粒细胞减少脓毒症急性肺损伤大鼠CD40表达研究

目的 建立粒细胞减少脓毒症大鼠急性肺损伤模型,研究其炎症反应特点及肺泡巨噬细胞CD40表达.方法 实验大鼠随机分4组,即粒细胞减少感染组、粒细胞减少对照组、粒细胞正常感染组和正常对照组,每组10只.动物处死后留取肺组织,观察病理形态,测定肺湿/干重比,计数支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞总数;外周血计数白细胞数;ELISA方法测定BALF及血清肿瘤坏死因子-α含量;流式细胞仪测定BALF肺泡巨噬细胞CD40表达.结果 (1)粒细胞正常组大鼠处死前平均体重(181.13±16.94)g,平均外周血白细胞数(9.54±1.25)×109/L,粒细胞减少组处死前平均体重(168.56±5.03)g,平均外周血白细胞数(2.56±1.12)×109/L,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)感染组(粒细胞减少感染组和粒细胞正常感染组)的BALF细胞总数明显高于正常对照组,差异有统计学意义[(3.33±0.26)×106/L,(3.23±0.06)× 106/L,(1.68±0.23)× 106/L,P＜0.05].(3)感染组(粒细胞减少感染组和粒细胞正常感染组)血清肿瘤坏死因子-α浓度明显较正常对照组升高,差异有统计学意义[(2 337.08±1 148.85) pg/ml,(2 274.01±1 569.37) pg/ml,(96.20±93.69) pg/ml,P＜0.05].(4)粒细胞减少感染组、粒细胞减少对照组CD40表达率明显较正常对照组增加,差异有统计学意义[(42.06±11.90)％,(46.38 ±7.42)％,(21.62±4.86)％,P＜0.01].结论 在粒细胞减少脓毒症大鼠肺损伤模型,感染早期外周血和肺泡巨噬细胞具有分泌细胞因子功能,可能与CD40高表达相关.     

巨噬细胞炎性蛋白1α及其mRNA在哮喘小鼠气道炎症中的作用

目的探讨巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)及其mRNA在哮喘小鼠气道炎症中的作用.方法 70只二级雄性BALB/C小鼠随机分为2大组7小组(1)正常小鼠组,分成灌洗组(A24组)和未灌洗组(A0组);(2)哮喘小鼠组,分成灌洗组(根据末次激发时相不同分成B3组、B8组、B24组和B36组)和未灌洗组(B0组).对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定血清和BALF中MIP-1α的浓度;采用免疫组化法和原位杂交法检测MIP-1α蛋白和MIP-1α mRNA的表达.结果 (1)BALF和血清中MIP-1α的浓度B3组[(30.2±4.2)pg/ml,(30.8±4.6)pg/ml]、B8组[(35.3±4.9)pg/ml,(34.9±5.1)pg/ml]、B24组[(42.9±5.8)pg/ml,(41.7±6.3)pg/ml]和B36组[(37.8±4.7)pg/ml,(35.7±4.9)pg/ml]均高于A24组[(20.9±3.8)pg/ml,(22.4±4.3)pg/ml](P均<0.01); MIP-1α浓度3 h开始升高,24 h达峰值,36 h已下降;(2)免疫组化和原位杂交显示,B0组支气管MIP-1α蛋白和MIP-1α mRNA的阳性表达率[(26.4±6.2)%, (23.9±4.2)%]均高于A0组[(10.3±2.5)%, (8.7±1.8)%](P均<0.01),其表达的主要细胞是上皮细胞;(3)哮喘小鼠BALF中MIP-1α的浓度和EOS绝对值之间呈显著正相关(r=0.890, P＜0.01),MIP-1α的浓度和EOS占细胞总数百分比(EOS %)之间呈显著正相关(r=0.897, P＜0.01).结论哮喘小鼠MIP-1α蛋白和mRNA较强表达,上皮细胞是主要表达细胞,MIP-1α动力学特点为3 h开始升高,24 h达峰值,36 h已下降,并与EOS聚集密切相关.     

生命早期补充维生素D对哮喘大鼠白细胞介素10和细胞间黏附分子1表达的影响

目的 研究生命早期补充维生素D对大鼠哮喘模型的影响与机制.方法选用性成熟的雌性Wistar大鼠32只.随机分为4组:对照组、低、中、高剂量组各8只.于受孕第7天起隔天以灌胃的方式给予各组大鼠不同剂量的1,25(OH)_2D_3,对照组以DMSO-PBS代替.子代大鼠离乳后,从每组中随机取出8只制备哮喘模型.HE染色肺组织切片;ELISA法检测血清及肺泡灌洗液(BALF)中IL-10浓度;免疫组化法检测细胞间黏附分子I(ICAM-1)在肺组织中的表达.结果 (1)肺组织病理变化:低剂量组和中剂量组气道炎症和嗜酸性细胞浸润均低于对照组,高剂量组则明显高于对照组.(2)血清及BALF中IL-10浓度:血清中,低剂量组[(30.2±2.8)pg/ml]和中剂量组[(51.5±6.6)pg/ml]IL-10浓度均高于对照组[(18.7±4.7)pg/ml](P<0.05),且中剂量组高于低剂量组(P<0.05),而高剂量组[(15.4±3.5)pg/ml]无明显变化(P>0.05);BALF中,与对照组[(59.1±14.4)pg/ml]相比,低剂量组[(58.1±3.4)pg/ml]无显著性变化(P>0.05),中剂量组[(90.0±14.3)pg/ml]IL-10浓度高于对照组(P<0.05),高剂量组[(45.3±6.5)pg/ml]低于对照组(P<0.05).(3)ICAM-1在支气管上皮细胞中的表达:低剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);中剂量组低于对照组(P<0.05);高剂量组高于对照组(P<0.05).结论 生命早期适量的1,25(OH)_2D_3干预可改善大鼠肺部炎症,减少嗜酸性细胞浸润,而过量则加重气道炎症.其机制可能与1,25(OH)_2D_3对IL-10及支气管上皮ICAM-1表达的影响有关.     

锌对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞趋化蛋白、单核细胞趋化蛋白-1及白介素8的影响

目的探讨锌对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞趋化蛋白(eotaxin)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白介素8(IL-8)的影响。方法建立哮喘大鼠模型,SD大鼠32只,按体质量随机分为4组,A组为缺锌饲料+卵清蛋白(OVA)激发组,B组为补锌饲料+OVA激发组,C组为正常锌饲料+OVA激发组,D组为正常锌饲料+生理盐水激发组。诱喘后24 h取BALF进行细胞分类,酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中eotaxin、MCP-1及IL-8。结果与C组相比,A组大鼠BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及单核细胞数均明显增加(P0.05),而B组则明显减少(P0.05);B组上述炎性细胞较D组仍有明显增加(P0.05)。A组大鼠BALF中eotaxin[(178.97±23.40)pg/ml]及MCP-1[(3.11±0.86)ng/ml]较C组[eotaxin(147.20±39.35)pg/ml,MCP-1(2.39±0.59)ng/ml]明显增加(P0.05),而B组eotaxin[(112.85±27.62)pg/ml]及MCP-1[(1.66±0.74)ng/ml]则明显减少(P0.05);A、B、C三组BALF中IL-8差异无统计学意义(P0.05)。结论锌对哮喘大鼠气道eotaxin及MCP-1具有抑制作用,但对IL-8无明显影响。     

卡介苗干预对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液干细胞因子、巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的 观察哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)干细胞因子(SCF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的表达,及卡介苗(BCG)干预对其表达的影响.方法 昆明小鼠30只随机分为哮喘组、BCG干预组、对照组,每组10只.以卵清蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型.BCG干预组小鼠在OVA致敏前7、3、1 d以BCG皮内注射干预.末次激发24h后收集小鼠BALF,进行BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组BALF中SCF、M-CSF水平.结果 哮喘组小鼠BALF中细胞总数[(27.06±4.25)×107L-1]、EOS计数[(7.58±1.30)×107L-1]较对照组[(4.93±1.43)×107L-1、0]明显增高(Pa<0.01);BCG干预组小鼠BALF中细胞总数[(18.87±2.96)×107L-1]、EOS计数[(3.78±1.44)×107L-1]较哮喘组显著降低(Pa<0.01);哮喘组SCF水平[(280.25±14.20)ng/L]与对照组[(223.59±15.61)ng/L]比较显著增高(P<0.01),而BCG干预组SCF水平[(266.77±31.15)ng/L]与哮喘组比较无显著差异(P>0.05);哮喘组M-CSF水平[(204.30±10.39)ng/L]与对照组[(181.33±8.63)ng/L]比较显著增高(P<0.01),而BCG干预组M-CSF水平[(189.97±8.50)ng/L]与哮喘组比较显著下降(P<0.01).结论 致敏前多次给予BCG干预能显著抑制哮喘小鼠呼吸道炎性反应.哮喘小鼠BALF中SCF及M-CSF的表达增高,BCG干预能降低哮喘小鼠M-CSF的表达.抑制SCF或M-CSF的表达可能成为治疗哮喘的潜在靶点.     

缺血再灌注对一氧化氮和细胞凋亡的影响及促肝细胞生长素的干预研究

目的观察促肝细胞生长素(pHGF)对肾缺血再灌注损伤大鼠肾功能及肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠32只,随机分为假手术对照组(Ⅰ组)、缺血再灌注组(Ⅱ组)、缺血再灌注前pHGF干预组(Ⅲ组)和缺血再灌注后pHGF干预组(Ⅳ组)。用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45min制成肾缺血再灌注损伤(RIRI)模型。假手术组只暴露双肾,不钳夹肾蒂。Ⅲ组和Ⅳ组分别在术前和术后腹腔注射pHGF50mg/kg。检测术后12h血清肌酐(Scr)和NO的浓度及肾小管上皮凋亡阳性细胞表达。结果Ⅱ组血清NO和Scr水平[(137.846±22.317)μmol/L、(120.85±22.237)μmol/L]明显高于Ⅰ组[(73.98±8.356)μmol/L、(22.775±6.508)μmol/L;P<0.01],各项在Ⅲ组[(101.304±16.518)μmol/L、(60.413±10.197)μmol/L和Ⅳ组(104.778±26.911)μmol/L、(69.400±11.443)μmol/L]的表达水平明显较Ⅱ组下降(P<0.01)。Ⅱ组肾小管损伤程度评分和肾脏凋亡阳性细胞的表达[(1.950±0.093)分、(26.850±1.476)个]均较Ⅰ组[(0.125±0.117)分、(0.900±0.385)个]明显升高(P<0.01),两项指标在Ⅲ组[(0.913±0.125)分、(8.300±1.146)个]和Ⅳ组[(0.888±0.136)分、(9.000±0.869)分]均较Ⅱ组显著下调(P<0.01)。Ⅲ组和Ⅳ组间各项值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论pHGF能显著降低血清NO和Scr水平,能显著抑制肾小管上皮细胞凋亡,对IARF在肾脏结构及功能上既有保护作用又有治疗作用。     

左旋精氨酸对模拟缺血再灌注乳兔培养窦房结细胞损伤的保护作用

目的 观察模拟缺血再灌注(IR)培养乳兔窦房结细胞(SANC)损伤及左旋精氨酸(L-Arg)的保护作用.方法 对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg 加 L-NAME(L-Arg抑制剂)与培养细胞共同孵育,吖啶橙(AO)标记细胞凋亡,检测细胞内过氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、总一氧化氮合酶(NOS)、氧化亚氮(NO)水平.细胞分为正常对照组、I120R120 组、I120R120加L-Arg组、I120R120加L-Arg加L-NAME组4组.结果 凋亡细胞体积明显缩小,核呈黄绿色,断裂为多个碎块状,由膜包裹着凸起于细胞表面呈黄绿色凋亡小体.与I120R120组凋亡率[(5.21±1.59)%]比较,I120R120加L-Arg组凋亡率[(8.70±3.10)%]显著降低(P<0.01);I120R120加L-Arg组细胞SOD活性[(46 820±14 450) U/g]较I120R120组 [(25 030±8 440) U/g]显著上升,而I120R120加L-Arg组MDA[(5.55±3.71)mmol/g]、NO[(3.65±1.02) U/g]和NOS[(3.73±0.24) μmol/L]较I120R120组MDA[(8.42±4.21)mmol/g]、NO[ (4.62±1.20) U/g]和NOS[(4.96±0.52) μmol/L]显著下降(Pa<0.05);而I120R120加L-Arg加L-NAME组各指标较I120R120组无显著性差异(Pa>0.05).结论 补充NO合成底物L-Arg能清除自由基,增加SOD活性,增强细胞抗氧化损伤能力,可能是阻断氧自由基所介导的细胞凋亡机制之一.     

依那西普对哮喘大鼠的抗炎作用研究

目的 探讨抗TNF-α受体单抗--依那西普(益赛普)对哮喘大鼠的抗炎作用及其机制.方法 30只SD雄性大鼠随机分成3组,每组10只.哮喘组:于第1、第8及第15天分别予腹腔注射10%鸡卵清蛋白(OVA)1 ml、氢氧化铝100 mg,于第16、17、18天密闭雾化罐中用1%OVA雾化吸入,每天激发20min致其哮喘发作;益赛普组:诱喘方法 同哮喘组,从第1天开始(致敏或激发后1 h)每隔1 d皮下注射益赛普0.5 mg/kg;对照组:以生理盐水代替OVA和益赛普.运用免疫组织化学方法 测定肺组织标本IL-4阳性细胞数,对支气管肺泡灌洗液(BALF)沉淀细胞进行计数以及运用ELISA方法 对BALF上清中TNF-α水平进行测定.结果 益赛普组大鼠肺组织中IL-4阳性细胞数较哮喘组明显降低(P<0.05);BALF中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数目较哮喘组明显减少(P<0.01),TNF-α水平(196±13)较哮喘组(236±8)明显降低(P<0.01);TNF-α、IL-4阳性细胞数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数目均明显高于对照组.结论 益赛普可以减少哮喘大鼠BALF及肺组织中TNF-α和Th2细胞因子水平,减轻哮喘气道炎症.     

哮喘儿童不同时期血清白细胞介素-8、白细胞介素-17及痰液中性粒细胞的变化

目的 探讨白细胞介素(interleukin,IL)-8、IL-17及气道中性粒细胞在儿童哮喘发病中的作用.方法 2007年1月至2009年1月,常州市儿童医院收治的符合儿童哮喘诊断,经过诱导痰液检测的12例非嗜酸粒细胞哮喘患儿为哮喘组;以12例健康儿童为对照组.对哮喘组患儿急性期、恢复期及对照组进行诱导痰的细胞分类检查和ELISA方法检测血清IL-8和IL-17浓度.结果 哮喘急性期患儿血清中IL-8[(357.84 ±215.36) pg/ml]、IL-17[(62.76 ±44.13) pg/ml]及诱导痰的中性粒细胞百分比[(43.14±5.79)％]明显高于缓解期[(164.95 ±60.22) pg/ml、(34.57±11.82) pg/ml、(23.25±3.75)％]及对照组[(88.68±38.76) pg/ml、(20.35±10.02) pg/ml、(13.34±3.21)％],差异有统计学意义(P＜0.01);缓解期IL-8、IL-17及诱导痰的中性粒细胞百分比仍高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 IL-8、IL-17趋化中性粒细胞聚集于气道,参与加重支气管哮喘发作.     

感染性脑水肿大鼠脑皮质细胞凋亡研究

目的　检测感染性脑水肿大鼠脑皮质一氧化氮 (NO)及皮质神经细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl 2表达 ,探讨皮质细胞凋亡的可能机制。方法　观察大鼠感染性脑水肿组与假手术组 2 4h脑含水量、钠、钾含量、脑组织HE染色、脑皮质匀浆NO-2 /NO-3 含量及脑皮质Bax、Bcl 2免疫组织化学阳性率。结果　感染性脑水肿组大鼠的脑组织钠含量与含水量较假手术组大鼠高 ,而钾含量较假手术组低。感染性脑水肿大鼠脑皮质匀浆NO生成 [(82 .4± 15 .9)nmol/ g]较假手术组大鼠 [(5 5 .6 8± 16 .30 )nmol/ g]明显增多 (t=6 .16 6　P <0 .0 1) ,其皮质神经细胞Bax表达 [(6 5 .8± 10 .7) % ]较假手术组 [(34.5± 12 .0 ) % ]显著增多 (t=5 .337　P <0 .0 1) ,而Bcl 2表达 [(2 1.3± 6 .1) % ]较假手术组 [(5 8.3± 18.7) % ]明显减少 (t=7.4 36　P <0 .0 0 1)。感染性脑水肿大鼠脑皮质中NO数量与Bax阳性数呈正相关 (r =0 .5 87　P <0 .0 1)。结论　感染性脑水肿大鼠脑皮质在感染后 2 4h有凋亡发生 ,其皮质中NO分泌增多可能是导致脑皮质细胞凋亡原因之一     

肾上腺素对内毒素血症大鼠早期炎症因子及急性肺损伤的影响

目的：探讨肾上腺素对内毒素( lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠肺损伤的保护作用及其作用机制。方法30只SD大鼠随机分为3组(每组10只)：正常对照组大鼠静脉输注生理盐水2．4 ml/( kg·h);LPS组大鼠静脉注射LPS 6 mg/kg后,静脉输注生理盐水2．4 ml/( kg·h);肾上腺素组大鼠静脉注射LPS 6 mg/kg后,静脉输注肾上腺素0．6μg/( kg·min)。在LPS注射后2 h和6 h通过心导管抽血,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子( TNF)-α、白细胞介素( IL)-6和IL-10水平,并在6 h处死大鼠取肺脏组织,分别予肺组织含水量检测,HE染色观察肺组织病理学变化,以及ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)内TNF-α、IL-6和IL-10水平。结果(1)与正常对照组肺含水量(70．19%±5．87%)相比,LPS组肺含水量(85．24%±5．87%)明显升高( P <0．05),与 LPS 组相比,肾上腺素组肺含水量(78．00%±6．41%)明显降低(P<0．05)。(2)病理观察结果显示,LPS组大鼠肺泡隔内毛细血管充血、水肿及炎症细胞浸润,少部分肺组织可见肺不张及肺泡内水肿、出血。肾上腺素组大鼠肺病理损伤较LPS组明显减轻。(3)与LPS组相比,肾上腺素组各时点血清TNF-α及IL-6水平明显降低(P<0．05), IL-10水平明显升高(P<0．05)。(4)与LPS组相比,肾上腺素组大鼠BALF中TNF-α水平降低[(78±9)ng/L vs.(102±16) ng/L],IL-6水平降低[(268±42) ng/L vs.(347±50) ng/L],IL-10水平升高[(210±23)ng/L vs.(146±34) ng/L](P<0．05)。结论肾上腺素可减轻LPS诱导的急性肺损伤,其保护作用可能与降低TNF-α、IL-6水平,升高IL-10水平有关。     

哮喘大鼠肺组织CD44和α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达

目的探讨不同时段哮喘大鼠肺组织CD44和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,了解其在哮喘发病中的作用机制。方法以卵蛋白致敏制备大鼠哮喘模型.分别在激发后1、2周取肺组织.RT-PCR检测肺组织CD44与α-SMAmRNA的表达,收集肺泡灌洗液(BALF)行细胞分类计数.肺组织石蜡切片行HE染色。结果哮喘大鼠BALF中炎性细胞明显增多(P<0.05).CD44与α-SMA在正常大鼠肺组织少量表达,在激发哮喘后1周肺组织CD44与α-SMAmRNA表达均显著升高(P均<0.05).2周后升高更明显(P<0.01)。CD44和α-SMA的表达呈正相关.CD44mRNA水平与BALF中淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的百分比呈显著正相关。结论肺组织CD44与α-SMA在转录水平的过量表达与哮喘的发生发展密切相关,二者存在相互作用.并在早期开始参与哮喘的发病。CD44与嗜酸性粒细胞、淋巴细胞向肺部炎症组织趋化浸润密切相关。     

哮喘小鼠树突状细胞表达及减毒卡介苗干预的影响

目的探讨哮喘小鼠树突状细胞(DC)表达及减毒卡介苗(BCG)干预的影响。方法以卵蛋白腹腔注射、雾化吸入和BCG皮下注射复制哮喘和BCG干预小鼠模型。流式细胞仪检测小鼠脾单个核细胞DC和共刺激分子CD80、CD86表达;免疫组化法检测小鼠肺DC表达;ELISA法检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6、IL-12的含量。结果哮喘、BCG干预、对照组小鼠的脾单个核细胞DC表达分别为(16.18±9.49)%、(8.62±3.53)%、(1.84±0.69)%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);哮喘、BCG干预、对照组小鼠的肺DC表达分别为(1 581±177)个/mm、(668±101)个/mm、(268±29)个/mm,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。哮喘、BCG干预、对照组小鼠的CD80表达分别为(6.4±3.3)%、(10.8±3.1)%、(7.1±4.0%),BCG干预组与哮喘和对照组间的差异有统计学意义(P<0.05),哮喘组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘、BCG干预、对照组小鼠的CD86表达分别为(9.6±2.9)%、(7.3±4.5)%、(4.9±4.4)%,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘、BCG干预、对照组小鼠BALF中的IL-6含量分别为(28.65±2.39)pg/ml、(18.63±1.88)pg/ml、(12.80±2.98)pg/ml,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘、BCG干预、对照组小鼠BALF中的IL-12含量分别为(4.78±0.22)pg/ml、(6.33±0.31)pg/ml、(7.38±0.28)pg/mlG,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠外周循环与呼吸道局部DC表达均增加,在哮喘的发生、发展过程中起着重要作用。BCG可通过调节DC,CD80、CD86、IL-6、IL-12等表达,以拮抗哮喘气道炎症反应。     

全氟化碳对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮损伤的保护机制研究

目的 探讨全氟化碳（perfluorocarbon,PFC）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用下胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡以及炎症反应的影响。方法 分离纯化原代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,采用随机数字表法随机分为对照组、LPS组、PFC组、PFC＋ LPS组.LPS组培养液加入1μg/ml的LPS,PFC组培养液加入20％容积比的PFC,PFC＋ LPS组培养液加入1μg/ml LPS和20％容积比PFC,共同培养后lh后,电镜观察Ⅱ型肺泡上皮细胞的形态学变化,流式细胞仪鉴定各组细胞凋亡率,用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中白细胞介素（interleukin,IL）-6及IL-10的浓度.结果 LPS组Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡率（14.29±1.93）％显著高于对照组（10.89±1.04）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;PFC＋ LPS组Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡率（12.22±1.47）％显著低于LPS组（P ＜0.05）;LPS组IL-6浓度[（482.58 ±26.84） pg/ml]显著高于对照组[（229.40 ±7.61） pg/ml] （P ＜0.05）,加入PFC后可显著减少LPS诱导的IL-6合成[（265.44 ±29.95） pg/ml] （P ＜0.05）;LPS组IL-10浓度[（1 497.29±191.89） pg/ml]显著高于对照组[（725.87 ±51.83） pg/ml] （P ＜0.05）,加入PFC对LPS诱导的IL-10合成无影响（P＞0.05）。结论 PFC可有效减轻脂多糖诱导的胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的炎性损伤,并减轻炎症反应的程度。     

窒息新生儿激活素A水平与缺氧缺血性脑病相关性研究

目的 研究窄息新生儿内源性激活素A(ACT A)的水平变化及其与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的发生、严重程度及预后的相关性.方法 应用ELISA方法动态监测58例窒息足月新生儿(轻度窒息39例,重度窒息19例)和30例正常足月新生儿血清ACT A、成纤维细胞生长因子(FGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的血清浓度(脐血、7 d),同时观察意识状态、肌张力、原始反射、有无惊厥及瞳孔改变、呼吸、心率、囟门张力等临床指标,结合颅脑CT进行临床诊断与分度.结果 窒息新生儿脐血清ACT A[(3.64±0.69)ng/ml vs(2.95±0.34)ng/ml、FGF[(77.55±23.18)pg/ml vs(36.43±9.51)pg/ml]和TNF-α[(10.72±1.50)as/ml vs(9.15±0.99)ng/ml]水平较对照组明显升高,P均<0.01;ACT A水平与生后1分钟Apgar评分旱负相关(r=-0.948,P<0.01).生后7 d窒息组患儿血清ACT A[(5.59±1.33)ng/ml vs(2.93±0.25)ng/ml]、FGF水平[(64.21±18.70)pg/ml vs(41.69±9.08)pg/ml]仍高于对照组,P均<0.01;TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义[(9.41±0.87)ng/ml vs(9.03±1.06)ng/ml],P>0.05.相关性分析显示,ACT A水平与HIE的严重程度呈正相关(r=0.962,P<0.01).结论 内源性ACT A参与新生儿HIE的发病过程,动态检测内源性ACT A水平,对判断窒息所致新生儿HIE的严重程度及估计预后,可能具有重要价值.     

哮喘大鼠信息传递与转录活化因子6的表达和地塞米松对其表达的影响

目的研究哮喘大鼠支气管信息传递与转录活化因子6(STAT6)的表达和地塞米松(DXM)对其表达的影响。方法30只体重120～180g的二级幼年雄性SD大鼠,随机分为3组:正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松组(DXM组)。对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF和血清中白细胞介素4(IL4)浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测支气管STAT6蛋白和STAT6mRNA的表达。结果(1)B组支气管STAT6蛋白和STAT6mRNA表达[(0.171±0.025),(0.180±0.013)]均高于A组[(0.082±0.022),(0.091±0.012)]和DXM组[(0.114±0.013),(0.114±0.010)](均为P<0.01),其主要表达细胞是上皮细胞;(2)支气管STAT6蛋白、STAT6mRNA分别与BALF中的IL4浓度呈显著正相关(r=0.664、0.785,P<0.01),STAT6蛋白、STAT6mRNA分别与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关(r=0.869、0.884,P<0.01)。结论哮喘大鼠支气管有STAT6的较强表达,上皮细胞是其主要表达细胞;地塞米松可以下调STAT6的表达,可能为其抑制哮喘气道炎症形成的重要作用机制。     

iNOS抑制剂阻断由细菌脂多糖诱导活性小胶质细胞对少突胶质细胞前体毒性作用的研究

目的 探讨由细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的活性小胶质细胞(MG)对少突胶质细胞(OL)前体的毒性作用及选择性iNOS抑制剂1400W对毒性作用的阻断效果.方法 取2日龄SD大鼠脑内MG和OL前体共培养,分为共培养对照组,共培养LPS组以及共培养LPS+1400W组.对共培养细胞经LPS 100 ng/ml诱导后48 h,分别应用硝酸还原比色法检测一氧化氮(NO)含量,免疫细胞染色法检测过氧亚硝酸盐(ONOO-)含量,Westem blot法检测诱生型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS)蛋白合成量,Hochest 33342/PI荧光染色观察细胞凋亡形态学改变,以及流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与共培养对照组比LPS可诱导培养细胞内NO含量[(82.27±3.41)tunol/L vs(167.86±9.87)μmol/L,t=8.593,P<0.01]、ONOO-含量[(6.14±1.27)×107/L vs(34.38±7.75)×107/L,t=5.892,P<0.01]以及iNOS蛋白合成量相对值[(0.18 4-0.027)vs.(0.79±0.068),t=9.26,P<0.01]明显增高,OL前体的凋亡率亦显著增加[(6.73 4±1.39)%vs.(24.77 4±2.05)%,t=12.619,P<0.01].应用1400W 10 μmol/L则可显著抑制因LPS诱导而增高的NO含量[(69.55±5.07)μmol/L,t=8.896,P<0.01]、ONOO-含量[(10.33±3.47)×107/L,t=14.96,P<0.01]以及iNOS蛋白的合成量(0.35±0.042,t=5.506,P<0.01),并显著降低了OL前体的细胞凋亡率[(11.8±2.06)%,t=7.715,P<0.01].结论 NO、iNOS以及ONOO-等物质在LPS诱导OL前体的死亡通路中扮演了重要角色,1400W通过选择性抑制iNOS,减少了NO以及ONOO-的生成,从而有效阻断了由LPS诱导活性MG对OL前体的毒性作用,提高了OL前体的存活率.     

致敏和哮喘小鼠腹腔和支气管肺泡灌洗液巨噬细胞数量和功能表达

目的探讨抗原对巨噬细胞(Mφ)表达和功能的影响。方法用卵蛋白(OVA)腹腔注射和雾化吸入复制致敏和哮喘小鼠模型。在不同时间段收集腹腔冲洗液、支气管肺泡灌洗液(BALF),进行Mφ计数;采用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)测定腹腔Mφ主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰa抗原(MHC-Ⅰa)和培养上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果腹腔Mφ(×106/mL),BALF细胞总数、Mφ数(×105/mL),致敏组小鼠致敏后2、5、7 d分别为7.59±1.27、2.01±0.61、1.66±0.52;19.43±6.37、2.87±0.50、1.84±0.40;7.68±2.28、1.40±0.45、0.99±0.38,哮喘组小鼠激发后2、57、d,分别为16.62±5.56、3.63±0.79、2.55±0.72;15.34±4.22、5.03±0.56、2.99±0.42;17.10±2.04、5.05±0.75、3.15±0.37。致敏组、哮喘组明显高于对照组(P<0.05)。致敏组、哮喘组腹腔MφMHC-Ⅰa和培养上清液TNF-α(μg/L)表达分别为44.09%5、9.28%;55.42±0.62,71.93±5.28,明显高于对照组(P<0.01)。结论致敏和哮喘小鼠腹腔冲洗液、BALF Mφ表达明显增加。MφMHC-Ⅰa和培养上清液TNF-α的表达明显增加。     

谷氨酸诱导新生大鼠皮层神经元毒性损伤的作用

目的　研究谷氨酸 (Glu)对神经细胞毒性损伤的作用。方法　采用皮层神经细胞原代培养技术 ,建立Glu诱导新生大鼠皮层神经细胞损伤模型。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化 ;分别用MTT法和生化法测定细胞存活率和LDH漏出率 ;用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果　倒置显微镜下Glu处理组神经细胞毒性损伤明显 ,与正常对照组比较 ,Glu处理组细胞存活率 [(2 5 .36± 1 5 .33) % ]明显下降 (t=4.58　P <0 .0 0 1 )、LDH漏出率 [(44.59± 9.35) % ]和凋亡率 [(2 1 .77± 1 0 .78) % ]明显升高 (t=2 .40 ,3 .0 9　P <0 .0 0 5 ,0 .0 0 1 )。结论　Glu可诱导新生大鼠皮层神经元毒性损伤。     

联合转染A20、HO-1基因对大鼠胰岛抗凋亡能力影响的研究

目的 研究A20基因、血红素加氧酶1基因(heme oxygenase 1 gene,HO-1)转染在大鼠胰岛细胞中的表达情况及对体外培养条件下胰岛活性、拮抗放线菌酮(CHX)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的胰岛细胞凋亡作用的影响.方法 构建A20、HO-1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒转移载体,荧光显微镜连续观察EGFP表达情况,评估转基因效率、确定诱导凋亡时机.Western印迹测定A20和HO-I蛋白表达.超敏ELISA试剂盒检测胰岛素浓度.胰岛经CHX+ TNF-α处理48 h进行TUNEL、流式细胞仪检测凋亡率.Western印迹检测半胱氨酸蛋白酶-3的活化.结果 (1)分别以A20和HO-1慢病毒转染胰岛检测表明A20和HO-1蛋白均呈高表达.(2)胰岛细胞经培养48h和96 h,转基因各组胰岛素浓度高于空白对照组(P＜0.01).(3)CHX+ TNF-α诱导胰岛细胞凋亡后,转A20组胰岛素浓度为(93.58 ±4.12) μg/ml、转HO-1组胰岛素浓度为(88.98±4.77) μg/ml,联合转A20和HO-1组胰岛素浓度(103.33 ±3.16) μg/ml,均高于转EGFP组[(9.03±0.65) μg/ml]和空白对照组[(8.86±0.38) μg/ml,P＜0.001].Western印迹法检测显示联合转A20/HO-1基因组活化型半胱氨酸蛋白酶-3表达水平最低.结论 原代胰岛细胞中高效表达的A20和HO-1蛋白具有抗CHX+ TNF-α诱导的胰岛凋亡作用,联合转A20和HO-1基因有协同抗凋亡效应.