选择性分离土壤放线菌的新方法

放线菌作为抗生素、维生素和酶的产生菌具有重大经济意义.大多数放线菌来源于土镶.为了从混杂的土壤微生物群体中选择分离放线菌,曾研究使用各种不同的分离培养基.分离土壤放线菌一般采用稀释平板分离法,利用诸如甘油-天冬酰胺琼脂,无机盐-淀粉琼脂和燕麦粉琼脂之类含选择性营养物的培养基.但这些培养基均尤法分离出大量放线菌,还会长满许多生长更丰富或生长更快的微生物.为克服这些问题,业已设计出许多培养基,其中尤以腐殖酸-维生素琼脂(HV琼脂)培养基获最广泛应用.介进一步改进分离放线菌的培养基过程中,Kyung等发现以煤作营养物比腐殖酸更有效,并设计出一种     

利用含林肯霉素选择性培养基定向筛选抗生素产生菌

本文基于放线菌对抗生素的耐药性不仅为长期训育于实验室条件下的放线菌所具有,而且也为自然界中的放线菌所具有,指出了从土壤中新分离出来的小单孢菌对结构上彼此相似或不同的抗生素的耐药性表现为类群式的拮抗性。在这一基础上提出了定向筛选抗生素产生菌的简便方法。并利用含林肯霉素选择性培养基来筛选抗生素产生菌。方法土样悬液接种内含50～100μg/ml林肯霉素(LM)的合成高氏1号培养基,对照培养基内不含LM。经28℃、14天培养后挑     

药用植物根际放线菌的种群多样性及生物活性初步研究

从我国云南及重庆地区采集62份药用植物根际土样,采用多种选择性分离培养基,4种预处理方法,分离得到959株根际放线菌.所得放线菌菌株经发酵和多种筛选模型检测,显示出多种生物活性,初筛总阳性率达31%.根据菌株形态特征并结合代谢产物的生物活性,从中挑选出77株菌进行16S rRNA基因检测,发现其分属于17个不同的放线菌属,充分显示出药用植物根际放线菌的生物多样性.     

诺卡氏菌分离条件试验

诺卡氏菌(Nocardia)是产生新抗生素的主要来源之一。我们从土样的采集、分离培养基的选择和加入抗生素等方面进行分离条件试验,以提高其出菌率。 分离时取1g土样溶于无菌水中,稀释100倍,分别取 0.1ml加至每碟培养基表面,均匀摊布后于28℃培养。以各碟出菌数的平均值统计(10~(-3)×菌株数/g土样)。所分离到的菌株经初步分类鉴定,用埋片法进行形态观察和细胞壁成份分析。 分离结果见表一。表明诺卡氏菌分布在不同性质的土壤中,以营养丰富的园地土和河泥土中较多,而贫瘠的土壤中较少。     

小双孢菌属的一个新种——灰白小双孢菌

在进行稀有放线菌分离研究中,分离到几株产生灰色气生菌丝体的小双孢菌。其中在四川省大足县土样中,用常规方法分离得到的菌株NA-2468菌丝体发育良好,气生菌丝体在燕麦琼脂上、蔗糖察氏琼脂上和葡萄糖琼脂上发育良好,灰色或白色,分枝上或主轴上着生大量的呈橄榄形的成对孢子,孢     

青岛泊子盐场放线菌多样性及其功能酶的筛选--测试文章

采用平板涂布法利用3种培养基从青岛即墨市田横镇泊子盐场盐池底泥样中共分离纯化出15株放线菌,对分离菌株进行16S rRNA基因测序分析。发现这15株放线菌分属于链霉菌属(Streptomyces)、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)和1个新属,其中Streptomyces属为优势菌属;菌株CXB832与Nocardiopsis arabia DSM 45083^T和Haloactinospora albus DSM 45015^T最接近,同源性分别为95.4%和94.9%,根据其表型和分子特征可以初步判定该菌株为放线菌新属。培养基及培养温度对盐池环境中放线菌的分离效果均有影响,利用淀粉酪素培养基在37℃分离的放线菌种类和数量较多。在15株放线菌中,分别有12株、3株、2株和1株放线菌产淀粉酶、酯酶、蛋白酶和纤维素酶。     

D-对羟基苯甘氨酸产生菌的筛选研究

目的采用多种筛选方法以获得D-海因酶及N-氨甲酰水解酶的阳性菌株。方法通过以底物(对羟基苯海因)为唯一氮源的培养基从土样和水样中初步分离,然后利用双层琼脂法和微孔快速筛选法对分离到的菌株以及实验室保藏的菌株进行筛选,得到D-海因酶阳性菌株。用茚三酮显色法及纸色谱法进一步筛选N-氨甲酰水解酶阳性菌株。结果最终获得D-海因酶阳性菌株54株,从这54株菌中筛选到2株产N-氨甲酰水解酶的阳性菌株,从而获得了可同时产生双酶的菌株。结论几种不同筛选方法和测定方法的配合使用提高了阳性菌株的获得机会,为进一步诱变得到高产菌株,建立基因工程菌,获得基因工程药物奠定了基础。     

冻融处理对土壤放线菌出菌率的影响

为了提高土壤中放线菌的出菌率,除改良分土培养基外,已报导有用物理或化学方法处理土壤,例如用各种去垢剂或使土样受到机械破碎,以便放线菌从土壤颗粒表面释放。本文报导冻融处理土壤的效应。方法为:将土壤置于-8°的冰箱内冰冻1小时后取出,在室温下充分融化。如此反复冻融两次后,放到灭菌自来水中,在230转/分的旋转式摇床上振荡15分钟。所获得的土样混悬液按1∶10,000和1∶100,000稀释,涂布于6个平皿上。对照组用同样的但未经冰冻的土壤。培养后,在淀粉-氨培养基上计数放线菌,在肉胨琼脂上计数细菌,在麦芽汁琼脂上计数真菌。     

罗布泊地区沙生植物根际放线菌多样性及生物活性的研究

目的研究罗布泊地区沙生植物根际放线菌多样性及其生物活性,以期发现新药用微生物资源。方法采用2种分离方法,6种分离培养基,从两种沙生植物24份根际土样中分离放线菌;对其中131株放线菌发酵液及乙酸乙酯提取液采用抗菌、杀线虫模型进行活性筛选,并根据活性测定结果结合菌株形态特征对其中66株进行16S rRNA基因序列分析。结果共分离到放线菌154株,53株在其中一个或两个活性筛选模型中都显示为阳性,总阳性率为40.46%,16S rRNA基因序列分析表明这66株放线菌分布在12个属,除了优势菌链霉菌(Streptomyces)外,还发现了拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis),拟无枝酸菌属(Amycolatopsis),疣孢菌属(Verrucosispore),喜冷杆菌属(Cryobacterium),异壁放线菌属(Actinoalloteichus),假诺卡氏菌属(Pseudonocardia),普氏菌属(Prauserella),链单孢菌属(Streptomonospora),贫养杆菌属(Modestobacter),放线产孢菌属(Actinomycetospora),芽生球菌属(Blastococcus)等稀有放线菌属,菌株CA15-2与GenBank数据库中最近种Nocardiopsis nikkonensis YU1183-22T(GenBank登录号:AB491226)的相似性约为94%,可能为潜在的新属或新种。结论罗布泊地区沙生植物根际存在较为丰富的放线菌资源并能产生多种活性次级代谢产物,值得进一步的研究。     

1株抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的土壤放线菌的分离与鉴定

目的:从土壤中分离与鉴定抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的放线菌。方法:在改良的高氏Ⅱ号培养基上划线分离土壤放线菌,以MRSA作为受试菌株,测试抗菌活性,对具有抗菌活性的菌株进行16SrDNA种属鉴定。结果:获得拮抗放线菌1株(命名为Hu001),具有较强的抗MRSA的活性;并将16SrDNA序列提交GenBank数据库,(登录号为JQ689078),与同源细菌进行比对,得到其系统进化树;经鉴定16SrDNA序列与山丘链霉菌(Streptomycescollinus)NBRC12547株具有99%的同源性。结论:放线菌Hu001具有抗MRSA的活性,并根据16SrDNA序列测序将其初步归属于山丘链霉菌。     

SS琼脂用于EIEC分离的观察报告

我们应用沙门氏志贺氏(SS)琼脂分离侵袭性大肠杆菌(EIEC)进行观察,现将结果报告如下。一、材料与方法 (一)EIEC在SS琼脂平板上生长繁殖试验试验培养基:SS琼脂和伊红美蓝(EMB)琼脂系上海市医学化验所生产的干燥琼脂制备,麦康凯琼脂和营养肉汤按常规法制备。试验菌株:EIEC 28株,     

青海高原东部土壤中拮抗性放线菌的生态分布特征

采用常规方法研究了从青海高原东部海晏、湟源、湟中、大通、西宁、互助、乐都和平安等八个县(市 ) ,粮田 (旱地和水地 )、菜地 (露地和保护地 )及自然土壤 34个样区 4 0个代表性土壤样品中分离所得 6 85株放线菌对 6种靶标菌的拮抗性。结果表明 ,(1)拮抗性放线菌占放线菌总数的比例与土壤利用方式有关 :粮田、菜地和自然土壤中拮抗性放线菌所占比例分别为 2 6 .8%、2 3.8%和 2 0 .5 % ,保护地土壤中拮抗性放线菌的比例是露地的 2倍 ,旱地土壤中拮抗性放线菌的比例明显高于水地 ;(2 )供试菌株中对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、假丝酵母、青霉、西瓜枯萎病菌和黄瓜枯萎病菌有拮抗活性菌株数分别为 2 .8%、14 .9%、3.5 %、0 .9%、1.8%和 0 .6 %。说明供试菌株对细菌的拮抗作用强于真菌 ,对革兰氏阳性细菌的拮抗作用强于革兰氏阴性细菌 ,对单细胞真菌的拮抗作用强于丝状真菌。     

库姆塔格沙漠可培养放线菌多样性及抑菌潜力评估

沙漠土壤蕴藏丰富的放线菌资源,尤其是稀有放线菌类群,是挖掘新放线菌资源的理想生境。本研究开展库姆塔格沙漠可培养放线菌抑菌活性筛选,以期为该地区放线菌资源开发和利用提供菌株资源。根据分离菌株的16S rRNA基因序列分析放线菌多样性;从库姆塔格沙漠4份土样中分离纯化到370株放线菌,分布于11个目12个科的22个属,其中链霉菌属和糖丝菌属为优势菌属,分别占分离放线菌菌株的63%和13.8%。对14株放线菌潜在新种(16S rRNA基因序列相似性低于98.65%)进行高氏一号、ISP2、TSB培养基液体发酵,获得提取浓缩物样品进行抑菌活性筛选,发现11株潜在新种的发酵产物有广谱抗菌活性。本研究表明,库姆塔格沙漠中含有丰富的放线菌资源,具有从中发现放线菌新菌种和抗生素的潜力。     

一株具有杀钉螺活性放线菌的筛选与鉴定

目的从土壤中筛选并鉴定具有杀钉螺活性的放线菌。方法采用稀释涂布平板法对土壤中的放线菌进行分离纯化,通过钉螺浸杀试验筛选具有较高杀螺活性的放线菌并对其进行生物学鉴定。结果从土壤中分离得到203株放线菌,在这些放线菌中筛选到一株具有较高杀钉螺活性的放线菌。通过培养特征观察、碳源利用试验、生理生化反应,以及16S rRNA序列分析,判定该放线菌为黑色浅灰链霉菌(Streptomyces nigrogriseolus)。结论筛选到一株具有杀钉螺活性的放线菌黑色浅灰链霉菌(S.nigrogriseolus XD 2-7)。     

真菌的分离鉴定与药敏试验结果分析

目的探讨笔者所在医院384株酵母样真菌的分离培养及药敏试验结果。方法用血琼脂平板及沙氏培养基分离真菌,用念株菌鉴别培养基和酵母样真菌药敏试剂盒对分离出的384株酵母样真菌进行鉴定和药敏试验。结果 384株酵母样真菌以念株菌属为主。其中白假丝酵母菌占72.66%;其次为热带念株菌占9.64%;光滑念珠菌占9.11%;克柔念株菌占2.60%;近平滑念株菌占1.04%;其他少见酵母样真菌占4.95%。384株酵母样真菌对伏力康唑、氟康唑、5-氟胞嘧啶、依曲康唑、两性霉素B的敏感率分别为64.50%、66.80%、92.32%、68.70%、97.27%。结论 5-氟胞嘧啶、两性霉素B是治疗酵母样真菌感染的首选药物。     

定向筛选细菌产生的抗绿脓杆菌抗生素的方法

本文报道从四川灌县青城山土壤中定向分离由细菌产生的抗绿脓杆菌的抗生素的方法及早期鉴别研究结果。 一、多粘菌素产生菌的分离及其产生的多粘菌素的早期鉴别 在加有5μg/ml核糖霉素的分离培养基上,筛选青城山的土样,分离到3000个细菌菌落,用琼脂挖块法移至含绿脓杆菌1.50的双碟上,挑取所有具抑菌圈的菌落移至斜面培养基上,生长三天后接入多粘菌素发酵培养基中,30℃发酵40小时,用纸片法测定发酵液抑制绿脓杆菌的能力,根据发酵液的特殊酒香味,发酵结束时pH下降及显微镜形态观察,共获得7株菌株能产生多粘菌素。     

对肠道致病菌有抑菌作用的干燥伊红美兰琼脂

干燥伊红美兰琼脂系肠道致病菌常用的培养基之一,制作简单,使用方便,尤适于基层细菌室.但我们在使用该培养基过程中,发现长期保存似潮解的培养基有抑菌现象,如用启封长期保存呈软块状的干燥伊红美兰琼脂平板分离伤寒杆菌(O_(901)、地方株)和福氏(1a、2a)痢疾杆菌不生长,对宋内氏痢疾杆菌亦有程度不同的抑菌的抑菌现象(菌落较小),大肠杆菌虽能生长,但菌落呈灰兰色,失去黑     

防治水稻白叶枯病抗生素筛选方法的研究

水稻白叶枯病是我国水稻区经常发生和流行的重要病害之一,迄今尚无理想的防治方法。考虑到水稻白叶枯病发病田的独特生态条件,我们在水稻白叶枯病发病田有病原菌存在的地方,筛选有拮抗作用和防病效果的放线菌,1978～1980年我们先后从水稻白叶枯病田采集土样244个,从水稻田采集土样78个。从水稻白叶枯病田土中分离出有拮抗作用和防病效果的菌株比未发病的稻田土分出的高一倍以上(发病田土初筛和苗筛所得有效菌株分别占总菌株数的 25.5％和19.1％,稻田土所分得的有效菌株分别为12.6％和8.7％)。从真菌中筛出有拮抗作用     

南极乔治王岛陆地土壤和潮间带放线菌多样性及其抑菌活性研究

目的 系统研究南极乔治王岛陆地土壤和潮间带中放线菌的多样性,并对分离菌株拮抗临床多重耐药菌活性进行筛选。方法 利用放线菌门特异引物扩增16S rDNA序列, 构建放线菌16S rDNA基因克隆文库, 对文库进行多样性指数分析和系统发育分析。采用琼脂块扩散法以3株临床多重耐药菌为指示菌,筛选具有高抑菌活性的潜在药用放线菌。结果 土壤放线菌文库和潮间带放线菌文库的覆盖率分别为54.55%和87.2%,陆地土壤中放线菌群落以放线菌纲为优势菌,潮间带样品中酸微菌纲占据明显优势。陆地土壤中的放线菌分布于10个目16个科中,潮间带底泥中放线菌则分布于7个目13个科中。纯培养得到141株放线菌,其中从陆地样品中分离得到93株菌,分布于放线菌纲的7个属17个种中,从潮间带样品中分离得到41株菌,分布于5个属10个种中。有17株具有显著抑菌效果的菌株,其中4株菌抑菌活性最强,可强烈抑制3株多重耐药菌。结论 南极乔治王岛陆地土壤和潮间带底泥环境中蕴涵着丰富且多样的放线菌资源,陆地土壤中放线菌的多样性要高于潮间带底泥中放线菌的多样性。南极链霉菌和诺卡氏菌具有较强的拮抗多重耐药菌的活性,具有深一步研究的价值。     

40株霍乱弧菌的分离鉴定和对抗菌药物的敏感性试验

１９９６年８月从本院临床收集到的粪便标本中分离到４０株霍乱弧菌，现将分离鉴定及其对抗菌药物的敏感性试验结果报告如下。１材料与方法１．１菌株４０株霍乱弧菌全部由患者粪便标本中分离获得。１．２培养基碱性蛋白胨水增菌液、庆大霉素琼脂培养基及各种生化鉴定培养...