食管癌变过程中cyclin D1和Rb的表达及其意义的前瞻性研究

目的：探讨cyclin D1和Rb基因在食管癌变过程中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学S—P法检测cyclin D1和Rb基因在17例癌变组和40例非癌变组中的表达。结果：Cyclin D1在癌变组中的表达增高（P〈0．05）,cyclin D1与Rb在早期癌中的表达存在正相关（P〈0．05）。结论：Cyclin D1基因的过表达和食管癌的发生有关,cyclin D1和Rb基因表达的变化可能是食管癌发生中的早期事件。     

食管黏膜上皮癌变过程中p27、cyclinD1和bcl-2蛋白的表达及其意义

目的　探讨p2 7、cyclinD1和bcl 2基因在食管鳞癌发生发展中的意义和相互间的作用。方法　采用免疫组化染色检测p2 7、cy clinD1和bcl 2蛋白在正常食管黏膜、非典型增生及浸润癌各 64例中的表达。结果　p2 7在正常食管黏膜表达率最高 (90 6% ) ,随食管黏膜上皮病变的发展表达率呈下降趋势 ,而cyclinD1和bcl 2在食管鳞癌的发生发展中表达呈上升趋势 ,p2 7、cyclinD1和bcl 2的表达率在非典型增生组、浸润癌组与正常组比较均有显著性差异 (P <0 0 1) ;相关分析显示食管鳞癌组织中p2 7与cyclinD1呈负向表达 ;p2 7、cyclinD1和bcl 2的表达与食管癌的淋巴结转移密切相关 (P <0 0 5 )。结论　食管癌的发生发展是多因素作用的结果 ,p2 7、cyclinD1和bcl 2的表达与食管癌的临床病理指标有关 ,可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的重要分子指标。     

p53基因第72位密码子突变与食管鳞癌临床病理特征关系的研究

目的研究p53基因第72位密码子（p53 codon72）突变与人食管鳞癌临床病理特征的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度（PCR-RFLP）方法检测118例人食管鳞癌组织及癌旁正常食管黏膜组织的p53 codon72的突变及其差异，并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果p53 codon72的Arg／Arg和Pro／Pro或Arg基因型在癌组织和癌旁正常食管黏膜组织的频率分别为11．0％和38．1％、4．2％和7.60A。p53 codon72Arg／Pro基因型在癌组织和癌旁正常食管黏膜组织分布差异具有显著性（χ^2=55.75，P〈0.01），p53 codon72突变与p53蛋白表达有关（χ^2=15．21，P〈0．01）；且p53 codon72的Pro等位基因与食管癌的TNM分期、分化程度和淋巴结转移均呈显著相关（P〈0．01）。结论抑癌基因p53第72位密码子突变在食管癌发生、发展中可能起重要作用。     

p27-CyclinD1/CDK4-Rb蛋白在不同类型甲状腺肿瘤组织中的表达及临床意义

目的：探讨细胞周期调控基因蛋白p27、CyclinD1、CDK4、Rb在不同类型甲状腺肿瘤组织中的变化，为甲状腺肿瘤的发生学以及临床诊断提供参考。方法：应用流式细胞术和免疫荧光技术对甲状腺乳头状癌（40例）、甲状腺腺瘤（16例）、结节性甲状腺肿（21例）、正常甲状腺组织（10例）的CyclinD1、CDK4、p27、Rb基因蛋白的表达进行定量检测。结果：CvclinD1和CDK4基因蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达量显著高于其它三组（P〈0．01），而后三组间差异无显著性（P〉0．05）；p27基因蛋白在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺乳头状癌表达量依次减少，均低于正常甲状腺组织（P〈0．05）；Rb基因蛋白的表达量在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺乳头状癌中依次减少，但各组间无显著性差异（P〉0．05）。结论：CyclinD1／CDK4高表达、p27低表达在甲状腺乳头状癌的发生中起着重要的作用．而Rb基因在甲状腺乳头状癌的发生中可能不起主要作用。     

RUNX3与OPN在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究RUNX3与OPN在食管鳞癌发生、发展、浸润和转移中的作用以及临床意义。方法免疫组化检测60例食管鳞癌病人的食管正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及鳞癌组织中RUNX3蛋白和OPN蛋白的表达情况。结果RUNX3在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管癌组织中分别为78．33％（47／60）、43．48％（10／23）、31．67％（19／60）。RUNX3的表达与食管鳞癌浸润深度和分期均明显相关（P〈0．05）。OPN在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管癌组织中分别为0％（0／60）、34．78％（8／23）及76．67％（46／60）,OPN的表达与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移和分期均明显相关（P〈0．05）。RUNX3和OPN在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生及正常食管黏膜组织中的表达呈明显的负相关（P〈0．05）。结论两者联合检测对探讨食管鳞癌的发生、发展、浸润、淋巴结转移及预后判断可能会有更大的意义。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

ERK1和P38在食管鳞癌组织中的表达

目的探讨人食管鳞癌中ERK1和P38蛋白的表达情况。方法应用免疫组织化学方法检测35例人中晚期食管鳞癌及其癌旁正常黏膜（其中15例包括早期癌）中有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成员ERK1和P38的表达情况。结果ERK1和P38在中晚期鳞癌中的表达高于早期癌和正常黏膜,有统计学差异（P〈0．01）,P38的表达与性别、肿瘤大小、肿瘤位置及临床分期无明显相关（P〉0．05）,与有无淋巴结转移相关（P〈0．01）,ERK1的表达与上述临床病理特征无明显相戈（P〉0．05）。结论中晚期食管鳞癌中ERK1和P38处于过度表达状态,参与食管癌的发生、发展和转移。     

血管内皮生长因子-C及p63在早期食管癌和上皮瘤变组织中的表达

目的探讨血管内皮生长因子-C（VEGF—C）和p63蛋白在早期食管癌及上皮内瘤变组织中的表达及其临床意义。方法随机选取正常食管黏膜、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及早期食管癌组织共146例,应用免疫组织化学EnVision二步法检测VEGF—C和p63蛋白在不同病理阶段中的表达。结果不同病理阶段的VEGF—C表达差异有统计学意义（X^2=47．455,P〈0．001）。正常黏膜与高级别上皮内瘤变（X^2=26．483,P〈0．001）、正常黏膜与早期癌（X^2=36．721,P〈0．001）、低级别上皮内瘤变与高级别上皮内瘤变（X^2=10．025,P〈0．0083）、低级别上皮内瘤变与早期癌（X^2=16．734,P〈0．001）之间VEGF-C的表达量构成比差异均有统计学意义。病理阶段与VEGF-C表达程度间呈正相关（r=0．462,P〈0．001）。不同病理阶段的p63表达量构成比差异有统计学意义（X^2=28．962,P〈0．05）。正常黏膜分别与低级别上皮内瘤变（X^2=12．735,P=0．005）、高级别上皮内瘤变（X^2=20．421,P〈0．001）、早期癌（X^2=20．854,P〈0．001）各组间的p63表达量构成比差异均有统计学意义;病理阶段与p63表达程度间呈正相关（r=0．272,P〈0．05）。结论VEGF—C和p63蛋白与早期食管癌和上皮内瘤变发生显著相关,可作为预警指标。     

食管癌及癌前病变组织中p16蛋白表达的定性和定量分析

目的：定性和定量分析P16蛋白在食管癌及癌前病变组织中的表达，探讨其与食管癌发生发展的关系。方法：应用免疫组化及流式细胞术（FCM），检测P16蛋白在食管癌及癌前病变组织中的表达。结果：1）从鳞状上皮→不典型增生（癌前病变）→原位癌→浸润癌，随着病变加重．P16蛋白表达呈逐渐降低趋势。2）免疫组化结果显示：正常组与不典型增生Ⅰ级组p16蛋白表达差异无显著性（P〉0．05），与其余各组差异有显著性（P〈0．05）；浸润癌组与正常组、不典型增生Ⅰ级组差异均有显著性（P〈0．05）．与其余组差异无显著性（P〉0．05）。3）FCM结果：不典型增生Ⅱ级组与正常组P16蛋白表达量差异有显著性（P〈0．001）．不典型增生Ⅱ级、Ⅲ级组间差异有显著性（P〈0．05）．不典型增生Ⅲ级与食管癌组间差异无显著性（P〉0．05）结论：P16蛋白表达缺失在食管癌变过程早期阶段就已经发生．随着病变发展P16蛋白阳性表达率逐渐降低．其表达缺失可能在食管癌发生、发展及转归过程中起重要作用。     

转移抑制因子KAI1和E-Cadherin在食管癌组织中的表达及其意义

目的 探讨KAI1和E-Cadherin在食管癌中的表达及其意义。方法 用免疫组化S-P法检测KAI1和E-cadherin蛋白在60例食管癌及对应的食管正常黏膜组织中的表达情况。结果 在食管鳞癌组织中KAI1表达（50％）显著低于食管正常黏膜组织（81．67％）（P〈0．01）。食管一常组织中E-cadherin表达（80％）显著高于癌组织（41．67％）（P〈0．01）。KAI1低表达与食管癌病理分级、淋巴结转移及食管癌浸润深度无关（P〉0．05）；E-cadherin低表达与食管癌病理分级、淋巴结转移密切相关（P〈0．05），与食管癌浸润深度无关（P〉0．05）；两者表达皆与食管癌的人体分型无关（P〉0．05）。KAI1与E-cadherin表达无明显相关性（P〉0．05）：结论 E-cadherin的低表达与食管癌的淋巴结转移有关；KAI1低表达未见对食管癌浸润转移的影响；两者无协同作用。     

p16、CyclinD1、Cdk4、Rb基因在胰腺癌中的表达及其意义

目的：探讨ｐ１６,ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｃｄｋ４,Ｒｂ在胰腺癌中的作用及其相互关系。方法：免疫组织化学检测ｐ１６,ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｃｄｋ４,Ｒｂ蛋白在胰腺癌中的表达,原位杂交检测ｐ１６和ＣｙｃｌｉｎＤ１在胰腺癌中的存在状况。结果：ｐ１６在胰腺癌中低表达,ＣｙｃｌｉｎＤ１呈正相关关系。结论：胰腺癌发生机制涉及ｐ１６,ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｃｄｋ４和Ｒｂ调节环路中多个基因的异常,ｐ１６低表达和ＣｙｃｌｉｎＤ     

食管癌前细胞DNA含量及多基因表达的定量检测

目的 探讨食管癌高发区人群食管上皮癌变过程中的早期分子改变及早期癌变机理。方法 自食管癌高发区采集食管黏膜上皮细胞,碘化丙啶（propidium lodide,PI)染色进行DNA含量及倍体测定;对各基因蛋白进行间接免疫荧光标记,采用流式细胞仪（flow cytometry,FCM)进行定量检测。结果 DNA含量在癌形成时明显增高,二倍体细胞显著减少,而异倍体细胞明显增多,在癌细胞组异倍体率为84．2％;同时p53蛋白有明显积聚,而抑癌基因p16有明显缺失。在癌细胞组p53及cyclin D1蛋白表达的阳性率均为100％（5／5、6／6）。结论 在癌形成早期,DNA含量及异倍体率增加,癌基因cyclin D1表达增高,抑癌基因p16缺失及p53蛋白积聚。食管上皮癌形成时已有多个分子事件发生。     

Cyclin E、CDK2和p21WAF1在食管上皮癌变过程中的表达及意义

目的探讨食管上皮癌变过程中细胞周期调控因子cyclin E、CDK2和p21WAF1的表达状况及其意义.方法应用免疫组化SP法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织、31例非典型增生组织和17例正常食管粘膜中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA表达.应用半定量RT-PCR和Western blot检测22例新鲜食管癌及相应癌旁组织的mRNA和蛋白表达.结果从食管正常粘膜、非典型增生组织到癌组织,cyclin E和CDK2蛋白和mRNA阳性表达率逐渐上升,差异具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).食管癌组织中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA高表达,与癌旁组织或切缘正常食管粘膜有显著性差异(P＜0.01).cyclin E、CDK2和p21WAF1基因表达显著正相关(P＜0.01或P＜0.05).结论食管上皮癌变过程中,细胞周期相关基因cyclin E和CDK2表达逐渐增强.cyclin E基因表达异常是食管癌变过程中的早期事件.p21WAF1基因在食管癌中高表达,可能与细胞周期调控的反馈机制有关.     

食管癌组织中p16、p21、p53、cyclin D1表达及其意义

目的 探讨p16、p21、p53、cyclin D1在食管癌中的表达及其作用。方法 采用免疫组化方法检测30例食管癌中p16、p21、p53、cyclin D1的表达,采用PCR－SSCP的表达p53基因突变情况。结果 p16、p21阳性表达率均为63．3％,p53为66．7％,cyclin D1为86．7％,p53基因突变率为26．7％。结论 食管癌以p53第7外显子突变为主cyclin D1过度表达在食管中是常见的并且是早期出现的分子异常,p16、P21可作为判断食管癌分化程度及预后的1个参考指标。     

EXPRESSION OF p16,CYCLIN D1 AND RB PROTEIN IN GASTRIC CARCINOMA AND PREMALIGNANT LESIONS

Gastric carcinoma is one of the most serious diseases in mankind. Its pathogenesis has not been understood very clearly. Recent researches suggested that oncogenes (such as cyclin D1), antioncogenes (ie., p16, Rb) and cell cycle played an important role in the pathogenesis of gastric carcinoma. But there are few reports about the relationship between these genes in gastric carcinoma and gastric premalignant lesions. In this study, we will discuss these problems. MATERIALS AND METHO…     

skp2、p27kip1在正常胃黏膜和胃癌组织中的表达

[目的]探讨细胞S相激酶相关蛋白2（skp2）和细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白27（p27^kip1）表达与胃癌发生的关系。[方法]用免疫组化SP法检测69例胃癌组织中skp2、p27^kip1蛋白的表达，并与28例正常胃黏膜作对比；用RT-PCR方法随机检测其中3例胃癌组织中skp2的mRNA表达，并与其正常胃黏膜作对比。[结果]p27^kip1蛋白阳性表达率在胃癌中为46.38％，而正常胃组织中为96．43％（P〈0．00。p27^kip1蛋白在胃癌中的阳性表达率随肿瘤分化程度的降低、浸润深度的加深、淋巴结转移、病理分期进展而降低（10〈0．05）。skp2 mRNA在胃癌组织中的表达明显上凋（P〈0．01）。skp2蛋白阳性表达率在胃癌中为33.33％，而正常胃组织中为10．71％（P〈0．05）。skp2蛋白阳性表达率随肿瘤的分化程度降低而升高fP〈0．05）。skp2、p27^kip1蛋白在胃癌中的表达呈负相关（P〈0．01）。[结论]p27^kip1、skp2蛋白检测有助于胃癌的临床诊断及判断预后。     

Loss of heterozygosity of the Rb gene correlates with pRb protein expression and associates with p53 alteration in human esophageal cancer.

To understand the alterations of Rb tumor suppressor gene and the relationship between defects in the Rb and p53 pathways in human esophageal carcinogenesis, we examined the loss of heterozygosity (LOH) of the Rb gene and immunohistochemical staining of pRb protein in 56 esophageal squamous cell carcinoma specimens and related the results to the p53 gene alterations. Using four introgenic polymorphic markers as probes, we observed LOH of the Rb gene in 30 of the 55 informative tumor samples. Immunohistochemical analysis revealed different patterns of pRb expression among the tumor samples. In the 56 cases, 16 displayed extensive pRb staining comparable to that of the adjacent normal epithelia, whereas 33 showed either significantly decreased or no pRb staining and 7 had a focal staining pattern reflecting heterogeneous cancer nests in the tumor with respect to Rb status. In the tumor samples containing Rb LOH, 90% showed low or no pRb expression, whereas in samples without Rb LOH, only 20% had altered pRb expression. There was a strong association between LOH of the Rb gene and alteration of pRb expression in our samples (P < 0.0001), suggesting LOH is a main event leading to Rb inactivation. We found that Rb LOH was more frequent in tumors with p53 mutations (P < 0.05), which occurred in 31 of the 49 cases analyzed. When the status of Rb and p53 alterations was evaluated by the combined results of immunohistochemical and genetic analyses, we found that alteration of Rb and p53 had an even stronger association in our esophageal squamous cell carcinoma samples (P = 0.0015). Among the 51 cases in which both the Rb and p53 status were determined, 31 contained alterations in both genes, and only 5 and 6 cases were altered in only Rb and only p53, respectively. Our results suggest that defects in the Rb and p53 pathways and their potential synergistic effect in deregulating cell cycle and apoptosis are major mechanisms for esophageal carcinogenesis.     

p21WAF1、Cyclin D1和PRb在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的 :探讨 p2 1WAF1、细胞周期蛋白 D1 (Cyclin D1 )和 PRb在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及相互关系及其意义。方法 :应用免疫组织化学 SP法检测 5 7例 BTCC患者癌组织中 p2 1WAF1、Cyclin D1 和 PRb的蛋白表达。结果 :p2 1WAF1、Cyclin D1 和 PRb的阳性表达率分别为36 .8%、49.1%和 45 .6 % ,p2 1WAF1随病理分级升高阳性率显著下降 ,Cyclin D1 和 PRb的表达与BTCC的病理分级、临床分期和有无转移均相关 ,p2 1WAF1与 PRb的表达呈负相关 ,Cyclin D1 和PRb的表达呈正相关 ,而 p2 1WAF1与 Cyclin D1 的表达无关。结论 :p2 1WAF1/ Cyclin D1 / PRb通路异常与 BTCC的发生发展密切相关 ,p2 1WAF1的改变可能为癌变的早期事件 ,联合检测 p2 1WAF1、Cyclin D1 和 PRb可较准确地评价 BTCC的生物学特性 ,估计预后 ,指导治疗     

G1 checkpoint protein and p53 abnormalities occur in most invasive transitional cell carcinomas of the urinary bladder.

The G1 cell cycle checkpoint regulates entry into S phase for normal cells. Components of the G1 checkpoint, including retinoblastoma (Rb) protein, cyclin D1 and p16INK4a, are commonly altered in human malignancies, abrogating cell cycle control. Using immunohistochemistry, we examined 79 invasive transitional cell carcinomas of the urinary bladder treated by cystectomy, for loss of Rb or p16INK4a protein and for cyclin D1 overexpression. As p53 is also involved in cell cycle control, its expression was studied as well. Rb protein loss occurred in 23/79 cases (29%); it was inversely correlated with loss of p16INK4a, which occurred in 15/79 cases (19%). One biphenotypic case, with Rb+p16- and Rb-p16+ areas, was identified as well. Cyclin D1 was overexpressed in 21/79 carcinomas (27%), all of which retained Rb protein. Fifty of 79 tumours (63%) showed aberrant accumulation of p53 protein; p53 staining did not correlate with Rb, p16INK4a, or cyclin D1 status. Overall, 70% of bladder carcinomas showed abnormalities in one or more of the intrinsic proteins of the G1 checkpoint (Rb, p16INK4a and cyclin D1). Only 15% of all bladder carcinomas (12/79) showed a normal phenotype for all four proteins. In a multivariate survival analysis, cyclin D1 overexpression was linked to less aggressive disease and relatively favourable outcome. In our series, Rb, p16INK4a and p53 status did not reach statistical significance as prognostic factors. In conclusion, G1 restriction point defects can be identified in the majority of bladder carcinomas. Our findings support the hypothesis that cyclin D1 and p16INK4a can cooperate to dysregulate the cell cycle, but that loss of Rb protein abolishes the G1 checkpoint completely, removing any selective advantage for cells that alter additional cell cycle proteins.