肿瘤坏死因子-α介导大鼠心肌梗死后心力衰竭机制的研究

目的探讨心肌梗死(心梗)后大鼠衰竭心肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达、核因子-κB(NF-κB)活性和基质金属蛋白酶(MMPs)活性与心肌胶原含量、心功能的相互关系.     

肿瘤坏死因子α在大鼠心肌梗死后心肌间质重塑和心力衰竭中的作用

目的:探讨心肌梗死后大鼠心肌肿瘤坏死因子α表达、基质金属蛋白酶(MMPs)及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)变化与心肌胶原代谢和心功能改变之间的相互联系.方法:结扎大鼠冠状动脉前降支复制心肌梗死模型,为心肌梗死组.同时设假手术组,分别于术后4周、8周、12周行血流动力学检测,称取心脏组织湿重.对非梗死区心肌组织采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肿瘤坏死因子α信使核糖核酸(mRNA)表达,Western-blot法检测中性粒细胞胶原酶(MMP-8)、明胶酶(MMP-9)及TIMP-1蛋白表达,明胶酶谱法检测明胶分解活性和天狼猩红染色偏振光下检测心肌胶原含量.结果:①心肌梗死组较同期假手术组左心室舒张末压均显著增加(P＜0.05),平均动脉压、左心室内压最大上升和下降速率则显著降低,有极显著性差异(P＜0.01);除12周组左心室相对重量外,其余时相左心室相对重量和右心室相对重量均显著增加(P＜0.05).②心肌梗死组不同时相心肌较同期假手术组肿瘤坏死因子α mRNA显著增加,呈时间依赖性;MMP-8、MMP-9蛋白表达及MMP明胶酶分解活性均较同期假手术组明显增加,而TIMP-1差异无显著性(P＞0.05);心肌胶原含量增加,与心功能呈负相关.结论:肿瘤坏死因子α基因过度表达与MMPs蛋白表达增加及其活性增强变化相一致,心肌肿瘤坏死因子α表达增加可能是心肌梗死后心肌间质重塑和心力衰竭发生发展的重要机制之一.     

心肌梗死大鼠非梗死区间质纤维化及机制探讨

目的:探讨心肌梗死后不同阶段非梗死区心肌胶原的变化及其发生机制。方法:雌性Wistar大鼠,通过结扎左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。分为心肌梗死组(最终存活32只)和假手术组(最终存活47只),于术后24h、1周、2周及4周随机从两组中各取10~12只大鼠,分别行病理组织学、心肌胶原容积密度分数(CVF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(ALd)水平的分析,以及Ⅰ型胶原(col-1)及Ⅲ型胶原(col-3)的信使核糖核酸(mRNA)检测。结果:大鼠梗死范围为24%~33%。心肌组织Messon染色显示,假手术组间质只可见散在亮绿色胶原;术后24h~1周,心肌梗死组间质亮绿色胶原与假手术组基本相似;术后2~4周最明显。肿瘤坏死因子-α的表达在梗死后1~4周显著增强。心肌血管紧张素Ⅱ水平术后1~4周,心肌梗死组均高于假手术组,有显著性差异(P<0.05~0.001)。心肌醛固酮含量术后2~4周,心肌梗死组也明显于高假手术组,有显著性差异(P<0.05~0.001)。Ⅰ型胶原mRNA水平术后2~4周心肌梗死组明显高于假手术组;Ⅲ型胶原mRNA水平术后1~4周心肌梗死组明显高于假手术组(P均<0.05)。基质金属蛋白酶-9表达无变化。结论:①大鼠心肌梗死2周后非梗死区出现明显间质纤维化。②非梗死区间质纤维化可能与局部肾素血管紧张素醛固酮系统激活后增加血管紧张素Ⅱ水平及肿瘤坏死因子-α上调有关。③大鼠心肌梗死后4周内非梗死区基质金属蛋白酶-9表达无明显变化。     

核因子MF-KB活化和肿瘤坏死因子-α表达在大鼠心肌梗死后心力衰竭中的作用

目的探讨心肌梗死(MI)后大鼠心肌核因子-kB(NF-κB)活化、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达在心室重塑和心力衰竭进展中的作用. 方法结扎大鼠冠状动脉前降支复制MI模型,同时设假手术组(SH)组,4、8、12周后检测血流动力学指标,称取心脏组织湿重.对左室非梗死区心肌组织采用Western-blot法检测TNF-α蛋白表达,电泳动度迁徙率法(EMSA)检测NF-κB活性.     

核因子-κB抑制剂对老龄小鼠急性心肌梗死后心脏破裂和心室重构的影响及机制研究

目的:探讨核因子(NF)-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对老龄小鼠急性心肌梗死(AMI)后心脏破裂、心室重构的影响及机制研究.方法:18个月龄雄性C57/BL小鼠212只结扎左冠状动脉建立AMI模型,分为两组(每组106只):AMI+PDTC组术后每日腹腔注射PDTC 120 mg/(kg·d),AMI组每日注射同等剂量生理盐水.观察1周内心脏破裂率及心脏超声改变.再将AMI后3天、7天、14天不同时间行p65、肿瘤坏死因子-α mRNA表达,基质金属蛋白酶-9、2活性及心肌间质胶原含量测定.结果:与AMI组相比,AMI+PDTC组心脏破裂率降低(35.3%比15.6%),差异有统计学意义(P<0.05).与AMI组相比AMI+PDTC组舒张末期内径、左心室舒张末期外径降低,舒张期前壁厚度、收缩期前壁厚度、左心室重量增加,左心室短轴缩短率升高,差异均有统计学意义(P均<0.05),AMI后3天及7天AMI+PDTC组基质金属蛋白酶-9表达较AMI组同时间点降低(P均=0.000),AMI后3天及14天时AMI+PDTC组基质金属蛋白酶-2表达较AMI组同时间点降低(P均=0.000).AMI后7天和14天肿瘤坏死因子-α mRNA表达在AMI+PDTC组较AMI组同时间点降低(P=0.000),差异均有统计学意义.AMI后3天和7天AMI+PDTC组较AMI组心肌间质胶原容积分数降低(P值均为0.000),差异有统计学意义.结论:NF-κB抑制剂PDTC可降低老龄小鼠AMI后心脏破裂率,改善心室重构,可能是通过抑制肿瘤坏死因子-α及基质金属蛋白酶-9表达,降低胶原降解并抑制胶原合成的结果.     

卡维地洛对心衰大鼠心肌细胞凋亡及NF-κB活性的影响

目的：探讨核因子-κB（NF-κB）活化与充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的关系及卡维地洛（CAR）的作用机制。方法：观察雄性Waistar大鼠心肌梗死（MI）8周后的心肌细胞凋亡指数、心肌总抗氧化能力、丙二醛的浓度、Fas和FasL的mRNA水平、KB抑制蛋白-α（I-κB-α）表达及NF-κB的核结合活性的改变，并于MI后1周对大鼠进行7周的CAR和美托洛尔（MET）干预，观察CAR和MET对上述指标的影响。结果：MI后心肌细胞凋亡指数、丙二醛水平、Fas和FasL的mRNA水平、NF-κB活性增高，I-κB-α表达下调、总抗氧化能力下降（P〈0．05）。CAR和MET可不同程度地改善心功能指标（P〈0．05），CAR降低心肌细胞凋亡指数、丙二醛浓度、Fas和FasL表达及升高总抗氧化能力的效果优于MET，并上调I-κB-α表达、显著降低NF-κB活性（P〈0．05）。结论：氧化应激可激活NF-κB，启动Fas和FasL转录，介导心肌细胞凋亡，促进MI后充血性心力衰竭的发生、发展。CAR具有抗氧化作用，可通过抑制I-κB-α降解、降低心肌NF-κB活性，减少心肌细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶在大鼠心肌梗死后心肌间质重塑和心力衰竭中的作用

目的探讨心肌梗死(MI)后大鼠心肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达、基质金属蛋白梅(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)变化与心肌胶原代谢和心功能改变之间的相互关系.     

高同型半胱氨酸血症对内皮细胞炎症反应的促发作用及其干预性研究

目的本研究试图了解辛伐他汀对同型半胱氨酸诱导的内皮细胞炎症反应的抑制作用及其分子机制。方法同型半胱氨酸、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞不同时间点后,用核转录因子κB P65检测系统和凝胶电泳迁移率实验法检测κB P65核转录因子的活性,蛋白质印迹技术分析相关蛋白的表达。结果在高浓度同型半胱氨酸(3mmol/L)刺激下,人脐静脉内皮细胞中核转录因子κB的活化高峰出现在作用30min和6h时;且伴有IκBα短暂快速的磷酸化及IκKα和IκKβ蛋白水平升高(P<0.05)。高浓度同型半胱氨酸(3mmol/L)刺激24h后人脐静脉内皮细胞分泌基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9及白细胞介素1β显著增加。而辛伐他汀能显著抑制核转录因子κB活化及其继发的基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9及白细胞介素1β升高。结论同型半胱氨酸能引起人脐静脉内皮细胞炎症因子的表达与释放,这些生物学效应是通过核转录因子κB信号通路来实现的;辛伐他汀能显著抑制上述效应。     

核因子κB在肺泡巨噬细胞源性基质金属蛋白酶9表达中的作用

核因子κB（NF-κB）是一种与多种基因表达调控有关的核转录因子。基质金属蛋白酶9（MMP-9）对明胶和弹性蛋白有高度的亲和性，在细胞外基质损伤与修复中起重要作用。近年来MMP-9在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的作用受到关注，但其表达调控机制仍未阐明，因此本课题研究了NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）和N-乙酰半胱氨酸（NAC）对肺泡巨噬细胞（AM）源性MMP-9表达的影响，从而探讨NF-κB在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的AM源性MMP-9表达中的作用。     

中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响

目的观察中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响。方法阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为对照组(10只)、模型组(9只)、心康方组(9只)和卡托普利组(9只)。Masson染色观察心肌胶原变化,Western blot检测心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子κB的抑制蛋白(IκB)和p56的表达,Western blot和RT-q PCR分别检测心肌基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著增加,胶原容积分数显著升高(均为P<0.01);TGF-β1和p56表达显著增加,IκB显著降低(均为P<0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,心康方组和卡托普利组大鼠的心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著减少,胶原容积分数显著降低(均为P<0.01);TGF-β1和p56显著降低,IκB显著升高(均为P<0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论中药心康方可减轻心力衰竭大鼠的心肌胶原沉积,其机制可能与抑制核因子κB介导的TGF-β1上调有关。     

卡维地洛对心衰大鼠心肌细胞间粘附分子-1表达的影响

目的观察心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的改变及卡维地洛干预的影响。方法：将雄性Waistar大鼠前降支结扎，于术后1周开始予卡维地洛、美托洛尔及特拉唑嗪干预7周，观察三种三种肾上腺素能受体阻滞剂对大鼠心肌核因子-κB（NF-κB）的核结合活性、心肌ICAM-1的mRNA和蛋白表达的影响。结果：心肌梗死后8周大鼠心肌NF-κB活性增高，ICAM-1的mRNA和蛋白表达增强，卡维地洛可明显降低NF-κB的活性和ICAM-1的表达，而美托洛尔和特拉唑嗪对NF-κB活性和ICAM-1的表达无明显影响。结论：心肌细胞ICAM-1表达上调在心肌梗死后心力衰竭的病理生理机制中具有重要的作用，卡维地洛可明显抑制MI大鼠心肌ICAM-1的表达，这可能与其抑制NF-κB激活有关。     

凝血酶对血管内皮细胞核因子κB活化及基质金属蛋白酶2表达的影响

研究凝血酶是否通过激活核因子κB信号传导途径，诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2表达，以及重组水蛭素对该途径是否有拮抗作用。体外培养人脐静脉内皮细胞，用免疫细胞化学和免疫印迹法分析核因子κB活化时由细胞浆至细胞核的动态改变，用逆转录聚合酶链反应法评价基质金属蛋白酶2mRNA的表达。结果发现，凝血酶诱导脐静脉内皮细胞后15min即有核因子κB的活化，30min核内大量活化；凝血酶诱导脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2mRNA，较高表达在6～24h。重组水蛭素可以抑制该过程。结果提示，通过参与核因子κB激活传导信号途径，凝血酶诱导脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2mRNA表达。水蛭素可以有效地抑制凝血酶诱导脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2表达，但不能完全抑制核因子κB的活化。     

血管紧张素Ⅱ通过核因子κB上调巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导因子的表达

目的 观察血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞表达基质金属蛋白酶诱导因子的影响及其相关通路.方法 血管紧张素Ⅱ体外刺激人巨噬细胞,应用逆转录聚合酶链反应和Western blot测定基质金属蛋白酶诱导因子基因和蛋白表达;RNA干扰技术沉默核转录因子核因子κB p65亚基,评价核因子κB通路在血管紧张素Ⅱ上调巨噬细胞细胞基质金属蛋白酶诱导因子的表达中的作用.结果 血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞后,基质金属蛋白酶诱导因子mRNA和蛋白表达均显著增加,核因子κB p65亚基沉默后,血管紧张素Ⅱ对基质金属蛋白酶诱导因子mRNA和蛋白表达无上调作用.结论 血管紧张素Ⅱ上调基质金属蛋白酶诱导因子的表达,此调控过程有核因子κB通路的参与.     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ干预内皮细胞后细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶的表达

目的探讨肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ在导致内皮细胞凋亡过程中诱导型一氧化氮合酶的表达变化及核因子κB的作用。方法核因子κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐预处理和未预处理原代培养的脐静脉内皮细胞,用肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ分别进行干预,逆转录聚合酶链反应检测诱导型一氧化氮合酶mR-NA的表达,免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶和IκBα的蛋白表达,电泳迁移率分析检测核因子κB的活性,TUNEL法检测细胞凋亡。结果在10μg/L肿瘤坏死因子α和1μmol/L血管紧张素Ⅱ的干预下,核因子κB的活性显著增加(P<0.05),诱导型一氧化氮合酶mRNA和蛋白的表达与对照组比较显著增加(P<0.05),细胞凋亡发生显著增加(P<0.05);吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ引起的细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶表达的增加。结论在肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ作用于内皮细胞时,通过降解IκBα引起诱导型一氧化氮合酶的核转位,后者可引起诱导型一氧化氮合酶表达上调和细胞凋亡。     

兔心肌梗死后肿瘤坏死因子α信使核糖核酸表达的变化

目的研究兔心肌梗死心力衰竭后心肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)信使核糖核酸(mRNA)表达的变化及其与心功能改变之间的相互关系。方法采用家兔在体大面积心肌梗死心力衰竭模型,为心肌梗死组。同时设假手术组,分别于术后4周、6周、10周描记左心室收缩峰压(LVSP)和左心室舒张末压,对非梗死区心肌组织采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测TN-FαmRNA的表达。结果心肌梗死组不同时相心肌较同期假手术组TNF-αmR-NA显著增加,有极显著差异(P<0.01),且呈时间依赖性,同LVSP呈负相关。结论心肌TNF-α基因过度表达是心肌梗死后心力衰竭发生、发展的重要机制之一。     

外周血核因子-κB及sFas/sFasL活性与心力衰竭严重程度的相关性

目的:探讨充血性心力衰竭(CHF)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核因子-κB(NF-κB) 和血浆sFas/sFasL活性变化的意义。方法: 采用ELISA法检测76例CHF患者和30例对照组PBMCs的核蛋白提取物NF-κB和血浆sFas/sFasL的活性,并与患者心功能及超声心动图参数相比较,分析其与心功能及心肌重构的关系。结果: CHF患者PBMCs中NF-κB及血浆sFas/sFasL活性高于对照组,二者与心脏收缩功能相关指标呈显著负相关,与心肌重构相关指标呈显著正相关,并且NF-κB的活化与sFas/sFasL水平呈正相关(P<0.05)。结论: CHF患者NF-κB及sFas/sFasL活性明显增高, 并与心功能恶化及心肌重构程度密切相关。     

重组葡激酶加中药对重症急性胰腺炎大鼠心肌核转录因子κB的激活作用

[目的]研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌核转录因子κB（NF-κB）的活化及葡激酶的干预作用。[方法]63只SD大鼠随机分为假手术组（n=9）、对照组（n=27）、葡激酶合用益活清胰汤治疗组（n=27），SAP模型采用5％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。ELISA法测定6、12、24h各时点血肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平，RT-PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达，免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达，苏木精-伊红染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。[结果]术后6h大鼠心肌NF-κB mRNA及其蛋白表达异常增高，TNF-α、IL-6呈进行性升高，治疗组用药后心肌NF-κB mRNA及蛋白表达下调，血TNF-α、IL-6明显下降，与对照组相比P＜0．05，治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。[结论]SAP大鼠心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关，益活清胰汤合用葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

香烟及脂多糖等诱导巨噬细胞核因子κB的活化及其对黏附分子表达的调控

核因子κB(NF-κB)是炎症、免疫反应中一个关键的调控因子，其可在基因转录水平上调控细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达，有助于炎症和免疫反应^[1]。我们的研究通过检测经香烟烟雾提取物(CSE)、脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导后不同时间点小鼠巨噬细胞NF-κB活化和ICAM-1表达的程度，以及地塞米松(DEX)对TNF-α、     

核因子-κB激活在大鼠冠状动脉微栓塞后的心肌组织中的作用及机制

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)激活在冠状动脉微栓塞(CME)后心肌组织中的作用及机制.方法 清洁级雄性SD大鼠88只,其中64只经左心窜内注射自体微血栓、同时短暂夹闭主动脉建立大鼠CME模型后,随机分为未治疗组及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)干预组,分别于术后1、3、7、14 d处死;余24只为假手术组.电泳迁移率改变分析(EMSA)检测不同时间点心肌组织NF-κB DNA结合活性,Western blot测定肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达水平,实时聚合酶链式反应检测TNFα、IL-6及ICAM-1 mRNA 表达含量.结果 NF-κB DNA结合活性在CME后1 d增高,3 d时达到高峰;7 d时明显降低,14 d时与假手术组无显著性差异.CME组在不同观察时间点心肌TNFα、IL-6、ICAM-1蛋白及基因的表达较假手术组均明显增强(P＜0.05).NF-κB DNA结合活性与TNFα、IL-6、ICAM-13种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关(分别是r=0.72,P＜0.05;r=0.94,P＜0.01;r=0.62,P＜0.05).NF-κB特异性抑制剂PDTC干预显著抑制CME后心肌中TNFα、IL-6及ICAM-1蛋白及mRNA的表达(P均＜0.05),同时也改善心功能.结论 CME后NF-κB激活促使炎性因子TNFα、IL-6、ICAM-1在基因及蛋白水平明显上调,是诱导CME心肌炎症反应、心功能减低的重要早期事件.     

核因子及其抑制因子在糖尿病肾病发病过程中表达变化的研究

目的检测核因子(NF-κB)亚基P65及抑制因子(ⅠκBα)在糖尿病肾病发病过程中肾组织中的表达,以探讨NF-κB、ⅠκBα在糖尿病肾病发病中的作用。方法2003-09～2004-11在中国医科大学第一医院以链脲菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型2周、4周、12周组;检测血肌酐和尿蛋白和用ABC法检测NF-κBP65、ⅠκBα在肾小球的表达。结果在糖尿病肾病发病过程中ⅠκBα胞浆表达的阳性细胞数逐渐减弱;NF-κBP65核内表达的阳性细胞数逐渐升高。ⅠκBα胞浆表达与糖尿病肾损害呈负相关;NF-κBP65核内表达与肾损害呈正相关;ⅠκBα胞浆表达与NF-κBP65核内表达呈负相关。结论NF-κB与ⅠκBα在糖尿病肾病发病过程中的肾小球的相反表达方式与糖尿病肾病的发生、发展密切相关,ⅠκBα发挥关键作用。