内毒素识别、内化及清除相关受体的研究进展

内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)是革兰阴性菌胞壁外膜主要成分,由3部分组成:O-特异性侧链、核心多糖和脂质A(Lipid A)。LPS进入机体后,免疫细胞可通过相关模式识别分子识别LPS,诱发失控性炎症反应。其中,单核/吞噬细胞系统是LPS的主要效应细胞,其胞膜表面的模式识别受体是识别启动炎症反应的始动因素。肝脏是人体最大的清除外来有毒物质的器官,肝枯否细胞是全身最大的组织巨噬细胞群,是清除降解LPS的重要免疫细胞,肝窦状内皮细胞也可充当清道夫角色,可不依赖枯否细胞独立清除LPS[1]。本文就近     

大鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子的分泌与内毒素剂量关系的初步分析

目的：确定内毒素(LPS)诱导巨噬细胞产生肿瘤坏死因子(TNF)的适宜用量，建立内毒素感染的细胞模型。方法：选用不同剂量的LPS，刺激大鼠腹腔巨噬细胞，分别于不同的刺激时间收集细胞培养上清。TNF细胞毒效应用L929细胞和WEHI-164细胞检测，TNF-α浓度用ELISA法检测。结果：当LPS使用浓度为0．1μg／ml至5μg／m1时，其诱导产生的TNF细胞毒效应有逐渐增加的趋势，超过此剂量时，TNF细胞毒效应反而降低；巨噬细胞TNF的分泌量也随LPS剂量的增加而减少。结论：LPS在一定的浓度范围内，巨噬细胞培养上清中TNF含量明显增多，但LPS浓度过高反而会使TNF分泌量减少。     

内毒素与血管内皮细胞结合特性初探

目的 探讨无血清因素参与下血管内皮细胞(Vasvular endothelial cell，EC)与细菌内毒素(Lipopolysacchrides，LPS)的结合特点。方法 用激光共聚焦显微镜观察异硫氰酸荧光素标记的内毒素(Fluorescein isothiocyanate labelled LPS，FITC-LPS)与EC的结合情况，并提取荧光标记内毒素与内皮细胞结合后细胞膜性成分观察其中的荧光物质强度。结果 EC与FITC-LPS的结合存在浓度依赖性，结合的荧光主要集中于细胞浆，尤其是胞浆近核周区，核仁也可染色，结合的内毒素同细胞膜性成分关系密切。结论 EC可与LPS直接结合，并可能进入细胞内部而发挥作用。     

虎杖甙对内毒素性心肌细胞损伤的防治作用

目的 观察脂多糖(LPS)对心肌细胞微丝蛋白的形态学影响以及中药虎杖甙(PD)的防治效果。方法 体外乳鼠心肌细胞培养，随机分为4组：正常对照组(D′-Hanks作用于心肌细胞30min)、PD组(0．2mmol／L作用于心肌细胞10min)、LPS组(100ng／ml刺激30min)和LPS PD组(100ng／ml LPS30min，0．2mmol/L PD治疗10min)。用免疫荧光技术标记纤维状肌动蛋白(F-actin)。结果 正常对照组心肌细胞皮质部分有较多纤维状肌动蛋白分布，细胞内纤维状肌动蛋白呈网状布满于整个细胞；LPS组细胞皮质部分染色较弱甚至消失，心肌细胞应力纤维(stress fiber)形成；PD(0.2mmol/L)处理10min后，心肌细胞应力纤维消失，形态趋于正常组细胞；而PD组和正常对照组细胞形态无明显差异。结论 LPS可能直接导致心肌细胞应力纤维的形成，PD对LPS导致的心肌细胞损伤有保护作用。     

氯化镧对内毒素攻击后小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的 探讨氯化镧对内毒素(LPS)攻击后小鼠胸腺细胞凋亡的影响。方法 通过观察氯化镧对LPS(12．5mg／kg)攻击后小鼠胸腺细胞DNA片段百分率、胸腺细胞凋亡百分率和胸腺细胞DNA片段琼脂糖凝胶电泳结果的影响，探讨其对小鼠胸腺细胞凋亡状况可能作用。结果 10mg／kg氯化镧能显降低内毒素血症小鼠胸腺细胞DNA片段百分率、胸腺细胞凋亡百分率．抑制胸腺细胞的凋亡。结论 LPS攻击后，可导致小鼠胸腺细胞发生凋亡．而氯化镧对LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡具有一定的抑制作用。     

内毒素诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 从内毒素(LPS)所致血管内皮细胞(VEC)凋亡的角度进行了实验研究，为进一步探讨血瘀证实质及药物保护VEC作用机理，建立可靠的细胞凋亡模型。方法 以不同剂量内毒素作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h，通过荧光显微镜与流式细胞仪观察细胞凋亡程度，并测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果 不同浓度LPS作用HUVEC 24h后，与对照组相比，HUVEC有较典型的细胞凋亡，且LDH显著升高。结论1μg/mL LPS可用于建立HUVEC凋亡模型，对研究方药治疗血瘀证的作用机理奠定了基础。     

内毒素与慢性肾脏疾病的关系研究进展

内毒素即脂多糖(LPS)是革兰氏阴性(D-)杆菌细胞外膜的主要成分,具有多种生物活性,细菌死后或快速生长时释放出来,是广泛存在于自然界的致病原.     

氯喹通过上调泛素-蛋白酶体相关分子表达抑制LPS活化巨噬细胞的实验研究

目的 观察氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)刺激的巨噬细胞中泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)相关分子A20、TRIM33和USP28表达的影响.方法 应用LPS刺激小鼠Raw264.7细胞,荧光定量PCR检测酸化抑制剂CQ对LPS诱导锌指蛋白A20、泛素连接酶TRIM33和泛素特异性蛋白酶USP28的mRNA表达,Western blot检测CQ对LPS诱导A20和TRIM33的蛋白表达.应用siRNA转染技术沉默A20,荧光定量PCR检测CQ对LPS诱导炎性细胞因子TNF的mRNA表达.结果 与LPS对照组比较,经CQ预处理的Raw264.7细胞中,A20、TRIM33、USP28的mRNA表达均显著上调[(3.197 ±0.013) vs (1.292 ±0.009),(1.627±0.113)vs(0.797±0.083),(1.387±0.144)vs(0.742±0.061),P＜0.05],A20和TRIM33的蛋白表达也同样上调.采用siRNA干扰A20基因表达,则CQ预处理组细胞中LPS诱导的TNF-α mRNA表达显著上调[(7.650 ±0.113) vs (4.145±0.120),P＜0.01].结论 CQ可显著上调LPS活化的巨噬细胞中泛素化相关分子A20、TRIM33和USP28的表达,而干扰A20基因表达可显著上调LPS活化Raw264.7细胞中TNF-α的mRNA表达,提示泛素-蛋白酶体系统及其相关分子参与CQ抑制LPS-TLR4信号通路的活化.     

内毒素血症的中医药研究进展

内毒素是革兰氏阴性细菌细胞外壁溶解后的一种脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),它具有多种生物活性。每当感染革兰氏阴性菌后或肠道内毒素增加及网状内皮系统功能受损时,内毒素进入血液,即可发生内毒素血症(Endotoxeamia,ETM)。ETM可     

AF-1对内毒素诱导RAW264．7细胞IL-10表达的影响

目的 探讨抗炎素-1(Antitlammin-1,AF-1)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞白细胞介素10(inter-leukin-10,IL-10)表达的影响.方法 采用体外培养巨噬细胞RAW264.7细胞,实验分为正常对照组,LPS组和不同浓度的LPS+AF-1组.应用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测IL-10表达的变化.结果 1μg/ml的LPS刺激RAW264.7细胞后IL-10的表达较正常对照组增加(P<0.05),LPS+AF-1组IL-10表达较LPS组表达显著升高(P<0.05),并具有剂量依赖性结论 AF-1可促进LPS诱导的RAW264.7细胞IL-10表达的增加.     

内毒素及内毒素血症治疗研究进展

内毒素是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖(LPS)成分，脂多糖的类脂A是LPS的“毒力中心”。正常机体肠腔内含有大量细菌及内毒素，有报道称正常肠黏膜可允许少量内毒素进入门脉，而少量内毒素对促使肝脏网状内皮系统处于激活状态有一定意义。当机体受到创伤(包括手术)、烧伤、感染、放化疗和接受长期传统的肠外营养时，肠黏膜有可能发生通透性增高，导致细菌和内毒素移位。     

内毒素致急性肺损伤发病机制研究进展

内毒素(LPS)是临床上引起急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的重要原因。它直接损伤肺泡细胞是特殊机制;它激活机体导致肺部损伤引起炎性细胞在肺部聚集以及释放各种炎性介质与细胞因子是关键的发病机制;而LPS引起的肺部凝血与纤溶系统失衡均是重要的发病机制。近年来一些新分子的发现,进一步阐明LPS介导急性肺损伤的发病机制。     

N-乙酰半胱氨酸抑制人肝细胞凋亡的实验研究

目的探讨体外内毒素(LPS)对LO2细胞的直接作用以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)的抑制效果.方法将LO2细胞培养24h后换用含LPS(20μg/ml)和/或NAC(5mmol/L)的新鲜培养液,提取肝细胞的基因组DNA,经琼脂糖凝胶电泳观察肝细胞生物化学性质的改变;用透射电镜研究其形态学变化;TUNEL标记法检测细胞凋亡.结果 LPS直接作用的LO2细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体、细胞器结构基本正常等凋亡细胞的特征.将NAC与LPS同时加入培养液,作用16h发现NAC可明显减少因LPS所诱导的LO2细胞的凋亡.结论 LPS在体外可诱导肝细胞凋亡,NAC能抑制其作用.     

蛋白激酶C对内毒素诱导的诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控作用

目的探讨内毒素(LPS)诱导单核/巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的分子机制.方法用LPS刺激诱导RAW264.7细胞,观察其对蛋白激酶C(PKC)的激活,用Griess还原法测定PKC抑制剂对LPS诱导的一氧化氮(NO)生成作用,并用逆转录PCR(RT-PCR)研究其对iNOS基因表达的影响;构建iNOS荧光素酶报告基因载体,用基因转染及报告基因检测等方法研究LPS刺激RAW264.7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及PKC对其影响.结果 LPS刺激RAW264.7细胞引起PKC磷酸化激活和膜移位(P<0.01);LPS刺激诱导RAW264.7细胞12 h后即可明显诱导NO生成(30.1 μmol/L±5.4 μmol/L, P<0.01)和iNOS基因表达;PKC抑制剂H-7可抑制NO的生成(P<0.01)和iNOS基因表达;LPS刺激诱导iNOS启动子的转录活性(25.3±4.6相对荧光素酶活性单位, P<0.01),用H-7和钙离子通道阻滞剂异博定(Verapamil)均可抑制其转录活性(P<0.01).结论 LPS刺激RAW264.7细胞,通过引起细胞内钙增加和PKC激活诱导iNOS基因表达,使NO生成增加,这是内毒素休克时NO增加的一个重要的信号机制.     

Toll样受体与内毒素的作用

大量动物实验和临床资料表明,肠源性内毒素血症在肝炎重症化和慢性化中发挥重要作用.关于Gram阴性细菌内毒素(endotoxin)即脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是通过何种途径发挥其毒性作用这一问题,多年来一直是研究者们关注的重要课题.理论上讲, 宿主对LPS的识别和信号转导是革兰氏阴性细菌致病及对其防治的关键.Ulevitch实验室[1]在1986年发现并克隆了血清因子脂多糖结合蛋白LBP(LPS binding protein), 1990年又发现并认为CD14是LPS的受体,并在此基础上提出了LPS介导细胞反应的模式:即LBP穿梭样运动把LPS转运到髓样细胞的膜上,与膜CD14(mCD14)结合形成复合物,将信号转导到细胞内 .这些发现对人们认识LPS介导的细胞反应起到重要的里程碑作用.但由于CD14与多种传递信号的跨膜受体不同,是没有跨膜区和胞浆内段的锚定蛋白,不能直接和细胞内进行信息交流.因而信号通过该途径传导的机制未能令人信服.随着对Toll样受体(Toll-like recept ors,TLRs)研究的深入,使人们对LPS信号转导通路的认识有了长足的进步.     

内毒素体外诱导人肝细胞凋亡的研究

目的 :探讨内毒素 (LPS)在体外直接作用于LO2细胞 ,引起细胞凋亡所表现出的病理及生物化学特性的变化。方法 :LPS诱导LO2细胞的凋亡。将LO2细胞培养 2 4h后换用含LPS( 2 0 μg/ml)的新鲜培养液 ,设多个时间点 ,提取肝细胞的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳观察肝细胞生物化学性质的改变 ;用透射电镜观察其形态学变化 ;TUNEL标记法观察细胞凋亡。结果 :LPS直接作用的LO2细胞在形态学上表现出胞浆浓缩核凝聚成团块、形成凋亡小体、细胞器机构基本正常等凋亡细胞的特征 ;在生物化学方面表现典型的凋亡梯形。肝细胞凋亡在处理后 2 4小时之内随处理时间的延长而增加。TUNEL检测结果显示染色阳性细胞。结论 :LPS在体外的直接作用可诱导正常肝细胞发生凋亡。     

黄芩抗内毒素活性物质的分离提取与活性研究

目的 从黄芩中提取具有拮抗内毒素(LPS)活性的物质.方法 采用大孔吸附树脂和高效液相色谱(HPLC)等技术将黄芩水提物分离成若干组分,应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心Lipid A的结合活性,动态比浊法鲎试验检测各组分(2.0 mg/L)对LPS(02 μg/L)的中和作用,籍此筛选出活性组分;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测所筛组分对LPS诱导的RAW264.7细胞的Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响,ELISA法检测所筛组分对LPS(100 μg/L)刺激的RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子的影响.结果 获得5种HPLC产物S3K1～5,其中S3K1与Lipid A结合活性最高,S3K1(2.0 mg/L)可显著抑制LPS(0.2 μg/L)介导的鲎试剂的凝结反应(P<0.05);以LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞,其TLR4 mRNA表达增强,给予40、80、160 mg/L的S3K1预处理后能减弱LPS诱导RAW264.7细胞的TLR4 mRNA表达(P<0.05);单纯LPS刺激RAW264.7细胞释放的TNF-α为(1 757.61±207.25)ng/L(对照组),给予40、80、160 mg/L的S3K1预处理后TNF-α浓度依次为(1324.53±149.73)、(893.87±140.77)、(799.97±124.21) ng/L,随S3K1剂量递增而减低,均显著低于对照组(P<0.05).结论 从黄芩中提取到具有拮抗LPS活性的组分S3K1,S3K1在体外对LPS具有一定的中和作用,可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的,TLR4 mRNA表达,进而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞活化.     

人参皂甙对内毒素休克大鼠NO/NOS系统的影响

目的：研究人参皂甙和非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L—硝基—精氨酸(L-NNA)对内毒素休克大鼠NO／NOS系统的影响。方法：大鼠腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS，10mg／kg)后随机分为对照组、LPS组、L-NNA组与人参皂甙组，观察平均动脉压(MAP)、肌酐清除率(Ccr)、肾组织NO浓度，总NOS(tNOs)、诱导型NOS(iNOS)活性与iNOS／tNOS比值以及肾组织病理变化。结果：(1)LPS组MAP及Ccr显著降低，肾组织NO增高，tNOS与iNOS活性以及iNOS／tNOS比值升高。肾间质水肿伴炎症细胞浸润，部分小管上皮细胞变性、坏死并见管型，死亡率20％。(2)L-NNA组MAP升高，但肾功能与病理损害更著，iNOS／tNOS比值较LPS组更高，死亡率达32％。(3)人参皂甙可纠正低血压，改善肾功能及病理损害，减轻肾组织NO过度升高，tNOS与iNOS活性以及iNOS／tNOS比值均较LPS组明显下降，死亡率8％。结论：L-NNA虽能阻止LPS引起的低血压，但肾功能与病理损害恶化，死亡率增加，可能与其对结构型NOS(cNOS)的抑制较iNOS更著有关；人参皂甙可维持血压，改善肾功能，维持cNOS、抑制iNOS、调节NOS亚型的特异性作用。     

内毒素血症大鼠Clara细胞数量和形态学变化

目的目的探讨内毒素（LPS）血症对Clara细胞的影响。方法通过免疫组织化学染色、透射电镜分析，观察内毒素血症大鼠Clara细胞数量和形态学方面的变化。结果静脉注射LPS后0．5h肺开始出现急性肺损伤（ALI）病理改变，表现为肺小动脉充血，肺泡隔水肿，肺泡隔出现以中性粒细胞（PMN）为主的炎性细胞浸润，随着时间的推移，肺损伤程度逐渐加重，于6h达最重，6h后逐渐恢复。内毒素致伤后1h大鼠Clara细胞数量开始明显减少，6h达最少，24h后逐渐恢复。LPS致伤后24h，Clara细胞的超微结构明显受损。结论内毒素血症可引起Clara细胞受损，Clara细胞可能是LPS在肺内的作用靶点，Clara细胞受损可能是LPS诱导急性肺损伤的早期事件。     

内毒素对NRK52E细胞生长及细胞间缝隙连接功能的影响

【目的】 研究不同浓度内毒素(LPS)对NRK52E细胞生长和细胞间缝隙连接功能的影响&#65377;【方法】 体外培养NRK52E细胞,随机分为对照组及LPS处理组,LPS处理组分别用5个不同浓度的LPS(10 ng/mL&#65380;50 ng/mL&#65380;100 ng/mL&#65380;500 ng/mL&#65380;1 000 ng/mL)作用24 h&#65377;采用四甲基偶氮唑盐法检测NRK52E细胞的生长;细胞荧光免疫示踪法测定NRK52E细胞间缝隙连接传递的功能;Western Blotting测定对照组&#65380;LPS 10 ng/mL组和LPS 100 ng/mL组Cx43蛋白的表达&#65377; 【结果】 ① 与对照组和LPS 10 ng/mL组相比,LPS 50 ng/mL&#65380;100 ng/mL&#65380;500 ng/mL及1 000 ng/mL组细胞生长明显降低(P < 0.01)&#65377;②与对照组相比,LPS 100 ng/mL&#65380;500 ng/mL及1 000 ng/mL组细胞间缝隙连接功能明显降低(P < 0.01)&#65377;③内毒素浓度与NRK52E细胞生长和细胞间缝隙连接传递数目呈负相关(r = -0.941,-0.872,P < 0.01)&#65377;④与对照组比较,LPS 10 ng/mL组和LPS 100 ng/mL组的Cx43蛋白表达明显降低(P < 0.05)&#65377; 【结论】 LPS对NRK52E细胞的生长呈浓度相关性的抑制,这种作用与细胞间缝隙连接功能有关&#65377;