表达和细胞凋亡（P〈0．05）;当糖浓度达到40mmol／L,刺激时间达到48h,CD,46表达显著升高（P〈0．05）,HK-2细胞凋亡率也显著上升（P〈0．05）;甘露醇对HK-2细胞CD146表达和细胞凋亡的促进作用较葡萄糖的作用显著降低（P〈0．01）。结论：HK-2组成性表达CD146,高糖诱导CD146表达,甘露醇诱导作用较高糖弱;高糖诱导HK-2凋亡,其凋亡作用与CD146表达增高联系密切,提示黏附分子CD146对细胞生存有重要影响。     

止消通脉宁干预TGF-β1诱导的HK-2细胞VEGF mRNA的表达

目的:通过观察止消通脉宁药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110ng/ml)、空白血清对照组(TGF-β110ng/ml+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110ng/ml+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110ng/ml+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110ng/ml+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24h后,荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,VEGF mRNA的表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁药物血清干预后,VEGFmRNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制的可能与调节纤维化细胞因子VEGF的mRNA表达有关。     

FSGS患者尿蛋白对肾小管上皮细胞活力及转分化的影响

目的：探讨局灶性-节段性肾小球硬化症（focal segmental glomerulosclerosis,FSGS）患者尿蛋白对肾小管上皮细胞（TECs）活力及转分化的影响。方法：用硫酸铵沉淀法提取FSGS患者尿液中的总蛋白成分,应用不同浓度尿蛋白处理体外培养人近端肾小管上皮细胞,然后应用全自动生化分析仪检测不同浓度尿蛋白刺激后HK-2细胞LDH值并计算其释放率、免疫细胞化学（ICC）法检测不同浓度尿蛋白刺激后HK-2细胞E-钙黏蛋白（e—cadherin）的表达水平和Western blotting法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（Q—SMA）蛋白表达水平。结果：所提取的尿蛋白主要成分为白蛋白、转铁蛋白和IgG等,分别占59．3％、15．3％和13．8％;肾小管上皮细胞LDH释放率和α—SMA蛋白的表达水平随尿蛋白浓度的升高而升高;E—cadherin的表达水平随着尿蛋白浓度的升高而下降。结论：FSGS尿蛋白可通过诱导肾小管上皮细胞损伤和转分化而促进肾小管-间质纤维化。     

Renal Tubular Epithelial Cell Self-Injury Through Fas/Fas Ligand Interaction Promotes Renal Allograft Injury

Tubular epithelial cells (TECs) coexpress Fas and Fas ligand (FasL), which could influence renal allograft injury. While TECs can resist apoptosis by Fas antibody, TEC apoptosis by contact with adjacent TECs has not been studied. Fas expression increased in TECs with cytokine treatment (IFN-gamma, TNF-alpha) while abundant FasL levels were not altered. Apoptosis (Annexin-V, DNA fragmentation) occurred in cytokine-treated TECs monolayers from C3H-HeJ mice by 24 h, but was absent in similarly treated TECs from Fas-deficient (lpr) or FasL-mutant (gld) mice, suggesting that 'self injury' occurred through Fas/FasL. Membrane labeling of TECs in cocultures confirmed that FasL-bearing TECs induced apoptosis when in contact with Fas-bearing TECs. Culturing TECs with allogeneic C57BL/6 (H-2b) splenocytes resulted in apoptosis and elimination of C3H-HeJ TECs by 48 h, with enhanced survival and reduced apoptosis using lpr or gld TECs. In a renal allograft model, survival of C57BL/6 recipients was greater (p < 0.05) and renal function improved (p < 0.001) using C3H-lpr or C3H-gld (H-2 k) donor kidneys compared with C3H-HeJ kidneys. These data demonstrate for the first time that cytokine-activated TECs can injure TECs through expression of functional FasL and Fas. We suggest that inhibition of TEC-TEC 'self injury' may be a novel strategy to augment renal allograft survival.     

小G蛋白Rho/Rock信号转导通路与肾小管上皮细胞转分化

上皮细胞在特定生理和病理情况下向间充质细胞转分化的现象是肿瘤及慢性炎症性疾病中的重要细胞生物学现象.近年来研究发现,细胞内信号转导途径中的MAPK通路、RhoGTP酶/Rho激酶系统(Rho/Rock信号转导通路)、Src激酶、PI3激酶和Smad通路参与调控上皮细胞转分化过程.肾小管上皮细胞在病理条件下可转分化为肌成纤维细胞,其细胞内信号转导机制虽已有初步研究,但尚所知甚少.本文就Rho/Rock信号转导通路在肾小管上皮细胞转分化过程中的作用进行综述.