野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的：探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用。并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变。结果：免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比（81.5%)和凋亡细胞百分比（11%）增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论：野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强。     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的:探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用,并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系.方法:利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变.结果:免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比(81.5%)和凋亡细胞百分比(11%)增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强.结论:野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强.     

逆转录病毒介导p53基因对食管癌细胞株的生长抑制作用

目的观察人类野生型p53(wt p53)基因对人食管癌细胞系的抑制作用.方法用逆转录病毒为载体将外源性wt p53基因导入人食管癌细胞系ECA109,通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用.结果 p53在转染细胞ECA109/p53中表达水平提高.外源性wt p53基因的导入和表达能使ECA109细胞的生长速率减低,软琼脂集落形成能力下降,G0 G1期细胞比例增加、S期细胞比例降低,凋亡指数升高,裸鼠体内成瘤能力明显下降.结论逆转录病毒载体介导的外源性野生型p53能够抑制人食管癌细胞生长.     

逆转录病毒介导的肿瘤坏死因子基因转染的肿瘤细胞克隆株的建立及其生物学活性的观察

人p53基因是一种抑癌基因．p53蛋白作为一种细胞增殖的负调节目子．调控细胞的生长和分化，维持基因组DNA的稳定．其突变．缺失或与细胞、病毒、肿瘤蛋白结合所致的p53失功能，在恶性肿瘤发生发展中起着非常重要的作用。为了进一步探讨野生型p53基因的抗肿瘤特胜．我们采用分子克隆方法将人野生型p53基因(WT—p53)cDNA全长正向插入到哺乳动物表达载体(pREP9)的BamHI位点，构建了pREP9-p53重组体，用电穿孔方法将其导入有p53基因突变的人肠癌SW1116细胞．通过标记基固Neo筛选带外源p53基因的G418抗药胜克隆，以观察抗药性克隆数量．同时对G418抗药性细胞的生长速度及细胞增殖周期进行观察：结果表明，导入WT-p53基因能使肠癌SW1116细胞的G418抗药性克隆形成减少，细胞生长速度较对照细胞明显减慢．细胞增殖周期G1期增加、S期下降。这些结果证明人野生型D53基因能抑制肠癌细胞的生长。本研究为大肠癌WT-p53实验性基因治疗提供了理论依据，说明基于恢复p53肿瘤抑制基因功能的基因治疗在治疗结、直肠癌方面有着广阔的应用前景。     

全反式维甲酸通过磷酸化JNK抑制视网膜母细胞瘤细胞生长

目的：探索重组病毒介导的外源性野生型p53cDNA(Ad-wtp53）对内源性p53基因状态不同结直肠癌细胞的抑制作用是否存在差异，研究p53基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法：采用MTT法选择Ad-wtp53的最佳转染滴度，分别感染内源性p53基因缺失，突变和正常的3种结直肠癌细胞株，观察比较它们的生长抑制作用。结果：Ad-wtp53在1000MOI时表现出最强的细胞抑制作用，p53缺失细胞株（THC－8908）的抑制效应最明显，3种细胞转染后均发生G0／G1期阻滞，并对不同p53状态细胞G2－M期具有不同的调控作用。结论：外源性野生型p53 cDNA导入可显著抑制结直肠癌细胞生长，使细胞周期停滞于G0／G1期；同时对内源性p53状态不同细胞的生长抑制强度和G2－M期调控作用不同。     

p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究

背景与目的：肿瘤抑制基因p53是调节多种与细胞周期、凋亡、DNA修复等有关基因表达的转录因子。p53基因在大约30％的胶质瘤中发生突变，在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。本文主要探讨野生型p53基因过表达对脑胶质瘤细胞系U251细胞生长抑制的机制。方法：通过p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染U251细胞系，RT-PCR及Westem blot方法检测转染效率；并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因对U251细胞生长的影响。结果：MOI为100时，野生型p53基因的过表达可引起U251细胞G0、G1期阻滞、诱导U251细胞凋亡以及引起U251细胞生长抑制。结论：p53基因可以通过细胞周期G0、G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长。     

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的　观察外源性野生型p53对有p53基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法　用PCR SSCP及DNA测序 ,选择p53突变的人肺巨细胞癌系 80 1 D。构建野生型p53表达质粒PZiP p53。用基因枪介导外源基因。经G41 8筛选得到转染细胞系 80 1 D p53。用PCR检测外源基因 ,观察转染细胞恶性生长的变化。结果　转染细胞系 80 1 D p53体外长期传代有外源性p53基因存在 ,转染细胞生长明显受到抑制 ,集落形成抑制率达 96% ,裸鼠异种移植致瘤性降低 ,肿瘤生长明显缓慢。结论　外源性野生型p53经基因枪导入有p53基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中 ,且明显抑制所转染的癌细胞的恶性生长。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

二乙酰去水卫矛醇联合p53基因转染对肝癌细胞生长的影响

目的：观察野生型p53基因转染联合二乙酰去水卫矛醇(1，2：5，6-dianhydro-3，4-(liacetylgalactitol，DADAG)对肝癌细胞生长的影响。方法：将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3质粒，通过脂质体(lipofectamine)介导转染人肝癌细胞，同时，在培养液中加入DADAG，用四甲基偶氮唑(MTT)法分析细胞的生长情况。结果：人肝癌细胞HLE转染野生型p53基因后，其生长作用明显受到抑制，细胞生长抑制率在第4天可达67．68％。如果HLE细胞中只加入含DADAG的培养液后，其细胞生长也受到一定的抑制，生长抑制率最高可达到53．09％。肝癌细胞HLE转染野生型p53基因后联合应用DADAG时，细胞的生长抑制率在第4天可达到85．37％，实验结果显示DAD-AG联合野生型p53基因增强对肝癌细胞的生长抑制作用。结论：DADAG能加强野生型p53基因对肝癌细胞的生长抑制作用。     

Ad-p53诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡作用

目的：观察重组人p53腺病毒（ p53-expressing adenovirus,Ad-p53）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞生长、细胞周期、凋亡和p53表达的影响。方法：流式细胞仪检测Ad-p53作用于MDA-MB-231细胞72h后细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot法检测MDA-MB-231细胞p53蛋白表达。结果：经Ad-p53处理72h后倒置显微镜下MDA-MB-231细胞形态发生明显的变化。流式细胞术检测结果显示, Ad-p53作用MDA-MB-231后其细胞凋亡率与对照组相比明显增加,G0/G1期细胞比例逐渐升高,S期、G2/M期细胞比例相应减少（ P＜0.05）。Western blot证实了外源野生型p53基因能在MDA-MB-231细胞表达增加。结论：Ad-p53可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,促进其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期以及野生型p53蛋白表达增加实现的。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

p53基因对人胚肺成纤维细胞周期影响的研究

背景与目的:研究野生型和179位残基突变型p53基因在HELF细胞周期调控中的作用.探讨p53基因的179位残基突变对细胞生长的影响.材料与方法:用野生型p53(pcDNA3-wtp53)和179位残基突变的突变型p53(pcDNA3-mtp53)转染HELF细胞,观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;用流式细胞仪分析细胞周期;用RT-PCR和Western blotting方法检测p53基因转染后HELF细胞周期相关基因mRNA和蛋白的表达.结果:野生型p53表达的上调使HELF细胞周期阻滞于G1期,细胞体积减小,并下调cyclin D3、cyclin E、Cdk2和Cdk4的表达,同时上调p21的表达.而179位残基突变的突变型p53表达的上调则促进细胞周期从G1期到S期的转换,同时细胞体积增大,上调cyclin A和Cdk4的表达.结论:p53的179位残基突变对于HELF细胞cyclin A和Cdk4的表达有诱导作用,并可能借此促进细胞周期进程.     

p53基因245位点突变对非小细胞肺癌细胞H1299的影响

背景与目的:p53基因突变是肺腺癌发生中的常见的分子生物学事件,第245位点突变为其突变热点之一,因此研究p53基因第245位点突变可能为肺腺痛的诊断、治疗提供一定的理论基础.本研究旨在研究肺癌常见的245位点突变对p53缺失的人肺腺癌细胞系H1299的影响.方法:应用流式细胞术观察脂质体瞬时转染p53基因第245突变体(G245V)对细胞凋亡的影响,同时用稳定转染观察克隆形成率和生长曲线的不同.结果:转染G245V突变体的H1299细胞凋亡平均数低于转染野生型p53基因的细胞,差异有统计学意义(P<0.001);大中克隆形成数量比导入野生型p53基因的细胞大中克隆形成数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);细胞的生长速度也明显加快.结论:p53基因第245位点发生突变后基本丧失了野生型p53的功能,是肿瘤细胞增殖的原因之一.     

野生型p53基因对人胆囊癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

目的:研究野生型p53(wtp53)基因对人胆囊癌细胞生长及致瘤性的影响.方法:应用免疫细胞化学染色、PCR产物直接测序方法分析细胞系遗传背景,在脂质体介导下将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53,导入GBC-SD细胞中.用G418筛选,建立转染克隆细胞系.以PCR,RT-PCR和蛋白印迹证实外源p53基因的整合与表达;以细胞生长曲线和集落形成实验反映细胞增殖状况;以裸鼠移植瘤试验检测体内致瘤性的影响.结果:GBC-SD细胞P53蛋白过表达;直接测序发现第5外显子126位密码子存在TAC→AAC的碱基突变.外源p53基因已整合入转染后的GBC-SD细胞并获稳定表达.表达外源wtp53的GBC-SD-wtp53细胞生长速率减慢、集落形成能力下降及裸鼠致瘤性受到显著抑制.结论:野生型p53基因可有效抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的体内、外生长.     

p53在乳腺癌中的表达及意义

p53基因定位于染色体17p13．1,它有两种形式,即野生型和突变型,野生型053是抑癌基因,存在于核内,在DNA损伤或缺氧时活化,使依赖p53的CDK抑制物p21和DNA修复基因上调性转录,细胞在G,期出现生长停滞,进行DNA修复。它能抑制ras,myc的转化活性,半衰期短,不稳定。而突变型p53能抑制野生型p53的活性,是促癌基因。免疫组化检测的是突变型p53,     

不同p53状态的肝癌细胞系DNA损伤修复能力的比较

目的 观察不同p53状态的肝癌细胞在DNA损伤因素存在下，探讨p53在肝细胞癌发生过程中的作用。方法 选用内源性表达野生型p53、突变型p53、p53全基因缺失的HepG2、PLC／PRF／5、Hep3B肝癌细胞系，将含有p53结合序列的CAT报告基因质粒分别转染各细胞，通过ELISA方法检测报告基因CAT活化情况，观察p53功能状态；用细胞生长曲线比较不同p53状态的细胞生长速度的差异；给予一定剂量的紫外线照射，检测各细胞程序外DNA损伤修复(UDS)能力；观察紫外线照射后细胞克隆形成情况，反映不同细胞系在紫外线照射后细胞存活率的不同。结果 报告基因CAT在HepG2细胞表达最强，而在PLC／PRF／5、Hep3B肝癌细胞均处于较低水平，说明HepG2细胞具有功能性的p53表达；HepG2细胞生长速度明显慢于其他两种细胞；紫外线照射后，HepG2具有较好的DNA损伤修复能力以及较高的细胞生存率。结论 野生型p53具有抑制肝癌细胞生长、保持细胞良好的DNA损伤修复的功能。     

传染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的 研究外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学作用。方法 将含有野生型p53基因的pDOR-neo逆转录病毒载体,通过Lipofectin转染GLC-82细胞,采用流式细胞分析、电镜下观察、^3H-TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验,观察野生型p53基因对GLC-82细胞的生物学效应。结果 电镜下观察可见,转染野生型p53基因可使GLC-82细胞出现一些病理现象,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀;流式细胞仪分析结果显示,野生型p53基因可阻止GLC-82细胞周期停止于G1-S区域;^3H-TdR掺入试验结果提示野生型p53基因能够抑制GLC-82细胞的DNA合成,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢。结论 转染野生型p53基因可抑制GLC-82细胞恶性增殖。     

p53基因对人胃癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

p53基因异常是人类肿瘤中最常见的基因变异之一．是最有希望用于肿瘤基因治疗的目的基因。在人胃癌组织中有较高频率的p53基因缺失和突变，为探讨p53基因用于胃癌治疗的可行性，我们采用脂质体介导方法将外源性野生型p53基因转染一株p53基因有部分缺失的人胃癌BGC823细胞，获得较高的转染效率，对转染后细胞DNA，RNA和蛋白进行分析．结果表明外源性p53基因已整合人细胞并获稳定表达，表达有外源性野生型p53基因的细胞生长速度，软琼脂集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。这一结果进一步证明p53基因在胃癌发生发展过程中起重要作用．本研究为采用野生型p53基因转染进行胃癌基因治疗提供了细胞学实验依据。     

转染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的研究外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学作用.方法将含有野生型p53基因的pDOR-neo逆转录病毒载体,通过Lipofectin转染GLC-82细胞,采用流式细胞分析、电镜下观察、3H-TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验,观察野生型p53基因对GLC-82细胞的生物学效应.结果电镜下观察可见,转染野生型p53基因可使GLC-82细胞出现一些病理现象,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀;流式细胞仪分析结果显示,野生型p53基因可阻止GLC-82细胞周期停止于G1-S区域;3H-TdR掺入试验结果提示野生型p53基因能够抑制GLC-82细胞的DNA合成,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢.结论转染野生型p53基因可抑制GLC-82细胞恶性增殖.     

转染 p53基因对肺腺癌细胞株裸鼠 移植瘤生长的影响

目的：探讨转染野生型 p53（ wt-p53）和突变型 p53（ mt-p53）基因对人肺腺癌细胞株 GLC-82裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将 wt-p53和 mt-p53基因导入人肺腺癌细胞株 GLC-82,在裸鼠体内、体外实验中检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染 mt-p53 基因的细胞株 G418筛选的细胞集落数、 3H-TDR掺入实验、软琼脂平皿细胞集落数,以及裸鼠瘤组织重量和体积均高于对照组（ P<0.01）,而转染 wt p53基因的细胞株均显著低于对照组（ P< 0.01）,表明导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度明显低于对照组细胞株和导入 mt p53基因的细胞株,即导入 mt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论： wt p53基因能有效抑制人肺腺癌细胞生长; mt p53基因则可以明显地促进瘤细胞生长。