自噬在缺氧条件下视网膜色素上皮细胞表达趋化因子IL-8、MCP-1中的作用

目的研究自噬在缺氧条件下视网膜色素上皮(RPE)细胞表达趋化因子白细胞介素8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)中发挥的作用。方法将培养良好的ARPE-19细胞分为对照组、缺氧组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+缺氧组和氯喹(CQ)+缺氧组。对照组细胞在常氧条件下培养;缺氧组细胞在缺氧箱中培养;3-MA+缺氧组和CQ+缺氧组分别先用10 mM 3-MA或50μM CQ预处理细胞2 h,然后置于缺氧箱中继续培养。24 h后采用ELISA法检测细胞上清液中趋化因子IL-8、MCP-1的浓度;采用Western blot法检测细胞的自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3 B (LC3B)、Beclin-1及p62的相对表达水平。对4组细胞表达的IL-8、MCP-1浓度和LC3B-II/I、Beclin-1及p62水平进行统计分析。结果 4组中IL-8、MCP-1浓度组间比较,差异均有统计学意义(IL-8:F=539.27,P=0.000;MCP-1:F=56.16,P=0.000);两两比较发现,缺氧组的IL-8、MCP-1浓度明显高于其它3组,差异均有统计学意义(IL-8:均P=0.000;MCP-1:缺氧组vs.对照组P=0.000;缺氧组vs. 3-MA组P=0.001;缺氧组vs. CQ组P=0.000)。4组细胞中的LC3B-II/I、Beclin-1及p62的相对蛋白表达量组间比较,差异均有统计学意义(LC3B-II/I:F=80.65,P=0.000;Beclin-1:F=139.29,P=0.000;p62:F=70.64,P=0.000)。两两比较发现,缺氧组细胞中LC3B-II/I的相对蛋白表达量明显高于对照组和3-MA组(缺氧组vs.对照组P=0.000;缺氧组vs. 3-MA组P=0.001);缺氧组中LC3B-II/I的相对蛋白表达量低于CQ组,差异有统计学意义(P=0.000);缺氧组细胞中Beclin-1的相对蛋白表达量均明显高于其它3组(缺氧组vs.对照组P=0.000;缺氧组vs. 3-MA组P=0.001;缺氧组vs. CQ组P=0.000);缺氧组细胞中p62相对蛋白表达量明显低于其它3组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论在缺氧条件下,自噬水平升高可促进RPE细胞趋化因子IL-8和MCP-1的表达。     

芒果苷对亚硒酸钠所致大鼠白内障的影响

目的 探讨芒果苷对亚硒酸钠所致大鼠白内障的改善作用。方法 将新生9 d龄的40只Wistar大鼠随机分为4组，分别为对照组(CG)、模型组(MG)、芒果苷低剂量组(L-MAN)、芒果苷高剂量组(H-MAN)，每组10只。MG、L-MAN、H-MAN组通过一次性皮下注射2.46 mg/kg亚硝酸钠建立大鼠白内障模型，CG组皮下注射等量0.9%氯化钠注射液。L-MAN、H-MAN组大鼠在造模1 h后，分别进行连续7 d的10、40 mg/kg芒果苷腹腔注射，CG、MG组仅给予等量0.9%氯化钠注射液。21 d后，对大鼠晶状体进行形态学检查，根据晶状体混浊程度进行分级评分，检测大鼠晶状体中钙离子浓度、晶状体总水溶性蛋白、丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)水平。结果 (1)晶状体混浊评分：与CG组比较，MG组晶状体混浊评分升高(t=22.136,P=0.000)；与MG组比较，L-MAN、H-MAN大鼠晶状体混浊评分降低(t_L-MAN=4.833,t_H-MAN=7.691，均P=0.000)，差异均有统计学意义。(2)晶状体钙离子浓度：与CG...     

“四明穴”推拿对透镜诱导性近视豚鼠眼球生物学指标和组织病理形态的影响

目的 利用豚鼠眼周和后肢部特定穴位模拟人体“四明穴”，探讨推拿对透镜诱导性近视豚鼠眼球生物学参数和组织病理学的影响。方法 选取30只三色豚鼠，随机分为对照组(CG)、模型组(MG)和推拿组(MSG)。CG组不作任何干预；MG、MSG组豚鼠右眼均佩戴-6.00 D透镜设为造模眼，左眼不佩戴透镜作为自身对照眼，建立透镜诱导性近视豚鼠模型；MSG组豚鼠给予推拿刺激右侧眼周穴位和右后肢穴位，模拟人体“四明穴”(上明、睛明、翳明和光明)，每次干预8 min，连续干预4周。各组豚鼠于干预前后测量屈光度和眼轴长度，苏木精-伊红(HE)染色观察各组豚鼠巩膜、脉络膜和视网膜的形态变化。结果 (1)屈光度：MG、MSG组豚鼠干预后与本组干预前比较，屈光度均增加(t_MG=8.852,t_MSG=5.957，均P=0.000)；与CG组比较，MG组豚鼠干预后屈光度增加(t=7.627,P=0.000)；与MG组比较，MSG组豚鼠干预后屈光度降低(t=2.621,P=0.014)，差异均有统计学意义。(2)眼轴长度：MG、MSG组豚鼠干预后与本组干预前比较，眼轴长度均增...     

龙蛭汤含药血清联合3-MA、白藜芦醇对氧化应激环境下血管内皮细胞自噬及管腔形成的影响

目的观察龙蛭汤含药血清联合3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine, 3-MA)、白藜芦醇(Resveratrol, Res)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的氧化应激环境下血管内皮细胞(HUVECs)自噬及管腔形成的影响。方法 SPF级SD大鼠分别予生理盐水、龙蛭汤水煎液灌胃7 d,取腹主动脉血制备含药血清,分装备用。通过建立H_2O_2诱导的HUVECs氧化应激自噬模型,分别加入正常对照组(Control组)、生理盐水含药血清组(空白血清组)、3-MA(3-MA组)、3-MA+10%龙蛭汤含药血清(3-MA+LZD组)、Res(Res组)、Res+10%龙蛭汤含药血清(Res+LZD组);CCK8、划痕实验、基质胶管型形成实验分别检测HUVECs增殖、迁移及管型形成能力,细胞免疫荧光检测自噬表达强度,Western Blot比较各组细胞Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、VEGF的蛋白表达水平。结果与空白血清组相比,Res组与Res+LZD组的细胞增殖数、迁移距离及管型形成数均明显增多,LC3荧光表达增强,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、VEGF蛋白水平升高,3-MA组的自噬、VEGF蛋白水平均降低;与3-MA组、Res组相比,加入龙蛭汤含药血清后的细胞增殖、迁移、管型形成数增多,3-MA+LZD组自噬荧光表达增强,Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、VEGF蛋白水平升高;Res+LZD组下调Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平,与自噬荧光表达趋势一致,同时VEGF蛋白表达水平上调。结论龙蛭汤含药血清通过调节Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ自噬蛋白水平调控自噬通路,提高血管内皮细胞活力,促进内皮细胞迁移及管型形成,可能是血管内皮细胞氧化应激损伤后的血管新生的重要作用机制。     

姜黄素对高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞血管生成的抑制作用

目的观察姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)增殖活力、迁移和管腔形成的作用。方法将RF/6A细胞分为3组进行培养:对照组(DMEM培养基)、高糖组(DMEM培养基中加入25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+姜黄素组(DMEM培养基中加入25 mmol/L D-葡萄糖+30μmol/L姜黄素),分组培养3 d后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞迁移,Matrigel法检测细胞管腔形成。结果(1)细胞增殖活力:与对照组(99.55±0.57)%相比,高糖组RF/6A细胞增殖活力(72.53±2.20)%明显降低(t=29.07,P=0.000),高糖+姜黄素组RF/6A细胞增殖活力(92.75±2.37)%比高糖组明显升高(t=15.30,P=0.000)。(2)细胞迁移:与对照组(122.00±5.48)个相比,高糖组RF/6A细胞迁移数(142.00±10.18)个明显增加(t=4.24,P=0.002),高糖+姜黄素组RF/6A细胞迁移数(76.50±7.56)个比高糖组明显减少(t=12.66,P=0.000)。(3)管腔形成数:与对照组相比(9.33±2.50)个,高糖组RF/6A细胞管腔形成数(14.83±3.06)个明显增加(t=3.41,P=0. 007),高糖+姜黄素组RF/6A细胞管腔形成数(6.33±1.37)个比高糖组明显减少(t=6.21,P=0.000)。(4)血管分支长度:与对照组相比(3169.67±270.81)μm,高糖组RF/6A细胞血管分支长度(3606.67±325.15)μm明显增加(t=2.53,P=0.030),高糖+姜黄素组RF/6A细胞血管分支长度(2556.50±301.72)μm比高糖组明显减少(t=5.80,P=0.000)。结论姜黄素可维持高浓度葡萄糖培养条件下的RF/6A细胞增殖活力,抑制细胞迁移和管腔形成,提示姜黄素对高糖诱导的RF/6A细胞损伤具有保护作用,并抑制病理性的血管生成。     

人参皂苷Rg3对大鼠实验性脉络膜新生血管的影响及作用机制研究

目的 观察人参皂苷Rg3对大鼠实验性脉络膜新生血管(CNV)形成的干预作用，以及对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法30只大鼠经532 nm激光光凝建立CNV模型，被随机分为模型组(MG)、人参皂苷Rg3低剂量组(L-Rg3)、人参皂苷Rg3中剂量组(M-Rg3)、人参皂苷Rg3高剂量组(H-Rg3)、阳性对照药康柏西普组(CB)，另设对照组(CG)，每组6只。L-Rg3、M-Rg3、H-Rg3组分别予3.65、7.20、14.40 mg/kg的人参皂苷Rg3药液灌胃，而CG、MG组大鼠灌胃2 mL蒸馏水，每日1次，连续干预7 d;CB组于造模后一次性玻璃体腔注射康柏西普注射液5μL。给药完成后荧光素眼底血管造影(FFA)观察大鼠眼底情况，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脉络膜HIF-1α、VEGF mRNA表达，Western Blot法检测脉络膜HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果 (1)FFA：与CG组比较，MG组荧光素渗漏平均光密度(MD)值升高(t=17.846,P=0.000)；与MG组比较，M-Rg3、H-Rg3、...     

二氯乙酸钠对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察二氯乙酸钠(sodium dichloroacetate,DCA-Na)对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:将对数生长期的MG63细胞随机分为对照组和低、中、高浓度DCA-Na组,对照组不加DCA-Na,低、中、高DCA-Na组加入DCA-Na(终浓度分别为50μg·m L-1、100μg·m L-1、200μg·m L-1),并设1个只加等量培养基不加细胞和DCA-Na的空白组。分别在干预24 h、48 h、72 h后,采用Cell Counting Kit-8细胞活性检测试剂盒分光光度法检测MG63细胞增殖情况,测定光密度(optical density,OD),计算低、中、高DCA-Na组细胞增殖抑制率,细胞增殖抑制率=[1-(DCA-Na组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]×100%;分别采用Caspase-3活性检测试剂盒分光光度法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒流式细胞法检测MG63细胞Caspase-3酶活性情况和细胞凋亡情况;并在干预48 h后采用Transwell实验检测MG63细胞迁移情况。结果:1细胞增殖检测结果。干预后,低、中、高DCA-Na组MG63细胞增殖抑制明显,且随干预时间的延长,3组细胞增殖抑制率均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=847.080,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,低、中、高DCA-Na组MG63细胞增殖抑制率的组间差异均有统计学意义,且低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组[(10.802±3.000)%,(18.792±2.261)%,(27.080±3.133)%,F=2.795,P=0.000;(13.098±1.299)%,(25.215±2.676)%,(44.382±2.397)%,F=4.362,P=0.000;(14.728±1.177)%,(35.297±4.757)%,(64.227±4.549)%,F=5.896,P=0.000];3组间MG63细胞增殖抑制率总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=296.412,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=75.678,P=0.000)。2Caspase-3酶活性检测结果。对照组MG63细胞Caspase-3酶活性无明显变化,干预后低、中、高DCA-Na组MG63细胞Caspase-3酶活性均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞Caspase-3酶活性的差异有统计学意义(F=1 480.792,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,4组间MG63细胞Caspase-3酶活性的差异均有统计学意义,且对照组低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组(0.027±0.003,0.143±0.005,0.153±0.008,0.161±0.003,F=2.320,P=0.000;0.035±0.003,0.174±0.004,0.184±0.007,0.253±0.001,F=1.014,P=0.000;0.031±0.004,0.246±0.006,0.275±0.003,0.371±0.004,F=1.000,P=0.000);4组间MG63细胞Caspase-3酶活性总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=624.975,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=94.579,P=0.000)。3流式细胞法细胞凋亡检测结果。对照组MG63细胞凋亡率无明显变化,干预后低、中、高浓度DCA-Na组MG63细胞凋亡率均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞凋亡率的差异有统计学意义(F=359.645,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,各组间MG63细胞凋亡率的差异均有统计学意义,且对照组低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组[(2.554±0.427)%,(10.708±2.012)%,(20.857±2.531)%,(27.312±2.140)%,F=6.733,P=0.000;(1.748±0.202)%,(18.604±2.721)%,(29.471±1.605)%,(36.873±2.734)%,F=9.292,P=0.000;(1.944±0.112)%,(24.071±3.921)%,(30.050±3.921)%,(38.211±1.721)%,F=8.237,P=0.000];4组间MG63细胞凋亡率总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=46.627,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=7.012,P=0.000)。4细胞迁移检测结果。干预48 h后,4组迁移细胞数[显微镜每个视野下(×200)]的组间差异有统计学意义[(84.45±10.45)个,(74.56±9.45)个,(65.41±5.21)个,(40.21±4.52)个,F=148.243,P=0.000)];低、中、高DCA-Na组迁移细胞数均少于对照组(P=0.017,P=0.001,P=0.000),且低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组(P=0.012,P=0.001,P=0.000)。结论:DCA-Na可抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,增强MG63细胞Caspase-3酶活性,诱导和促进MG63细胞凋亡,抑制MG63细胞的迁移;且浓度越高、干预时间越长,其影响越明显。     

苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究

目的观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响。方法 (1)苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测:分别设空白对照组、不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、5.00mg/mL)苦参碱组和(0.05、0.25、0.50、5.00、20.00μmol/L)伊马替尼组,MTT检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率。分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5μmol/L伊马替尼组,免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象,Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达。(2)苦参碱联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rapa)诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测:实验分6组,空白对照组、苦参碱组(0.4mg/mL苦参碱处理)、3-MA组(5mmol/L 3-MA处理)、Rapa组(0.5μmol/L Rapa处理)、苦参碱+3-MA组(0.4mg/mL苦参碱+5mmol/L3-MA处理)、苦参碱+Rapa组(0.4mg/mL苦参碱+0.5μmol/L Rapa处理),采用MTT检测细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达。结果 (1)苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞,细胞增殖受抑制明显(P0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加,Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高,P62蛋白表达减少(P0.05),以K562/IM细胞更明显(P0.05)。(2)苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率(36.32±2.21)%,凋亡率(15.35±0.39)%。苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高[(65.25±2.06)%,P0.01)],凋亡率升高[(21.70±0.48)%,P0.05],同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降,P62蛋白表达增强,Caspase-3表达增强(P0.05);而苦参碱+Rapa组作用则相反。结论苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬,以耐药K562/IM细胞株自噬明显。通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性,而雷帕霉素减弱苦参碱作用。     

基于自噬/凋亡研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对3-MA诱导的ASMCs自噬抑制状态的作用

目的 研究淫羊藿女贞子合用糖皮质激素对自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)抑制气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)自噬的影响。方法 培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组，即正常组(正常大鼠血清)、3-MA组(正常大鼠血清+3-MA)、激素组(正常大鼠血清+3-MA+地塞米松)、中药组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清)、合用组(3-MA+淫羊藿女贞子含药血清+地塞米松)。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清；除正常组外，其余各组同时加入3-MA刺激ASMCs, 48h后进行检测。电镜观察细胞超微结构；MTT法检测细胞活力：免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达；Annexin V-FITC/PI法检测凋亡活性；Western Blot或免疫荧光法检测LC3、Bax、Bcl-2、P53、Caspase-3、Beclin-1、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与3-MA组比较，各给药组可不同程度地增加3-MA抑制的自噬活性，上调LC3 II/I比值、Beclin-1表达，下调mTOR及p-mTO...     

枸杞多糖对HepG2肝癌细胞自噬与细胞凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对HepG2细胞自噬与凋亡的影响。方法体外培养HepG2肝癌细胞株,CCK-8法检测0、200、400、800 mg/L的LBP分别培养24、48、72 h后对细胞增殖的影响。将实验对象分为:对照组、LBP组、3-MA(3-甲基腺嘌呤)组和LBP+3-MA 4组。GFP-LC3腺病毒感染HepG2细胞,荧光显微镜观察各组自噬小体的绿色荧光颗粒的变化;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的变化。结果 LBP对HepG2细胞生长具有明显抑制作用;LBP组GFP-LC3荧光颗粒数目明显高于对照组(P0.01);3-MA+LBP组荧光颗粒数目比LBP组明显减少(P0.05);3-MA组和对照组相比较数目无明显变化(P0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡率,LBP组的凋亡率明显高于对照组(P0.05),明显低于3-MA+LBP组(P0.05),二者具有统计学差异;3-MA组与对照组凋亡率比,二者无统计学差异(P0.05)。结论枸杞多糖抑制HepG2细胞的增殖,并诱导细胞发生自噬和凋亡。LBP诱导的自噬作用对肝癌细胞的凋亡起保护作用,促进肝癌细胞的增殖。     

黄芩苷对糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞激活的影响及机制研究

目的 探讨黄芩苷对糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞的激活作用及其机制。方法 大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,随机分为模型组(MG)和黄芩苷组(BG),另将健康大鼠设对照组(CG),每组12只。BG组大鼠给予黄芩苷水溶液(50 mg/kg)每日灌胃,CG、MG组大鼠给予同体积的蒸馏水灌胃,连续给药12周。12周后测量大鼠血糖,然后麻醉取右眼眼球,苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜形态,免疫组织化学法检测视网膜小胶质细胞簇分化抗原68(CD68)蛋白表达,免疫荧光法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测白细胞介素-6(IL-6)、STAT3 m RNA的相对表达量。结果 (1)视网膜形态：与CG组相比,MG组大鼠视网膜神经节细胞(RGC)丢失明显增多,而BG组RGC数量增加;MG组视网膜厚度较CG组薄,而BG组较MG组厚。(2)小胶质细胞：CG组小胶质细胞局限在内核层;MG组小胶质细胞数量增多,且分布在视网膜的每一层中;BG组小胶质细胞数量较MG组少,且小胶质细胞迁移受限。MG组大鼠视网膜小胶质细胞CD68表达高于CG组(t=7.34...     

基于HSP72探讨通络明目方对青光眼模型大鼠RGC和视神经的保护作用

目的 探讨通络明目方调控热休克蛋白72(HSP72)对青光眼模型大鼠视网膜神经节细胞(RGC)和视神经的保护作用。方法 采用Shareef-Sharma法将40只大鼠建立青光眼模型,随机分为模型组(MG)和通络明目方组(TM),各20只,另将进行假手术的24只大鼠设为对照组(CG)。TM组大鼠每日通络明目方8.61 g/kg灌胃,CG、MG组大鼠每日等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,连续给药21 d。造模后第1、7、14、21天时,使用眼压计测量大鼠眼压,采集大鼠造模对侧眼眼眶血0.5 mL,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清HSP72水平。给药完成后,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜形态结构,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测大鼠RGC细胞数量及凋亡率,测定视网膜厚度;免疫荧光和免疫组织化学法检测RGC细胞HSP72表达。结果 (1)眼压：MG组大鼠造模后1、7、14、21 d眼压均高于CG组(t_{1 d}=7.758、t_{7 d}=10.913、t_{14 d}=17.353、t_{21 d}=7....     

马钱子碱诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡影响及作用机制研究

目的 观察马钱子碱对人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡的影响及作用机制。方法 将体外培养的人葡萄膜黑色素瘤细胞分为4组:对照组(CG)、马钱子碱低(BLG)、中(BMG)、高浓度组(BHG),CCK-8法测定细胞增殖率,苏木精-伊红(HE)染色法观察马钱子碱对黑色素瘤细胞形态的影响,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot法检测黑色素瘤细胞内Bax及Bcl-2蛋白表达。结果 (1)细胞增殖率:与CG组比较,BLG组、BMG组及BHG组细胞增殖率均下降,差异有统计学意义(t_(BLG)=7.964,P_(BLG)=0.000;t_(BMG)=12.920,P_(BMG)=0.000;t_(BHG)=20.962,P_(BHG)=0.000);与BLG组比较,BHG组差异有统计学意义(t=10.720,P=0.000);与BMG组比较,BHG组差异有统计学意义(t=6.291,P=0.000)。(2)细胞凋亡率:与CG组比较,BLG组、BMG组及BHG组细胞凋亡率逐渐增加,差异有统计学意义(t_(BLG)=7.982,P_(BLG)=0.000;t_(BMG)=12.744,P_(BMG)=0.000;t_(BHG)=15.960,P_(BHG)=0.000);与BLG组比较,BHG组差异有统计学意义(t=6.940,P=0.000)。(3)Bax蛋白表达:与CG组比较,各组间差异有统计学意义(t_(BLG)=4.082,P_(BLG)=0.004;t_(BMG)=16.740,P_(BMG)=0.000;t_(BHG)=28.990,P_(BHG)=0.000)。与BLG组比较,BMG组差异有统计学意义(t=12.660,P=0.000),BHG组差异有统计学意义(t=23.680,P=0.000)。与BMG组比较,BHG组差异有统计学意义(t=11.020,P=0.000)。(4)Bcl-2蛋白表达:与CG组比较,各组间差异有统计学意义(t_(BLG)=6.678,P_(BLG)=0.000;t_(BMG)=9.080,P_(BMG)=0.000;t_(BHG)=10.079,P_(BHG)=0.000)。与BLG组比较,BMG组差异有统计学意义(t=10.340,P=0.000),BHG组差异有统计学意义(t=14.550,P=0.000)。与BMG组比较,BHG组差异有统计学意义(t=3.674,P=0.006)。结论 马钱子碱通过改变线粒体凋亡途径中凋亡相关信号分子Bax及Bcl-2的表达,抑制黑色素瘤细胞增殖并促进细胞凋亡。     

芍药苷基于JAK2/STAT3信号通路抑制糖尿病大鼠视网膜细胞炎症的研究

目的 基于Janus激酶/信号传导及转录激活因子(JAK/STAT)通路探讨芍药苷抑制糖尿病大鼠视网膜细胞炎症的作用机制。方法 30只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，随机分为模型组(MG)、芍药苷组(PF)、芍药苷+JAK2/STAT3通路激活剂colivelin组(COL)，另设对照组(CG)，每组10只。PF组以4 ng/g剂量的芍药苷腹腔注射给药，每周2次；COL组在PF组的基础上，玻璃体腔一次性注射1×10^-4μmol/L的colivelin 5μL；其余各组腹腔注射等体积磷酸盐缓冲液，均连续给药12周。给药后处死大鼠，取视网膜组织，苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜形态，免疫组织化学法检测视网膜神经胶质蛋白(GFAP)表达，Western Blot法检测视网膜组织白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、p-JAK2、JAK2、p-STAT3和STAT3蛋白表达水平。结果 (1)视网膜形态：与CG组相比，MG组视网膜神经节细胞(RGC)数量减少，排列稀疏；与MG组相比，PF组RGC数量增多；而COL组较PF组RGC数量...     

牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞凋亡和氧化损伤的影响

目的研究牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡和氧化损伤的影响和机制。方法 RGCs分成对照组、高糖组、牛蒡子苷低剂量组(ARC-Ⅰ组)、中剂量组(ARC-Ⅱ组)、高剂量组(ARC-Ⅲ组),其中高糖组、ARC-Ⅰ组、ARC-Ⅱ组、ARC-Ⅲ组细胞在培养时分别添加50 mmol/L的葡萄糖,ARC-Ⅰ组、ARC-Ⅱ组、ARC-Ⅲ组依次添加牛蒡子苷浓度为0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL。MTT检测增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,试剂盒检测caspase-3活性以及ROS、MDA、SOD水平,Western blot检测TLR4蛋白表达。在RGCs中转染TLR4过表达载体,用高糖和牛蒡子苷细胞培养液培养,检测细胞增殖、凋亡、caspase-3活性以及ROS、MDA、SOD水平。结果 (1)增殖率:与对照组比较,各组均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而增殖率升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。(2)凋亡率:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而凋亡率降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。(3)caspase-3蛋白表达:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而caspase-3蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。(4)ROS、MDA、SOD水平:与对照组比较,各组ROS、MDA水平均明显升高,SOD水平均明显下降,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组ROS、MDA水平均明显降低,SOD水平均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而ROS、MDA水平降低,SOD水平升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。(5)TLR4蛋白表达:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而TLR4蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。(6)TLR4过表达:在RGCs中转染TLR4过表达载体,经过高糖和牛蒡子苷处理后,差异均具有统计学意义(t=9.391,P=0.001)。(7)TLR4过表达下的RGCs增殖率、凋亡率以及ROS水平:在RGCs中转染TLR4过表达载体和空载体(NC)阴性对照,经过高糖和牛蒡子苷处理后,ARC-Ⅱ+NC与ARC-Ⅱ+TLR4比较,细胞增殖率(t=7.639,P=0.000),凋亡率(t=7.129,P=0.000)和caspase-3活性(t=8.231,P=0.000),ROS(t=13.891,P=0.000)和MDA(t=8.406,P=0.000),SOD(t=9.966,P=0.000),差异均具有统计学意义。结论牛蒡子苷可通过下调TLR4蛋白表达抑制高糖诱导的RGCs凋亡和氧化损伤。     

拜颤停复方对MPP+诱导SH-SY5Y细胞自噬及凋亡机制研究

目的：对给药前后帕金森病(PD)细胞模型样本自噬和凋亡变化规律进行测定,探讨拜颤停复方对PD疾病模型神经保护作用的可能机制。方法：将SH-SY5Y细胞株随机分为正常对照组、模型对照组、拜颤停复方组和3-MA组,共计4组。运用MTT法、流式细胞技术、荧光染色和蛋白质印迹技术观察1-甲基-4-苯基吡啶(MPP⁺)诱导的SH-SY5Y模型细胞自噬凋亡变化规律及自噬凋亡相关蛋白变化情况,运用方差分析进行组间比较。结果：与正常对照组比较,模型对照组细胞活性极显著降低(P <0.01);与模型对照组比较,拜颤停复方组细胞活性显著升高(P <0.05),3-MA组细胞活性无显著改变(P> 0.05)。PD细胞模型凋亡实验,正常对照组散点主要集中在3区,模型对照组散点主要集中在2区和4区,拜颤停复方组散点主要分布于3区和4区,3-MA组散点主要分布于2区和4区,3区散点零星分布。PD细胞模型自噬实验,与模型对照组比较,正常对照组自噬囊泡数显著升高(P <0.05),拜颤停复方组自噬囊泡数显著回调(P <0.05),3-MA组自噬囊泡数量无显著改变(P...     

祛积通络方联合抗VEGF药物对黄斑微血管损伤修复的疗效观察

目的研究中药祛积通络方联合抗VEGF药物治疗非缺血型视网膜分支静脉阻塞合并黄斑水肿黄斑微血管损伤修复作用的临床疗效。方法收集2018年1月—2019年6月符合纳入标准的非缺血型视网膜分支静脉阻塞合并黄斑水肿患者100例(100眼),随机分为2组,对照组和试验组各50例(50眼)。对照组采用康柏西普眼用注射液治疗,试验组采用祛积通络方联合康柏西普眼用注射液治疗。观察治疗前后2组视力,光学相干断层扫描血管成像技术(OCTA),视网膜浅层毛细血管密度、深层毛细血管密度以及中心凹无血管区变化情况。结果(1)ETDRS视力:2组患者ETDRS视力字母数在治疗后1、3、6个月均比治疗前增加,均有统计学意义(P<0.05)。治疗后1个月,2组间比较无统计学意义(P>0.05),治疗后3个月和6个月,2组比较,t_3个月=3.224,P3个月=0.002;t_6个月=4.567,P6个月=0.000,均有统计学意义。(2)D-SCP:2组患者D-SCP在治疗后1、3和6个月均比治疗前增加,均有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、3和6个月,2组比较,t_1个月=2.498,P1个月=0.014;t_3个月=2.063,P3个月=0.042;t_6个月=2.781,P6个月=0.007,均有统计学意义。(3)D-DCP:2组患者D-DCP在治疗后1、3和6个月均比治疗前增加,均有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、3和6个月,2组比较,t_1个月=5.934,P1个月=0.000;t_3个月=2.852,P3个月=0.005;t_6个月=9.957,P6个月=0.000,均有统计学意义。(4)FAZ:2组患者FAZ在治疗后3、6个月均比治疗前减少,均有统计学意义(P<0.05)。2组比较,治疗后1个月,无统计学意义(P>0.05);而治疗后3、6个月,t_3个月=2.005,P3个月=0.048;t_6个月=2.673,P6个月=0.009,均有统计学意义。(5)Spearman相关分析:D-SCP和D-DCP与ETDRS视力字母数呈显著正相关(r_SCP=0.695,P=0.010;rDCP=0.863,P=0.001),而SCP-FAZ与ETDRS视力字母数呈负相关(r=-0.583,P=0.040)。结论祛积通络方联合抗VEGF治疗对于视网膜分支静脉阻塞黄斑微血管损伤修复作用优于单纯抗VEGF治疗组,有助于提高视功能。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的三七总皂苷调控自噬抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)能否通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬从而减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制。方法将H9c2细胞分为正常组、缺氧/复氧(A/R)组、A/R+PNS组、A/R+PNS+雷帕霉素(Rapa)组、A/R+Rapa组、A/R+羟氯喹(HCQ)组、A/R+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。通过缺氧6 h、复氧2 h建立H9c2细胞A/R模型。CCK-8法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞损伤,Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、m TOR的表达,荧光法观察细胞自噬流。结果与正常组比较,A/R组H9c2细胞存活率明显下降,细胞损伤率明显升高(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增加,自噬流显著增强(P0.05);与A/R组比较,用PNS预处理后,H9c2细胞存活率明显上升,细胞损伤率明显降低(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P0.05),p62蛋白表达明显升高,与自噬抑制剂HCQ、3-MA作用相似,荧光结果显示,PNS对自噬流有明显抑制作用(P0.05);PNS预处理后p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 PNS能有效减轻H9c2细胞A/R损伤,其机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬流相关。     

调节自噬对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性影响的实验研究

目的 观察调节自噬对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响.方法 选取两株乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-468细胞,分为不同浓度的紫杉醇(PTX)组、联合自噬激动剂雷帕霉素(PTX+ Rapa)组和联合自噬抑制剂3-MA(PTX+3-MA)组(对照组给予相应溶剂),分别作用24 h、48 h及72 h后,应用MTT比色法检测各组细胞的存活率及抑制率.结果 PTX+ Rapa组对两株乳腺癌细胞的抑制作用均显著优于单独给药的PTX组及PTX+3-MA给药组(P＜0.01),而PTX+3-MA组对两株乳腺癌细胞的抑制作用则明显弱于单独给药的PTX组(MDA-MB-231,P＜0.05;MDA-MB-468,P＜0.01),提示自噬激动剂雷帕霉素(10 nm)可降低乳腺癌细胞对紫杉醇耐药性,增强紫杉醇对乳腺癌细胞的抑制作用,而自噬抑制剂3-MA(10 mm)在一定程度上增强乳腺癌细胞紫杉醇耐药性,拮抗紫杉醇对乳腺癌细胞的抑制作用.结论 调节自噬能明显影响乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性,这为自噬与乳腺癌细胞紫杉醇耐药性关系的研究提供了新的思路.     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...