蒙古黄芪和膜荚黄芪水溶性蛋白表达

目的:蒙古黄芪和膜荚黄芪都为药用黄芪,二者亲缘关系近,成分相似,药用价值尚未区分。该研究旨在建立蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱,了解两种黄芪之间存在的差别。方法:样品采用水超声提取和丙酮沉淀的方法得到黄芪水溶性蛋白成分,质谱级胰酶酶解后的肽段经nano ESI-LC-MS/MS分析,采用Proteome Discoverer 1. 4软件比对豆科蛋白数据库鉴定蛋白,再使用非标记定量软件SIEVE分析蒙古黄芪与膜荚黄芪水溶性蛋白质表达的差异。最后运用生物信息学方法分析2种黄芪共有蛋白的分类、分子功能、参与的生物过程和信号通路。结果:蒙古黄芪鉴定特异性蛋白有920个,膜荚黄芪鉴定的特异性蛋白有717个,2种黄芪中共同表达的蛋白有472个,其中二者的差异表达蛋白有21个,如PR-10蛋白,NDK-1蛋白,谷蛋白A2,磷脂酶D等蛋白在两种黄芪中差异表达。蒙古黄芪高表达蛋白14个,膜荚黄芪高表达蛋白7个。结论:蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱存在显著差异,特异性蛋白、差异表达蛋白和共同表达的蛋白可为今后两种黄芪的鉴别、药理作用机制的研究和寻找作用靶点提供参考。     

蒙古黄芪和膜荚黄芪种子酯酶同工酶的研究

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus m embrana-ceus(Fisch·)Bge·var·mongholicus(Bge·)Hsiao或膜荚黄芪A·m embranaceus(Fisch·)Bge·的干燥根[1]。二者的化学成分有差异导致其药效不同[2],蒙古黄芪的药效更佳,膜荚黄芪不仅药效,而且栽培管理技术、产值均不如蒙古黄芪[3]。二者在植物形态特征和生物学特征方面有明显区别,但其种子外形比较相近,肉眼难以区别。本研究利用种子酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳快速简便的鉴别了....     

基于人工胃酸水解的黄芪糖指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪鉴别

目的:模拟人工胃液条件处理不同种质资源蒙古黄芪(移栽芪和野生芪)和膜荚黄芪(移栽芪和野生芪)细胞可溶性多糖及糖缀合物,获得一系列PACE糖指纹图谱,用于黄芪的种质资源鉴别和评价。方法:利用SMICA软件对数据进行主成分分析及t检验,获得区分不同种质资源黄芪的差异性糖组分。结果:蒙古黄芪中移栽芪和野生芪分离现象明显,且多糖酸解产物中的四糖和六糖可以作为区分生长方式的主要差异性糖片段,野生蒙古黄芪中四糖的含量高于蒙古移栽芪中含量,移栽蒙古黄芪中六糖的含量高于野生芪中含量;三糖和四糖可以作为区分野生蒙古黄芪与野生膜荚黄芪的主要差异性片段;五糖和六糖可以作为区分移栽蒙古黄芪与移栽膜荚黄芪的主要差异性片段。结论:人工胃酸降解的多糖产物能很好的鉴别黄芪种属(野生蒙古黄芪与野生膜荚黄芪、移栽蒙古黄芪与移栽膜荚黄芪),生长方式(移栽蒙古黄芪和野生蒙古黄芪)。本研究为黄芪药材的品质评价奠定了基础。     

药用黄芪基因组大小的研究

黄芪是一种著名的传统中药材,其包括蒙古黄芪和膜荚黄芪,本研究旨在检测蒙古黄芪、膜荚黄芪的基因组大小。实验选取蒙古黄芪和膜荚黄芪的新鲜叶子为实验材料,大豆品种William 82为标准植株,用LB01裂解液处理叶子,应用流式细胞仪测定蒙古黄芪、膜荚黄芪、William 82样品的PI发射的荧光强度,分别比较蒙古黄芪、膜荚黄芪峰与William 82的荧光强度均值的倍数关系,进而分别计算出蒙古黄芪的基因组大小约为1.46 Gb,膜荚黄芪的基因组大小约为1.52 Gb。本研究探索了流式细胞术测定黄芪基因组大小的方法,并发现膜荚黄芪的基因组大小大于蒙古黄芪的基因组大小,从基因组的角度进一步揭示了蒙古黄芪和膜荚黄芪在生物学上的差异,该研究也将有助于黄芪属植物确定合理的全基因组测序策略。     

膜荚黄芪和蒙古黄芪的SSR鉴定

目的:分析蒙古黄芪转录组序列中的SSR位点,设计引物并对膜荚黄芪和蒙古黄芪进行鉴定。方法:对蒙古黄芪根和叶进行转录组测序、从头组装,利用MISA软件搜索SSR位点并设计引物,随机选取110对引物对蒙古黄芪和膜荚黄芪进行鉴定。结果:蒙古黄芪根、叶转录组共获得74 383条unigene,平均长度781 bp。在长度大于1 kb的18 040条序列中检索到5 640个SSR位点,选取其中110对SSR引物对膜荚黄芪和蒙古黄芪进行鉴定,发现引物CL609在10个膜荚黄芪样品中均能扩增出约700 bp的特异条带,而蒙古黄芪无此条带。结论:蒙古黄芪转录组序列的SSR标记可用于膜荚黄芪和蒙古黄芪的鉴定,这些SSR将为黄芪的遗传分析、种质鉴定、分子标记辅助育种等研究提供有利的工具。     

蒙古黄芪与膜荚黄芪特异性分子标记鉴别研究

目的:通过分析不同基原中药黄芪样本DNA序列,研究特异性鉴别蒙古黄芪与膜荚黄芪的方法。方法:通过筛选5条常用DNA条形码序列(ITS,ITS2,psbA-trnH,rbcL,matK),运用MEGA软件进行序列比对,分析可特异性鉴别蒙古黄芪与膜荚黄芪的序列及SNP位点,并设计特异性引物。结果:ITS及ITS2序列可准确区分蒙古黄芪与膜荚黄芪,发现稳定的SNP位点,蒙古黄芪在ITS序列第476位点(位于ITS2序列上游)为碱基C,而膜荚黄芪为碱基T,并设计三对特异性鉴别蒙古黄芪的引物对。结论:ITS/ITS2序列以及特异性引物可准确鉴别蒙古黄芪与膜荚黄芪,为黄芪药材的基原鉴定提供科学依据。     

干旱胁迫对黄芪叶片光合特性和叶绿素荧光参数的影响

目的:探讨干旱胁迫对黄芪光合系统和叶绿素荧光参数的影响,探寻提高植株抗旱能力的途径。方法:设计3个试验处理(CK:正常水分;T1:中度干旱;T2:重度干旱),研究干旱胁迫对光合特性和叶绿素荧光参数的影响。结果:随着干旱胁迫程度增加,蒙古黄芪叶片相对含水量和水势下降比膜荚黄芪更显著;在叶片蒸腾速率和气孔导度变化程度基本一致的情况下,蒙古黄芪的净光合速率和胞间CO_2浓度变化更显著;蒙古黄芪的表观量子效率减小程度比膜荚黄芪显著,膜荚黄芪的光补偿点和光饱和点均高于蒙古黄芪;膜荚黄芪叶片的F_v/F_m、φPSⅡ和NPQ变化程度更显著,而蒙古黄芪的qP变化更显著。结论:膜荚黄芪叶片比蒙古黄芪叶片具有更强的保水能力,在相同胁迫条件下膜荚黄芪具有更强的同化能力,更适宜于在光照强度相对较强的区域生长。     

黄芪类品种的药理研究

本文报告了六种黄芪类品种(膜荚黄芪、蒙古黄芪、多序岩黄芪、多花黄芪、梭果黄芪、东俄洛黄芪)的药理活性,在相同的实验条件下进行了比较。实验结果表明,六种黄芪类品种的药理活性,只有膜荚黄芪和蒙古黄芪在镇痛、免疫功能、利尿、降压、促进微循环、抗过氧化脂质、增加血浆中环磷酸腺苷上有显著的药理作用。提示膜荚黄芪和蒙古黄芪是六种黄芪类品种中质量最佳的。     

蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别

目的 基于特异性聚合酶链式反应（PCR）建立一种可以准确、快速鉴别蒙古黄芪、膜荚黄芪种子的方法。方法 利用叶绿体基因组综合数据库（CGIR）及IdenDSS软件分别获取蒙古黄芪、膜荚黄芪的DNA特征片段，在此基础上筛选获得蒙古黄芪与膜荚黄芪的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据该位点设计蒙古黄芪特异性鉴别引物对MG-F/MG-R和膜荚黄芪特异性鉴别引物对MJ-F/MJ-R。分别建立蒙古黄芪和膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，优化PCR反应体系，并对该方法的专属性和适用性进行考察。结果 蒙古黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MG-F/MG-R、退火温度62 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后蒙古黄芪在约220 bp处得到特异性条带，而膜荚黄芪和其他混伪品种子无条带；膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MJ-F/MJ-R、退火温度58 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后膜荚黄芪扩增得到约150 bp的条带，而蒙古黄芪及混伪品无扩增产物。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法，可以准确、快速对蒙古黄芪、膜荚黄芪进行种源鉴别，为黄芪种子的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据。     

蒙古黄芪与膜荚黄芪种子形态特征及其鉴别方法的研究

目的为黄芪种子鉴定提供方法,为按中药材GAP原则制定相关标准操作过程(SOP)提供基础研究资料。方法采用肉眼直接观察、光学显微镜观察和电子显微镜进行扫描观察,比较蒙古黄芪和膜荚黄芪两种药用黄芪的种子形态特征和微观结构;通过萌发试验,比较二者的差异。结果通过肉眼和光学显微镜观察,两种黄芪种子的形态差异不明显,在电子显微镜下观察,两种黄芪种子的萌发孔形状、种脐和种皮的微观结构有明显差异;蒙古黄芪较膜荚黄芪种子硬实率高,萌发不整齐,萌发高峰滞后。结论在电子显微镜下能够对两种黄芪种子准确地做出鉴定,种脐、萌发孔、种皮的微观结构可作为鉴别两种黄芪种子的指标;种子硬实率和萌发动态规律可用于两种黄芪种子的辅助鉴别。     

黄芪病虫害种类及为害情况调查

目的 :摸清为害黄芪的病虫害种类及其为害情况 ,为研究其防治方法提供依据。方法 :采用多点调查 ,点面结合的方式进行研究。结果 :共发现黄芪病害有7种、虫害有 49种。结论 :为害较严重的病害有白粉病和根腐病2种 ,为害较严重的虫害有小地老虎、芫菁及蚜虫等类害虫。     

不同生物源农药对内蒙古地区蒙古黄芪白粉病的田间防效研究

目的：探究不同生物源农药对蒙古黄芪白粉病的防治效果,为内蒙古地区蒙古黄芪生态种植专用生物源农药的选择提供依据。方法：在内蒙古自治区呼和浩特市和林格尔县,以清水为空白对照、25%多菌灵为阳性对照,选择市售、农业中白粉病防治效果较好的11种生物源农药（1.5%苦参·蛇床素、0.5%小檗碱、哈茨木霉菌+枯草芽孢杆菌、80%硫磺、几丁聚糖、0.3%丁子香酚、5%氨基寡糖素、大蒜素、0.5%大黄素甲醚、碳酸氢钠、解淀粉芽孢杆菌）,施药3次,以病叶率、病情指数为考察指标,研究不同药剂对蒙古黄芪白粉病的防治效果。结果：给药前不同组别间病叶率差异无统计学意义,表明试验田各组别蒙古黄芪白粉病发病情况基本一致;在第3次给药7 d后,与空白对照相比,1.5%苦参·蛇床素、80%硫磺、25%多菌灵和碳酸氢钠组的蒙古黄芪病叶率显著降低（P<0.05）,表明防治效果较好,其中1.5%苦参·蛇床素、80%硫磺与阳性对照防治效果相当,三者间防治效果差异无统计学意义;12种药剂中80%硫磺、1.5%苦参·蛇床素、25%多菌灵的平均防治效果为49.26%、33.95%、39.78%,防治效果较好,三者间防治效果差异...     

黄芪花营养成分分析与资源价值评价

目的明晰黄芪花中资源性化学成分组成,探讨其资源潜在利用价值。方法采用分光光度法对黄芪花中总多糖、水溶性蛋白进行分析评价;采用HPLC-PDA/ELSD法对黄芪花中单糖寡糖组成及含量进行分析;采用GC-MS法对黄芪花中挥发性成分及脂肪酸类成分和含量进行分析;采用UPLC-TQ-MS法对黄芪花中核苷类及氨基酸类组成及含量进行分析。结果黄芪花中含有多糖类(47.02 mg/g)、水溶性蛋白质(470.66 mg/g)、果糖(45.46 mg/g)、葡萄糖(8.71 mg/g)、蔗糖(1.05 mg/g)营养物质;检测出黄芪花中32种挥发性成分,其中以含氧衍生物为其主要组成成分;6种核苷类和15种游离氨基酸类资源性化学成分,总量分别达2.77和6.52 mg/g。在黄芪花中还检出8种脂肪酸类成分,其中肉豆蔻酸、棕榈酸和油酸为其主要组成成分。结论阐明了黄芪花中各类型营养成分的组成及含量,为黄芪花的系统利用与精细化开发提供了科学依据。     

大田不同水分条件对蒙古黄芪生长及品质的影响

目的:探讨不同水分条件对蒙古黄芪生长发育及次生代谢物含量的影响,为研究蒙古黄芪品质提升及代谢调控机制奠定基础。方法:以蒙古黄芪为试验材料,开展大田试验,设置常规水分条件(CK)、轻度干旱胁迫(A1)、重度干旱胁迫(A2)3个不同处理,考察了不同水分胁迫下蒙古黄芪的株高、根长、商品根长、根鲜重等性状,并采用高效液相色谱法分析蒙古黄芪有效成分含量的变化规律。结果:轻度干旱胁迫时,黄芪株高较对照组降低7.60%、但根长提高11.23%,根鲜重提高26.07%,商品根长提高10.40%;在重度干旱胁迫下,株高、根长、商品根长、根鲜重较对照组均降低,分别为13.67%、12.60%、17.05%、5.5%;HPLC结果显示轻度干旱胁迫下毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量比对照组高11.74%;重度干旱胁迫下毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量比对照组低19.93%。而在干旱胁迫下毛蕊异黄酮含量与对照组差异不大。结论:轻度干旱胁迫能够有效促进黄芪幼苗生长并提高黄芪药材品质,为蒙古黄芪规范化种植技术提供参考。     

蒙古黄芪中黄酮类成分抗超氧阴离子活性研究及构效关系分析

 目的研究蒙古黄芪[Astragalus membranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao]中有效成分对超氧阴离子(O^2-)的清除能力,并探讨黄酮类物质抗氧化能力与结构之间的关系。方法对蒙古黄芪中的黄酮类成分进行分离,通过化学发光法测定这些成分对邻苯三酚-鲁米诺-碳酸缓冲液(pH10.2)体系产生的超氧阴离子的清除能力。结果从蒙古黄芪中分离出12个黄酮类单体,分别为:槲皮素(Ⅰ),异槲皮苷(Ⅱ),芦丁(Ⅲ),山柰酚(Ⅳ)和异鼠李素(Ⅴ),芒柄花素(Ⅵ),芒柄花苷(Ⅶ),毛蕊异黄酮(Ⅷ),(3R)-8,2′-二羟基-7,4′-二甲氧基异黄烷(Ⅸ),2′,4′-二甲氧基-3′-羟基异黄烷-6-O-β-葡萄糖苷(Ⅹ),(6aR,11aR)-10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷(Ⅺ),(6aR,11aR)9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅻ)。结果表明,所有成分在一定浓度范围内(此浓度范围所对应的清除率在10%～90%之间),量效呈对数关系(y=alogx+b)。构效关系结果显示,化合物的分子结构决定其抗氧化活性。结论黄芪中的黄酮类成分具有明显的清除超氧阴离子活性,是黄芪抗氧化作用的主要活性成分,且黄酮类成分的清除超氧阴离子活性与其结构有明显的相关性。     

移栽密度对蒙古黄芪生长发育及产量质量的影响

目的:黄芪是药食同源的重要中药材品种之一,为了实现黄芪规范化栽培,提高栽培成效,在黄芪道地产区甘肃省陇西县试验基地行距30 cm条件下,分别采用8,10,12,14,16 cm不同的株距栽培蒙古黄芪。方法:通过测定返青株生长发育动态及药材产量和质量,利用隶属函数综合评价,旨在确定合理的移栽密度,探寻规范的蒙古黄芪生产技术。结果:在行距30 cm条件下,移栽株距对蒙古黄芪的生长发育具有显著影响;随着株距的增大,蒙古黄芪地上部分生物量减小,根冠比增大,但单位面积药材产量下降,药材外观性状随着移栽密度的减小有所改善。在株距14 cm的栽培密度下,黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量均最高。株距8~16 cm栽培密度条件下,黄芪药材浸出物含量均优于2015年版《中国药典》标准,各株距处理综合评价指数依次为14 cm> 16 cm> 10 cm> 8 cm> 12 cm。结论:结合产量与经济效益综合评判,最优移栽株行距30 cm×14 cm(密度23.81万株/hm^2),该密度下蒙古黄芪生长发育健壮,主茎较粗,根冠比较大,产量较高,质量优异。     

黄芪种植产地与生态环境及饮片规格的调查研究

目的:中药黄芪来源于蒙古黄芪及膜荚黄芪,由于黄芪野生资源的接近枯竭,目前商品黄芪以栽培品为主。方法:通过实地调查,了解黄芪的种植产地及生态环境。并且市场上黄芪饮片规格不统一,通过调查了解饮片规格,为饮片标准的制订和饮片质量的控制提供依据。结果:蒙古黄芪多为人工栽培,主要产地为山西恒山地区、甘肃陇南地区、内蒙古南部,栽培面积广,除山西黄芪多为山地直播外,其他均为平川地种植;膜荚黄芪则多为野生,主要分布于黑龙江省和内蒙古东北部,且资源近枯竭,其他地区如山东、河北等只有少量栽培。通过对黄芪饮片的市场调查,发现有5种不同规格的饮片,并且呈现一定的区域特征。结论:建议通过建立自然保护区保护黄芪野生资源,并统一黄芪饮片规格。     

蒙古黄芪病虫害种类初步调查

在多个地点采用点面结合的方式对蒙古黄芪病虫害进行了初步调查。结果表明,蒙古黄芪病害有6种、害虫有23种。为害较严重的病害为白粉病和根腐病,虫害有芫菁、豆荚螟及蚜虫。通过调查,摸清了蒙古黄芪的病虫害种类及其为害情况,为研究蒙古黄芪病虫害防治方法提供了参考依据。