双反义腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究

目的:探讨双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响.方法:应用MTT法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率,观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA(Ad-ODCas)和Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响.结果:MTY法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P<0.05).以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达(P<0.05).流式细胞术结果显示感染了Ad-ODC-AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G1期.HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内3种多胺含量均明显降低(P<0.05).TUNEL标记检测结果显示.Ad-ODC-AdoMet-DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P<0.05).结论:Ad-ODC-AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据.     

鸟氨酸脱羧酶和S-甲硫氨酸脱羧酶双反义RNA腺病毒抑制食管癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC) 和 S-甲硫氨酸脱羧酶(s-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)的双反义RNA腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞增殖和侵袭的抑制作用.方法:重组腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,应用Western blotting和HPLC分别检测双反义RNA腺病毒对食管癌细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺合成的抑制作用.采用活细胞计数法观察其对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响,采用Matrigel侵袭实验检测重组腺病毒载体感染对食管癌Eca109细胞侵袭活性的影响.同时应用裸鼠皮下移植瘤模型观察Ad-ODC-AdoMetDCas对移植食管癌生长增殖的抑制作用.结果:Western bloting证实Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,HPLC结果显示食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后细胞内腐胺、精胺、精脒等3种多胺含量都明显降低(P<0.01).活细胞计数法表明Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有明显抑制作用(P<0.01),Matrigel侵袭实验结果显示Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低食管癌Eca109细胞的体外侵袭能力(P<0.01).体内实验显示,双反义RNA腺病毒载体对已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01).结论:ODC和AdoMetDC双反义RNA重组腺病毒能显著抑制食管癌细胞的增殖和侵袭,具有食管癌基因治疗临床应用的潜在价值.     

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体抑制人食管癌Eca109细胞增殖和侵袭的研究

背景与目的:食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一,对人民的生命和健康危害极大.有研究发现,在食管癌细胞和肿瘤组织中多胺的含量和生物合成明显增高.本研究中我们探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCaa)对人食管癌Eca109细胞多胺合成、细胞增殖和侵袭的抑制作用.方法:采用活细胞计数法和BrdU掺入实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对Eca109细胞增殖的影响;应用Western blot法和HPLC法分别检测腺病毒对Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达的影响,以及胞内多胺合成的抑制作用,采用Matrigel侵袭实验分析腺病毒载体对Eca109细胞侵袭活性的影响,同时检测Ad-ODC-AdoMetDCas对Eca109细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.结果:活细胞计数法和BrdU掺入实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对Eea109细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05).Westem blot证实Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制Eea109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达.HPLC结果显示,感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,Eca109细胞内三种多胺腐胺、精脒、精胺含量均明显降低(P<0.05).Matrigel侵袭实验结果显示.Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低Eca109细胞的体外侵袭能力(P<0.05).同时发现,与Ad-GFP相比,Ad-ODC-AdoMetDCas对裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用.结论:ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体具有显著抑制Eca109细胞增殖和侵袭的作用.     

手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法：用不同浓度的手霉素（10、20、40、80、120txmol／L）处理Eca109细胞24、48和72h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果：不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol／L的手霉素作用Eca109细胞48h后的细胞凋亡率分别为4．520％±1．035％、14．490％±1．707％、28．883％±4．299％、35．107％±2．276％、47．940％±8．126％,与对照组凋亡率（1．370％±0．028％）相比,差异均具有统计学意义（p均〈0．05）;且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2／M期细胞显著增多。结论：手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。     

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞Eca109的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法：采用柱层析和高效液相色谱等逐步分离法对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离和纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定;采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用;应用FCM分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果;Western印迹法检测移植瘤组织凋亡相关基因survivin的表达变化。结果：宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞的增殖（P〈0．05）,并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加（12．5、25．0和50．0μg／mL）,Eca109细胞G0／G1期明显增加（P〈0．05）,S期和G2／M期细胞明显减少（P〈0．05）;经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长（24、48和72h）和宝藿苷浓度的增加（0、12．5、25．0和50．0μg／mL）而明显升高（P〈0．01）;Eca109裸鼠移植瘤经宝藿苷Ⅰ（15mg／kg）治疗后,肿瘤生长受到明显抑制（P〈0．01）,生长抑制率达（60．9&#177;0．16）％;survivin的蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论：香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞的增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导凋亡相关基因survivin的表达降低有关。     

腺病毒介导入VEGF—siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用

目的：研究腺病毒介导入VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用。方法：利用腺病毒重组技术将VEGF—siRNA基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中，构建重组腺病毒Ad—VEGF-siRNA，重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞，RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平。建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型，以Ad-VEGF—siRNA瘤组织注射治疗，检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad．VEGF—siRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用。结果：成功构建了表达VEGF—siRNA的重组腺病毒载体Ad—VEGF-siRNA；体外与体内实验检测Ad—VEGF—siRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达。荷人骨肉瘤裸鼠经Ad—VEGF—siRNA治疗后，显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用（P〈0．05），并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用（P〈0．05）。结论：所构建的Ad—VEGF—siRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达，使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢，并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生。     

IL-27基因转染人食管癌细胞诱导PBMC产生IFN-γ和IL-12的研究

目的：探讨小鼠白介素（mIL-27）基因转染人食管癌细胞株诱导正常人外周血单个核细胞（PBMC）产生IFN-γ和IL-12的作用。方法：以逆转录病毒作为载体，将mIL-27基因转染入人食管癌细胞株Ecal09获得表达mIL-27的阳性细胞克隆（Eca109／mIL-27），RT-PCR检测目的基因的表达，用MTT法检测转基因mIL-27对细胞增殖的影响，用EUSA法检测其诱导正常人PBMC产生IFN-γ和IL-12的能力。结果：建立了表达mIL-27基因的人食管癌细胞株，Eca109／mIL-27细胞中有mIL-27p28和EBI3亚基基因表达，而Eca109／LXSN和Eca109细胞中未见表达，P〈0．01；Eca109／mIL-27与Eca109／LXSN和Eca109体外的体外增殖差异无统计学意义，P〉0．05；Eca109／mIL-27诱导正常人PB—MC产生IFN-γ和IL-12的含量高于Eca109／LXSN和Eca109，P〈0．01。结论：IL-27基因转染人食管癌细胞后可以诱导PBMC产生IFN-γ和IL-12的能力提高，提示可以用于肿瘤的免疫治疗。     

丁酸钠诱导食管癌细胞凋亡的体外观察

目的探讨丁酸钠对人食管癌Eca-109细胞凋亡的作用。方法将丁酸钠以1mmol／L、2．5mmol／L和5mmol／L与人食管癌Eca-109细胞共培养，倒置显微镜观察细胞生长情况，免疫组化（SP法）检测凋亡抑制基因survivin蛋白的表达。结果Eca-109细胞经丁酸钠处理后，在倒置显微镜下观察到丁酸钠处理后的Eca-109细胞形态学发生了改变，细胞生长明显受到抑制；免疫组化检测实验组细胞的survivin蛋白表达阳性率低于对照组，具有统计学意义（P〈0．05）。结论丁酸钠可诱导食管癌Eca-109细胞凋亡，其机制与下调凋亡抑制基因survivin蛋白表达有关。     

腺病毒介导的PTEN对A549肺癌细胞体内外生长的影响

目的：研究携带第10号染色体缺失的磷酸脂酶和张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homologue-deleted chromosome ten gene，PTEN）的腺病毒表达载体对A549肺癌细胞体内外生长的抑制作用。方法：从人外周血淋巴细胞中通过RT—PCR扩增出PTEN基因片段，将其克隆到pAdTrack—CMV转移载体上，构建了PTEN重组腺病毒载体。体外用MTT法检测Ad—PTEN对A549肺癌细胞生长的抑制作用，以流式细胞术检测肿瘤细胞的周期和凋亡率。建立荷瘤裸鼠模型，体内检测Ad—PTEN对A549肺癌细胞移植瘤生长的影响，以免疫组化法检测移植瘤中微血管密度。结果：克隆的P陋Ⅳ基因测序结果与基因Bank数据库完全相符。Ad—PTEN体外感染A549肺癌细胞48h后其凋亡率为10．5％，明显高于对照细胞；4d后细胞生长与对照组细胞相比抑制了57％。肺癌细胞移植瘤治疗结束时，Ad—PTEN组瘤重为（0．58±0．29）g，对照组瘤重为（1．42±0．24）g，其生长抑制达59％（P〈0．05）；同时移植瘤中微血管密度降低约49％（P〈0．05）。结论：成功构建的Ad—PTEN腺病毒载体能在体内外抑制A549肺癌细胞及其移植瘤的生长。     

表达抗-VEGF发夹状核酶腺病毒载体的构建及其对结肠癌生长的抑制作用

背景与目的：VEGF过表达提示结肠癌预后不良。本实验构建带有抗-VEGF发夹状核酶的复制缺陷型腺病毒，观察其对结肠癌VEGF表达及肿瘤生长的抑制作用。方法：将人工合成的抗-VEGF发夹状核酶DNA定向克隆至转移质粒pAdTrack—CMV多克隆位点，然后与病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183中重组，在293a细胞中包装成完整病毒（命名为Ad-Rz）并复制扩增、纯化。RT-PCR检测病毒感染后抗-VEGF发夹状核酶在HT-29细胞中的表达、real-time PCR及ELISA检测其对VEGF mRNA及蛋白表达的抑制作用。观察Ad-Rz对HT-29细胞和裸鼠移植瘤生长的抑制作用，CD34标记检测肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果：抗-VEGF发夹状核酶成功克隆至复制缺陷型腺病毒载体上。抗-VEGF发夹状核酶可在HT-29细胞中表达．Ad—Rz感染的HT-29细胞中VEGFmRNA的相对表达量大约为PBS组的45％（e〈0．05）。ELISA结果显示Ad—Rz感染后的细胞上清液中蛋白含量（A值）为0．455±0．35／百万细胞，低于PBS组（P〈0．05）。Ad—Rz对HT-29细胞的生长抑制无统计学意义（P〉0．05），但可显著抑制肿瘤组织内血管的形成（P〈0．05），Ad—Rz治疗的移植瘤增殖率低于PBS组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：腺病毒载体介导的抗-VEGF发夹状核酶可有效抑制HT-29细胞VEGF的表达及移植瘤组织内血管的生成。     

丁酸钠对人食管癌Eca-109细胞凋亡作用的实验研究

目的体外研究丁酸钠对人食管癌Eca-109细胞的凋亡作用。方法 以1mmol/L、2．5mmol／L、5mmol／L丁酸钠处理Eca-109细胞，透射电镜观察细胞凋亡的形态，TUNEL法检测细胞凋亡率，免疫组化（SP法）检测凋亡抑制基因bcl-2蛋白的表达。结果 Eca-109细胞经丁酸钠处理后，透射电镜见到细胞核染色质浓缩，聚集于核膜处等细胞凋亡的形态特征，并见到凋亡小体；TUNEL法检测发现2．5mamol／L丁酸钠处理24h组与阴性对照组细胞凋亡率分别为5．5％和1．6％，其差异具有显著性（P〈0．05）；免疫组化检测实验组的bcl-2蛋白表达阳性率低于对照组，具有统计学意义（P〈0.05）。结论 丁酸钠可诱导食管癌Eca-109细胞凋亡，其机制与下调凋亡抑制基因bcl-2蛋白表达有关。     

ODC基因反义RNA对肺癌A-549细胞生长抑制作用的体外研究

目的：探讨重组腺病毒rAd-ODC／Ex3as对肺癌A-549细胞的体外抑制作用。方法：利用报告基因GFP测定病毒感染效率，采用MTT法实验观察rAd-ODC／Ex3as对肺癌细胞A-549生长增殖的影响，用Western Blot检测rAd-ODC／Ex3as是否抑制鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因的表达，并应用TUNEL标记检测法观察rAd-ODC／Ex3as对细胞凋亡的影响。结果：当MOI为50时，腺病毒感染A-549细胞的效率约为75％；Western Blot证实rAd-ODC／Ex3as可抑制ODC基因的表达；rAd-ODC／Ex3as以20MOI感染肺癌A-549细胞可明显抑制其生长增殖。TUNEL标记检测结果证实rAd-ODC／Ex3as可引起A-549细胞凋亡。结论：rAd-ODC／Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达，并可抑制肺癌A-549细胞的生长和增殖，诱导其凋亡，有望成为治疗肺癌的基因药物。     

白藜芦醇对食管癌细胞凋亡相关基因survivin和bax表达的影响

[目的]探讨白藜芦醇诱导食管癌Eca109细胞凋亡的作用机制。[方法]MTT比色法测定细胞增殖的抑制率;透射电镜下观察细胞凋亡形态学变化;RT-PCR法和流式细胞术（FCM）检测白藜芦醇对Eca109细胞survivin和bax表达的影响。[结果]白藜芦醇对Eca109细胞生长有抑制作用．抑制率达76．42％．并呈剂量一时间效应关系。白藜芦醇处理细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小。染色质浓缩及边集。RT—PCR法和FCM检测结果显示白藜芦醇可抑制survivin上调,促进bax的表达。[结论]白藜芦醇能诱导食管癌Eca109细胞凋亡,其机制可能与调节survivin和bax的表达有关。     

香加皮三萜类化合物抑制食管癌Eca109细胞裸鼠成瘤及其机制

目的： 研究香加皮三萜类化合物（triterpenes compound extracted from cortex periplocae,TCCP）对荧光素酶（luciferase）标记的人食管鳞癌细胞株Eca109（Eca109-luc细胞）在裸鼠体内成瘤的作用及其机制。 方法： Eca109-luc细胞经皮下接种裸鼠,构建Eca109-luc细胞裸鼠移植瘤模型,观察TCPP治疗后移植瘤体积和质量的变化,应用活体成像系统观察移植瘤生长情况,H-E染色观察移植瘤组织形态学变化,流式细胞仪检测移植瘤细胞的凋亡,Western blotting检测移植瘤组织中survivin的表达。 结果： TCPP在体内能明显抑制裸鼠Eca109-luc移植瘤的生长,移植瘤体积和质量明显减少,抑瘤率为40.7%。TCPP 治疗组小鼠移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润及肿瘤细胞坏死,移植瘤细胞的凋亡率明显高于大豆油对照组（P<005）,移植瘤组织中survivin蛋白表达水平明显下降（P<0.05）。 结论： TCCP在体内能抑制人食管癌Eca109细胞的生长,其作用机制可能与下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

 目的 研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞增殖作用的影响,以期为该成分用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据。 方法 采用逐步分离法包括柱层析和高效液相色谱等对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离、纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定。采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果。 结果 宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞增殖（P<0.05）,并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加,Eca109 G₀/G_1期细胞明显增加（P<0.05）,S期和G2/M期细胞明显减少（P<0.05）;经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长和宝藿苷Ⅰ浓度的增加而明显升高（P<0.01）;经宝藿苷Ⅰ（15mg/kg）治疗荷Eca109细胞裸鼠后,肿瘤生长受到明显抑制（P<0.01）,生长抑制率达（60.9±0.16）%。 结论 香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导细胞凋亡有关。     

重组复制缺陷型腺病毒Ad-p53AIP1的抗肿瘤效应及其作用机制

目的：探讨外源性p53AIP1（p53-regulated apoptosis—inducing protein1）基因抗肿瘤效应及其作用机制，以评估声3A，H基因在肿瘤基因治疗中应用的可行性。方法：构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad—p53AIP1，感染人肝癌细胞HepG2，应用MTT比色法、Westernblotting、流式细胞术、罗丹明染色以及电镜等观察外源性p53AIP1基因表达对肿瘤细胞的作用及其相关机制。小鼠皮下接种感染Ad—p53AIPl的小鼠乳腺癌4T1细胞，观察Ad—p53AIP1对肿瘤细胞体内成瘤性的影响；建立4T1细胞皮下移植瘤小鼠模型，直接瘤内多点注射重组腺病毒，观察Ad—p53AIP1的抗肿瘤疗效。结果：感染Ad—p53AIP1的HepG2细胞能够高效表达p53AIP1蛋白。MTT检测显示Ad—p53AIP1对人肝癌细胞HepG2的生长抑制率达50％以上；流式细胞术分析证实p53AIP1使肿瘤细胞周期阻滞于G2／M期；罗丹明染色、电镜观察以及凋亡相关蛋白PARP表达的检测均证实p53AIP1能诱导肿瘤细胞发生明显凋亡。感染Ad—p53AIPl的肿瘤细胞体内成瘤受到非常明显的抑制（P〈0．01），Ad—p53AIP1瘤体注射对移植瘤生长也有明显的抑制作用（P〈0．05）。Western blotting以及RT—PCR检测证实Ad—p53AIP1对声3mRNA表达无影响，能下调mdm2基因的表达；p53AIP1能上调P53蛋白的表达、下调MDM2蛋白的表达水平，同时还影响P21等细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结论：p53AIP1有明显的体内外抗肿瘤作用，其作用机制与其反向调控P53蛋白、调控多种细胞周期和细胞凋亡相关蛋白、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关，该基因在肿瘤基因治疗中具有潜在的应用前景。     

辐射对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其放射增敏意义

目的：探讨不同辐射剂量对食管癌Eca-109细胞COX-2表达的影响及其与放射敏感性的关系,为合理应用COX-2抑制剂提供实验依据。方法：X线照射食管癌Eca-109细胞,2Gy/f,以照射累积剂量（0Gy、20Gy、40Gy）将其分为Eca 109、Eca 109-20、Eca-109-40组;COX-2抑制剂尼美舒利培育Eca-109-40组细胞为Eca-109-40R;RT-PCR及Western-blot检测细胞COX-2的表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果：Eca-109-40细胞COX-2表达增高（P〈0.05）,放射敏感性降低（P〈0.05）,细胞周期S期比例增多（P〈0.05）,Eca 109与Eca 109-20之间差异无统计学意义（P〉0.05）,Eca-109-40R较Eca-109-40 COX-2表达下降（P〈0.05）,放射敏感性增高（P〈0.05）,细胞周期S期比例减少（P〈0.05）。结论：辐射累积剂量在40Gy时Eca-109细胞COX-2的表达较高,癌细胞放射敏感性降低;照射40Gy时加用尼美舒利可提高细胞放射敏感性。     

戊地昔布对人食管癌Eca109细胞系的抑制作用及其调控

目的:探讨特异选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂戊地昔布对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其调控机制.方法:采用MTT法检测戊地昔布对人食管癌Eca109细胞生长的作用;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;采用流式细胞术和免疫组织化学检测人食管癌Eca109细胞中p-p38MAPK、c-jun和c-fos的表达.结果:戊地昔布(25～400μmol/L)可按时间和浓度依赖性抑制人食管癌Eca109细胞的生长,作用72小时后,对细胞生长的抑制率可达85.95%,凋亡率由(2.38±0.42)%增加到(48.46±0.73)%;50～400μmol/L时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低,G0/G1期的细胞比例增加.戊地昔布在给药72小时后,食管癌Eca109细胞中p-p38MAPK、c-fos、c-jun蛋白表达均增强,并且随浓度的增加而增强.结论:戊地昔布可通过诱导细胞凋亡和细胞周期停滞而抑制人Eca109细胞生长,其诱导凋亡的机制可能部分是通过激活p-p38MAPK、c-jun、c-fos途径实现的.     

低氧下三氧化二砷对食管癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的： 观察三氧化二砷（As 2O 3）在低氧条件下对食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其发挥放射增敏作用的可能机制。 方法： CoCl 2处理模拟肿瘤细胞模拟低氧微环境,MTT法分别检测常氧和低氧条件下不同浓度As2O3及不同剂量放射线对食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测低氧下As 2O 3、放射线单独及两者联合对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测经As 2O 3、放射线单独及两者联合作用后Eca109细胞中HIF-1α、p27蛋白的表达情况。 结果： 在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间和剂量依赖方式抑制Eca109细胞增殖,相同时间和相同剂量条件下,其抑制水平相当（P>0.05）;而低氧下放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用较常氧下明显减弱（P<0.05）。低氧下Eca109细胞周期出现G 0/G 1期阻滞、G 2/M期细胞比例明显减少（P<0.05）,As 2O 3在低氧条件下可诱导G 2/M期阻滞、G 0/G 1期细胞比例减少。As 2O 3与放射线联合作用时,Eca109细胞的凋亡率大于两者单独作用之和。低氧条件下,Eca109细胞HIF-1α、p27蛋白表达均明显增强,As 2O 3可逆转HIF-1α、p27表达水平的升高。 结论： 低氧条件下,As 2O 3对食管癌Eca109细胞有放射增敏作用,其机制可能与下调HIF-1α进而降低p27表达水平、解除G 0/G 1期细胞周期阻滞和促进细胞凋亡有关。