H2S减少H2O2诱发H9c2心肌细胞内质网应激的机制研究

目的 探讨硫化氢(H2S)减少过氧化氢(H2O2)诱发H9c2心肌细胞内质网应激的作用机制.方法 H2O2 150 μmol/L诱发制备H9c2心肌细胞内质网应激模型后分为三组,A组为模型对照组,B组和C组分别采用硫氢化钠25 μmol/L和S-炔丙基半胱氨酸25 μmol/L处理;另设空白对照(D)组.CCK-8法检测细胞生存率,Hoechst染色法检测凋亡细胞,荧光分析法检测Caspase-12活性,Western blot检测转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)、受磷蛋白(PLN)和心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)表达,免疫共沉淀法检测CaMK Ⅱ与PLN以及SERCA2a与PLN的结合.结果 A组细胞存活率低于D组,而B组和C组高于A组(P＜0.05).A组凋亡细胞数多于D组,而B组和C组均少于A组(P＜0.05).A组 Caspase-12活性、PLN 磷酸化水平、CHOP、BiP、CaMK Ⅱ 以及 CaMK Ⅱ与PLN结合表达均高于D组,B组和C组则均低于A组(P＜0.05).A组SERCA2a与PLN结合的表达低于D组,B组和C组则均高于A组(P＜0.05).结论 H2S可以通过CaMK Ⅱ/PLN/SERCA2a途径减少内质网应激,对H2O2诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用.     

不同剂量前列腺素E2对H9c2心肌细胞肥大的影响

目的:研究前列腺素E2(PGE2)对H9c2心肌细胞的肥大作用,并分析其量效关系,为寻找抗心肌肥大的潜在靶点提供理论依据.方法:将H9c2心肌细胞分为空白对照组(C组)和PGE2处理组,PGE2处理组又分为小剂量PGE2组(D1组)、中剂量PGE2组(D2组)和大剂量PGE2组(D3组).各组细胞培养液中PGE2终浓度分别为0、0.1、1及10 μmol/L.给药孵育48 h后,利用荧光显微镜观察大鼠H9c2心肌细胞形态及体积;通过测量细胞直径大小、BCA法测定细胞总蛋白含量来确定心肌细胞是否肥大;RT-PCR技术测量心钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)mRNA的表达水平,以此判断是否发生病理性肥大.结果:与C组比较,免疫荧光显示D1组、D2组及D3组细胞形态改变、体积增大;细胞直径及总蛋白含量显著增加(P＜0.05),不同剂量PGE2组间亦具有统计学差异(P＜0.05);D2组及D3组较C组细胞内ANP、BNP mRNA表达水平显著增高(P＜0.05).结论:PGE2可剂量依赖地诱导H9c2心肌细胞肥大,较大剂量PGE2引发心肌细胞病理性肥大.抑制PGE2合成有望为抑制心肌肥大提供靶点.     

芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞PPARα表达的影响

目的 观察芪苈强心胶囊对H9C2大鼠心肌细胞PPARα表达的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭作用的相关机制.方法 30只H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组、模型组、芪苈强心组、WY14643组、芪苈强心组+WY14643组,每组6只,采用100 μmol/L H2O2处理6h造成心肌细胞损伤模型,5组给药后继续培养12、24、48 h,测定细胞增殖率和LDH漏出率.5组给药孵育48 h后,收集细胞,RT-PCR和Western blot法检测PPARα mRNA和蛋白的表达.结果 与模型组比较,芪苈强心组、WY14643组、芪苈强心组+ WY14643组均能增加H9C2细胞增殖活性(P＜0.05或＜0.01),抑制LDH漏出率(P＜0.05或＜0.01),RT-RCR和Western blot方法结果显示芪苈强心组、WY14643组、芪苈强心组+WY14643组PPARα mRNA和蛋白表达显著上升(P＜0.05或＜0.01).结论 芪苈强心胶囊可通过上调PPARα的表达,发挥其心肌细胞的保护作用.     

硫化氢通过SIRT1途径对大鼠H9c2心肌细胞的保护作用

目的探讨硫化氢(H₂S)对氧化应激下大鼠H9c2心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法体外培养H9c2心肌细胞并分为四组。A组作为空白对照。B、C、D组采用过氧化氢诱导氧化应激模型;其中,B组为模型对照组,C组和D组分别实施硫氢化钠(NaHS)和炔丙基半胱氨酸(SPRC)预处理。采用Western blot法检测胱硫醚γ裂解酶(CSE)、Sirtuin 1(SIRT1)和前体Caspase-9的蛋白表达,比色法检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ～Ⅳ、SOD的活性以及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测TNF-α和IL-8含量。结果 D组H9c2心肌细胞中CSE的蛋白表达较A组增加(P<0.05)。与A组相比,B组SIRT1和前体Caspase-9蛋白表达以及线粒体呼吸链复合物Ⅰ～Ⅳ和SOD的活性降低(P<0.05或P<0.01),MDA、NO、IL-8及TNF-α含量升高(P<0.01);而C组和D组分别用NaHS和SPRC预处理后可有效逆转上述各指标的变化过程(P<0.05或P<0.01)。结论 H₂     

碘化N-正丁基氟哌啶醇通过抑制线粒体凋亡通路抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中线粒体凋亡通路的影响,并探讨其分子作用机制。方法建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,将H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、F_2低、中、高剂量组。流式细胞术分析测定细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞色素C(Cyto C)、Bcl-2、和Bax蛋白表达变化;比色法测定caspase-3的活性。结果与H/R组相比,F_2低、中、高剂量组可明显降低H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞凋亡率;提高Bcl-2/Bax比值;抑制线粒体中Cyto C的释放;减少caspase-3的活性。结论 F_2能够降低H/R后H9c2心肌细胞凋亡率,其机制可能与抑制线粒体通路的细胞凋亡有关。     

Effect and possible mechanism of desferrioxamine on microvascular formation of ischemic myocardium in rats

目的 探讨去铁胺(DFO)对大鼠缺血心肌微血管形成的作用及可能机制.方法 48只SD大鼠随机均分为正常对照组(A组)、假手术组(B组)、结扎组(C组)和DFO 200mg/kg组(D组).术后7d,处死大鼠,免疫组化法检测微血管密度(MVD)及低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达,RT-FCR检测HIF-1α mRNA表达.结果 与A、B组相比,C、D组MVD、HIF-1α蛋白和mRNA表达均增加(P＜0.05或P＜0.01),其中D组各指标增加更为显著(P＜0.01).结论 DFO 可以促进大鼠缺血心肌组织微血管形成;其作用机制可能与上调HIF-1α的表达有关.     

高尿酸对胰岛β细胞生存与功能的影响

目的 探讨高尿酸对胰岛β细胞生存及功能的影响.方法 采用免疫荧光染色方法检测正常小鼠(A组)和高尿酸小鼠(B组)胰岛形态及胰岛素水平变化.采用CCK-8方法观察尿酸浓度为0 mg/dl(C组)、5 mg/dl(D组)和15 mg/dl(E组)大鼠胰岛细胞系INS-1细胞活力.采用ELISA法检测尿酸浓度为0 mg/dl(F组)、15 mg/dl(G组)小鼠分离的胰岛胰岛素分泌量及储藏量变化.结果 与A组比较,B组小鼠胰岛面积明显缩小,胰岛素水平降低(P＜0.05).与C组比较,D组、E组INS-1细胞活力呈剂量依赖性显著降低(P＜0.05).与F组比较,G组细胞胰岛素的分泌水平和储存水平均显著降低(P＜0.05和P＜0.01).结论 尿酸对胰岛β细胞有直接损伤作用.     

芪苈强心胶囊通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡

目的探讨芪苈强心胶囊对氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡的作用及机制。方法动物实验:通过结扎SD大鼠左冠状动脉前降支建立心梗后慢性心力衰竭(慢性心衰)大鼠模型,按分组分别灌胃给予芪苈强心超微粉(QLQX)或生理盐水4周。彩超检测心功能,ELISA法及荧光法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、活性氧(ROS)表达水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL检测心肌细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白表达水平及信号通路相关因子p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β表达相对比。细胞实验:使用H9c2心肌细胞给予或不给予QLQX或PI3K抑制剂LY294002,然后暴露于H2O2中共孵育24 h,MTS检测H9c2细胞生存活性,检测LDH和ROS表达水平及SOD活性,QRT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达水平。流式细胞术测H9c2细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白及信号通路相关因子蛋白表达水平。同时评估线粒体分裂、线粒体通透性转运孔(m PTP)开放和线粒体膜电位(MMP)水平。结果动物实验结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠血清LDH和ROS水平显著增加,SOD活性降低(P<0.01);心肌细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白Bax、细胞色素c、凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)、活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达相对比降低(P<0.01),心功能下降(P<0.01)。给予不同剂量QLQX后均不同程度降低心衰大鼠血清LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性(P<0.05);抑制心肌细胞凋亡率及促凋亡蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β相对比,提高心衰大鼠心功能(P<0.05)。细胞实验结果显示,与H2O2组相比,QLQX促进H2O2损伤H9c2心肌细胞24 h后细胞增殖,抑制LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性、HO-1及CAT mRNA表达水平(P<0.01);抑制H9c2细胞凋亡率,下调上述促凋亡蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β相对比(P<0.01)。同时,QLQX抑制H2O2损伤H9c2细胞线粒体分裂、mPTP开放及MMP下降(P<0.01)。然而,QLQX改善氧化应激诱导H9c2心肌细胞线粒体损伤及凋亡作用可被PI3K抑制剂LY294002阻断。结论 QLQX可能通过激活PI3K/AKT/Gsk3β通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体依赖性凋亡。     

阳离子脂质体转染Akt基因对缺血性心脏病细胞凋亡的影响

目的 研究转染基因Akt对心肌细胞凋亡的影响.方法 培养新生SD大鼠心肌细胞;提取人Akt质粒,用脂质体将其转染心肌细胞.实验分5组:空白对照(A)组、缺血-再灌注损伤对照(B)组、Akt基因(C)组、阳离子脂质体空载体(D)组和Akt抑制剂(E)组;各组进行模拟缺血-再灌注后测定乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞活性、细胞凋亡率及Akt、Bcl-2、NF-kB p65蛋白表达.结果 C组LDH含量较B组、D组和E组明显减少(P＜0.05),细胞活性高(P＜0.05),细胞凋亡率低(P＜0.05),Akt、Bcl-2与NF-kB p65蛋白表达增加(P＜0.05).结论 细胞凋亡参与了心肌缺血-再灌注损伤过程,转染Akt基因可减少缺血-再灌注损伤心肌细胞凋亡率.     

内质网应激相关蛋白 1过表达对缺氧 /复氧诱导的 H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的 研究内质网应激相关蛋白1(SERP1)过表达对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠胚胎H9c2心肌细胞凋亡的影响.方法 2018年1—12月将中国科学院上海细胞库大鼠H9c2心肌细胞系建立H/R损伤大鼠心肌细胞模型,采用pCMV6质粒为载体构建内质pCMV6-网应激相关蛋白1(pCMV6-SERP1)过表达重组质粒,分别设H9c2心肌细胞为正常对照组(NC组),H/R损伤(缺氧4 h/复氧4 h)H9c2心肌细胞为H/R组,H/R损伤H9c2心肌细胞转染pCMV6空质粒为H/R+pCMV6组,H/R损伤H9c2心肌细胞转染pCMV6-SERP1过表达重组质粒为H/R+pCMV6-SERP1组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各种H9c2心肌细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染技术检测各组H9c2心肌细胞凋亡率,采用实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹法分别检测各组细胞SERP1蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 与NC组[(1.06±0.21)、(0.41±0.07)]比较,H/R组、H/R+pCMV6组H9c2心肌细胞SERP1 mRNA[(0.47±0.09)、(0.48±0.08)]及蛋白表达水平[(0.25±0.04)、(0.26±0.05)]显著降低,H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞SERP1 mRNA(2.94±0.52)及蛋白表达水平(0.83±0.12)显著增加(P<0.05),与H/R组、H/R+pCMV6组比较,H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞中内质网应激相关蛋白1微小RNA(SERP1 mRNA)及蛋白水平显著升高(P<0.05).与NC组[(100.00±00.00)％、(4.45±0.62)％]比较,H/R组、H/R+pCMV6组、H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞存活率[(49.86±5.14)％、(48.75±5.23)％、(89.72±8.61)％]、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平显著降低(P<0.05),H9c2心肌细胞凋亡率[(35.84±4.13)％、(33.66±4.07)％、(10.96±1.74)％]、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与H/R组、H/R+pCMV6组比较,H/R+pCMV6-SERP1组H9c2心肌细胞中存活率、Bac-l蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 SERP1过表达可能通过上调Bacl-2蛋白,下调Bax、Caspase-3蛋白表达,对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡有一定保护作用.     

N-乙酰半胱氨酸对活性氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对活性氧(ROS)介导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的抑制作用。方法用过氧化氢(H2O2)诱导H9c2心肌细胞,建立氧化损伤凋亡模型,并用NAC进行干预。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,应用流式细胞仪分析H9c2心肌细胞内ROS水平及凋亡率。结果不同剂量H2O2(0、2、4mmol/L)作用于H9c2细胞8h后,随着H2O2剂量的增高,细胞存活率降低,ROS水平及凋亡率升高(P<0.01),5mmol/L NAC有效提高了细胞存活率,明显抑制细胞内ROS水平及凋亡的发生(P<0.01)。结论 NAC通过减少自由基的产生,拮抗了ROS介导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡。     

PPARα/PGC-1α信号通路在磷酸肌酸钠对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤中的作用

目的探讨磷酸肌酸钠对阿霉素损伤H9c2心肌细胞的影响及对细胞PPARα/PGC-1α信号通路的影响。方法实验分为3组:即对照组、阿霉素组(ADM)和磷酸肌酸钠预处理组(ADM+CP)。在使用药物处理后,使用阿霉素建立心肌损伤模型。用DCFH-DA标记细胞用荧光显微镜观察细胞中绿色荧光的含量来分析细胞中ROS的含量;RTPCR检测H9c2心肌细胞PPARα、PGC-1α和P300mRNA的表达;Western blot检测H9c2心肌细胞内PPARα、PGC-1α和P300蛋白的表达;采用Gilson高效液相色谱系统测定H9c2心肌细胞腺嘌呤核苷酸的含量。结果阿霉素处理H9c2心肌细胞后,细胞内ROS含量升高(P0.05),当用磷酸肌酸钠预处理2 h后,可明显降低阿霉素引起的ROS含量升高(P0.05)。与对照组相比,阿霉素可降低H9C2心肌细胞内PPARα、PGC-1α和P300mRNA及蛋白的表达(P0.05)。当用磷酸肌酸钠预处理2 h后,可以增加阿霉素引起的PPARα、PGC-1α、P300mRNA及蛋白的表达(P0.05)。与对照组相比,阿霉素可降低H9c2心肌细胞内ATP、ADP和AMP的含量(P0.05),而磷酸肌酸钠组的ATP、ADP和AMP的含量与阿霉素组相比明显升高(P0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论在本试验条件下,一定剂量的磷酸肌酸钠可在一定程度上抑制阿霉素引起的心肌细胞的损伤,激活PPARα/PGC-1α信号通路,改善阿霉素引起腺苷酸含量减少。     

柚皮苷预处理通过抑制内质网应激凋亡途径减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的研究柚皮苷(naringin,Nar)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中内质网应激凋亡途径的影响及其分子作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,并随机分为5组:正常对照组(C)、缺氧/复氧组(H/R)、Nar低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H)。C组心肌细胞正常培养至实验结束,H/R组行缺氧4 h后复氧24 h,H/R+Nar低、中、高剂量组分别于缺氧前6 h给予10、20、40 mg·L~(-1)的Nar培养,再行缺氧4 h后复氧24 h。实验后,MTT法测定细胞存活率;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)及其磷酸化水平(p-eIF2α)、双链RNA样内质网激酶(PERK)及其磷酸化水平(p-PERK)。结果与C组相比,H/R组明显降低H9c2心肌细胞存活率,诱导细胞凋亡,增加CHOP、ATF4、p-eIF2α/eIF2α和p-PERK/PERK表达(P<0.05);与H/R组比较,Nar 3个剂量组均能提高H9c2心肌细胞存活率,降低细胞凋亡,CHOP、ATF4、p-eIF2α/eIF2α和p-PERK/PERK表达下调,以Nar中、高剂量组效果最明显(P<0.05)。结论 Nar预处理可以减轻心肌细胞H/R损伤所致的心肌细胞凋亡,提示PERK-eIF2α-ATF4-CHOP途径参与Nar减轻内质网应激相关凋亡的作用。     

云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

摘 要 目的：研究云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的机制。方法: 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,并采用云南鼠尾草提取物进行干预。将体外培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为6组：正常对照（C）组、缺氧/复氧模型（H/R）组、缺氧/复氧模型+维拉帕米阳性对照（H/R+V）组、缺氧/复氧模型+云南鼠尾草低（H/R+L, 0.01 mg·L^-1）、中（H/R+M, 0.1 mg·L^-1）、高（H/R+H, 1.0 mg·L^-1）剂量组。采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,利用检测试剂盒测定丙二醛（MDA）的含量和乳酸脱氢酶（LDH）的活性,通过荧光酶标仪测定荧光吸光度（A）值反映细胞内活性氧 （ROS）水平。结果: 与模型组比较,云南鼠尾草低、中、高剂量组均能显著提高心肌细胞存活率（P＜0.05或P＜0.01）,云南鼠尾草高剂量组显著减少细胞内LDH漏出量（P＜0.05或P＜0.01）、胞浆内MDA的含量（P＜0.01）和细胞内ROS水平（P＜0.05）。结论: 云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其相关作用机制可能与其减少脂质过氧化物和清除细胞氧自由基有关。     

pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用

目的：构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法：提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG-AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,West-ern Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧（A/R）损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性。结果：AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论：构建成功的pFlAG-AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。     

细胞色素C在Pim-3抗心肌急性损伤中的作用

目的:探讨原癌基因Pim-3对抗心肌急性损伤的作用是否与线粒体信号转导途径介导的细胞色素C(Cyt C)的释放有关.方法:采用大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组,对照组;缺氧复氧(A/R)组,建立A/R损伤模型;pcDNA3.1+A/R组,将pcDNA3.1转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤;pcDNA3.1/Pim-3+A/R组,将Pim-3重组质粒(pcDNA3.1/Pim-3)转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤.实验结束后,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性,四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白印迹检测Pim-3 蛋白表达水平,线粒体、胞浆Cyt C动态变化和caspase-3活性.结果:与对照组比较,A/R组细胞存活率明显下降,LDH值和凋亡指数明显升高,差异有统计学意义(P ＜ 0.01);与A/R组比较,pcDNA3.1/Pim-3+A/R组细胞存活率明显升高,LDH值和凋亡指数明显下降,并且Cyt C由线粒体向胞浆的释放明显被抑制,同时caspase-3活性也下降,差异有统计学意义(P ＜ 0.01).结论:Pim-3对抗心肌急性损伤的机制是通过抑制Cyt C易位释放入胞浆激活caspase-3而致.     

芬太尼和脂多糖迟发预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 诱导大鼠心肌迟发预处理保护作用,测定心肌细胞凋亡率、Caspase、细胞色素C的变化.探讨DPC对心肌细胞凋亡的影响及作用机制.方法 健康SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只.芬太尼组(A组):大鼠腹腔注射芬太尼,24小时后建垃缺血再灌注损伤模型;脂多糖组(B组):腹腔注射脂多糖,24小时后处理同A组.生理盐水组(C组):腹腔注射生理盐水,24小时后处理同A组.对照组(D组):不注射任何药物,24小时后处理同A组.TUNEL法检测心肌细胞凋亡;caspase-3试剂盒测定其活性;Western blot法检测细胞色素C.结果 HE染色:损伤重区域的心肌仍保存细胞轮廓,横纹不清或消失,收缩带形成.损伤轻区域细胞轮廓清晰.横纹不消失.TUNEL染色:散在的细胞核呈棕色凋亡细胞.A组和B组心肌细胞凋亡毕分别为(9±3)%和(11±3)%低于C组(17±5)%;A组和B组caspase-3活性(分别为0.43±0.11和0.40±0.13)低于C组(0.75±0.23);A组和B组细胞色素C蛋白表达(分别为0.67±0.11和0.63±0.18)低于C组(0.98±0.19),均有显著差异(P＜0.05).结论 芬太尼、脂多糖诱导的迟发预处理中存在心肌细胞凋亡.且心肌细胞凋亡率、细胞色素C、Caspase-3降低.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用及其机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的抑制作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,随机分为正常(N)、缺氧/复氧(H/R)、EGCG低剂量(L)、中剂量(M)和高剂量组(H),共5组(n=6)。建立细胞缺氧/复氧模型,给予EGCG预处理,用CCK-8法测定细胞存活率;Annex V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;按照试剂盒说明书检测细胞培养液T-AOC、TNF-α含量;用Western blot法检测Akt蛋白及磷酸化水平;用荧光定量PCR法检测PI3K、Akt、caspase-3基因表达。结果与模型组相比,EGCG能增加H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后的存活率,减少细胞凋亡,提高T-AOC水平,降低TNF-α含量,增加PI3K、Akt和p-Akt表达,减少caspase-3的表达。结论 EGCG通过影响PI3K/Akt信号通路,减少细胞凋亡,保护心肌细胞。     

白藜芦醇通过调控自噬减轻乳大鼠心肌细胞低氧复氧损伤

目的探讨白藜芦醇(Res)对低氧复氧(H/R)损伤心肌细胞的保护作用。方法采用三气培养箱法制备乳大鼠心肌细胞H/R损伤模型(H12 h/R12 h)。乳大鼠心肌细胞分为5组:细胞对照组、H/R模型组、模型+Res 5和20μmol·L-1组(Res预处理细胞12 h,然后H12 h/R12 h)和模型+Res 20μmol·L-1+氯喹(CQ)10μmol·L-1组(Res预处理细胞12 h,然后含CQ的培养基H12 h/R12 h);CCK-8法检测心肌细胞存活率,比色法测定心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡,免疫荧光法检测心肌细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)阳性细胞率,Western印迹法检测心肌细胞Beclin 1,LC3Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,H/R组心肌细胞存活率下降(P<0.01),细胞凋亡率和LDH漏出率上升(P<0.01),LC3阳性细胞率和Beclin 1表达水平无明显变化,LC3Ⅱ和P62表达水平下降(P<0.05)。与H/R组比较,Res 5和20μmol·L-1可升高心肌细胞存...     

RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/复氧组(H/R);(3)S1P组;(4)S1P+LY294002组(S1P+LY);(5)LY组;(6)S1P+PD98059组(S1P+PD);(7)PD组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法测定丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(TSOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力;采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子浓度变化;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法测定Akt和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果与H/R组比较,S1P组可明显增加H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率及凋亡率,增加TSOD及Mn-SOD活力,降低MDA含量,降低钙离子浓度,增加Akt和ERK1/2磷酸化水平,而PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002或ERK1/2阻断剂PD98059可阻断S1P对H9c2的上述作用。结论 S1P能够减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤,加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059均使S1P的保护作用被取消,表明S1P通过RISK信号通路发挥抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤作用。