滨蒿内酯对大鼠哮喘模型蛋白激酶C-α基因表达影响的研究

目的观察滨蒿内酯对哮喘大鼠肺组织蛋白激酶C—α（proteinkinase Cα,PKC-α）mRNA及蛋白表达的影响,探讨滨蒿内酯治疗哮喘的作用机制。方法将40只雄性大鼠随机分成4组：正常对照组（N组）、哮喘组（A组）、地塞米松治疗组（D组）及滨蒿内酯治疗组（S组）。以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘大鼠动物模型并给予相应治疗。测定N组及A组的肺功能,检测各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数及嗜酸性粒细胞（Eos）计数;用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肺组织中PKC—α mRNA,用免疫组化法检测其蛋白表达水平。结果大鼠致敏3周及诱发哮喘4周后,肺功能测定表现为呼气时间延长,呼气峰压明显增大;A组BALF中的白细胞总数及Eos计数、肺组织PKC—α mRNA及蛋白表达水平均较N组明显升高（P〈0．01）;滨蒿内酯治疗组哮喘大鼠BALF中白细胞总数和Eos计数较A组减少（P〈0．01）;PKC—dmRNA及蛋白表达水平较哮喘组下降,但仍较正常对照组升高（P均〈0．01）,D组与S组之间差异无统计意义（P〉0．05）。结论滨蒿内酯可显著抑制哮喘大鼠模型肺组织的PKC—α表达,可明显抑制哮喘大鼠气道炎症的发生发展,对哮喘有较好的治疗作用。     

黄芪对哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶表达的影响

目的 探讨支气管哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶（p38 MAPK）表达的变化以及黄芪注射液对其影响。方法 应用鸡卵清蛋白（OVA）腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入刺激复制大鼠哮喘模型。随机分成3组：正常对照组、哮喘模型组和黄芪干预组。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-5含量和肺组织磷酸化p38MAPK表达的变化,并观察BALF中EOS计数以及肺组织病理学变化。结果哮喘模型组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达水平及BALF中IL-5含量和EOS计数均较正常对照组显著增加（P〈0．01）;黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低（P〈0．01）,肺组织病理学损伤程度明显减轻。肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平与BALF中IL-5含量和EOS计数之间分别呈显著正相关（r=0．73,0．65,P〈0．01）。结论 p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关。     

地塞米松对哮喘小鼠气道炎症反应和外周血单核细胞p38MAPK表达的影响

目的：探讨支气管哮喘小鼠急性外周炎症反应和血单核细胞p38MAPK表达的变化及地塞米松（DEX）对其的影响。方法：采用蛋白质印迹和ELISA方法检测PBMCs核蛋白p38MAPK的表达及细胞上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度。结果：哮喘组PBMCs核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-1、IL-6的蛋白质浓度较正常对照组显著升高（P〈0．01）,DEX处理组核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-1、IL-6的蛋白质浓度较哮喘对照组显著降低（P〈0．01）。通过直线相关分析发现,PBMCs核蛋白p38MAPK表达与培养上清液中IL-1、IL-6蛋白质含量之间均呈显著正相关（r分别=0．72、0．56,P〈0．01）。结论：地塞米松可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症反应,作用机制可能是通过下调外周血单核细胞p38MAPK过度表达,从而抑制依赖于038MAPK信号转到通路的急性气道炎症反应。     

运动对1型糖尿病大鼠心肌细胞中磷酸受纳蛋白表达的影响

目的观察运动对1型糖尿病大鼠心肌细胞中磷酸受纳蛋白（PLB）表达影响及其意义。方法40只健康SD大鼠随机分为正常对照组、运动对照组、糖尿病组及糖尿病＋运动组4组,每组10只。糖尿病大鼠模型复制成功后第4天开始跑台运动,于运动第4周末心脏采血收集血清,放射免疫法测定血清胰岛素水平,RT—PCR和Western-blotting法检测心肌细胞中磷酸受纳蛋白的表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组血糖、糖化血清蛋白水平升高（P〈0．01）,血清胰岛素水平降低（P〈0．01）,心肌细胞PLB mRNA和蛋白表达无显著变化（P〉0．05）,糖尿病＋运动组血糖及糖化血清蛋白水平均升高（均P〈0．01）,心肌细胞中PLB mRNA和蛋白表达上调（P〈0．01）。与糖尿病组比较,糖尿病＋运动组血糖及糖化血清蛋白水平均降低（均P〈0．05）,PLB mRNA和PLB蛋白表达水平均升高（均P〈0．05）。结论运动对1型糖尿病大鼠心肌损伤有防治作用,其机制与运动能上调PLB基因表达可能有关。     

红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞磷酸化JNK表达的影响

目的：探讨哮喘大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）JNK磷酸化表达的变化及红霉素对其影响。方法：分离培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的PBMCs。分别采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-4,IL-5浓度,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western Bloting技术检测PBMCs JNKmRNA、磷酸化JNK的表达。结果：哮喘组PBMCs JNK磷酸化蛋白、mRNA表达水平及细胞上清液中IL-4,IL-5的浓度较正常对照组显著升高（P＆lt;0.05）,红霉素处理组JNK mRNA、磷酸化蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4,IL-5的浓度较哮喘组显著降低（P＆lt;0.05）。通过直线相关分析发现,PBMCs JNK磷酸化蛋白与细胞上清液中IL-4,IL-5的表达水平之间均呈显著正相关（r分别为0.74和0.66,P均＆lt;0.05）。结论：JNK可能参与支气管哮喘的病理生理过程。红霉素可能通过作用于JNK这一靶点发挥其抗炎效应。     

谷氨酰胺对脓毒症幼年大鼠心肌ERK2mRNA以及p38MAPK表达的影响

目的观察脓毒症心肌细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase-2，ERK2）和丝分裂原蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，p38MAPK）是否参与这一病理过程，以及谷氨酰胺（Glutamine，Gln）对其表达的影响，探讨Gin对脓毒症大鼠心肌的保护途径。方法选健康18日龄Wistar大鼠88只．按腹腔注射药物不同生理盐水作对照组（0h），内毒素（LPS）、Gln组，各组于加LPS后2、4、6、24及72h分别取8只，断头无菌分离心脏，似多聚甲醛固定12-16h，制成石蜡切片，用原位杂交方法测定ERK2 mRNA表达，用免疫组化方法测定p38MAPK表达。结果LPS组各时点ERK：mRNA以及p38MAPK表达均较对照组增强．最高点分别在6h和6-24h，差异有显著性，P〈0．01；Gln组各时点ERK2 mRNA以及p38MAPK表达趋势与LPS组一致，但明显低于LPS组，P〈0．01。结论ERK2 mRNA以及p38MAPK表达在脓毒症时均明显增强：谷氨酰胺可以使其表达下调。     

磷脂酰肌醇3激酶途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：观察哮喘大鼠肺组织中p-Akt、p-p70^s6k含量变化,探讨磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）信号转导途径在哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖中的作用。方法：SPF级健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组（C组）、哮喘组（A组）和wortmannin干预组（W组）,每组12只。以卵蛋白（OVA）致敏和激发的方法制备大鼠慢性哮喘模型。观察各组大鼠气道炎症和细胞浸润情况;以图像分析软件测定气道壁厚度（Wat）及气道平滑肌层厚度（Wam）;以Westernblot法检测肺组织p-Akt及p-p70^s6k表达情况。结果：①A组大鼠War、Wam大于C组（P〈0．01）;W组大鼠War、Wam小于A组（P〈0．01）,大干C组（P〈0．01）。②A组p-Akt及p-p70^s6k。含量均高于C组（P〈0．01）;W组低于A组（P〈0．01）,但高于C组（P〈0．01）。③p-Akt蛋白含量与Wam／Pbm呈显著正相关（r=0．779,P〈0．01）;p=Akt蛋白含量与P—p70^s6k蛋白含量呈显著正相关（r=0．803,P〈0．01）。结论：哮喘大鼠肺组织中P13K／Akt／p70^s6k途径激活,抑制该途径可减轻哮喘大鼠ASMC增殖。     

腺苷、白介素—1及茶碱对哮喘患者外周血单核细胞A2腺苷受体mRNA表达的影响

目的 通过研究腺苷、白介素（IL）－1、茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞（PBMCs)表达A2a及A2b腺苷受体（A2aAR及A2bAR)mRNA的影响,探讨A2aAR及A2bAR在哮喘发病中的作用,为临床使用茶碱提供理论依据。方法 11例正常人及哮喘患者PBMCs经Ficoll液分离,分对照组,腺苷组、腺苷＋IL－1组及腺苷＋茶碱4组,体外培养18小时,收集细胞,采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法和图象分析半定量法检测A2aAR及A2bAR mRNA表达。结果 正常人及哮喘患者各组PBMCs表达A2aARmRNA无明显差异（P＞0．05）。哮喘患者PBMCsA2bAR mRNA表达较正常人增加（P＜0．01）,腺苷、IL－1促进哮喘患者（P＜0．01）。腺苷及IL－1对哮喘患者PBMCsA2bAR mRNA表达的影响与血清TIgE水平呈正相关（P＜0．05）,与FEV1％呈负相关P＜0．05）。结论 PBMCs A2bARmRNA表达的影响与血清TIgE水平呈正相关（P＜0．05）,与FEV1％呈负相关P＜0．05）。结论 哮喘患者PBMCs表达A2bmRNA增加,腺苷及IL－1促进其表达,且与患者机体过敏状态及气道阻塞程度相关,茶碱能抑制A2bAR mRNA表达;腺苷、IL－1及茶碱对PBMCs表达A2aAR mRNA无明显影响。     

地塞米松对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERK1／2 mRNA表达水平的影响

目的探讨地塞米松对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖及ASMCs上ERK1／2 mRNA表达水平的影响。方法建立哮喘大鼠模型,取气道平滑肌细胞进行原代培养,实验分对照组、哮喘组、地塞米松干预组（终浓度为100HM）。采用流式细胞仪检测各组ASMCs增殖周期的变化。RT—PCR检测ASMCs上ERK1／2 mRNA表达。结果与对照组相比,哮喘组S＋G2/M期细胞所占比例明显增高,G0／G1期细胞所占比例明显减小（均P〈0．01）;与哮喘组相比,地塞米松干预组S＋G/M期细胞所占比例明显降低,G0／G1期细胞所占比例明显增高（均P〈0．01）;干预组S＋G2／M期细胞所占比例仍高于对照组（P〈0．01）。哮喘组ERK1／2 mRNA表达量较对照组和干预组显著增加（均P〈0．01）,干预组与对照组之间比较无差异（P〉0．05）。结论哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,ERK1／2 mRNA表达上调,该结果提示细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）可能参与了气道重塑中平滑肌细胞的增殖过程。地塞米松能下调哮喘大鼠ASMCs上ERK1／2 mRNA的表达,能抑制气道重塑中平滑肌细胞的异常增殖。早期给予地塞米松干预可能延缓气道重塑的进程。     

氧化LDL对人脐静脉内皮细胞Connexin37表达的影响

目的研究氧化低密度脂蛋白（Ox—LDL）对体外培养的人脐静脉内皮细胞缝隙连接蛋白Connexin37基因表达的影响。方法常规人脐静脉内皮细胞体外培养并传代。根据Ox—LDL的不同浓度分为对照组（不加Ox—LDL）及50、100、200mg／L干预组,干预24h后通过RT-PCR方法检测并比较各组内皮细胞Connexin37mRNA的表达。根据Ox—LDL干预的不同时间分为对照组（不加Ox—LDL）以及50mg／LOx—LDL干预6、12、24、48、72h组,检测比较各组Connexin37mRNA的表达情况;并检测比较对照组和100mg／L Ox-LDL干预组间Connexin37蛋白的表达水平。结果50、100、200mg／L的Ox—LDL干预24h后均能引起内皮细胞Connexin37mRNA表达的显著减少（P〈0.01）,以50mg／L的Ox—LDL干预效果最明显（P〈0.01）.50mg／L的Ox-LDL干预12h后Connexin37mRNA的表达开始显著下降（P〈0．01）,24h下降最明显（P〈0．01）,48h仍下降（P〈0．05）,至72h时恢复到刺激前水平。100mg／L的Ox—LDL干预24h后内皮细胞Connexin37蛋白表达水平显著降低（P〈0.01）。结论Ox-LDL可以抑制人脐静脉内皮细胞Connexin37mRNA和Connexin37蛋白的表达。     

地塞米松对哮喘小鼠气道炎症反应和外周血单核细胞p38 MAPK表达的影响

目的:探讨支气管哮喘小鼠急性外周炎症反应和血单核细胞p38MAPK表达的变化及地塞米松(DEX)对其的影响。方法:采用蛋白质印迹和ELISA方法检测PBMCs核蛋白p38MAPK的表达及细胞上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度。结果:哮喘组PBMCs核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-1、IL-6的蛋白质浓度较正常对照组显著升高(P<0.01),DEX处理组核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-1、IL-6的蛋白质浓度较哮喘对照组显著降低(P<0.01)。通过直线相关分析发现,PBMCs核蛋白p38MAPK表达与培养上清液中IL-1、IL-6蛋白质含量之间均呈显著正相关(r分别=0.72、0.56,P<0.01)。结论:地塞米松可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症反应,作用机制可能是通过下调外周血单核细胞p38MAPK过度表达,从而抑制依赖于p38MAPK信号转到通路的急性气道炎症反应。     

姜黄素对哮喘大鼠IL-5、Eotaxin 水平及NF-κB表达的影响

目的 探讨姜黄素对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-5 及肺组织中 Eotaxin、NF-κB表达的影响.方法 将36只大鼠随机分为正常对照组、哮喘组、姜黄素组,用卵白蛋白（OVA）制备哮喘大鼠模型,正常对照组用0.9%氯化钠溶液代替OVA进行致敏和激发.以ELISA法检测各组大鼠血清及BALF中IL-5的浓度以及计数BALF中嗜酸细胞（EOS）的绝对值及百分比,同时以免疫组化方法检测Eotaxin、NF-κB等在肺组织中的表达.结果 血清及BALF中IL-5浓度的改变与NF-κBp65、Eotaxin蛋白表达的改变：哮喘组及姜黄素组均显著高于正常对照组（P＜0.01）,姜黄素组显著低于哮喘组（P＜0.01）.肺组织细胞NF-κB p65的表达与EOS绝对计数、IL-5的表达及Eotaxin的表达均呈显著正相关（r=0.928、0.905、0.850,均P＜0.01）.结论 姜黄素能抑制NF-κB的活性,通过抑制NF-κB向核内转移与DNA的结合而减少IL-5及Eotaxin的合成,从而发挥抗哮喘作用.     

P38MAPK在妊娠期糖代谢异常大鼠肾脏组织中的表达

目的初步研究P38MAPK在妊娠期糖代谢异常大鼠肾脏组织中的表达水平。方法选取雌性sD大鼠60只,雄性SD大鼠15只,分为高糖高脂饮食-孕鼠组（SFP）和非孕鼠组（SFV）,普通饮食一孕鼠组（NP）和非孕鼠组（NV）。相应组分别受孕,于妊娠第20天四组大鼠心内取血,检测血糖、胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数。用RT—PCR法检测大鼠肾脏组织中P38MAPK的表达水平。结果SFP组的空腹血糖值、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数与其他三纽相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）,证明妊娠期糖代谢异常大鼠模型建立成功;P38MAPK mRNA在肾脏组织中有表达,并且：①P38MAPKmRNA在SFP组的表达水平明显升高,与其他三组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。②P38MAPKmRNA在SFV组和NP组的表达水平均升高,但是二者之间差异无统计学意义（P〉0．05）。⑧P38MAPK mRNA在SFV组和NP组的表达水平与NV组相比升高明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论P38MAPK可能参与了妊娠期糖代谢异常疾病的肾脏损伤过程。     

麻杏石甘汤对哮喘大鼠气道上皮STAT6和黏蛋白表达的调控

目的研究麻杏石甘汤对哮喘大鼠气道上皮STAT6及黏蛋白表达的影响,探讨其在哮喘中的作用及可能机制。方法将55只SPF级雄性SD大鼠随机分为5组：对照组（A组）、哮喘组（B组）以及高、中、低剂量麻杏石甘汤＋哮喘组（C组、D组、E组）。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）,运用ELISA法检测其中IL-12、IL～13浓度;留取肺组织标本行HE染色观察气道炎症,免疫组化法检测STAT6表达,AB—PAS染色法分析气道黏蛋白表达。结果（1）麻杏石甘汤能降低哮喘组BALF中IL-13浓度,升高IL-12含量且高、中剂量组与哮喘组相比均有统计学意义（P〈0．05）。（2）麻杏石甘汤剂量依赖性减少哮喘组气道平滑肌及血管肌层增生,减少周围炎性细胞（嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞）浸润。（3）STAT6蛋白在哮喘大鼠各级气道上皮均有表达,麻杏石甘汤组STAT6含量高于对照组,且高、中剂量组STAT6表达较哮喘组显著降低（P〈0．05）。（4）哮喘组存在气道黏液高分泌,麻杏石甘汤组较对照组黏蛋白表达增多,但较哮喘组明显减少。结论麻杏石甘汤可能通过IL-13／STAT6／黏蛋白途径减轻哮喘大鼠炎症反应、气道黏液高分泌,为哮喘的临床治疗提供新的思路。     

不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1／Th2类细胞因子分泌的影响

目的：观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法：选取Wistar大鼠,随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、麻杏甘石汤1高剂量组（简称麻1组）、麻杏甘石汤2高剂量组（简称麻2组）。观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠BALF中IL-4、IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值比较、外周血中IL-4、IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值比较、肺组织中IFN-γ、IL-4和内参照激动蛋白cDNA扩增后半定量和电泳结果的影响。结果：与哮喘模型组比较,不同配比的麻杏甘石汤组大鼠BAIF和外周血中IL-4水平下降（P〈0.05,P〈0.01）,效果与地塞米松组相似（P〉0.05）、IL-4/IFN-γ比值也相应降低,IFN-γ水平升高。麻杏甘石汤组大鼠RT-PCR结果显示,IFN-γmRNA表达水平明显高于地塞米松组的IFN-γmRNA（P〈0.05）,而地塞米松组IL-4 mRNA与正常组相比表达减少（P〈0.05）,与哮喘组相比IL-4 mRNA的表达明显减少（P〈0.01）。IFN-γmRNA的表达与正常组相比表达无明显差异（P〉0.05）,与麻杏甘石汤组相比IFN-γmRNA的表达明显减少（P〈0.01）。麻1、2高剂量组间比较无显著差异（P〉0.05）。结论：不同配比麻杏甘石汤可能通过抑制IL-4水平及提高IFN-γ水平,使Thl/Th2失衡得到一定程度的纠正,从而控制气道炎症,减缓哮喘发作。不同配比比较无显著差异（P〉0.05）。     

槐定碱对内毒素肺损伤小鼠p38MAPK的影响

目的探讨内毒素（细菌脂多糖,LPS）肺损伤小鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）表达的变化以及槐定碱对其影响。方法 60只BALB/c小鼠,除正常对照组、槐定碱对照组外,内毒素肺损伤模型组（LPS模型组）、槐定碱治疗高（12mg.kg-1）、中（6mg.kg-1）、低（3mg.kg-1）剂量组的BALB/c小鼠均尾静脉注射LPS制备急性肺损伤模型,注射后30min再分别腹腔注射生理盐水或槐定碱12、6、3mg.kg-1,各组均处理后6h取材,肉眼及光镜观察肺组织的病理变化,免疫组化SP法检测肺组织中总p38、磷酸化p38的表达,硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果 LPS模型组肺脏病理改变明显加重,肺组织总P38和磷酸化p38的表达均增多和增强（P〈0.01）;血清NO显著升高（P〈0.01）;槐定碱三个剂量治疗组病理损伤均不同程度改善,总P38表达与LPS组比较差异无统计学意义,但磷酸化p38表达均显著小于模型组（P〈0.01）,血清NO含量显著低于LPS模型组（P〈0.01）。结论 p38MAPK参与了内毒素肺损伤的发病过程,槐定碱的抗内毒素肺损伤机制可能与下调p38MAPK的表达,抑制NO的释放有关。