LY294002增强5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌细胞转移和侵袭的影响.方法:LY294002及5-Fu体外作用于大肠癌细胞株SW480,Western blot检测总Akt和Akt-ser473蛋白表达,细胞黏附实验观察细胞与基质的黏附力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法观察细胞侵袭能力,免疫细胞化学法测定β-catenin及MMP-7蛋白表达.结果:经LY294002及5-Fu处理的SW480细胞总Akt表达无改变,Akt-ser473蛋白表达下降.LY294002及5-Fu分别、并协同使细胞与基质的黏附力、细胞迁移能力及侵袭能力减弱,β-catenin及MMP-7蛋白表达水平降低.结论:LY294002可增强5-Fu对大肠癌细胞侵袭和转移的抑制作用.     

PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的 研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响.方法 制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型.进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录.结果 ①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P＜0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P＞0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P＜0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的表达,减少神经元凋亡.LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用.     

LY294002增强5-氟尿嘧啶抑制裸鼠大肠癌移植瘤生长及转移的实验研究

目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002在裸鼠体内对5氟尿嘧啶(5-Fu)抑制大肠癌移植瘤生长及肝转移的影响。方法:采用细胞接种法建立裸鼠异位及原位移植瘤模型,观察LY294002、5-Fu及LY294002联合5-Fu对异位裸鼠移植瘤生长的抑制作用,用流式细胞仪检测异位裸鼠移植瘤细胞凋亡,用免疫共沉淀法检测Akt和Akt-ser473蛋白表达;观察LY294002、5-Fu及LY294002联合5-Fu对原位裸鼠移植瘤肝脏转移的影响情况,用免疫共沉淀法检测原位裸鼠移植瘤Akt、Akt-ser473的表达,用免疫组化法检测β-catenin及MMP-7蛋白表达。结果:与对照组比较,5-Fu、LY294002抑制异位移植瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,LY294002显著促进5-Fu诱导的肿瘤生长抑制、细胞凋亡;与对照组比较肿瘤细胞的Akt表达无改变,Akt-ser473蛋白表达下降。与对照组比较,5-Fu、LY294002抑制原位移植瘤的肝脏转移,LY294002显著增强5-Fu抑制原位移植瘤的肝脏转移;与对照组比较原位移植肿瘤细胞的Akt表达无改变,Akt-ser473、β-catenin及MMP-7蛋白表达下降。结论:LY294002可增强5-Fu抑制裸鼠移植大肠癌生长及肝脏转移的作用。     

LY294002对胃癌细胞株生长增殖及侵袭能力的影响

目的探讨LY294002（PI3K/Akt信号通路特异性阻断剂）对胃癌细胞生长增殖、凋亡和侵袭转移的影响。方法采用不同浓度LY294002处理胃癌AGS细胞,MTT法检测胃癌AGS细胞经LY294002作用后生存率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变。结果 MTT检测结果显示,一定浓度的LY294002可抑制AGS细胞的生长,且随着浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用明显增强（P〈0.05）。流式细胞术显示,AGS细胞经LY294002作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞有明显凋亡,并呈现浓度依赖性（P〈0.05）。Transwell实验和划痕实验显示,AGS细胞经LY29400作用后,其侵袭和转移能力受到抑制。结论 LY294002可抑制胃癌AGS细胞的生长增殖,且呈时间和剂量的依赖性。其机制可能是阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡。LY294002也可抑制胃癌AGS细胞的侵袭和转移。     

抑制PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞转移和侵袭影响的研究

目的:探讨PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞转移和侵袭的影响.方法:选用PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002体外作用于胃癌细胞株SGC-7901,Western blot检查总Akt和p-Aktser473蛋白表达,细胞粘附实验观察细胞与基质的粘附力,Transwell法检查细胞侵袭能力,RT-PCR及免疫细...     

E-cadherin表达下调致GSK-3β磷酸化失活的分子机制研究

目的:探讨E-cadherin表达下调在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中诱导GSK-3β磷酸化失活信号通路的调控机制?方法:运用RNA干扰技术建立E-cadherin表达缺失的稳定细胞株?Western blot实验检测稳定株细胞(HepG2-E-cadherin-shRNA)E-cadherin的表达水平以及GSK-3β与Akt的磷酸化水平;用10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HepG2-E-cadherin-shRNA细胞,Western blot检测细胞GSK-3β磷酸化水平,RT-PCR检测HepG2-E-cadherin-shRNA细胞PTEN和Egr-1的mRNA水平,Western blot检测细胞PTEN的蛋白表达水平?结果:Western blot实验结果表明,HepG2-E-cadherin-shRNA稳定株细胞E-cadherin表达水平较空白对照组下调约82.54%,GSK-3β磷酸化水平较空白对照组上升约298.93%,Akt磷酸化水平较空白对照组上升约218.98%;LY294002作用4 h后,GSK-3β磷酸化水平与空白对照组相比下降至48.13%;RT-PCR结果显示,下调HepG2细胞E-cadherin表达水平后,细胞PTEN的mRNA水平下降至76.14%,Egr-1的mRNA水平下降至66.89%,PTEN的蛋白表达水平下降至53.77%?结论:人HCC细胞中E-cadherin抑制性表达导致细胞内GSK-3β磷酸化失活很可能是通过PI3K/Akt的信号通路实现的?     

LY294002对胃癌细胞株生长增殖及侵袭能力的影响

目的探讨LY294002（P13K／Akt信号通路特异性阻断剂）对胃癌细胞生长增殖、凋亡和侵袭转移的影响。方法采用不同浓度LY294002处理胃癌AGs细胞,MTT法检测胃癌AGS细胞经LY294002作用后生存率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;TransweU实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变。结果MTT法显示一定浓度的LY294002可抑制AGS细胞生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强（P〈0．05）。流式细胞术显示AGS细胞经LY294002作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞有明显凋亡,并呈现浓度依赖性（p〈0．05）。Transwell试验和划痕试验显示AGS细胞经LY29400作用后,其侵袭和转移的能力受到抑制。结论LY294002可抑制胃癌AGS细胞的生长增殖,且呈时间和剂量的依赖性,其机制可能是阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡;LY294002可抑制胃癌AGS细胞的侵袭和转移能力。     

双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

LY294002对胃癌MGC803细胞生长的影响

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶的特异性抑制剂(LY294002)对胃癌MGC803细胞生长的影响.方法 选用LY294002处理胃癌MGC803细胞后,利用细胞生长曲线、平皿克隆与流式细胞术观察细胞的生长情况,采用免疫细胞化学染色和Western blot检测AKT蛋白与p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白的表达.结果 LY294002处理后,MGC803细胞生长速度明显减慢,细胞克隆体积变小,数量减少;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例降低.LY294002处理后,MGC803细胞中磷酸化的AKT蛋白与Cyclin E蛋白表达降低,而磷酸化的p27Kip1蛋白表达升高.结论 LY294002抑制胃癌MGC803细胞生长速度,呈现出G1/S期细胞周期阻滞.     

GSK-3β参与抑制肺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)对肺癌A549细胞增殖的影响及可能机制.方法:MTT法检测不同浓度曲古抑菌素A(TSA)和联合GSK-3β抑制剂SB216763对A549细胞增殖的影响;Western Blot法检测各组细胞中GSK-3β和磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)蛋白表达的变化;流式细胞仪分析细胞周期;免疫细胞化学法检测p27蛋白水平.结果:TSA以剂量依赖性抑制A549细胞生长,使细胞周期阻滞于GdG1期,用SB216763预处理后明显减弱了TSA对A549细胞的生长抑制作用和细胞周期阻滞.TSA对细胞GSK-3β蛋白表达无明显影响,却降低了pGSK-3β蛋白水平.p27蛋白表达增加;抑制剂SB216763使pGSK-3β表达增加,下调p27蛋白水平.结论:GSK-3β参与并促进了TSA对肺癌细胞的生长抑制和细胞周期阻滞效应,其机制可能与GSK-3β对p27蛋白的调节有关.     

PI3K抑制剂对食管癌Eca-109细胞株放射增敏作用及机制

目的:研究PI3K抑制剂对食管癌细胞株Eca-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eca-109为实验对象,MTT法观察PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT-PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs mRNA表达;流式细胞技术检测细胞周期.结果:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时即可降低Eca-109细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.58.药物LY294002组DNA-PKcs mRNA表达受抑,但与对照组比较差异无统计学意义;照射组表达较对照组明显升高(P<0.05);药物LY294002+照射组的表达较照射组下降(P<0.05).药物LY294002组G2期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义,照射组较对照组升高(P<0.01),药物LY294002+照射组G2期细胞比例较照射组下降(P<0.05).结论:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有放射增敏作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs及减少G2期细胞...     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

Hsulf-1介导PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的探讨人硫酸酯酶-1（Hsulf-1）基因介导磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制。方法将构建成功的pcDNA3.1（+）-Hsulf-1质粒及Hsulf-1siRNA质粒分别转染肝癌细胞系SMMC7221细胞,应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理,分为Hsulf-1过表达组、Hsulf-1siRNA组、抑制剂组及空白组;采用RT-PCR法及Westernblot法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）和β连环蛋白（β-catenin）的mRNA及蛋白表达水平,采用Transwell小室实验法检测细胞迁移能力。结果Hsulf-1过表达组E-cadherin和β-cateninmRNA表达水平均明显高于空白组（均P＜0.05）;Hsulf-1siRNA组、抑制剂组E-cadherin和β-cateninmRNA表达水平均明显低于空白组（均P＜0.05）。与空白组比较,Hsulf-1过表达组Hsulf-1、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为高,p-AKT均明显为低（均P＜0.05）;Hsulf-1siRNA组p-AKT蛋白表达水平明显为高,Hsulf-1、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）;抑制剂组p-AKT、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）。与Hsulf-1siRNA组比较,抑制剂组p-AKT、E-cadherin和β-catenin蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）。与空白组比较,Hsulf-1过表达组、Hsulf-1siRNA组SMMC7221细胞迁移数均明显为高,抑制剂组SMMC7221细胞迁移数明显为低（均P＜0.05）;与Hsulf-1siRNA组比较,抑制剂组SMMC7221细胞迁移数明显为低（P＜0.05）。结论Hsulf-1基因可通过PI3K/AKT信号通路刺激E-cadherin,β-catenin的表达,抑制肝癌细胞侵袭转移,是肝癌侵袭转移的重要机制。     

PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞SGC7901生长的研究

目的 探讨PI3K/Akt(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B)信号转导通路在人胃癌细胞株SGC7901生长中的作用机制.方法 应用PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002用SGC7901,并设对照组和实验组.MTT法检测LY294002作用24、48、72 h后,对SGC7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测胃癌细胞周期的变化;Western-blot检测P-Akt蛋白的表达水平的变化.结果 LY29400对SGC7901细胞的增殖有抑制作用,与正常培养组比较,培养24 h时尚无差异,培养48、72 h后差异显著(P<0.05)具有统计学意义.流式细胞法及Western blot结果显示:LY29400作用于SGC7901细胞后,胃癌细胞SGC7901的凋亡率增强、G0/G1期细胞比例增加并使P-Akt 蛋白表达减弱.与正常培养组比较(P<0.05),具有统计学意义.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路,胃癌细胞生长、分化受到抑制,凋亡率增强.PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901的调控起一定作用.     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对胃癌细胞SGC7901中Skp2和NAG-1表达的影响及其效应

目的 研究PI3K/Akt信号转导通路靶向抑制剂LY294002对胃癌细胞SGC7901中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和非甾体抗炎药诱导基因-1(NAG-1)表达的影响.方法 将LY294002作用于胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术AnnexinV2FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,Western blot检测p-Akt(Ser473)和总Akt(t-Akt)的表达情况.结果 LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;10、30、50 μmol/L的LY294002作用12 h后细胞凋亡率分别为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%和(64.1±0.79)%,显著高于空白对照组的(2.3±0.36)%,差异均有统计学意义(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达,而t-Akt的表达未发生改变;LY294002可上调NAG-1 mRNA的表达,并下调Skp2 mRNA的表达.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路可改变胃癌细胞株SGC7901中Skp2和NAG-1的表达,并能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化及调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关.     

双氢青蒿素通过Wnt信号通路对胶质瘤细胞增殖侵袭的影响

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察DHA对胶质瘤活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移力; Transwell小室法检测细胞侵袭力;免疫印迹试验(Western blot,WB)检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及β-catenin、GSK-3β、Axin2、c-myc蛋白的表达水平。结果:DHA显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖活性、迁移能力及侵袭能力且呈浓度依赖性; WB法显示DHA下调E-cadherin、β-catenin、c-myc蛋白的表达水平,上调N-cadherin、Vimentin、GSK3β、Axin2蛋白的表达水平且呈浓度依赖性。结论:DHA可以抑制人胶质瘤U251细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin通路从而抑制EMT相关进程。     

X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响

目的:探讨X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响.方法:不同剂量X射线照射肺腺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖抑制;免疫细胞化学法蛋白水平检测细胞中E-cadherin及其连环蛋白β-catenin的表达;Transwell小室检测细胞的侵袭力.结果:X射线对A549细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性;照射后E-cadherin和β-catenin蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05),其变化趋势是随照射剂量增加表达逐渐增加;Transwell小室结果表明随着照射剂量的增加.细胞侵袭力逐渐降低(P<0.05).结论:X射线上调A549细胞上粘附分子E-cadherin和β-catenin在细胞中的表达,增加细胞间的粘附力,降低肿瘤细胞的侵袭力,这可能是X射线抑制肺腺癌细胞转移的作用机制之一.     

PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元保护的实验研究

【目的】 探讨PI3K/Akt信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中对Wnt/β-catenin信号通路的影响。 【方法】 健康雄性SD大鼠96只,采用longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为4组:假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I组)、脑缺血再灌注+bFGF后处理组(bFGF组)、脑缺血再灌注+bFGF后处理+LY294002(LY组),各组24只大鼠。各组依据缺血后再灌注时间点12、24、48、72 h再分4个亚组。应用H-E染色、TUNEL法检测皮质组织形态变化及细胞凋亡情况。采用免疫组织化学法、原位杂交法、蛋白质印迹法分别检测在各组皮质不同再灌注时间点P-Akt、GSK-3β mRNA、β-catenin的表达变化。 【结果】 免疫组织化学法检测P-Akt蛋白水平, I组和LY组每一灌注时间点都高于S组表达水平,24 h达高峰。bFGF组各亚组皮质P-Akt表达均较I组和LY组各亚组表达增多(P<0.05)。应用原位杂交和蛋白质印迹技术分别检测GSK-3β mRNA和β-catenin在缺血再灌注皮质的表达。I组和LY组各亚组缺血皮质GSK-3β mRNA和β-catenin表达高于S组,分别在48 h和72 h达高峰。与I组和LY组比较,bFGF组各亚组缺血皮质GSK-3β mRNA表达明显降低,而β-catenin蛋白表达却显著增高(P<0.05)。说明bFGF在缺血再灌注皮质通过激活Akt,抑制GSK-3β的活性,拮抗由GSK-3β、axin和结肠多发性息肉样蛋白(APC)组成的复合物,使β-catenin不能被磷酸化,游离的β-catenin在细胞浆内蓄积,继而进入胞核,促进Wnt靶基因转录,抑制细胞凋亡。从两条通路主要成员激活的时间上,Akt在皮质缺血再灌注后24 h达高峰,而β-catenin是缺血再灌注后持续增高,一直到72 h达高峰。提示β-catenin参与了脑缺血再灌注PI3K/Akt激活后的信号传导路径,Akt对β-catenin的调控作用同样在缺血性脑损伤中发挥作用,即Akt-GSK-3β-β-catenin。 【结论】 脑缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路通过GSK-3β可以调控Wnt信号通路主要成员β-catenin,这为深入研究β-catenin在缺血性脑损伤中的作用机制提供重要线索。     

Akt通过磷酸化p27诱导胆管癌细胞生长

 目的  探讨Akt和p27蛋白控制胆管癌细胞生长的分子机制。方法  利用突变载体、突变失活载体以及位点突变基因的转染技术,流式细胞仪检测PI3K、转染各类载体对胆管癌细胞周期的影响,免疫印迹、免疫荧光检测PI3K抑制剂、转染各类载体对P27蛋白表达及分布的影响。结果  PI3K抑制剂LY294002引起胆管癌细胞株G1期细胞周期阻滞,并引起p27蛋白入核;Akt能通过诱导p27蛋白出细胞核而解除LY294002的G1期细胞周期阻滞;Akt通过磷酸化野生型p27蛋白第157位苏氨酸逆转细胞周期阻滞。 结论  Akt通过磷酸化p27第157位苏氨酸来诱导p27细胞内重定位于细胞质,促进胆管癌细胞的生长。     

靶向抑制PI3K／Akt信号通路对Smac基因表达与胃癌细胞凋亡的影响

目的 研究LY294002靶向抑制PI3K/Akt信号通路对线粒体激活因子(Smac)基因的表达及胃癌细胞凋亡的影响.方法将PI3K/Akt信号通路的靶向抑制剂LY294002加入胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖,DNA ladder检测细胞凋亡,原位细胞凋亡检测技术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,免疫组织化学检测Smac的表达.结果LY294002致细胞存活率下降,且与时间、浓度呈正相关.在DNA电泳图上,对照组呈规则的基因组断裂条带,其亮度与药物作用时间呈正相关.流式细胞结果显示LY2940002处理后在细胞周期G1期前出现明显的凋亡峰,作用12 h时,细胞凋亡达58.7%.Smac在胃癌细胞中仅在胞质中呈阴性或弱阳性表达;LY294002作用后,细胞质中出现棕黄色颗粒状浓染.结论PI3K/Akt信号通路、Smac基因与胃癌细胞的凋亡关系密切.