单克隆抗体识别日本血吸虫循环虫卵抗原表位的初步研究

本文采用免疫印迹试验对抗日本血吸虫卵可溶性糖蛋白单克隆抗体SM_(21-2)识别感染兔血清中循环虫卵抗原表位作了初步的分析。将Dot-ELISA检测呈阳性反应的感染兔血清进行SDS凝胶电泳,再转移至NC膜上,采用间接ELISA染色。结果发现SM_(21-3)能识别感染10、100、1000条尾蚴兔血清中27kDa的循环虫卵抗原表位,而正常血清无此区带。同时发现在46kDa处存在非特异性反应。不同的封闭剂对印迹效果有一定的影响,用0.3％Tween-PBS获得了较好的结果。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原的电泳分析

本文报道日本血吸虫 SEA电泳分析的初步资料,PAGE的区带模式以及鉴定血清学抗原的方法。日本血吸虫 SEA的 PAGE谱十分复杂,有 12条氨基黑染色带,5条 PAS染色带,二者都能染色的有二条。日本血吸虫SEA有三种主要血清学抗原,其中二种是糖蛋白,一种是不含糖的蛋白质。以上结果表明,日本血吸虫 SEA的电泳分析结果与曼氏血吸虫 SEA的十分相似。     

日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原诊断血吸虫病的初步探讨

用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)作探针，采用ELISA和ELIB检测血吸虫病人血清抗体，对急慢性血吸虫病人的控出率分别为100％和98．2％，未出现假阳性及交叉阳性反应；治疗后3、6和12个月血清抗体的阴转率分别为32．3％、50．9％和64％。其中抗82，73，67，52，42，38，32，31，28，26．21，18kDa分子的血清抗体消失较快。结果表明，SIEA在血吸虫病的诊断中具有较高的敏感性、特异性和潜在的疗效考核价值。     

日本血吸虫成虫及虫卵可溶性抗原的早期诊断分子筛选

为获取有效的日本血吸虫病早期诊断靶抗原分子。以感染前和感染后2周、4周、6周兔混合血清以及急性、慢性日本血吸虫病人和正常人血清,用Westernblot对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)和虫卵可溶性抗原(SEA)进行了全面的分析与筛选。SEA140kDa和AWA54kDa、21kDa、20kDa分子出现最早,能被感染后2周兔血清所识别;SEA69kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA72kDa、45kDa、34kDa、15kDa相继能被感染后4周兔血清所识别;其中SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa与病人血清反应同6周兔血清反应效果相仿,均为免疫反应主带,且在SDS-PAGE上有对应的蛋白主带,具有潜在的早期诊断价值。进一步对SEA进行抗体类型的分析,发现SEA能刺激机体产生IgG、IgM和IgA反应,其中SEA50kDa、45kDa、38kDa三个抗原分子均能被IgG、IgM、IgA三种抗体所识别,且均为反应主带;SEA140kDa以IgM反应带最深;SEA100kDa反应带仅出现于病人血清,以IgM反应最强,且其与IgM反应带在急性病人血清明显深于慢性病人血清,表明针对IgM的SEA100kDa分子也具有一定的早期诊断和区分病程的价值。SEA140kDa、50kDa、45kDa、38kDa和AWA34kDa、21kDa、54kDa、15kDa和针对IgM的SEA100kDa分子是具有潜在早期诊断价值的优势靶抗原分子。     

日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原54kD等抗原保护力的鉴定

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制得的日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原ＳＩＥＡ ５４ＫＤ抗原免疫小鼠,用尾蚴击感染后,其肝内的总虫卵成熟卵的比例与对照组小鼠比较有显著的减少。ＳＩＥＡ５４ＫＤ抗原分子地的免疫有很强抗雌虫生殖和抗胚胎发育效果,因此可望作为日本血吸虫抗病疫苗修选分子。     

血吸虫虫卵抗原诱导的日本血吸虫感染小鼠IFN—γ及IL…

本研究调查了日本血吸虫感染的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞的ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４ｍＲＮＡ转录，于感染后０，３，５，８，１０和１２周摘取小鼠脾脏，将脾细胞置于含ＳＥＡ或ＣｏｎＡ的培养基中培养，然后提取脾细胞总ＲＮＡ，通过逆转录后ｃＤＮＡ的扩增，分析ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４的ｍＲＮＡ水平，ＲＮＡ模板同时进行β－ａｃｔｉｎ的逆转录的扩增，扩增产物被用作ＩＦＮ－γ和ＩＬ－４扩增的标准对照，在ＳＥＡ或ＣｏｎＡ诱导的未感     

日本血吸虫虫卵抗原致敏甲醛化红细胞的微量血凝试验

本文报告日本血吸虫虫卵抗原致敏甲醛化羊红细胞的微量血凝试验方法,实验结果稳定、重复性良好,致敏红细胞在4℃冰箱至少可保存4个月。实验所需血量少,器材简单,操作简便,有高度的敏感性和一定的特异性,阳性检出率可达92.13～100％;在非疫区的正常人群中假阳性仅2.46％,可作为血吸虫病普查过筛试验。在急性血吸虫病患者,血凝的阳性检出率及滴度均显著高于病程长或经反复治疗的慢性患者和晚期患者,并在动物实验中得到证实,提示血凝滴度可能与病程有关。     

日本血吸虫未成熟虫卵卵壳的超微结构

应用透射电镜和扫描电镜观察了日本血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ）未成熟虫卵卵壳的超微结构。初产期和胚胎期虫卵卵壳形态结构相似，均有形态多样的微管道贯通卵壳内外，管道内含一些分泌颗粒，管壁由单位膜构成；致密的微棘沿卵壳均匀分布，微棘纵切呈长三角形，横切呈星形，中央有小空腔；卵壳由电子密度低且较厚的外层和电子密度高且较薄的内层构成；卵壳表面有丰富的网样纤维基质。推测卵壳的微管道、微棘和网样纤维基质的形成时期是同步的，皆在雌虫卵模内形成。本文讨论了微管道的结构、功能与意义。     

日本血吸虫循环抗原与抗独特型抗体的检测及其比较

以日本血吸虫肠相关ＭｃＡｂ－Ｇ３及单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０致敏红细胞，建立ＲＩＨＡ诊断血吸虫病。结果是正常人、急、慢性及晚期血吸虫病人Ｇ３－ＲＩＨＡ阳性率分别为２．１７％、９８．７９％、８４．０％、３２．１４％；ＮＰ３０－ＲＩＨＡ阳性率各为１．４５％、９７．５８％、８１．３％、２８．５７％。７５例慢性感染人群中，两者与Ｋａｔｏ阳性符合率分别为８４．０％、８１．３％；而阴性符合率各是３１．５％、３７．０％轻、中、重感染度人群循环抗原／抗独特型抗体阳性率：Ｇ３－ＲＩＨＡ分别为８０．３３％、１００．０％、１００．０％；ＮＰ３０－ＲＩＨＡ为８０．３３％、８８．８９％、８０．０％，显示慢血病人血清中循环抗原及／或抗独特型抗体与ＥＰＧ无相关性。本文提示循环抗原、抗独特型抗体在免疫调变及／或免疫网络系统中呈竞争与抑制状态。     

日本血吸虫成虫抗原和虫卵抗原检测先天性感染仔兔血清抗体的动态变化

目的　观察仔兔血清抗体动态变化 ,探讨家兔日本血吸虫病垂直传播的体液免疫反应规律。方法　 5只怀孕晚期母兔分别人工感染 5 0 0条日本血吸虫尾蚴 只 ,仔兔出生后 4 3d起每隔 2周采血收集血清 ,至仔兔发育成熟 (约出生后113d)。分别运用日本血吸虫成虫抗原 (AWA)和可溶性虫卵抗原 (SEA) ,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgM抗体 ,观察动态变化。结果　仔兔先天性感染率为 6 0 % (12 2 0 ) ,其中 5只双性感染 ,7只单性感染。 2 0只仔兔 ,抗AWA IgG、抗AWA IgM抗体检测始终呈阴性 ;抗SEA IgG检测 ,5只双性感染仔兔有 4只于出生后 5 7d起陆续呈阳性 ,其余 16只始终为阴性 ;2 0只仔兔抗SEA IgM也始终呈阴性。结论　先天性感染日本血吸虫病的仔兔呈低免疫应答状态 ,可能存在免疫耐受     

组合单克隆抗体夹心斑点-ELISA检测日本血吸虫循环抗原的研究

本研究将抗不同表位单抗组合，首次用于夹心斑点-ＥＬＩＳＡ检测血吸由感染。对慢性日本血吸虫病患者的阳性检出率为８５％，１２例急性患者均阳性，１０例晚血病人４例阳性，非疫区正常人的假阳性率为２．２％。用单盲法检测的-组血清其符合率亦较满意。在基本消灭血吸虫病地区检测了１１００人，用夹心斑点-ＥＬＩＳＡ测抗原，阳性率为６．５％，以ＩＨＡ测抗体阳性率为２５．２％。在低年龄组人群，斑点ＥＬＩＳＡ与ＣＯＰＴ符合率为８８．９％，明显高于ＩＨＡ与ＣＯＰＴ的符合率（３５．７％），Ｐ＜０．０５。动物实验中，组合单抗夹心班点ＥＬＩＳＡ对低感染兔的阳性检出率高于单个单抗直接斑点-ＥＬＩＳＡ。     

用抗旋毛虫单克隆抗体纯化抗原诊断旋毛虫病

旋毛虫病的血清学诊断方法很多,但假阳性反应未能完全排除。作者用旋毛虫单克隆抗体(McAb)免疫亲和层析法,对粗制抗原进行纯化,再用纯化抗原作ELISA,诊断旋毛虫病,提高了诊断的特异性。1 材料和方法 制取纯净的裸肌旋毛虫幼虫,于0.01mol/L pH7.2 PBS中超声(15kHz,每次5min,共4次)匀浆,以7500r/min将匀浆离心10min,收集上清液,此即为旋毛虫可溶性粗制抗原。经分光光度计测     

单克隆抗体斑点试验检测血吸虫卵抗原

靶抗原为血吸虫卵糖蛋白的单克隆抗体SM21-3标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中虫卵抗原。12份感染兔血清全部呈阳性反应;12份正常兔血清呈阴性反应。8份感染 10 0条及8份感染10条尾蚴的治疗前兔血清呈阳性反应;治疗后1月,血清抗原水平有不同程度下降;治疗后3月,部分血清转为阴性,其余几份均呈弱阳性反应。检测血吸虫病人血清80份,阳性66份,阳性率为82.5％;检测正常人血清60份,未见阳性反应。上述结果表明本方法具有较好的敏感性与特异性,而且方法简单易行,肉眼观察结果,适于现场应用。     

用酶标记日本血吸虫成虫抗原对流免疫电泳检测抗血吸虫抗体

将新鲜日本血吸虫成虫以甘氨酸——盐酸缓冲液浸泡30分钟后用NS充分洗净,真空干燥,取这种材料100毫克以冷丙酮研磨脱脂2次,乙醚脱脂一次,取脱脂后的虫粉100毫克先以10毫升NS研磨30分钟,离心后上液保存,沉淀再加0.1MNa_2HPO_4溶液10毫升混悬,超声处理15分钟,离     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67)对血吸虫病的诊断价值。本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔。进行常规ELISA检测。结果对急,慢性血吸虫病患血清的检出率分别为100%和95%,与正常人血清,肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的变叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.7%,75.0%和90.09%。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

用斑点试验检测血吸虫虫卵抗原的进一步研究

<正> 研究表明,血吸虫卵具有强免疫原性,对检测抗体诊断血吸虫病具有重要意义。为此我们曾采用细胞杂交瘤技术制备了一株高效价的单克隆抗体SM21-3,该抗体能识别分子量20～67KD多个重复表位的虫卵抗原;标记过氧化物酶后,用于夹心法ELISA,     

抗血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇的单克隆抗体

<正> 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫BALB/c 小鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞按 Kennett 方法作细胞融合,用有限稀释法克隆化2～3次后,建立一株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(A6-B6),其培养上清经浓缩后作免疫球蛋白亚类签定为 IgM,杂交瘤诱生的小鼠腹水经 SEA 免疫     

几株抗血吸虫单克隆抗体细胞株的建立与特性鉴定

为了对血吸虫病的免疫诊断和免疫预防提供有价值的单克隆抗体,通过2次骨髓瘤细胞与感染日本血吸虫的小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立了4株分泌单克隆抗体的细胞株。其中2株的靶抗原为血吸虫成虫肠道;1株为成虫表面膜;另一株为成虫的肌细胞或纤维细胞。免疫球蛋白亚类鉴定表明前3株均为IgG_1。除了SM 48-2对虫卵呈弱反应外,未见对血吸虫虫卵、尾蚴、童虫有阳性反应;亦未见对曼氏血吸虫、肺吸虫、华枝睾吸虫、疟原虫及利什曼原虫有阳性反应。这几株细胞已在体外培养下稳定地分泌特异性抗体达6个月之久。