氯化锂联合脐血干细胞移植修复大鼠脊髓损伤

目的 观察氯化锂联合脐血干细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤的修复效果.方法 成年雌性SD大鼠80只,建立胸9脊髓全横断损伤模型,随机分对照组(A组,n=20)、氯化锂组(B组,n=20)、细胞移植组(C组,n=20)和氯化锂+细胞移植组(D组,n=20).于术后1 d、3 d及每周的最后1天,应用BBB评分评价大鼠脊髓功能的恢复情况;8周后取材,通过Brdu细胞核标记观察移植细胞的存活、迁移;通过荧光金逆行追踪,观察脊髓神经纤维的再生与分布.结果 4只大鼠死亡.术后8周可观察到Brdu标记的脐血干细胞在体内存活并在脊髓内迁移;细胞移植组和氯化锂+细胞移植组可见少量连续性神经纤维通过损伤区.荧光金逆行脊髓追踪显示C组和D组可见被荧光金标记的神经锥体细胞穿越损伤区.术后8周A、B、C、D四组后肢功能运动BBB评分分别为4.11+0.14、4.50+0.15、8.31±0.11、11.15±0.18.结论 氯化锂能促进人脐血间充质干细胞在损伤区的存活并向神经细胞分化,氯化锂联合脐血干细胞与脊髓去细胞支架移植能够促进细胞移植修复大鼠脊髓损伤的效果.     

Wnt3a在大鼠骨髓源性胆碱能神经元中的表达

目的 通过研究大鼠骨髓基质细胞诱导的胆碱能神经元中Wnt3a的表达变化,了解Wnt3a在胆碱能神经元诱导分化过程中的作用,揭示神经元分化过程中可能的信号通路.方法 取Wistar雄性大鼠的股骨骨髓,培养骨髓基质细胞,经三代纯化CD71免疫细胞化学鉴定后进行分组实验.实验共分四组:骨髓基质细胞组,未加任何诱导因子;胆碱能神经元诱导分化组,加入Shh,RA和bFGF诱导基质细胞向胆碱能神经元分化,并用ChAT鉴定胆碱能神经元;神经干细胞诱导组,加入bFGF、EGF和RA诱导基质细胞为神经干细胞;自然分化组,加入血清诱导分化.提取细胞总RNA,利用RT-PCR进行Wnt3a的半定量分析.结果 与对照的骨髓基质细胞组,神经干细胞诱导组及自然分化组相比,Wnt3a在胆碱能神经元组中表达最高并且有统计学差异.结论 Wnt3a在骨髓基质细胞来源的胆碱能神经元中高表达,提示Wnt3a可能是胆碱能神经元分化的Wnt信号通路中的一个环节.     

已分化神经干细胞修复成年鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的 观察已分化神经干细胞植入成年鼠损伤脊髓后的变化及检查修复脊髓损伤的效果.方法 以胚胎脊髓提取液(FE)诱导细胞/PGA支架复合物分化后,植入成年鼠损伤脊髓,观察分化细胞的存活和发育情况并评估动物的运动功能.结果 FE体外可诱导神经干细胞分化成神经元、星形和少突胶质细胞.植入脊髓后,分化细胞/PGA支架复合物(dNPC)内的细胞成分可以存活并继续成熟,动物BBB评分明显优于对照组.结论 dNPC含有已经分化的细胞,移植后各种细胞成分可以存活并继续成熟,对成年鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用.     

神经干细胞不同移植途径治疗脊髓损伤的比较研究

目的探讨神经干细胞（NSCs）不同的移植方法治疗脊髓损伤的可行性及疗效差异。方法 Wistar成年大鼠40只,随机分成4组,①正常组;②损伤组;③静脉移植组;④损伤局部移植组。术后2个月采用免疫组化观察横断脊髓局部NSCs分布及分化情况,采用BBB评分、皮层体感诱发电位（CSEP）评价大鼠脊髓功能的恢复情况。结果各种移植方法在损伤脊髓节段上下均可检测到B rdu标记细胞,但是不同移植方法B rdu标记的移植细胞数不同;BBB评分C、D组与B组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,C组与D组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;所有大鼠CSEP在术前和A组术后的潜伏期正常;脊髓损伤1 d后,B组、C组和D组的CSEP消失,术后2个月B组的波形仍无,C组和D组的波形恢复,但潜伏期延长,与B组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,C组与D组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论神经干细胞静脉移植和脊髓损伤局部移植对大鼠损伤脊髓的功能恢复有一定的促进作用,但这两种方法之间无明显差异。     

神经干细胞移植治疗脊髓横断损伤的研究

目的研究神经干细胞移植治疗对脊髓横断损伤的修复作用.方法采用成年S-D大鼠,随机分为脊髓(胸10)横断损伤对照组(n=7)和神经干细胞移植治疗组(n=7).术后10周,感觉运动区皮质注射10?A示踪剂.动物再存活两周后取出相应的脑和脊髓组织,冰冻切片后,采用自由漂浮法行BDA染色显影,光镜观察.两组实验动物均于脊髓横断术后采用BBB评分法定期评估运动功能.结果神经干细胞移植治疗组所有大鼠BBB运动功能评分在横断损伤4周以后明显高于对照组(P＜O.05).BDA神经束路示踪技术研究显示神经干细胞治疗组7只中的6只大鼠在术后12周有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓横断损伤部位,而对照组大鼠均未见再生的皮质脊髓束通过.结论在脊髓横断损伤后应用神经干细胞移植治疗,可明显改善损伤的运动功能.神经干细胞移植治疗促进了皮质脊髓束的再生并重新建立了部分神经纤维联系.BDA神经束路示踪技术为脊髓损伤后神经功能的恢复提供了解剖形态学依据.     

骨髓基质干细胞对急性脊髓损伤大鼠模型神经功能修复的影响

目的探索骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）体外定向诱导分化为神经细胞后移植治疗急性脊髓损伤动物模型的疗效。方法对BMSCs进行体外诱导,并鉴定。将模型大鼠分为3组,将诱导及未诱导的BMSCs和生理盐水分别注入模型鼠脊髓半切点附近,在3个月内用BBB评分法对治疗情况进行评价。结果BMSCs体外诱导后的细胞经免疫组化检测可证实为神经细胞;进行细胞移植的两组动物死亡率明显下降,神经功能有明显恢复（P〈0.05）;并且BMSCs诱导后移植组神经功能恢复较未诱导组明显（P〈0.05）;而生理盐水组移植前后评分变化不明显。结论BMSCs诱导组治疗脊髓损伤模型的疗效总体好于未诱导的BMSCs组,前两组的疗效均好于生理盐水组。     

他克莫司联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性脊髓损伤后的再生修复实验研究

目的观察用他克莫司(tacrolimus,FK506)联合骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)移植对脊髓损伤后再生的影响,进一步探讨两者对急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用和机制。方法钳夹法制作SD(Spraque-Dawley)大鼠急性脊髓损伤动物模型30只,随机分成三组。A组为单纯损伤组,B组为单纯骨髓干细胞移植组,C组为骨髓干细胞联合FK506组。A、B、C三组一周后再次手术,暴露出原脊髓损伤处,A组将生理盐水10μl用微量注射器注入于脊髓损伤区域远近端;B、C两组将体外培养的骨髓间充质干细胞10μl用微量注射器分别注入于脊髓损伤远近端;C组同时另行腹腔再注射0.25%FK506一次,用量1mg/kg。期间加强动物的护理,于术前、术后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB评分、斜板实验及后肢行为学评分观察神经恢复情况。8周后取材,行免疫组化检查及病理学检查。结果各组BBB评分B、C两组大鼠后肢运动功能恢复较明显,B、C组注射细胞后2周开始出现后肢活动,逐步恢复排尿,伤后4周变化最为明显,可见明显后肢活动和尾巴的摆动,伤后8周,已可见协调运动,C组的恢复情况较B组为快,BBB最高评分可达14分,A组亦有所恢复,但程度较轻。B、C两组评分高于A组,B、C两组统计学上有差异(P<0.05)。C组与A组在6周以后的评分有显著性差异(P<0.01)。斜板实验和后肢行为学评分与BBB评分类似。免疫组化显示:A组切片见伤处为瘢痕连接,结构紊乱,邻近有明显空洞形成,未见神经轴索通过。B、C组亦见瘢痕形成,但可见少量神经轴索样结构。A组伤处邻近神经元胞体NF200阳性细胞较少,邻近脊髓组织GFAP阳性细胞亦较少。B组伤处可见GFAP及NF阳性纤维,但排列较紊乱,无正常结构。C组较B组邻近脊髓神经元胞体NF200阳性细胞较多,GFAP阳性细胞亦较多。C组大鼠脊髓损伤边缘Nogo阳性神经元较A、B两组明显减少。结论脊髓损伤的大鼠移植的大鼠骨髓间充质干细胞在脊髓损伤部位能长期存活,并能向邻近脊髓内迁徙,骨髓间充质干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用;联合应用FK506有协同效果;脊髓损伤后功能恢复需要一个多种神经因子共同参与的复杂的微环境。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响

目的研究神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响。方法 SD大鼠45只,随机分成3组(n=15):假手术组、脊髓损伤模型组(模型组)和神经干细胞移植组。假手术组仅打开锥板但不离断脊髓;模型组动物锥板打开后横向断开脊髓,止血并逐层缝合;神经干细胞移植组椎板打开后横向断开脊髓,止血并注入神经干细胞悬液,再逐层缝合。手术后1、2、3和14 d对大鼠进行神经功能评分(BBB评分)。14 d后处死动物,取脊髓组织,部分用于制备切片并进行TUNEL标记,检测神经细胞(神经元)的凋亡;对另一部分脊髓组织进行蛋白提取,Western blotting检测Caspase-3和c-fos蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组和神经干细胞移植组BBB评分均显著下降(P<0.05);但神经干细胞移植组神经功能改善情况好于模型组(P<0.05)。模型组和神经干细胞移植组的细胞凋亡率均显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,模型组和神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著低于模型组(P<0.05)。结论在大鼠脊髓损伤后,神经干细胞移植能够加快大鼠损伤后的恢复并降低细胞凋亡率,使Caspase-3和c-fos的表达量减少,对大鼠脊髓损伤具有治疗作用。     

骨髓基质细胞体外诱导分化移植治疗大鼠脊髓损伤的研究

目的 探讨大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)在体外由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、全反式维甲酸(RA)联合诱导下分化成的神经细胞样细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性.方法 采用出生4周SD大鼠的全骨髓细胞进行培养,利用bFGF+EGF+RA在体外诱导BMSCs向神经细胞样细胞分化.在倒置相差显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体鉴定.实验动物分为3组:细胞移植组(A组)、模型对照组(B组)、正常对照组(C组).A、B组采用改良Allens法建立大鼠急性脊髓损伤模型.A组在造模后立即将诱导后的BMSCs悬液多点缓慢注入到损伤节段的头侧和尾侧,B组同法注射等量磷酸盐缓冲液.C组不造模,于相同部位注射等量磷酸盐缓冲液.于伤后1～5周,按照BBB法观察脊髓神经功能恢复情况并处死动物取材,用HE染色观察脊髓病理变化.结果 诱导7 d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体呈锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,有NSE阳性细胞表达;细胞移植后1～5周,A、B组动物运动功能均有不同程度恢复,但B组恢复较慢,BBB评分差异有统计学意义(P<0.05);组织形态学观察示A组损伤脊髓恢复较好.结论 bFGF、EGF和RA可以联合诱导BMSCs向神经干细胞分化,并可调控神经元分化,将其移植于大鼠脊髓损伤区,可促进脊髓损伤的恢复.     

ES细胞来源的神经前体细胞移植Aβ损伤大鼠海马后的分化及对学习记忆的改善

目的 观察来源于小鼠胚胎干细胞的神经前体细胞移植Aβ海马损伤大鼠后的存活、分化以及细胞移植对模型大鼠的治疗作用.方法 采用改良的无血清方法将表达绿色荧光的小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞,移植至单侧海马注射Aβ1-40损伤模型大鼠注射处;免疫荧光双染观察移植细胞的存活、分化.结果 胚胎体在改良的N3选择性培养基生长5 d后,90%以上的小鼠胚胎干细胞分化为nestin阳性神经前体细胞.移植到模型大鼠海马后神经前体细胞存活良好,EGFP荧光显示移植细胞呈集落生长,Cy3荧光显示大部分细胞分化为GFAP阳性细胞,移植区周围可见一定数量NF200阳性细胞,其中部分发出类似神经元的长突起.行为学结果显示移植大鼠记忆能力较对照组明显改善.结论 胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植Aβ1-40损伤模型大鼠海马后能有效存活,大部分移植细胞分化为胶质细胞,小部分分化为神经元,细胞移植能改善模型大鼠学习记忆功能障碍.     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的活体示踪研究

目的:探索利用MR技术活体追踪干细胞的可行性及神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后功能恢复的影响。方法:66只SD大鼠随机分为假损伤组(A组)、SCI对照组(B组)和细胞移植治疗组(C组)3组,应用已包被多聚左旋赖氨酸(PLL)的SPIO标记NSCs,对标记细胞进行普鲁士蓝染色,分别在细胞移植后第1、2、3、4、5周对各组动物进行BBB评分,细胞移植后1、3、5周行MRI检查。结果:(1)普鲁士蓝染色证实该方法标记NSCs的有效率为100%。(2)细胞移植后1~5周,B、C组动物运动功能均有不同程度恢复,但B组恢复较慢,BBB评分差异有统计学意义(P<0.05)。(3)1.5 T MRI检查见移植处在T2WI序列呈低信号改变,第3周时低信号向损伤区扩大,第5周时可在损伤区见到低信号改变。结论:MR技术可以活体追踪干细胞,NSCs移植治疗SCI有利于大鼠后肢功能的恢复。     

神经干细胞与骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤修复的比较

目的:比较神经干细胞和骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤效果与机制的差异。方法:用成年Wist-ar大鼠建立脊髓半横切模型,随机分为神经干细胞(NSCs)组(n=10)、骨髓间充质干细胞(BMSC)注射组(n=10)、PBS注射组(n=10)及只打开椎板的假手术组(n=10)。移植后行BBB运动功能学评分,半切位置的免疫组化及核磁成像比较。结果:BBB评分NSCs注射组明显高于BMSCs注射组,NSCs注射组和BMSCs注射组均明显高于PBS注射组,脊髓切片中可观察到被标记的NSCs及BMSCs,核磁成像显示移植后半切形成的脊髓空洞有所减小。结论:静脉注射NSCs、BMSCs均能改善脊髓损伤大鼠的运动功能,但注射NSCs效果更明显。静脉注射干细胞后,细胞可迁移至脊髓损伤的位置,核磁成像显示脊髓空洞有所减小,提示干细胞可能通过补充或替代损失的神经细胞,修复已缺失的神经组织和功能性神经单位,重建神经环路。     

神经元移植与鼠颞叶癫痫海马γ-氨基丁酸能神经元的变化

目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)转化神经元移植前后大鼠颞叶癫痫海马γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的变化及海马形态学改变。方法40只SD大鼠随机分为3组,移植组(n=15):海马内注射海人酸(KA)后,依据大鼠左侧海马CA3区坐标,立体定向将ADSCs转化神经元注入海马;移植对照组(n=15):海马内注射KA后,靶点内移植生理盐水;生理盐水对照组(n=10):海马内注射生理盐水后,不进行任何移植。比较手术前后大鼠海马GABA能神经元的变化以及海马形态学的改变。结果ADSCs转化神经元移植后,GABA能神经元较移植前显著增加(P<0.01)。移植对照组海马区神经元水肿数量较生理盐水对照组明显增多,细胞内胞质贫乏,细胞器数量减少,细胞核边界不规整;而移植组神经元水肿减轻,其余结构变化与生理盐水对照组差异不大;且术后8周较2周与生理盐水对照组的差异更小。结论ADSCs转化神经元移植对颞叶癫痫大鼠的神经元修复起到了良好的效果。     

Human neural stem cells promote corticospinal axons regeneration and synapse reformation in injured spinal cord of rats

Background Axonal regeneration in lesioned mammalian central nervous system is abortive, and this causes permanent disabilities in individuals with spinal cord injuries. This paper studied the action of neural stem cell （NSC） in promoting corticospinal axons regeneration and synapse reformation in rats with injured spinal cord. Methods NSCs were isolated from the cortical tissue of spontaneous aborted human fetuses in accordance with the ethical request. The cells were discarded from the NSC culture to acquire NSC-conditioned medium. Sixty adult Wistar rats were randomly divided into four groups （n=15 in each）： NSC graft, NSC medium, graft control and medium control groups. Microsurgical transection of the spinal cord was performed in all the rats at the T11. The NSC graft group received stereotaxic injections of NSCs suspension into both the spinal cord stumps immediately after transection; graft control group received DMEM injection. In NSC medium group, NSC-conditioned medium was administered into the spinal cord every week; NSC culture medium was administered to the medium control group. Hindlimb motor function was assessed using the BBB Locomotor Rating Scale. Regeneration of biotin dextran amine （BDA） labeled corticospinal tract was assessed. Differentiation of NSCs and the expression of synaptophysin at the distal end of the injured spinal cord were observed under a confocal microscope. Group comparisons of behavioral data were analyzed with ANOVA. Results NSCs transplantation resulted in extensive growth of corticospinal axons and locomotor recovery in adult rats after complete spinal cord transection, the mean BBB scores reached 12.5 in NSC graft group and 2.5 in graft control group （P〈 0.05）. There was also significant difference in BBB score between the NSC medium （11.7） and medium control groups （3.7, P〈 0.05）. BDA traces regenerated fibers sprouted across the lesion site and entered the caudal part of the spinal cord. Synaptophysin expression colocalized with BDA positive axons and neurons distal to the injury site. Transplanted cells were found to migrate into the lesion, but not scatter along the route of axon grows. The cells differentiated into astrocytes or oligodendrocytes, but not into the neurons after transplantation. Furthermore, NSC medium administration did not limit the degree of axon sprouting and functional recovery of the injured rats compared to the NSC graft group. Conclusions Human embryonic neural stem cells can promote functional corticospinal axons regeneration and synapse reformation in the injured spinal cord of rats. The action is mainly through the nutritional effect of the stem cells on the spinal cord.     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的：探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的新方法，为治疗脊髓功能障碍性疾病打下基础，方法：制作脊髓横断大鼠模型，造成大鼠下肢瘫痪，分别在损伤急性期和损伤3周后移植胎鼠组织神经干细胞，观察移植后的动物行为变化，脊髓神经电生理变化和脊髓组织形态学变化，结果：细胞移植后第8d即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复，2－3周后可出现爬行，4周后后肢活动沃跃；对照组瘫痪的肢体无任何恢复。脊髓诱发电位部分出现，动作电位波幅较高，对照组未出现诱发电位，且动作电位波幅明显减低，脊髓移植肉眼可见有增生的组织充填，镜下有大量新生的细胞，表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色，结论：神经干细胞移植可使脊髓横断大鼠运动功能恢复，有望成为治疗脊髓损的有效手段。     

Effects of Co-grafts Mesenchymal Stem Cells and Nerve Growth Factor Suspension in the Repair of Spinal Cord Injury

Endogenous repair ability of mammalsisli mit-ed after the damage of central nervous system.It isdifficult to produce the new neurons for the dam-aged adult central nervous system,and neither canthe damaged systemstart the functional axonal re-generation. At present ,a good many methods arebelieve to be able toi mprove the damagedlocal mi-croenvironment , such as cell transplantation andprovision of exogenous neurotrophic factors ,whichare ai med at promoting the regeneration of thedamaged spin…     

羊膜间充质干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验

目的:探讨羊膜间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤修复的影响。方法:90只成年SD大鼠按改良Allen′s打击方法建立脊髓损伤模型,随机分为3组:对照组、假移植组和移植组,每组30只。于脊髓损伤后1周经尾静脉移植Brdu标记的羊膜间充质干细胞。3组大鼠分别于损伤后第1 d、3 d、1周及移植后1 d、3 d、1周、2周、4周采用BBB评分法对行为学进行评价。并于移植后1 d、3 d、1周、2周、4周分批处死,切片观察Brdu标记的细胞能否迁移到损伤区。结果:脊髓损伤后第1 d,3组实验动物后肢运动功能BBB评分皆为0分;细胞移植1周后移植组动物BBB评分为5.6±0.6,对照组和假移植组动物BBB评分分别为5.3±0.4和5.2±0.6;细胞移植2周后移植组、假移植组和对照组BBB评分分别为11.3±0.9、6.4±0.5和6.5±0.8;4周后3组实验动物评分分别为13.4±0.9、8.3±0.6和8.5±0.7;在损伤部位出现了Brdu标记的羊膜间充质干细胞。结论:经静脉移植的羊膜间充质干细胞能够迁移到损伤区并对脊髓损伤有一定的修复作用。     

血管性痴呆大鼠海马神经干细胞移植

目的 探讨新生大鼠脊髓神经干细胞(NSC)移植至血管性痴呆(VD)大鼠海马后在体内的存活、迁移和分化。方法 用无血清培养和单克隆技术从新生大鼠脊髓分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养，鉴定为NSC后，将其用BrdU标记后移植入VD大鼠海马内，利用免疫荧光化学技术检测移植后细胞的生存、迁移和分化。结果 从脊髓分离的细胞群具有NSC的特性，这些细胞在移植入VD大鼠海马8周后能检测到其存在并向四周迁移，并且分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从脊髓分离的细胞是脊髓NSC，将其移植到VD大鼠海马内能生存、迁移和分化。