PTEN表达与胃肠癌细胞体外侵袭力关系的探讨

目的 :探讨PTEN基因mRNA表达与胃肠癌细胞体外侵袭力的关系。方法 :采用Transwell小室法测定 11种胃肠癌细胞系MKN2 8、MKN4 5、GC9811、GC9811-C11、KATOⅢ、AGS、HEPGⅡ、HCC、772 1、HT - 2 9、HR - 8348的体外侵袭力、运动力 ,RT -PCR检测 11种细胞系的PTEN表达水平。结果 :胃肠癌细胞体外侵袭力高低的顺序依次为 :AGS最高 ,HEPGⅡ、HCC、772 1、HT - 2 9、HR - 8348、SGC9811、SGC9811-C11次之 (几者间无显著差异 ) ,MKN2 8、MKN4 5、KATOⅢ最低 (P<0 0 1)。PTENmRNA相关表达水平的顺序依次为 :MKN2 8、MKN4 5、KATOⅢ最高 ,HEPGⅡ、HCC、772 1、HT - 2 9、HR -8348、GC9811、GC9811-C11次之 (几者无显著差异 ,P >0 0 5 ) ,AGS最低 (P <0 0 1) ,其相关表达与胃癌细胞体外侵袭力呈反比关系。结论 :PTENmRNA的相关表达水平在评价胃肠癌细胞体外侵袭力方面具有重要价值。     

Src在胃癌腹腔转移多细胞团簇抗失巢凋亡中的作用

目的 探讨Src蛋白对体外三维培养的胃癌多细胞团簇(multicellular aggregates,MCAs)增殖及凋亡的影响.方法 体外三维培养人胃腺癌细胞BGC823和MKN45成MCAs,Western blot检测MCAs和单层贴壁培养的胃癌细胞中Src蛋白表达情况.siRNA法干扰Src表达,转染胃癌细胞后检测其对胃癌细胞BGC823和MKN45 MCAs形态学的影响.分别采用CCK-8和流式细胞术检测干扰Src表达对胃癌BGC823和MKN45 MCAs细胞活力和细胞凋亡率的影响.结果 利用BGC823和MKN5成功建立胃癌MCAs体外三维培养模型,Westem blot检测结果表明,与对照组比较,MCAs中Src的表达水平明显高于单层贴壁培养的胃癌细胞[BGC823:(0.615 ±0.068)vs(0.219 ±0.017),P＜0.01;MKN45:(0.657 ±0.087) vs (0.420 ±0.015),P＜0.05].干扰胃癌细胞BGC823和MKN45 Src表达,可以显著降低MCAs形成能力,并明显影响MCAs活力.流式细胞术检测结果表明,干扰Src表达可以显著诱导MCAs发生凋亡[BGC823:(9.456±0.209)vs(3.026±0.201),P＜0.01;MKN45:(9.356 ±0.416) vs(2.541 ±0.251),P＜0.05].结论 Src是胃癌MCAs抗失巢凋亡的关键分子,抑制Src表达可以显著抑制胃癌BGC823 MCAs和MKN45 MCAs形成,影响胃癌MCAs增殖,并诱导胃癌MCAs凋亡.     

胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究

目的：探讨胃癌细胞系MKN中HLA—Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制。方法：以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照，利用流式细胞仪检测细胞表面HLA—Ⅰ类复合物的表达情况，Western blot检测HLA—Ⅰ类分子重链及轻链表达情况，半定量RT—PCR检测HLA—Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况，并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果：胃癌细胞系MKN表面HLA—Ⅰ类复合物表达降低，重链A及B／C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平，胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示，MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论：胃癌细胞系MKN HLA—Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。     

野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用

目的：观察野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用。方法：以逆转录病毒为载体将野生型p53基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823，检测p53对肿瘤细胞的影响。结果：p53在转染细胞中表达水平提高。外源性p53的导入使肿瘤细胞增殖细胞核抗原（PCNA）水平明显降低；G0／G1期细胞数增加，S期降低。转染p53基因的MKN28细胞探鼠体内成瘤能力明显下降。结论：野生型p53基因参与调节DNA复制及细胞周期，抑制癌细胞过度增殖。     

RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响

 目的研究RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法采用RNA干扰技术,在E-cadherin和S100A2表达阳性的MNK45细胞同时沉默E-cadherin和S100A2基因表达,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测干涉效果,MTT 和Transwell检测细胞生长和侵袭力的变化。结果小干扰RNA明显抑制MKN45 细胞E-cadherin和S100A2 的表达;干涉第11天,E-cadherin和S100A2蛋白表达下降,细胞生长速度和细胞侵袭力明显增加。结论E-cadherin和S100A2蛋白具有抑制细胞增殖和侵袭的功能,可作为抑癌因子参与胃癌的发生与转移。     

通过下调FOXM1的新型小分子抑制剂1-3-51抗胃癌细胞的作用

目的 研究新型小分子抑制剂1-3-51在胃癌中调控FOXM1 (Forkhead box protein M1)表达及其抗癌的作用.方法 CCK-8实验检测1-3-51处理后的BGC823和MKN45细胞IC50;Western blot检测胃癌细胞FOXM1表达;qRT-PCR检测胃癌细胞FOXM1及其下游分子Cyclin D1和MMP9 mRNA表达;流式细胞术测定细胞周期情况;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力;裸鼠皮下移植瘤模型检测1-3-51抗胃癌增殖效果;在胃癌细胞BGC823中转染FOXM1过表达质粒及其空载质粒,CCK-8实验、Transwell实验分别检测1-3-51对胃癌细胞活性、迁移及侵袭等的影响.结果 新型小分子抑制剂1-3-51在BGC823和MKN45细胞作用48 h后的IC50分别为(5.429±0.225) μmol/L、(5.169±0.239) μmol/L,并可以显著抑制FOXM1的表达及其下游分子Cyclin D1和MMP9 mRNA表达.1-3-51显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭及迁移.过表达FOXM1后,可部分逆转其抑制细胞增殖、侵袭及迁移能力.结论 小分子抑制剂1-3-51在胃癌细胞中可通过抑制FOXM1及其下游分子Cyclin D1和MMP9等的表达,进而降低胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力.     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对BGC823胃癌细胞株RIZ1基因去甲基化转录调控作用

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdB)对人胃癌细胞系BGC823细胞株RIZ1基因的去甲基化转录调控作用及对细胞株生长增殖的影响,寻找胃癌治疗的新靶点.方法:使用3种不同浓度5-Aza-CdR干预胃癌BGc823细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCB)检测药物干预前后RIZ1基因的甲基化状态和RIZ1 mBNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CAR处理的BGC823细胞中MZ1基因启动子区域cpG岛高甲基化,且RIZ1 mRNA不表达,经2,5,10 μmol/L 5-Aza-CdB处理48 h后,RIZ1基因启动子区域高甲基化得到逆转,细胞中均有RIZ1 mRNA表达,相对定量值分别为0.509,0.716,0.831;3种浓度5-Aza-CdR处理BGC823细胞后,与对照组比较,细胞增殖速度出现不同程度减慢(P<0.05),随着浓度的增加其抑制作用增强;并显著抑制BGC823细胞生长周期,与对照组相比,G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论:5-Aza-CdR能有效逆转胃癌BGC823细胞RIZ1基因的异常甲基化,从而激活因高甲基化导致RIZ1基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,抑制肿瘤细胞生长.     

OCT4基因在胃癌细胞系中的表达及其意义

【摘要】 目的 检测八聚体结合蛋白-4（octamer-binding protein-4,OCT4）基因在不同分化程度的胃癌细胞株（MKN-28、SGC-7901、BGC-823）及正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达情况,研究OCT4基因表达水平与胃癌细胞分化程度和侵袭力的相关性。方法 RT-PCR确定GES-1、MKN-28、SGC-7901、BGC-823中OCT4基因的表达水平,OCT4 siRNA转染BGC-823细胞,分别通过荧光定量PCR和Western blot检测干扰OCT4基因表达的效果,并利用Transwell小室法研究OCT4在BGC-823细胞侵袭力中的作用。结果 正常人胃黏膜细胞中未检测到OCT4的表达,人胃癌细胞系分化程度越低,OCT4基因表达量越高,低分化人胃癌细胞系BGC-823中OCT4基因表达最高,转染OCT4 siRNA的BGC-823细胞内的OCT4 mRNA和OCT4蛋白表达量明显下降（P＜0．05）。干扰胃癌细胞BG-823中OCT4基因的表达,穿膜细胞数量减少（P＜0．05）,侵袭力下降。结论 OCT4基因表达量与胃癌细胞的分化程度有关,OCT4基因可能在胃癌细胞的分化中起重要作用,影响胃癌细胞的侵袭能力,其表达程度有望成为胃癌患者恶性度预测的参考指标之一。     

RegⅠ-shRNA载体对胃泌素促胃癌细胞BGC823增殖作用的影响

目的探讨再生蛋白Ⅰ(RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用。方法构建3个RegⅠ-shRNA表达载体:pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3。分别转染胃癌细胞BGC823,G418筛选。RT-PCR检测RegⅠmRNA的转录水平,建立RegⅠ基因表达抑制胃癌细胞系。MTT法检测胃泌素孵育对胃癌细胞增殖的效应。结果 pSUPER-EGFP-REG/1可有效抑制RegⅠmRNA在胃癌细胞BGC823中的表达。胃泌素孵育前,RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞增殖能力较无基因表达抑制的胃癌细胞明显降低(P<0.05);胃泌素孵育后,胃癌细胞的增殖能力明显增加(P<0.05),而RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞增殖能力无明显改变(P>0.05)。结论成功建立了RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系,RegⅠ基因可能对胃泌素促胃癌细胞的增殖有促进的作用。     

TRAF1基因干扰质粒的构建及其对胃癌细胞生物学功能的影响

目的:构建T F1基因干扰重组质粒及建立T F1基因干扰瞬时转染胃癌细胞模型,然后通过干扰目标胃癌细胞中的T F1基因来检测T F1对胃癌细胞的生物学功能的影响。方法:首先通过real-time PCR和Western印迹验证T F1在胃癌细胞系BGC823,SGC7901,MGC803中的表达,筛选出T F1表达量最高的一株细胞作为干扰转染的目标细胞;设计及构建3个T F1的shRNA表达载体pLVX-shRNA-T F1-shRNA1~3,将其分别转染至目标胃癌细胞系中,应用real-time PCR和Western印迹筛选出干扰效率最强的shRNA,最后通过M及流式细胞术检测T F1对胃癌细胞凋亡能力的影响,通过Transwell小室迁移实验来检测对其迁移功能的影响。结果:与GES-1比较,T F1基因在BGC823,SGC7901,MGC803中的表达均有上调(P<0.05),其中以BGC823表达最高;3个T F1shRNA对T F1基因均有抑制作用,以pLVX-shRNA-T F1-shRNA2干扰效果最强;干扰胃癌细胞BGC823中的T F1可使细胞生长活力减弱,凋亡明显增加,但对其迁移功能无明显影响。结论:T F1基因在胃癌细胞系BGC823中上调最明显;pLVX-shRNA-T F1-shRNA2可成功干扰BGC823中T F1的表达;T F1可抑制BGC823细胞的凋亡。     

着丝粒蛋白-H对人胃癌细胞增殖的影响

目的检测着丝粒蛋白-H(CENP-H)基因在人胃癌细胞系中的表达情况,研究CENP-H对胃癌细胞增殖的影响。方法采用QPCR、Western blot检测7株胃癌细胞系及永生化人胃粘膜上皮细胞中CENP-H的mRNA和蛋白表达水平。用重组逆转录病毒感染胃癌细胞,建立稳定干扰内源性及高表达外源性CENP-H的胃癌细胞系,并利用Western blot及QPCR检测进行鉴定,最后采用MTT、平板克隆形成实验分析CENP-H对胃癌细胞增殖能力的影响。结果人胃癌细胞系中CENP-H蛋白及mRNA表达水平均高于永生化人胃粘膜上皮细胞。Western blot及QPCR鉴定结果表明成功建立稳定沉默内源性及高表达外源性CENP-H的胃癌细胞系。MTT、平板克隆形成实验显示干扰CENP-H后对胃癌细胞增殖能力起到抑制作用,过表达CENP-H后能促进胃癌细胞增殖。结论 CENP-H对胃癌细胞的增殖具有重要的作用,在胃癌的发生发展中可能扮演重要角色。     

基质金属蛋白酶-9及其mRNA在胃癌中的表达与血管新生的关系

目的　观察基质金属蛋白酶 9(MMP 9)与MMP 9mRNA在胃癌组织及细胞中的表达与作用特点 ,及其与肿瘤浸润、转移及血管新生之间的关系。方法　利用 74例胃癌标本及体外培养人胃低分化腺癌细胞BGC82 3,经连续切片免疫组织化学染色、原位杂交、侵袭实验、酶谱分析及形态定量分析方法 ,进行金属蛋白酶 (MMP) 9、MMP 9mRNA、CD34、α SMA、VEGFR 1、VEGFR 2的检测 ,并结合临床病理参数进行综合分析。结果　MMP 9及其mRNA的表达均与癌组织的浸润深度、分化程度、淋巴结转移密切相关 ;MVD与癌组织的浸润深度、淋巴结转移关系密切 ;BGC82 3细胞MMP 9,MMP 9mRNA ,VEGFR 2染色均为阳性 ,VEGFR 1染色阴性 ;MMP 9抗体可使BGC82 3细胞侵袭细胞数由 6 9± 5个 /40 0倍下降为 (18± 4 )个 /40 0倍 ;直接培养于培养皿表面的BGC82 3细胞有稳定的MMP 9,MMP 2酶原表达 ,但培养于I型胶原包被培养皿表面的BGC82 3细胞MMP 2表达明显增强并出现活化形式 ;BGC82 3细胞与VEGF共孵育 ,条件培养基中MMP 9酶原含量以VEGF剂量依赖的方式增加。结论　胃癌细胞自身具有产生与分泌MMP 9的能力 ,MMP 9对肿瘤的浸润、转移及间质血管新生具有促进作用。     

沉默circPVT1对5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的:研究circPVT1对胃癌细胞5-氟尿嘧啶（FU）敏感性的作用及分子机制。方法:采用RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞 BGC823/5-FU 中circPVT1的相对表达水平。沉默circPVT1,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用TUNEL试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用RT-PCR和Western 印迹检测Bcl-2、Bax 和caspase-3基因mRNA和蛋白的表达水平。沉默circPVT1观察裸鼠皮下移植瘤生长。结果:在5-FU抵抗患者胃癌组织中circPVT1的表达水平明显高于5-FU敏感患者（P＜0.01）。与BGC823细胞相比,circPVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显升高（P＜0.001）。下调circPVT1表达可增强5-FU的细胞毒性（P＜0.05）。与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的克隆形成能力明显降低（P＜0.05）。5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的凋亡数目明显高于5-FU+si-NC组（P＜0.01）。沉默circPVT1,与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,5-FU+si-circPVT1组移植瘤体积和重量明显低于5-FU+si-NC组（P＜0.05）。结论:沉默circPVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达,增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。     

细小病毒H-1感染对胃癌细胞核修复相关基因表达的影响

目的 探讨细小病毒H-1诱导胃癌细胞死亡的可能机制。方法 选取对细小病毒H-1敏感和不敏感的胃癌细胞株HGC27和BGC823，H-1病毒感染48h后提取细胞总RNA。应用不同标记的dCTP逆转录制备荧光探针，与含有8000点人类体细胞基因序列的表达谱cDNA芯片杂交，计算机荧光扫描分析HGC27细胞核修复相关基因表达谱的改变。实时定量PCR检测HGC27和BGC823细胞部分核修复相关基因的表达。结果基因芯片分析显示，HGC27细胞的64对核修复相关基因中，12对基因表达水平下调至0．5以下，6对基因表达水平上调至2倍以上。PCR定量检测证实，HGC27细胞BTG2表达明显下调，MBD2表达显著上调，XRCC4和H2A-Z的表达无明显改变；BGC823细胞BTG2表达明显下调，XRCC4、H2A．Z和MBD2表达无明显改变。结论 细小病毒H-1可能通过影响胃癌细胞核修复通路相关基因的表达，使细胞基因转录或细胞周期停止，从而诱导胃癌细胞死亡。     

Gli1基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学特性的影响

目的：探讨胶质瘤相关癌基因1（Gli1）在胃癌组织中的表达,阐明Gli1基因对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法：收集95例胃癌患者胃癌组织和癌旁组织,RT-qPCR法检测胃癌组织和癌旁组织中Gli1mRNA表达水平,免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁组织中Gli1蛋白表达水平。以人胃癌细胞株MKN28、BGC823和SGC7901为研究对象,胃永生化上皮细胞株GES-1作为对照,RT-qPCR法检测各细胞株中Gli1mRNA表达水平。将Gli1-siRNA转染BGC823细胞后,实验分为对照组、con-siRNA组和Gli1-siRNA组;RT-qPCR法检测各组细胞中Gli1mRNA表达水平,CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移能力,Western blotting法检测各组细胞P27、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白的表达水平。结果：胃癌组织中Gli1mRNA表达水平和蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织（t=27.606,P<0.01;χ²=54.782,P<0.01）。在GES-1、MKN28、SGC7901和BGC823细胞中Gli1mRNA表达水平比较差异有统计学意义（F=86.341,P<0.01）。Gli1-siRNA组Gli1mRNA表达水平明显低于对照组和con-siRNA组（F=48.322,P<0.01）。Gli1-siRNA组胃癌细胞增殖率明显低于对照组和con-siRNA组（F=54.428,P<0.01）。Gli1-siRNA组胃癌细胞的迁移数低于对照组和con-siRNA组（F=257.788,P<0.01）。与对照组比较,con-siRNA组细胞中P27、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）;与con-siRNA组比较,Gli1-siRNA组细胞中P27蛋白表达水平明显升高（t=-3.776,P=0.020）,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低（t=3.479,P=0.025;t=5.487,P=0.005）。结论：Gli1在胃癌组织表达水平高于癌旁组织,抑制Gli1基因的表达能抑制胃癌细胞增殖和迁移能力。     

17β-雌二醇可促进胃癌细胞BGC823生长

目的:观察不同浓度17β-雌二醇(E2β)处理时,人胃癌BGC823细胞生长情况以及雌激素受体ERα36表达的变化,探讨E2 β在胃癌生长调节中的作用及相关机制.方法:BGC823细胞经10-10,10-11和10-12 mol/L浓度的E2β处理24 h和48 h.细胞生长通过WST1方法检测.RT-PCR,Western blot及灰度分析法检测ERα36mRNA水平及蛋白水平变化,其平均光密度值通过t检验分析,应用免疫荧光染色方法检测ERα36蛋白在细胞中的位置变化.结果:E2β可促进胃癌BGC823细胞生长,但随着其浓度的上升,E2β的促生长能力下降.E2β可促进ERα36 mRNA表达,该促进作用具有浓度依赖性.E2β处理BGC823细胞24 h时,ERα36蛋白表达上升,48 h时,ERα36蛋白表达下降.ERα36蛋白定位于细胞膜,E2β对BGC823细胞ERα36蛋白定位无明显影响.结论:E2β可促进胃癌细胞BGC823生长.E2β-ERα36可能通过膜信号通路参与了胃癌细胞的生长调节.     

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂丁酸钠对胃癌细胞系生长及p16基因表达的影响

目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶抑制剂丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系SGC7901和BGC823生长及p16基因表达的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素染色法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法检测p16基因mRNA及蛋白质表达,甲基化特异性PCR法(MSP)检测p16基因的甲基化状态.结果 NaB处理后SGC7901和BGC823细胞生长受到抑制,1×10-3,3×10-3,5×10-3mol/L NaB处理72 h后两株细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数显著降低(P<0.01),呈现G1阻滞,各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01).p16基因在SGC7901及BGC823细胞中低表达,启动子区呈异常甲基化状态,NaB处理后在两株细胞中表达均增强.结论 NaB对胃癌细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导凋亡及上调p16基因表达有关,NaB可能通过增加组蛋白乙酰化水平及甲基化下调增加胃癌细胞中p16基因的表达.     

壳聚糖纳米粒介导的PIK3CA基因干扰对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的观察PIK3CA siRNA-壳聚糖纳米粒子处理胃癌细胞BGC823后,胃癌细胞BGC823侵袭能力的变化,研究壳聚糖纳
米粒子介导PIK3CA干扰在抑制胃癌侵袭转移中的应用价值。方法使用壳聚糖包被PIK3CA siRNA制备纳米粒子,纳米粒子
粒径在350 nm。用其处理胃癌细胞,通过western blot及PCR检测PIK3CA沉默情况,并通过Transwell实验观察细胞侵袭性的
变化。结果PIK3CA siRNA-壳聚糖纳米粒子可显著下调胃癌细胞BGC823中PIK3CA的表达（P<0.01）,并且可明显抑制胃癌
细胞的侵袭性（P<0.001）。结论通过壳聚糖纳米粒子介导的PIK3CA基因干扰可以显著降低胃癌细胞的侵袭能力。
     

miR-149-5P调控β-catenin/MMP2/E-cadherin介导胃癌BGC-823和MKN28的细胞迁移

目的 观察miR-149-5P对胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移的影响。方法 采用qRT-PCR方法检测miR-149-5P在胃粘膜上皮细胞(GES-1)与BGC-823和MKN28细胞中的表达。分别转染miR-149-5P mimics、NC、inhibitor和inhibitor-NC,采用qRT-PCR方法验证转染效率,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达或抑制miR-149-5P后胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移能力。采用Western Blot检测转染miR-149-5P mimics或inhibitor后BGC-823和MKN28细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白表达水平。结果 qRT-PCR实验结果显示:与GES-1相比,miR-149-5P在BGC-823和MKN28细胞中表达显著降低;转染mimics后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平显著升高,而转染inhibitor后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平下降。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示:转染mimics后可以抑制BGC-823和MKN28细胞迁移,而转染inhibitor后,可以促进BGC-823细胞迁移,MKN28细胞并无明显变化。Western Blot实验结果显示:在BGC-823和MKN28细胞中过表达miR-149-5P可上调E-cadherin的蛋白表达,抑制β-catenin和MMP2蛋白表达,而抑制miR-149-5P的表达可下调E-cadherin的蛋白表达,促进BGC-823细胞中β-catenin和MMP2蛋白表达,但转染inhibitor后MKN28细胞中E-cadherin、β-catenin和MMP2蛋白表达水平并无明显变化。结论 miR-149-5P可以抑制胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移。