广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原及其诊断价值分析

目的对比分析广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原(LESA)与成虫抗原(AWA),探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫三期幼虫感染小鼠,21 d后取小鼠脑内幼虫进行体外培养,收集幼虫排泄分泌蛋白,并与广州管圆线虫成虫匀浆蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,分别用两种抗原建立LESA-ELISA和AWA-ELISA以检测小鼠血清和不同人群血清。结果SDS-PAGE和Western blot显示幼虫排泄分泌蛋白条带和抗原反应带较成虫少;LESA与小鼠感染血清和广州管圆线虫病患者血清在Mr40 000和Mr26 000处均出现强反应带;感染小鼠血清中抗LESA和AWA的IgG和IgM抗体自感染后开始上升,5 d后达到高峰,第10天后开始下降;LESA-ELISA用于检测广州管圆线虫病疑似病人血清阳性率低于AWA-ELISA;检测血吸虫和华支睾吸虫感染病人血清的交叉阳性率明显低于AWA-ELISA;检测献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较AWA-ELISA少。结论 LESA的抗原反应带较AWA少,尽管对广州管圆线虫病疑似病例血清抗体阳性率略低于AWA,但其特异性高;具有潜在的广州管圆线虫病早期诊断和现症感染诊断价值。     

广州管圆线虫一期幼虫的分离纯化及其抗原分析

目的建立广州管圆线虫一期幼虫的分离纯化方法,分析其抗原特性及血清学诊断价值。方法分别用贝尔曼漏斗法、蔗糖离心浮选法及改良贝尔曼法联合胰酶消化法从大鼠粪便中分离纯化一期幼虫;用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白谱与抗原谱分析;分别用一期幼虫和成虫抗原包被ELISA反应板,间接法检测不同样本中相应抗体。结果3种方法分离效率分别为50.1%、33.6%和19.7%;联合法获得的纯度最高,且90%以上的幼虫有活力;贝尔曼漏斗法分离的幼虫99%以上具有活力但纯度低;蔗糖离心浮选法分离的绝大多数虫体失去活力。一期幼虫104000Mr与广州管圆线虫感染2周的大鼠血清出现强反应,32000Mr和31000Mr与感染6周的大鼠血清、32000Mr与广州管圆线虫病患者血清均出现较强反应,与对照血清均未出现明显的反应;在ELISA检测中,一期幼虫抗原对广州管圆线虫病患者血清和感染大鼠血清的检出率与成虫抗原无统计学差异。结论改良贝尔曼法联合胰酶消化法可从大鼠的粪便中分离高纯度且具有活力的一期幼虫,一期幼虫104000Mr、32000Mr和31000Mr具有潜在的诊断价值,可望从大鼠粪便中分离一期幼虫开发诊断性抗原。     

广州管圆线虫Mr32000抗原的免疫诊断效果评价

目的 价广州管圆线虫Mr32000抗原(AC32)的诊断价值．方法 利用切胶纯化法从广州管圆线虫成虫抗原中获取AC32，用Western blotting和ELISA方法检测61例广州管圆线虫感染大鼠血清、5例正常鼠血清、1例广州管圆线虫病人血清、50例其他寄生虫体阳性患血清和50例献血员血清。结果AC32和成虫粗抗原包被的ELISA检测61份感染大鼠血清和1例临床诊断为广州管圆线虫病人血清均为阳性：AC32．ELISA检测的50例献血员、20例急性血吸虫病人、11例弓形虫病人和所检测的其他寄牛虫抗体阳性患血清均为阴性。结论AC32在广州管圆线虫病的血清学诊断中具有较高的敏感性和特异性。     

广州管圆线虫病疗效考核抗原的筛选与鉴定

目的 从广州管圆线虫抗原中筛选广州管圆线虫病疗效考核抗原。方法 用治疗前后广州管圆线虫感染的大鼠血清与广州管圆线虫可溶性抗原进行免疫印迹试验,用ELISA检测治疗前及治疗后不同时期感染大鼠血清中的AC-IgG和AC32-IgG抗体。结果 Mr38000～78000区间的抗原分子与治疗前后的感染大鼠血清的反应带无明显差别,Mr90000和Mr17000抗原与治疗前大鼠血清出现较强的反应,与治疗后血清未出现反应带,Mr32000和Mr24000抗原与治疗前大鼠血清出现较强的反应,与治疗后大鼠血清的反应带明显变弱;AC32-IgG抗体出现的高峰期较早,而且在治疗后消失较快,治疗后17周的阴转率为60％（6／10）。结论 广州管圆线虫Mr190000,17000,32000,24000,16000抗原具有潜在的疗效考核价值,ELISA检测AC32-IgG抗体可以用于感染大鼠的疗效考核。     

广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原及其诊断价值分析

摘要：目的对比分析广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原（LESA）与成虫抗原（AWA）,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫三期
幼虫感染小鼠,21 d 后取小鼠脑内幼虫进行体外培养,收集幼虫排泄分泌蛋白,并与广州管圆线虫成虫匀浆蛋白进行
SDS-PAGE和Western blot 分析,分别用两种抗原建立LESA-ELISA和AWA-ELISA以检测小鼠血清和不同人群血清。结果
SDS-PAGE和Western blot显示幼虫排泄分泌蛋白条带和抗原反应带较成虫少;LESA与小鼠感染血清和广州管圆线虫病患者
血清在Mr 40 000和Mr 26 000处均出现强反应带;感染小鼠血清中抗LESA和AWA的IgG和IgM抗体自感染后开始上升,5 d后
达到高峰,第10天后开始下降;LESA-ELISA用于检测广州管圆线虫病疑似病人血清阳性率低于AWA-ELISA;检测血吸虫和
华支睾吸虫感染病人血清的交叉阳性率明显低于AWA-ELISA;检测献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数
较AWA-ELISA少。结论LESA的抗原反应带较AWA少,尽管对广州管圆线虫病疑似病例血清抗体阳性率略低于AWA,但其
特异性高;具有潜在的广州管圆线虫病早期诊断和现症感染诊断价值。
     

广州管圆线虫Mr32000抗原的免疫诊断效果评价

目的 评价广州管圆线虫Mr32000抗原(AC32)的诊断价值。方法 利用切胶纯化法从广州管圆线虫成虫抗原中获取AC32,用Westernblotting和ELISA方法检测61例广州管圆线虫感染大鼠血清、5例正常鼠血清、1例广州管圆线虫病人血清、50例其他寄生虫体阳性患者血清和50例献血员血清。结果 AC32和成虫粗抗原包被的ELISA检测61份感染大鼠血清和1例临床诊断为广州管圆线虫病人血清均为阳性;AC32-ELISA检测的50例献血员、20例急性血吸虫病人、11例弓形虫病人和所检测的其他寄生虫抗体阳性患者血清均为阴性。结论 AC32在广州管圆线虫病的血清学诊断中具有较高的敏感性和特异性。     

联合检测血清广州管圆线虫循环抗原及循环抗体的临床价值

目的:探讨血清中广州管圆线虫循环抗原(CAg)和循环抗体检测对广州管圆线虫病的诊断价值.方法:用单克隆抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫病患者血清中循环抗原,间接ELISA法检测血清中特异性循环抗体.结果:25例广州管圆线虫病人血清中循环抗原的阳性率为80%,循环抗体的阳性率为88%;56例其他寄生虫病人血清循环抗原检测均为阴性,循环抗体检测与1例旋毛虫病人血清有交叉反应;25例健康人广州管圆线虫循环抗体阳性率为16%,循环抗原检测全部为阴性.结论:联合检测血清中广州管圆线虫循环抗原和循环抗体有助于提高广州管圆线虫病的诊断率.     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

环卵沉淀试验在广州管圆线虫病诊断中的应用

目的评价环卵沉淀试验(Circum oval precipitin test COPT)在广州管圆线虫病检测诊断中的应用价值。方法根据广州管圆线虫感染时间不同将SD大鼠分为B、C、D 3组,(A组为正常SD大鼠,E、F组分别为感染血吸虫、旋毛虫的SD大鼠),每组5张单凹载玻片,每张采用10个广州管圆线虫虫卵,与感染前后不同时间段大鼠血清各30μL进行反应,放置370C孵箱内孵育,72h后置显微镜下观察阳性反应结果并计算环沉率。结果广州管圆线虫幼虫感染后7d、14d和28d,SD大鼠血清环沉率分别为24%、68%、90%;感染前SD大鼠血清、血吸虫阳性血清和旋毛虫阳性血清广州管圆线虫环沉率分别为0%、0%和2%。结论 COPT法检测感染广州管圆线虫病的大鼠血清抗体具有一定的免疫学诊断价值,为广州管圆线虫病散发病例的快速诊断提供可选择的方法。     

滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

目的建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法。方法以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原,金标记SPA为显色剂,建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法（DIGFA）;并以ELISA平行检测比较。结果用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份,其阳性检出率为96．0％,50份正常鼠血清的阴性符合率达100％。DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份。绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份,前二者均为阴性,后者交叉反应率为5．6％;DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清,两法符合率达96,7％。结论DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性。且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点。是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法。     

Screening and identification of therapeutic effect evaluation antigens of angiostrongyliasis]

OBJECTIVE: To identify antigens which may help evaluate the therapeutic effect of angiostrongyliasis from adult worm antigen of Angiostrongylus cantonensis. METHODS: The adult worm antigens of A. cantonensis were analyzed by Western blotting with the sera of rats infected with A. cantonensis before and after treatment. The sera of rats were tested by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: The antigens with relative molecular mass between 38,000 and 78,000 reacted not only with the sera of rats before treatment, but also with that after treatment. The antigens with M(r) between 190,000 and 17,000 reacted with the sera of rats before treatment but not with that after treatment; those with M(r) between 32,000 and 24,000 antigens strongly reacted with the former, but the reaction became much weakened with the latter. The AC32-IgG antibody appeared earlier than the AC-IgG, and disappeared rapidly after treatment. Six of the 10 treated rats became negative for AC-IgG as found by ELISA. CONCLUSION: The antigens of adult worm antigen of A. cantonensis with M(r) of 190,000, 32,000, 24,000, 17,000 and 16,000 may serve as candidate antigens for therapeutic effect evaluation of angiostrongyliasis.     

华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

日本血吸虫成虫脲溶42 kD蛋白的分离及其初步诊断应用

目的 :分离日本血吸虫成虫脲溶抗原中有免疫学活性的抗原分子 ,探讨其诊断血吸虫病的效果。方法 :利用SDS PAGE及免疫印迹法分析日本血吸虫成虫脲溶抗原 ,采用电泳层析法分离有免疫活性的 4 2kD蛋白 ,ELISA分析 4 2kD蛋白诊断血吸虫病的灵敏度和特异性。结果 :电泳层析获得了具有免疫学活性的 4 2kD蛋白 ;分离的 4 2kD蛋白诊断血吸虫病的灵敏度和特异性分别为 88.0 9%和 97.0 6 %。结论 :日本血吸虫成虫脲溶 4 2kD蛋白是一种日本血吸虫的血清学抗原 ,可用于血吸虫病诊断