应用RNAi沉默STAT3基因促裸鼠移植瘤细胞凋亡及对Bax/Bcl 2基因表达的影响

目的应用RNAi技术沉默信号转导子与转录活化子3(STAT3)基因,探讨其对人乳腺癌裸鼠移植瘤的细胞凋亡及其对Bax/Bcl2基因表达的影响。方法于雌裸鼠皮下种植MCF7细胞,肿瘤长至一定大小时,随机分为盐水对照(A)组、空质粒对照(B)组及实验(C)组。于肿瘤局部分别注射盐水、psilencer1.0U6空质粒和psilencer1.0U6STAT3siRNA重组质粒。当A组肿瘤长至足够大时处死全部动物,取肿瘤,测其大小及重量,行HE及免疫组化染色,同时用Westernblot检测STAT3,Bax,Bcl2基因的表达水平。结果C组肿瘤瘤块的体积和重量明显小于A,B组(P<0.01)。免疫组化及HE显示C组肿瘤中心区出现大面积细胞坏死及细胞凋亡征象,STAT3免疫组化呈阴性,而A,B组无此现象。Westernblot显示C组STAT3的表达明显低于A,B组(P<0.01),而Bax的表达明显高于A,B组(P<0.05),各组Bcl2的表达水平差异无显著性(P<0.05)。结论应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人乳腺癌裸鼠移植瘤中STAT3的表达,同时引起Bax基因的表达上调,导致细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。     

糖原合酶激酶3β抑制剂对前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 研究糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)抑制剂抗前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的效用. 方法 建立前列腺癌PC-3和LNCaP/Bcl-xL细胞株裸鼠移植瘤模型,观测GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl)及SB216763腹腔内给药后移植瘤重量及体积的变化.同时通过BrdU掺入的免疫组化染色探讨移植瘤的增殖状态,TUNEL染色比较对移植瘤细胞凋亡的影响. 结果 LiCl及SB216763均可明显抑制移植瘤生长(P＜0.05).与对照组相比,LiCl给药组细胞BrdU标记明显降低(P＜0.05),TUNEL染色差异无统计学意义. 结论 抑制GSK-3β活性可抑制前列腺癌裸鼠移植瘤细胞在体内的生长,其中LiCl可能通过干扰癌细胞DNA复制发挥作用.     

人内皮抑素基因转染对Hep3B肝癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的研究腺相关病毒转染人内皮抑素基因对肝癌细胞体内致瘤作用的影响。方法用含人内皮抑素基因的重组腺相关病毒(rAAV2/ES)体外转染人肝癌细胞Hep3B,以空病毒(AAV2)转染作阴性对照,RT-PCR方法检测ES在mRNA水平的表达。将转染细胞接种裸鼠,通过ELISA方法检测裸鼠血液中人内皮抑素的的浓度。观察内皮抑素对移植瘤的生长抑制作用。结果RT-PCR结果显示腺相关病毒可介导内皮抑素基因高效转染Hep3B细胞;rAAV2/ES转染细胞接种裸鼠后内皮抑素的表达随时间逐渐升高,在第4周达到最高浓度(115·79±8·70)ng/ml;rAAV2/ES转染组8只裸鼠中6只成瘤,成瘤时间为(26·80±6·42)d,明显长于对照组(17·17±4·17)d(P<0·05);对裸鼠移植瘤检测显示瘤体重量和瘤内微血管密度(MVD)分别为(0·36±0·22)g、(3·50±1·05)个/视野,明显低于对照组(1·54±0·48)g、(12·67±1·97)个/视野(P<0·01)。结论腺相关病毒介导人内皮抑素基因转染可有效抑制Hep3B细胞在裸鼠体内的生长。     

RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨RNA干扰沉默STAT3基因表达对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用.方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建重组质粒（pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3）,转染SKOV3细胞进行体外研究;采用Western blot、实时聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学技术检测重组质粒对STAT3基因表达的作用;MTT法检测重组质粒对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）及吖啶橙染色检测重组质粒诱导的细胞凋亡.结果 （1）免疫组织化学技术证实卵巢癌细胞株SKOV3及癌组织中STAT3呈高表达;（2）成功构建pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒,并成功转染SKOV3细胞;（3）MTT法证实重组质粒抑制SKOV3细胞的增殖,流式细胞技术证明重组质粒诱导细胞凋亡;（4）RT-PCR与Western blot分析表明,重组质粒在mRNA及蛋白质水平特异的抑制STAT3的表达;（5）STAT3基因表达的下调抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结论 pSilencer 1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人卵巢癌细胞SKOV3中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡.     

雄激素治疗对人前列腺癌（PC－3m）裸鼠可移植瘤中AC和GC活性变化的实验研究

本研究利用不同浓度的丙酸睾丸素（ＴＰ）治疗雄激素非依赖性前列腺癌细胞株（ＰＣ－３ｍ）裸鼠可移植瘤，并观察了其生长及瘤组织中的腺苷酸环化酶（ＡＣ）和鸟苷酸环化酶（ＧＣ）的活性变化。结果发现可移植瘤生长呈双相效应，并伴有相应的ＡＣ活性水平的变化。其中ＴＰⅡ组的瘤重明显高于对照组，ＡＣ和ＧＣ活性无变化；ＴＰ　Ⅲ组的瘤重明显低于对照组，ＡＣ活性明显升高，为１３．８４７±１１．３３５ｐｍｏｌ·Ｍｉｎ（－１）·ｍｇ蛋白（－１）。本研究结果为临床利用高水平雄激素治疗晚期复发的前列腺癌提供了实验依据，同时对高水平雄激素抑制前列腺癌生长及其与ＡＣ和ＧＣ的关系进行了讨论。     

腺病毒载体介导的PML生长抑制因子对前列腺癌细胞生长和致瘤能力的抑制效果

为探讨用腺病毒载体携带ＰＭＬ（ＰｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａ）基因作为前列腺癌基因治疗的可能性，应用重组人携带ＰＭＬ基因腺病毒（ＡｄＰＭＬ）感染培养的前列腺癌细胞，观察表达ＰＭＬ蛋白的癌细胞与对照组癌细胞的体外生长和裸鼠体内致瘤能力变化，对荷瘤裸鼠瘤体周围注射ＡｄＰＭＬ，观察治疗组和对照组肿瘤生长的变化。结果显示，感染ＡｄＰＭＬ的前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力明显下降，荷瘤裸鼠瘤体周围注射ＡｄＰＭＬ后肿瘤生长速度明显减慢。证实了ＰＭＬ是一种生长抑制因子，提示其可能被应用于前列腺癌的基因治疗研究     

胞嘧啶脱胺酶/5-氧胞嘧啶基因系统对前列腺癌细胞系生长的抑制作用

目的　探讨胞嘧啶脱胺酶 (cytosinedeaminase,CD) / 5 氟胞嘧啶基因 (5 FC)基因系统对体外前列腺癌细胞生长的作用。　方法　经基因重组并纯化的腺病毒AdCMVCD分别感染体外前列腺癌细胞DU 14 5、RM 1,观察CD/ 5 FC系统对细胞的生长抑制作用和旁观者效应。　结果　CD/5 FC系统能明显抑制体外前列腺癌细胞系DU14 5、RM 1的生长 ,经 10 0m .o .i(multiplicityofinfec tion)AdCMVCD感染并加入 15 .5mmol/L 5 FC后 4、6d ,细胞抑制率高于 97% ;同时此系统具有很强的旁观者效应 ,当受染细胞混合比例为 10 %时 ,即有 >75 %的细胞被杀死。　结论　CD/ 5 FC系统是一种有效的基因治疗方法 ,旁观者效应为此系统在实体肿瘤中的应用提供了可行性。     

索拉非尼对前列腺癌PC3细胞的抑制作用的研究

目的 观察索拉非尼(Sorafenib)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞的抑制作用.方法 用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌PC3细胞24h、48h和72h后,用MTT法检测Sorafenib对PC3细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Western blot检测不同浓度Sorafenib处理72h后PC3细胞内ERK和Bcl-2的表达.结果 Sorafenib能显著抑制PC3细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性.PC3细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系(P<0.01);Sorafenib处理PC3细胞72h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论 Sorafenib抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长.     

前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达的意义

目的探讨前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达及临床意义.方法采集44例中晚期前列腺癌（PCa）患者、20例良性前列腺增生（BPH）患者及18例健康男子外周血,分离单个核细胞,提取总RNA.RT-PCR琼脂糖电泳法检测DD3 mRNA,以β-actin为内参照,以出现311-bp和184 bP片段为DD3 mRNA阳性,仅出现184 bp片段为DD3 mRNA阴性. 结果 20例BPH患者和18例健康青年男子外周血标本中均无DD3 mRNA表达,44例PCa血标本中DD3mRNA表达13例（29.5%）.B期、C期及D期患者DD3 mRNA阳性率分别为0%（0/3）、18%（2/11）及37%（11/30）,各期之间差异无统计学意义（P＞0.05）.PCa伴骨转移患者外周血中DD3 mRNA阳性率为44%（10/22）,而无骨转移者其阳性率为14%（3/22）,组间差异有统计学意义（P＜0.05）.PCa未治疗组、去势治疗组的DD3 mRNA阳性率分别为64%（7/11）、18%（6/33）,组间差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 PCa患者外周血中可检测到DD3 mRNA表达,DD3 mRNA可望作为诊断PCa血行转移和治疗监测的良好标志物.     

PML生长抑制因子过表达抑制前列腺癌细胞生长和致瘤能力的实验研究

为探讨ＰＭＬ（Ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅａｋｅｍｉａ）生长抑制因子对人前列腺癌细胞的作用，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导基因转染技术将ＰＭＬ基因和Ｇ４１８抗性基因联合导入体外培养的人前列腺癌细胞，经Ｇ４１８筛选、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测出ＰＭＬ蛋白过表达细胞克隆，经体外生长抑制试验和裸鼠体内致瘤能力试验，观察ＰＭＬ过表达对前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力的影响。结果证实ＰＭＬ基因被成功地导入前列腺癌细胞中并得到高效表达。过表达ＰＭＬ蛋白的细胞体外生长能力和裸鼠体内致瘤能力明显低于对照细胞。提示ＰＭＬ生长抑制因子过表达能够有效地抑制前列腺癌细胞的体外生长和裸鼠体内的致瘤能力。     

α-甲基-辅酶A消旋酶在前列腺癌中的表达及意义

目的　探讨α 甲基 辅酶A消旋酶 (P5 0 4S)表达在国人前列腺癌病理诊断中的价值。　方法　对 4 2例前列腺癌、18例前列腺上皮内瘤 (PIN)和 2 5例良性前列腺增生 (BPH)标本进行P5 0 4S、高分子质量角蛋白 (34βE12 )和血管内皮生长因子 (VEGF)免疫组化染色 ,观察比较分析染色范围和强度。　结果　前列腺癌标本P5 0 4S染色阳性 33例 (79% ) ,染色强度为中等到强阳 ,明显高于BPH和PIN ,癌旁组织均为阴性 ;6例 (33% )PIN标本 ,2例 (8% )BPH标本有少量细胞微弱表达 ,其余均为阴性。BPH标本具有完整基底层细胞 ,34βE12 呈阳性表达 ;PIN腺体基底层细胞 34βE12 表达阳性 ,相对BPH强度减弱 ;4 0例前列腺癌腺体无基底层细胞 ,仅 2例有不完整的基底层呈弱表达。BPH、PIN和前列腺癌标本VEGF均呈阳性表达 ,各组阳性细胞数和染色强度相差不明显。　结论　P5 0 4S诊断前列腺癌敏感性高、特异性好 ,结合 34βE12 检测可提高前列腺癌的检出率。     

重组免疫毒素scFv-psm-ETA对人前列腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的　探讨重组免疫毒素scFv psm ETA对人前列腺癌细胞生长的抑制作用。　方法制备具有良好器官特异性的免疫毒素scFv psm ETA,从抗前列腺特异膜抗原(PSM)单抗杂交瘤细胞中克隆抗PSM单抗重、轻链可变区基因,与切去细胞结合区的ETA基因相连,构建成表达scFv psm ETA的质粒pSW200 psm,转化E.coli株CC118,表达有生物活性的融合蛋白scFv psm ETA,经M1FLAG柱纯化,检测其体外对前列腺癌细胞的细胞毒杀伤活性和在荷瘤裸鼠体内的抑瘤作用。　结果　制备的scFv psm ETA免疫毒素能特异性地与PSM高表达的LNCaP细胞结合,在浓度为100 ng/ml时对80%的LNCaP细胞有体外细胞毒杀伤作用;荷LNCaP前列腺癌裸鼠治疗组及对照组肿瘤大小分别为153mm3 及272mm3 (P<0. 01),显示scFv psm ETA对荷瘤裸鼠有抑制肿瘤生长作用。　结论　重组免疫毒素scFv psm ETA对PSM高表达的前列腺癌细胞LNCaP有体外细胞毒杀伤及体内抑瘤作用。     

E-cadherin在前列腺癌细胞中的表达及与预后的关系

目的　探讨上皮细胞粘附因子Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌预后的关系。　方法　采用免疫组织化学染色法检测４２ 例前列腺癌标本Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 的表达。　结果　４０ ．５ ％ 表达阳性，４２ ．８ ％ 表达不同程度下降，１６．７ ％ 表达阴性。肿瘤恶性程度越高，其表达异常所占比率越高。确诊时即已发现肿瘤转移和随访中相继出现转移的患者Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 表达下降比率均高于全组，分别为８３ ．３ ％ 和７７ ．７％ 。　结论　Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 在前列腺癌组织中表达异常的比率随着肿瘤分级的升高而增加，Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 的表达状况对前列腺癌的预后有一定参考价值     

端粒酶与前列腺癌及其生物学行为的关系

目的 探讨端粒酶（ＴＥ）与前列腺癌（ＰＣａ）及其生物学行为的关系。方法 应用端粒重复片段扩增法（ＴＲＡＰ）法,检测３９例ＰＣａ组织,１５例前列腺增生（ＢＰＨ）组织及１０例正常前列腺（ＮＰ）组织中的ＴＥ活性,并比较ＴＥ活性水平与ＰＣａ病理分化程度,临床分期及转移情况的关系。     

人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。 　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具     

蛙皮素对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞系的作用

目的观察蛙皮素(bombesin,BBS)对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞系的作用;检测PC-3细胞BBS受体及其 mRNA的表达。方法①MTT法检测BBS对PC-3细胞增殖的影响;②检测BBS处理后PC-3细胞贴壁率;③Millcell小室实验检测BBS对PC-3细胞播散能力的影响;④免疫荧光组织化学结合激光扫描共聚焦显微镜检测BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达[1];⑤用Fluo-3/AM荧光标记技术检测不同浓度BBS处理后PC-3细胞[Ca2 ]i浓度[2]。⑥免疫组化方法检测PC-3细胞中蛙皮素受体(BBS-R)蛋白表达;⑦利用逆转录聚合酶链反应(Rt-PCR)观察PC-3细胞BBS-R mRNA的表达。结果经BBS处理的PC-3细胞吸光度A值增高,细胞贴壁率增高,细胞播散能力提高,并呈现一定浓度依赖性;10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达;BBS提高PC-3细胞[Ca2 ]i浓度;PC-3细胞中BBS-R蛋白表达呈阳性;Rt-PCR产物与预期的BBS-R的cDNA分子量完全相符。结论BBS可通过特异性受体介导致PC-3细胞系增殖、粘附、播散、伪足形成。一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2 ]i浓度以及CK表达进而影响细胞骨架形态。