鞘内注射钩吻素子对骨癌痛小鼠行为学及脊髓背角胶质细胞活化的影响

目的 探究鞘内注射钩吻素子对骨癌痛(BCP)小鼠行为学和脊髓背角胶质细胞活化的影响。方法 实验一：选择雄性SPF级C57BL/6小鼠36只,4～6周龄,体重18～22 g。采用随机数表法将小鼠分为两组：假手术1组(S₁组)和BCP₁组,每组18只。S₁组向右侧股骨远端骨髓腔注入PBS溶液10μl, BCP₁组向右侧股骨远端骨髓腔接种含有2×10⁵个Lewis肺癌细胞的PBS溶液10μl建立BCP模型。于建模前1 d、建模后4、7、10、14、21 d每组随机取6只小鼠测定含机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于建模后7、14、21 d完成行为学测试后每组随机处死6只小鼠,取小鼠脊髓腰膨大处,采用Western blot法检测脊髓星形胶质细胞标记蛋白(GFAP)和小胶质细胞标记蛋白(Iba-1)含量。取小鼠右侧股骨行HE染色进行骨组织病理学检查。实验二：选择雄性SPF级C57BL/6小鼠54只,4～6周龄,体重18～22 g。采用随机数表法将小鼠分为三组：假手术2组(...     

鞘内注射Roscovitine对小鼠骨癌痛行为学的影响

目的 探讨鞘内给予细胞周期依赖性激酶5(cyclin-dependent kinases,Cdk5)特异性拮抗剂Roscovitine对小鼠骨癌痛行为学的影响.方法 24只C3H/Hej 小鼠采用随机数字表法随机分为3组,S组(假手术后14 d+溶媒)、C组(接种后14d+溶媒)、R组(接种后14 d+Roscovitine),每组8只.C组和R组将含2×105个纤维肉瘤NCTC 2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)20μl注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.S组只注入不含肿瘤细胞的α-MEM.术后14 d,R组小鼠鞘内注射含有20μg Roscovitine的二甲基亚砜(DMSO)5μl,C组及S组小鼠鞘内注DMSO 5 μl.观察给药前及给药后1、6、24、48、72 h检测小鼠痛行为学的变化:机械缩足阈值(paw uithdrawal mechanical threshold,PMWT)和热缩足潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 各组术前基础机械缩足阈值及热缩足潜伏期比较差异无统计学意义(P＞0.05).接种后7 d,C组PMWT(1.08±0.24)g,与S组(1.85±0.28)g相比明显降低(P＜0.05);接种后10 d,C组PTWL(12.7±1.4)s较S组(18.6±2.1)s明显缩短(P＜0.05),C组小鼠的痛行为学随时间逐渐加重,与S组小鼠比较差异有统计学意义(P＜0.05);与C组及给药前基础值相比,鞘内注射Roscovitine 20μg后6 h PMWT(0.70±0.19)g显著增加(P＜0.05),PTWL(14.16±1.07)s显著延长(P＜0.05),并随时间逐渐增加,12 h达最大值,后逐渐降低,72 h降低到C组水平.结论 鞘内注射Roscovitine可有效缓解小鼠骨癌痛.     

脊髓小胶质细胞在SD大鼠骨癌痛中的变化

目的 观察SD大鼠一侧胫骨注射同系Walker 256癌细胞后脊髓小胶质细胞的变化.方法 腹水传代Walker 256癌细胞种植于大鼠一侧胫骨建立骨癌痛模型,25只雌性SD大鼠,体质量150～180 g,随机均分为5组:对照组(N)、热杀死肿瘤细胞组(K)、骨癌痛早期组(C1,种植后第6天)、骨癌痛中期组(C2,种植后第12天)、骨癌痛晚期组(C3,种植后第18天).结果 骨癌痛大鼠在出现自发痛行为与机械性痛觉过敏的同时,两侧脊髓L4～L6 OX-42免疫组织化学染色显著增强,细胞明显增大,染色加深,与N组及K组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OX-42染色增强以C1组最为显著,术后第6～18天逐步降低,C1组与C2或C3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 胫骨注射Walker 256癌细胞后激活脊髓小胶质细胞;小胶质细胞在两侧脊髓灰质后角均有激活,反映了本模型骨癌痛特征中"镜像痛"的产生机制;小胶质细胞在骨癌痛早期激活最为明显.     

脊髓小胶质细胞在SD大鼠骨癌痛中的变化

目的 观察SD大鼠一侧胫骨注射同系Walker 256癌细胞后脊髓小胶质细胞的变化.方法 腹水传代Walker 256癌细胞种植于大鼠一侧胫骨建立骨癌痛模型,25只雌性SD大鼠,体质量150～180 g,随机均分为5组:对照组(N)、热杀死肿瘤细胞组(K)、骨癌痛早期组(C1,种植后第6天)、骨癌痛中期组(C2,种植后第12天)、骨癌痛晚期组(C3,种植后第18天).结果 骨癌痛大鼠在出现自发痛行为与机械性痛觉过敏的同时,两侧脊髓L4～L6 OX-42免疫组织化学染色显著增强,细胞明显增大,染色加深,与N组及K组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OX-42染色增强以C1组最为显著,术后第6～18天逐步降低,C1组与C2或C3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 胫骨注射Walker 256癌细胞后激活脊髓小胶质细胞;小胶质细胞在两侧脊髓灰质后角均有激活,反映了本模型骨癌痛特征中"镜像痛"的产生机制;小胶质细胞在骨癌痛早期激活最为明显.     

脊髓小胶质细胞在SD大鼠骨癌痛中的变化

目的 观察SD大鼠一侧胫骨注射同系Walker 256癌细胞后脊髓小胶质细胞的变化.方法 腹水传代Walker 256癌细胞种植于大鼠一侧胫骨建立骨癌痛模型,25只雌性SD大鼠,体质量150～180 g,随机均分为5组:对照组(N)、热杀死肿瘤细胞组(K)、骨癌痛早期组(C1,种植后第6天)、骨癌痛中期组(C2,种植后第12天)、骨癌痛晚期组(C3,种植后第18天).结果 骨癌痛大鼠在出现自发痛行为与机械性痛觉过敏的同时,两侧脊髓L4～L6 OX-42免疫组织化学染色显著增强,细胞明显增大,染色加深,与N组及K组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);OX-42染色增强以C1组最为显著,术后第6～18天逐步降低,C1组与C2或C3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 胫骨注射Walker 256癌细胞后激活脊髓小胶质细胞;小胶质细胞在两侧脊髓灰质后角均有激活,反映了本模型骨癌痛特征中"镜像痛"的产生机制;小胶质细胞在骨癌痛早期激活最为明显.     

单次鞘内注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠痛行为学的影响

目的 探讨单次鞘内注射mLin 10-PDZ1(PSD-95,Drosophila disks-large,ZO-1)结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠痛行为学的影响. 方法 40只雄性C3H/HeJ小鼠完全随机分为肿瘤组(T组)32例和假手术对照组(S组)8例.将含有2×105个纤维肉瘤细胞NCTC2472的最小必需培养基(α-MEM)接种到T组小鼠右侧股骨远端骨髓腔,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含有NCTC2472细胞的α-MEM.于接种前1d、接种后3、5、7、10、14d测定痛行为学指标:自发性抬足次数、机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).T组小鼠在接种后第14天,进一步按照随机数字表法分为对照control组(C组)8例和mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂2.5μg/5μl、5μg/5μl、10 μg/5μl组(G1组8例,G2组8例,G3组8例).G1～G3组分别鞘内注射相应剂量的mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂,S组和C组鞘内注射等体积的溶媒10％二甲基亚砜(DMSO).在给药后的2、12、24 h分别测定各组小鼠的痛行为学指标. 结果 与S组[(2.1±0.7)次]和术前基础值[(1.8±0.7)次]比较,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足次数[(13.5±1.4)次]显著增多(P＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.7±0.3)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低(P＜0.05).给药后2h,与C组及14 d给药前比较,G1、G2组和G3组自发性抬足次数减少,PWMT增高(P＜0.05),且G3组较G1和G2组痛行为学改善更明显(P＜0.05).至12 h,与C组比较,G2和G3组自发抬足次数减少(P＜0.05),PWMT增高(P＜0.05);而G1组给药后痛行为学差异无统计学意义(P＞0.05).给药后24 h,G3组与C组比较,自发抬足次数减少,PWMT升高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 鞘内单次注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂能够改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

不同剂量驱动蛋白17反义寡核苷酸鞘内注射对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 通过鞘内注射不同剂量驱动蛋白17(kinesin superfamily 17,KIF17)反义寡核苷酸,研究其在骨癌痛小鼠疼痛发生中的作用. 方法 55只雄性C3H/HeJ小鼠,4周～6周龄,体重20 g～25 g.用随机数字表法分为骨癌组(A组,41只)和假手术组(S组,14只).A组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射20μl含约2×105个纤维肉瘤细胞(NCTC2472)的最小必须培养基(α-minimal essence medium,α-MEM)以制备骨癌痛模型,S组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射等体积不含肿瘤细胞的α-MEM.各组小鼠于接种前(base)及接种后第4、7、10、14天进行痛行为学测试,包括自发抬足次数(the number of spontaneous flinches,NSF)和机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).每组每个时间点各取1只小鼠断头处死,取L3-5脊髓,用免疫印迹法(Western blot)测定KIF17蛋白含量.在接种后第14天,再将剩余A组小鼠按随机数字表法分为KIF17反义寡核苷酸2.5 μg组(A1组)、KIF17反义寡核苷酸5.0 μg组(A2组)、KIF17反义寡核苷酸10.0 μg组(A3组)以及对照组(AC组),每组9只.A1组～A3组小鼠分别鞘内给予相应剂量KIF17反义寡核苷酸,S组和AC组小鼠鞘内给予生理盐水,注药容积均为5μl.给药结束后2、12、24、36、48 h每个时间点取1只小鼠处死,再行痛行为学测试和脊髓水平KIF17蛋白含量. 结果 与S组[(2.15±0.49)次、(1.80±0.39)g]和基础值[(2.08±0.34)次、(1.88±0.35)g]比较,接种后第14天,A组小鼠NSF显著增加[(11.95±0.78)次],PWMT显著降低[(0.34±0.11)g](P＜0.05);同时A组小鼠脊髓水平KIF17表达增多;与AC组和给药前比较,A1组小鼠在给药后2、12h和24 h,NSF[2 h(4.80±0.40)次]减少,PWMT[2 h(0.95±0.33)g]升高(P＜0.05),A2组和A3组小鼠在给药后2、12、24 h和36 h,NSF[2 h(2.35±0.26)、(2.53±0.21)次]减少,PWMT[2 h(1.70±0.32)、(1.73±0.40)g]升高(P＜0.05),且与A1组比较,A2组和A3组小鼠痛行为学的改善更明显,A2组与A3组各时间点小鼠NSF和PWMT比较,差异无统计学意义(P＞0.05);给药后2h,A1组～A3组小鼠脊髓水平KIF17表达减少. 结论 骨癌痛小鼠脊髓水平KIF17表达上调,鞘内给予KIF17反义寡核苷酸能有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学,其镇痛效果和作用时间与剂量有关.     

鞘内注射胍丁胺对骨癌痛大鼠痛觉及脊髓背角NMDA受体1表达的影响

目的 观察鞘内注射胍丁胺对骨癌痛大鼠痛觉及脊髓背角NMDA受体1(NR1)表达的影响.方法 成年雌性Wistar大鼠,体重180～220 g,假模型组(A组,n=14)接种PBS液,骨癌痛模型制作成功大鼠随机分为三组,其中B组(n=14)不行鞘内注射,另两组分别鞘内注射生理盐水10 μl(C组,n=14)和胍丁胺160 mg/kg(D组,n=14).用von Frey丝测定大鼠机械缩足反射阈值(MWT),于鞘内注射后120min用Western blot方法测定脊髓背角NR1蛋白的表达.结果 建模7d后B、C和D组大鼠MWT明显低于A组(P＜0.05),鞘内注射胍丁胺后D组MWT显著高于B、C组(P＜0.05).鞘内给药120 min后B、C、D组NR1蛋白的相对表达量明显高于A组(P＜0.05),D组明显低于B、C组(P＜0.05).结论 鞘内注射胍丁胺可通过抑制大鼠脊髓背角NR1的表达减轻胃癌痛.     

脊髓胶质细胞在小鼠骨癌痛形成中的作用

目的 评价脊髓胶质细胞在小鼠骨癌痛形成中的作用.方法 健康雄性C3H/He小鼠40只,周龄8～10周,体重18～22 g,随机分为4组(n=10):假手术组(S组)、骨癌痛组(B组)、PBS组(P组)和米诺环素组(M组).S组跟骨骨髓腔内注射PBS 10 μl;余3组跟骨骨髓腔内注射含2×105个骨纤维肉瘤细胞的PBS 10 μl制备骨癌痛模型,于造模前即刻开始PBS组鞘内注射PBS 5μl,M组鞘内注射米诺环素(用PBS溶解为0.2 mmol/L)5μl,1次/d,连续11 d.于造模前1 d、造模后即刻、3、5、7、9、11 d时测定机械痛阈;于造模后3、7、9、11 d机械痛阈测定结束后测定冷痛阈.痛阈测定结束后处死小鼠,取脊髓组织,测定神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CD11b的表达水平.结果 与S组比较,B组和P组造模后3-11 d时、M组造模后3、5 d时机械痛阈升高,B组、P组和M组造模后7～11 d时冷痛阈升高,脊髓CD11b和GFAP表达上调(P<0.05).与B组比较,M组造模后3-11 d时机械痛阈降低,造模后7-11 d时冷痛阈降低,脊髓CD11b和GFAP表达下调(P<0.05).结论 脊髓胶质细胞(星形胶质细胞和小胶质细胞)的激活参与了小鼠骨癌痛的形成.     

脊髓胶质细胞在小鼠骨癌痛形成中的作用

Objective To evaluate the role of gliocyte in the spinal cord in the development of bone cancer pain (BCP) in mice. Methods Forty male C3H/He mice aged 8-10 weeks weighing 18-22 g were randomly divided into 4 groups ( n = 10 each) : group I sham operation (group S) , group II BCP, group Ⅲ PBS and group IV minocyline (group M) . In group BCP, PBS and M, bone cancer pain was produced by injection of NCTC2472 fibrosarcoma cell suspension (2 x 105 cells) 10 μl into medullary cavity of calcaneus bone, while in group S, PBS solution 10 μl was injected instead of cancer cell suspension. In group PBS and M, PBS 5 μl and minocyline 5 μl (dissolved to 0.2 mmol/L in PBS)_were given IT immediately before cancer cell inoculation once a day for 11 consecutive days respectively. Mechanical pain threshold was measured at 1 d before cancer cell inoculation, and at 0, 3, 5, 7, 9 and 11d after cancer cell inoculation. Cold pain threshold was measured at 3, 7, 9 and 11d after cancer cell inoculation. The animals were killed after measurement of pain threshold and L4-6, segment of spinal cord was removed for determination of GFAP and CD11b expression by Western blot. Results Compared with group S, mechanical pain threshold was significantly increased at 3-11 d after cancer cell inoculation in group BCP and PBS, and at 3 and S d after cancer cell inoculation in group M, and cold pain threshold was significantly increased at 7-11 d after cancer cell inoculation, and expression of CD11b and GFAP was up-regulated in group BCP, PBS and M ( P < 0.05) . Compared with group BCP, mechanical pain threshold was significantly decreased at 3-11 d after cancer cell inoculation, cold pain threshold was significantly decreased at 7-11 d after cancer cell inoculation, and expression of CD11b and GFAP was down-regulated in group M ( P <0.05) . ConclusionThe activiton of gliocyte in the spinal cord is involved in the development of bone cancer pian in mice.     

神经痛大鼠脊髓胶质细胞源性神经营养因子参与多巴胺D2受体激动剂对痛觉过敏的调制作用

目的 研究鞘内注射多巴胺D2受体激动剂喹吡罗对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓水平胶质细胞源性神经营养因子表达的影响,探讨其介导抗伤害作用的可能机制. 方法 实验1：采用完全随机分组方法将30只成年雄性SD大鼠制作坐骨神经慢性压迫损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI）模型分为5组（每组6只）：CCI＋生理盐水（NS组）、CCI＋喹吡罗0.1 μg（Q0.1组）、CCI＋喹吡罗1μg（Q1组）、CCI＋喹吡罗5 μg（Q5组）、CCI＋喹吡罗10 μg（Q10组）,分别在建模后第7天鞘内注射0.1、1、5、10 μg喹吡罗,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl.于给药前及给药后0.5、1、2、4、8、16h测定大鼠术侧后足机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）.实验2：将54只成年雄性SD大鼠制作CCI模型,并采用完全随机分组方法分为3组（Q5组、Q10组、NS组,每组18只）：Q5组、Q10组分别在建模后第7天鞘内注射5、10μg喹吡罗后0.5、1、2、4、8、16h处死取材,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl;另取6只正常大鼠作为模型对照组（M组）,另取6只正常大鼠作为对照组（C组）.采用免疫印迹法测定脊髓背角胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic fact,GDNF）蛋白表达的变化. 结果 实验1：与NS组比较,Q0.1组注药后各时间点PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）,Q1组注药后2 h PWMT[（4.3±1.5）g]及PWTL[（13.2±1.6）s],Q5组注药后1,2、4 h PWMT[（4.7±1.6）、（5.3±1.6）、（4.7±2.1）g]和PWTL[（14.0±1.7）、（15.2±1.5）、（13.4±1.6）s],Q10组注药后1、2、4 h PWMT[（6.0±1.3）、（7.3±1.0）、（5.3±2.1）g]和PWTL [（15.3±1.8）、（17.5±1.2）、（14.9±1.7）s]明显升高（P＜0.05）.实验2：与C组比较,M组GDNF表达（0.95±0.09）明显升高（P＜0.05）.与M组和NS组比较,GDNF的表达Q     

特异性促炎症消退介质在骨病治疗中的研究进展

骨骼作为一个独特的器官,不断地进行骨重塑,维持骨骼的生理稳态,为身体提供支持。在各种急慢性骨损伤中,初期往往伴随着炎症的出现。炎症是组织对有害刺激的保护性反应,炎症的产生在一定程度上是有益的,可以将免疫细胞招募到组织损伤或感染的部位,引导有害刺激的移除和愈合过程的启动。如果炎症不能及时消退,则会导致局部或全身性炎症慢性化,破坏骨稳态,从而引起和加重骨骼疾病。已有研究将全身性、慢性、低水平炎症作为骨质疏松症（osteoporosis, OP）、类风湿关节炎（(rheumatoid arthritis, RA）和牙周炎发病机制的一部分。特异性促炎症消退介质(specialized pro-resolving mediators, SPMs)是一类多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids, PUFAs）的代谢产物,研究发现SPMs在促进炎症消退和组织再生方面疗效显著。在此基础上也有研究证实SPMs对骨细胞有直接作用,能抑制骨破坏,促进骨形成。本文就SPMs对骨病的治疗作用,从促进炎症消退、防止骨破坏和促进骨形成的不同途径作一综述,以期为探讨利用SPMs治疗骨病的研究提供思路。     

椎管内应用阿片类药物研究进展

椎管内应用阿片类药物因为其诸多优点近年来在临床上应用广泛.新的药物和给药方法层出不穷.然而,对于阿片类药物在椎管内的作用机制、分布、头向移动、最佳剂量及长期给药的优缺点均尚存争议.     

微RNA参与骨癌痛的研究进展

骨癌痛(bone cancer pain,BCP)发生、发展机制复杂,目前仍旧困扰临床.在转录后水平起调控作用的微RNA(microRNA,miRNA)可能参与BCP过程.因此,寻找参与BCP发生、发展相关的特定miRNA与标志物,将为BCP治疗及临床检测、诊断提供帮助.文章综述近期研究,阐述miRNA如何调控破骨细胞...     

骨形成蛋白-2诱导脊髓神经干细胞分化的实验研究

目的：研究不同浓度的骨形成蛋白-2(bone norphogenetic protein-2，BMP-2)对脊髓源性神经干细胞(neural stem cells，NSCs)诱导分化成为神经细胞(神经元和神经胶质细胞)的影响。方法：取孕14d的胚胎小鼠脊髓，原代培养出脊髓NSCs。培养四代后，分别在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在与否的不同条件下，加入不同浓度的BMP-2．观察细胞的增殖、分化情况，用免疫组织化学的方法进行鉴定，并进行统计学分析：结果：低浓度的BMP-2(1～10ng／ml)与bFGF(20ng／ml)联合作用，可促进脊髓NSCs向神经元和星形胶质细胞分化，抑制其向少突胶质细胞分化。较高浓度BMP-2(100ng／ml)可抑制脊髓NSCs的增殖甚至导致细胞死亡。结论：脊髓NSCs在低浓度BMP和bFGF联合作用下能有效地分化成具有多种特性的神经样细胞，并与脊髓具有良好的同源性，可为脊髓损伤的修复研究提供良好的细胞学基础。