萘哌地尔衍生物YMⅢ抗AngⅡ诱导SHR血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张Ⅱ(AngⅡ)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并初探其作用机制。方法以组织块贴壁法培养SHR VSMC,应用MTT比色法、3[H]-TdR参入法、流式细胞技术、电镜技术和real time RT-PCR分别观察VSMC在AngⅡ刺激下的细胞增殖、DNA合成、细胞周期、细胞超微结构和Agt、c-myc基因表达的变化,及观察YMⅢ对上述指标的影响。结果 AngⅡ1μmol.L-1明显促进VSMC增殖和DNA合成;而YMⅢ0.01、0.05、0.10μmol.L-1可呈浓度依赖性地抑制AngⅡ所致VSMC增殖活性、DNA合成、细胞周期增殖指数的升高,改善细胞超微结构,并使AngⅡ升高的Agt、c-myc mRNA表达下调。结论 YMⅢ可明显抑制AngⅡ诱导的SHR VSMC增殖,作用机制可能与其抑制Agt、c-myc mRNA表达,从而抑制细胞DNA合成和细胞周期的进展有关。     

丹参酮ⅡA对血管紧张肽Ⅱ诱导增殖的 大鼠血管平滑肌细胞中c-fos与c-myc的影响

［摘要］目的探讨丹参酮ⅡA对血管紧张肽Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。方法分离大鼠胸主动脉中层平滑肌，贴壁法培养平滑肌细胞，建立AngⅡ诱导的VSMC增殖模型；以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察丹参酮ⅡA对VSMC增殖的影响；流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响；应用免疫细胞化学方法观察原癌基因c fos和c myc表达水平的变化。结果成功建立AngⅡ诱导的VSMC增殖模型；随着丹参酮ⅡA浓度增加，VSMC增殖活性呈明显下降趋势（P＜0.05）；流式细胞术结果显示丹参酮ⅡA使VSMC G0/G1期比例升高（P＜0.01），S期比例下降（P＜0.01）;丹参酮ⅡA各组随着浓度的增加，VSMC中c fos和c myc表达水平显著下降（P＜0.05）。结论丹参酮ⅡA具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，并呈浓度依赖性。其机制可能与丹参酮ⅡA下调VSMC中c fos及c myc表达水平有关。     

卡维地洛对血管平滑肌细胞DNA合成的影响

目的 :探讨卡维地洛对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其可能机制。方法 :通过贴壁细胞培养法建立豚鼠主动脉血管平滑肌细胞模型 ,应用 [3 H]TDR掺入试验研究卡维地洛对反应性氧族 (reactiveoxygenspecies ,ROS)、血管紧张肽Ⅱ(angiotensinⅡ ,AngⅡ )及胎牛血清 (fetalcalfserum ,FCS)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 :卡维地洛呈剂量依赖性地抑制ROS ,AngⅡ及FCS诱导的血管平滑肌细胞DNA合成 ,最大抑制率分别为 (48± 15 ) % ,(42± 7) %和 (44± 14) %。结论 :卡维地洛对ROS及AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞DNA合成呈剂量相关性的抑制作用 ,提示卡维地洛可能通过抗氧化的途径抑制血管平滑肌细胞增殖     

银杏内酯对血管紧张素Ⅱ依赖性血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养牛主动脉血管平滑肌细胞(VSM C)增殖的作用及银杏内酯对其增殖的影响.方法采用组织块贴壁法培养牛主动脉VSMC ,以3H-TdR掺入法和流式细胞仪分别测定VSMC的DNA合成量及细胞周期中各期细胞构成比.结果 AngⅡ(0.1μmol/L)作用24h 使3H-TdR掺入量比对照组增加34%;S期和G2/M期细胞增多,细胞增殖指数由35.15%增至45.03%.与AngⅡ组相比,AngⅡ加银杏内酯B(G -B,0.1～10μmol/L)组、AngⅡ加G-B和银杏内酯A(G-A)的混合物(G-AB,0.1～10μmol/L)组的3H-TdR掺入量减少;S期细胞构成比和细胞增殖指数减少.结论 AngⅡ对VSMC有促增殖作用 ,可被G-B和G-AB所拮抗.     

血管紧张素Ⅱ受体对血管紧张素-（1-7）作用的影响

目的：探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）1对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠系膜细胞（GMC）增殖及血管紧张素Ⅱ受体对血管紧张素-（1-7）作用的影响。方法：选择对数生长期GMC，分为对照组、AngⅡ组、Ang-（1-7）组、[Sar^1,Ile^8]-AngⅡ＋Ang-（1-7）组、、PD123319＋Ang-（1-7）组，通过[^3H]-Thymidine及[^3H]-Leucine掺入分别测定GMC的DNA、蛋白质合成；结晶紫染色检测细胞数日，观察系膜细胞增殖情况，探讨Ang-（1-7）是否通过AngⅡ受体发挥作用。结果：Ang-（1—7）可抑制AngⅡ诱导GMC的DNA、蛋白质合成及细胞数日增加；[Sar^1,Ile^8]-AngⅡ和PD123319不影响Ang-（1—7）的上述作用。结论：Ang-（1—7）能抑制基础和AngⅡ诱导的GMC增殖，其作用的发挥不通过AngⅡ的AT1和AT2受体介导。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨下调血管生成素样蛋白7(Angptl7)表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测AngⅡ诱导的VSMC生长,流式细胞术检测下调Angptl7蛋白表达对细胞周期的影响。分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后细胞中Angptl7 mRNA和Angptl7、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1、p21、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 采用1μg/mL的AngⅡ处理24 h能提高VSMC活力(0.63±0.06 vs.0.37±0.06)(P<0.01),促进Angptl7 mRNA和蛋白的表达(3.05±0.21 vs.0.97±0.06和1.61±0.14 vs.1.01±0.12)(P<0.01)。下调Angptl7蛋白表达可抑制CDK2、细胞周期蛋白E1和Bcl-2蛋白的表达,促进p21和Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论 AngⅡ能促进VSMC增殖,上调Angptl7 mRNA和蛋白表达。下调Angptl7表达可抑制AngⅡ诱导的V...     

蒺藜皂苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察蒺藜皂苷（GSTT）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及相关因素的影响。方法采用培养的牛VSMC，以血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）为刺激因子，应用MTT法检测细胞增殖；以H2O2为刺激因子，应用激光扫描共聚焦显微镜检测VSMC内钙离子浓度；应用硝酸还原酶法检测培养的牛血管内皮细胞NO释放量。结果GSTT能明显抑制AngⅡ刺激的VSMC增殖，具有剂量依赖性；GSTT也能抑制H2O2所致的VSMC内钙离子浓度升高，使血管内皮细胞释放的NO明显增多。结论GSTT能抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖，此作用可能与抑制活性氧激活钙离子信号转导途径、增加血管内皮细胞NO含量等因素有关。     

银杏内酯对血管紧张Ⅱ依赖性血管平滑肌细胞增殖的作用

目的 观察血管紧张Ⅱ（AngⅡ）对培养牛主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及银杏内酯对其增殖的影响。方法 采用组织块贴壁法培养牛主动脉VSMC,以^3H-TdR掺入法和流式细胞仪分别测定VSMC的DNA合成量及细胞周期中各期细胞构成比。结果 （AngⅡ）（0.1μmol/L)作用24h使用^3H-TdR掺入量比对照组增加34%;S期和G2/M期细胞增多,细胞增殖指数由35.15%增至45.03%。与（AngⅡ）组相比,AngⅡ加银杏内酯B（G-B,0.1-10μmol/L)组、AngⅡ加G-B和银杏内酯A（G-A）的混合物（G-AB,0.1-10μmol/L)组的^3H-TdR掺入量减少;S期细胞构成比和细胞增殖指数减少。结论 AngⅡ对VSMC有促增殖作用,要被G-B和G-AB所拮抗。     

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导HFL-I增殖和胶原合成的影响

目的:研究苦参碱(matrine,Mat)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人胚肺成纤维细胞(HFL-I)增殖和胶原合成的影响,探讨其抑制纤维化的机制。方法:以AngⅡ诱导HFL-I为研究对象,不同浓度的Mat作用48 h后,采用四氮唑盐(MTT)法检测Mat对HFL-I增殖的影响;羟脯氨酸测定HFL-I胶原合成量。结果:在一定范围内,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导的HFL-I增殖和胶原合成(P<0.01)。结论:苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的HFL-I增殖和胶原合成增加,从而发挥有效的抗纤维化作用。     

血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞增殖的影响及机制研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在体外对自发性高血压以及正常血压两种乳鼠左心室成纤维细胞(CFB)的促生长作用并通过应用AngⅡ受体I型(ATlR)抑制剂--洛沙坦以探讨AngⅡ的作用途径。方法酶解法制备乳鼠左心室CFB,分为(1)对照组(不加任何药物);(2)不同浓度AngⅡ(10-10～10-6)组(3)10-6M洛沙坦组;(4)10-8MAngⅡ+不同浓度洛沙坦(10-8～10-6M)组。应用3H-TdR、3H-Leu掺入法测定细胞DNA和蛋白质合成率。结果AngⅡ使CFB3H-TdR、aH-Leu掺入率增加,呈剂量依赖性。洛沙坦可抑制AngⅡ的作用。结论AngⅡ在体外具有经细胞表面的AT1R促进CFB增殖的作用。     

D-硫酸多糖抗血管平滑肌细胞增殖作用及其机制

目的：探讨硫酸多糖（DPS）抗增殖作用及其机制,方法;用MTT法评价DPS抗大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖作用,用流式细胞仪观察DPS对VSMC胞浆内游离Ca^2 的含量、细胞周期和蛋白质含量的影响。结果：DPS在0.001-100mg/L浓度下,对AngⅡ诱导的VSMC增殖均有明显抑制作用,最佳抑制浓度为1mg/L,流式细胞术分析结果表明,DPS在抗增殖的浓度（1mg/L）下能抑制VSMC从G0/G1到S期的转换,阻止VSMC进入G2/M期;减少VSMC蛋白质的合成、DPS能明显抑制胞浆内游离Ca^2 浓度的升高,此作用可被一氧化氮合酶抑制剂（L-NAME）所阻断,提示一氧化氮可能介导了DPS降低胞浆内游离Ca^2 浓度的作用。结论：硫酸多糖DPS可拮抗AngⅡ诱导的VSMC增殖,其作用机理可能与降低胸浆内游离Ca^2 浓度,抑制VSMC的DNA及蛋白质合成有关。     

淡豆豉异黄酮对增殖血管平滑肌细胞JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的探讨淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及Janus激酶2-细胞信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法检测VSMC增殖活性;RT-PCR法检测AngⅡ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor1,AT1R)mRNA表达;Westernblot法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白JAK2,STAT3及其磷酸化表达水平。结果100、200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,并明显下调AT1R mRNA表达水平;200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显下调磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的表达。结论淡豆豉异黄酮可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,其机制可能与下调AT1R表达,阻断JAK2/STAT3信号通路的磷酸化有关。     

香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖与迁移的影响

目的:研究香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与迁移的作用。方法:采用贴壁法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,以Ang Ⅱ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖的模型,分别应用质量浓度为10^-7 mol·L^-1 Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ+不同浓度香青兰总黄酮组(25,50,100 mg·L^-1)作用24 h,并设空白对照组进行比较。采用MTT法检测细胞的增殖;transwell法检测细胞的迁移;免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与对照组比较,Ang Ⅱ组能显著刺激大鼠VSMC的增殖和迁移,香青兰总黄酮不同剂量组联合Ang Ⅱ可在一定程度上抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖,迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。结论:香青兰总黄酮具有抑制Ang Ⅱ诱导VSMC增殖与迁移的作用。     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用，并研究福辛普利对其的影响。方法：采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和福辛普利对其的影响。结果：血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngⅡ作用，对细胞凋亡有一定的影响，同时可影响凋亡调控基因的表达。结论：血管紧张素Ⅱ具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用，尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响。方法：培养新生大鼠心肌细胞，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[H^3]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；用West—ern-blot测定p-ERK表达。结果：STS能显著降低AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量、蛋白合成速率上升，同时对p-ERK表达具有剂量、时间依赖性抑制作用。结论：STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥大，机制与抑制p-ERK表达有关。     

粉防己碱对高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

探讨了粉防己碱 (Tet)抑制培养的大鼠主动脉平滑肌细胞 (AVSMC)增殖的作用 ,MTT法分析细胞增殖 ,[3 H]TdR参入法分析细胞DNA合成 .结果显示 :①肾血管性高血压〔RH ,二肾一夹 (2K1C)术后18周〕大鼠AVSMC超微结构呈典型的合成细胞特征 ;②RH大鼠AVSMC具有更活跃的增殖倾向 ,血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和去甲肾上腺素 (NE)刺激下指数增长期细胞数和在NE刺激下的AVSMC生长率均明显增高 ;③Tet(50mg·kg- 1·d- 1,po ,2K1C术后 9周始 ,连续 9周 )治疗组的AVSMC对NE和AngⅡ诱导的细胞增殖反应性和生长率较RH组明显降低 ;④对RH组和伪手术组大鼠的AVSMC ,Tet(0 .1～ 10μmol·L- 1)体外给药可浓度依赖性地抑制NE或AngⅡ诱导的增殖和 [3 H]TdR参入 .研究表明 ,RH大鼠AVSMC对NE和AngⅡ促增殖作用敏感性及反应性增高 ;Tet可降低其对NE和AngⅡ的反应性 ,抑制AVSMC增殖和DNA合成 .     

蒺藜皂苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察蒺藜皂苷(GSTT)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及相关因素的影响。方法采用培养的牛VSMC,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)为刺激因子,应用MTT法检测细胞增殖;以H₂O₂为刺激因子,应用激光扫描共聚焦显微镜检测VSMC内钙离子浓度;应用硝酸还原酶法检测培养的牛血管内皮细胞NO释放量。结果GSTT能明显抑制AngⅡ刺激的VSMC增殖,具有剂量依赖性;GSTT也能抑制H₂O₂所致的VSMC内钙离子浓度升高,使血管内皮细胞释放的NO明显增多。结论GSTT能抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,此作用可能与抑制活性氧激活钙离子信号转导途径、增加血管内皮细胞NO含量等因素有关。     

前胡丙素对牛主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨前胡丙素(pra-C)对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响 方法:细胞DNA的合成量由~3H-胸腺嘧啶核苷[~3H]TdR)掺入试验测定,应用流式细胞术测定细胞周期,用乳酸脱氢酶活性测定观察药物的毒性.结果:无论有无血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),在0.01μmol/L到10μmol/L浓度范围内,pra-C均可呈浓度依赖性地抑制SMC的增殖,抑制作用主要与阻止细胞进入有丝分裂期有关,而与细胞毒性无关.结论:pra-C能够完全阻断Aug Ⅱ诱导SMC的增殖效应,部分阻止小牛血清诱导的细胞分裂,这对于血管增生性疾病的防治有重要意义.     

ACE2通过下调AT1R和ERK1/2的磷酸化而抑制平滑肌细胞的增殖

目的 探讨血管紧张素转换酶2(ACE2)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和细胞外基质激酶(ERK)1/2磷酸化水平及细胞增殖的影响.方法 荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达;将载有ACE2基因慢病毒表达载体(Lentiviral-ACE2)以感染复数为10(MOI=10)感染平滑肌细胞不同时间(24、48、72、96 h);采用CCK-8法检测平滑肌细胞增殖;Western blot检测ACE2、AT1R及ERK1/2磷酸化水平.结果 目的 蛋白GFP表达量明显增加,慢病毒ACE2的表达量成时间依赖性增加,并且在96 h时蛋白表达量较对照组和空载体组明显升高,(1.22±0.06 vs 0.53±0.03和0.53±0.09,P<0.05,n=4);AngⅡ(10-7 mol·L-1)可以促进平滑肌细胞的增殖,ACE2能够抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖(0.53±0.10 vs 0.68±0.03,P<0.05,n=5);AngⅡ(10-7 mol·L-1)作用平滑肌细胞12 h后AT1R明显上调,同时ACE2明显抑制AngⅡ诱导的AT1R的上调(0.34±0.01 vs 0.73±0.07,P<0.05,n=4); ACE2能够明显抑制AngⅡ诱导的ERK1/2的磷酸化水平 (0.43±0.06 vs 0.71±0.08,P<0.05,n=4).结论 ACE2可以通过下调AT1R和/及ERK1/2 的磷酸化水平而抑制平滑肌增殖,提示ACE2的过表达具有血管保护作用.     

茯苓提取物以miR-649/Akt1通路调控AngⅡ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移和侵袭机制

目的 探讨茯苓提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 AngⅡ诱导VSMCs细胞,茯苓提取物作用后,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力,Western Blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p...