微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞DNA甲基化的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)暴露对小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶(DNMTs)mRNA表达的影响。方法将40只健康SPF级昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组(含0.02%DMSO)和5、10、20μg/kg MCLR染毒组,每组10只,雌雄各半。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒20 d。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠肝细胞DNA中的脱氧胞苷和5-甲基脱氧胞苷含量,并计算DNA的总体甲基化水平;采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B m RNA的表达水平。结果 10、20μg/kg MC-LR染毒组小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平,DNMT1、DNMT3A及DNMT3B mRNA的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平与DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达水平均呈正相关(P0.05)。结论 MC-LR可抑制小鼠肝细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达,降低DNA总体甲基化水平。     

微囊藻毒素-LR对传代细胞的毒性

目的 从多种传代细胞株中，筛选对微囊藻毒素-LR敏感的细胞株，探讨建立经济、简便研究该毒素传代细胞模型的可能性。方法 不同宿主来源的8种细胞株(KB细胞，NIH／3T3细胞，H-4-Ⅱ-E细胞，Hela细胞，Vero细胞，HepG2细胞，Caco-2细胞，HL-60细胞)与不同浓度的微囊藻毒素-LR作用，细胞培养24，48，72。96h后观察其形态学变化，利用体外细胞法(MTT)测定其细胞毒性终点(判断细胞活性)及乳酸脱氢酶试验测定细胞膜受损情况。结果8种细胞株中，KB细胞和H-4-Ⅱ-E细胞在培养96h，毒素浓度大于18．8μg／ml时，呈现明显剂量-反应关系。KB细胞与毒素接触8h后就有显著的形态学改变，其实验结果的重现性和稳定性非常好；乳酸脱氢酶试验显示微囊藻毒素-LR可导致KB细胞膜损伤。结论 微囊藻毒素-LR对KB细胞和H-4-Ⅱ-E细胞有明显的细胞毒性作用。从形态学变化、试验结果的重现性、稳定性和敏感性考虑，KB细胞可用作研究该毒素的传代细胞模型。     

太原市大型水库微囊藻毒素-LR污染调查

目的了解太原市汾河一库和汾河二库微囊藻毒素-LR(MC-LR)污染状况,为制订防治微囊藻毒素-LR 污染的政策提供参考依据。方法分别于2005年5月(枯水期)、10月(平水期),在汾河一库和汾河二库的入口、中心、出口处采集水面下0.5 m 处水样5 L。采用高效液相色谱法(HPLC)检测水样中的微囊藻毒素-LR 含量。结果枯水期汾河一库水样中微囊藻毒素 LR 的平均含量为0.875 μg/L,约为平水期(0.283 μg/L)的3倍;枯水期汾河二库水样中微囊藻毒素-LR 的平均含量为0.815μg/L,约为平水期(0.048μg/L)的17倍,且均呈入口>中心>出口的趋势。枯水期汾河一库和汾河二库入口处水样中微囊藻毒素-LR含量均超过《生活饮用水卫生规范》(2001)中的限值(1μg/L)。结论汾河一库和汾河二库都存在 MC-LR 污染,且以枯水期较为严重。     

微囊藻毒素-LR致HT17细胞毒性及DNA损伤

目的比较微囊藻毒素-LR(MCLR)对2种人肝癌细胞系HT17和HepG2的细胞毒性差异,研究MCLR对HT17细胞的氧化性DNA损伤作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞毒性,免疫酶染色法检测细胞内8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平。结果当剂量增加到1μg/ml时,MCLR对HT17细胞产生明显的细胞毒性,细胞存活率随着处理剂量的增加而降低。HT17细胞对MCLR的敏感性高于HepG2细胞。非毒性剂量的MCLR处理HT17细胞引起8-OHdG水平升高,处理剂量与8-OHdG水平之间呈现剂量-反应关系。结论HT17细胞对MCLR的毒性更敏感,可能与HT17细胞表达有机阴离子转运多肽(OATP)1B1有关。非毒性剂量的MCLR引起氧化性DNA损伤提示长期少量接触MCLR可能对人类健康产生潜在的远期危害。     

微囊藻毒素-LR对人肝癌HT17细胞周期及细胞凋亡的影响

目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HT17细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 调整HT17细胞密度为1×104/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、2.0、5.0μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)染毒组以及...     

太湖水体中微囊藻毒素-LR污染状况调查

目的 了解环太湖水体中微囊藻毒素(MC-LR)的污染和分布状况,为生活饮用水安全性预警提供决策依据,为自来水的深度处理提供理论支持.方法 在太湖水体中设置15个采样点,2009年7月～2010年6月期间每月采集一次样品,采用高灵敏时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测各样品中MC-LR的浓度情况.结果 太湖水体中MC-LR浓度高峰出现在10月份,枯水期浓度显著高于丰水期.此外,太湖北部和西部水体中MC-LR的污染状况较东部、南部以及中部严重.结论 太湖水体已受到MC-LR的污染且污染程度存在时间和地域差异,为保障饮用水安全,应改善自来水深度处理工艺和加强枯水期水质监测.     

微囊藻毒素-LR的研究进展

微囊藻毒素-LR(MC-LR)是由蓝藻产生的一种毒性极强的毒素,在水体污染日益严重的今天,它已对生态环境和人类健康造成严重的威胁,成为全球殛待解决的重大环境问题.本文通过对MC-LR的结构性质、毒性作用、作用机制、检测方法和治理手段等方面进行综合阐述,旨在为环境管理与人类健康服务.     

太湖水体微囊藻毒素-LR及相关因子时空分布

目的 掌握太湖水体中微囊藻毒素(MC-LR)及相关因子的时空分布,为太湖周边城市安全供水提供基础数据。方法 2010年1月-2011年12月,在太湖水体中设置15个采样点,每月采集一次样品,采用高灵敏时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测各样品中MC-LR的浓度,同时监测藻类密度、水温、高锰酸盐指数、氨氮、叶绿素a等指标。 结果 太湖水体中MC-LR浓度高峰出现在11月份,枯水期浓度(0.129±0.024 μg/L)显著高于丰水期(0.087±0.008 μg/L)(t=25.71, P=0.0012),北部(0.150±0.028 μg/L)和西部(0.121±0.014 μg/L)的平均浓度均显著高于东部(0.077±0.015 μg/L)、南部(0.076±0.014 μg/L)和中部(0.075±0.012 μg/L)(均P<0.001);而藻类密度以9月份最高,丰水期浓度[(913±548)万个/L)]高于枯水期[(467±170)万个/L](t=10.71, P=0.0054),南部[(1 061±409)万个/L]和中部[(1 039±556)万个/L]均显著高于西[(580±216)万个/L]、北[(618±306)万个/L]和东部[(572±218)万个/L](均P<0.001)。 结论 太湖水体中MC-LR污染存在时间和地域差异,和藻类密度的变化趋势并不一致。应加强监测以保证供水安全。     

谷胱甘肽耗竭与微囊藻毒素-LR细胞毒性的关系初探

目的探讨谷胱甘肽耗竭与微囊藻毒素-LR(MCLR)细胞毒性的关系。方法不同剂量的MCLR作用人肝癌细胞HepG2后,采用四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞毒性,并用二硫硝基苯甲酸法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果细胞存活率随处理剂量的增加而降低,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸明显减轻MCLR诱导的细胞毒性。细胞内GSH含量显著降低,处理剂量与GSH水平之间呈现剂量-反应和时间-反应关系。结论谷胱甘肽耗竭可能是微囊藻毒素-LR引起细胞毒性的原因之一。     

微囊藻毒素-LR致小鼠肝、肾和睾丸细胞DNA-蛋白质交联的研究

目的探讨微囊藻毒素-LR所致小鼠肝、肾、睾丸细胞DNA-蛋白质交联(DPC)作用。方法以昆明种雄性小鼠为实验对象,腹腔注射染毒,采用KCl-SDS沉淀法检测小鼠肝、肾、睾丸细胞中交联DNA和游离DNA的量,计算其DPC系数,DPC系数=交联DNA/(交联DNA+游离DNA),判断DNA与蛋白质的交联程度。结果在小鼠肝细胞中,微囊藻毒素-LR各染毒组DPC数量均有显著增加,其DPC系数与对照组相比差异均有显著性(P<0.05)。在小鼠肾细胞中,微囊藻毒素-LR染毒剂量为3μg/kgbw和6μg/kgbw时,DPC数量显著增加,其DPC系数与对照组相比差异有显著性(P<0.05);染毒剂量为12μg/kgbw时,DPC数量未增加,其DPC系数与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。在小鼠睾丸细胞中,染毒剂量为3μg/kgbw时,DPC数量未增加,其DPC系数与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。染毒剂量为6μg/kgbw和12μg/kgbw时,DPC数量显著增加,其DPC系数与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论在一定的染毒剂量下,微囊藻毒素-LR可以引起小鼠肝、肾、睾丸细胞DNA-蛋白质交联。     

环境污染物对着床前小鼠胚胎的DNA甲基转移酶活性的影响

目的探讨环境污染物对着床前小鼠胚胎发育的直接影响,以及对基因组DNA甲基化的影响。方法着床前小鼠1细胞期胚被放入含有不同的环境污染物的培养液中进行体外培养;观察1细胞期胚发育至胚泡期胚的发育率;测定胚泡期胚的DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase)活性。结果小鼠胚胎着床前期在含有环境污染物的培养液里发育的过程中,其形态没有发生显著的异常变化,各实验组的胚胎发育率在61%～67%。然而,DNA甲基转移酶活性应环境污染物种类而异发生不同变化。与对照组相比,二英2,3,7,8tetrachlorodibenzopdioxin(TCDD)使着床前胚的DNA甲基转移酶活性显著升高;而二乙烯二苯乙烯雌酚Diethylstilbestrol(DES)和多氯联苯中的2,2′,3,3′4,4′polychlorinatedbiphenyl(PCB153)使着床前胚的DNA甲基转移酶活性显著下降。不过,二氯联苯二氯乙烯p,p′dichlorodiphenelethylene(DDE)和苯二甲酸二丁酯dibutylphthalate(DBP)对着床前胚的甲基转移酶活性的影响未达到统计显著水平。结论环境污染物可在体外培养中对着床前胚DNA甲基转移酶活性产生作用,进而可能影响基因组甲基化模式的变化。     

叶酸与DNA甲基转移酶1在宫颈癌及癌前病变中的作用

目的 探讨叶酸和DNA甲基转移酶1(DNMT1)与宫颈癌发生发展的关系及其在宫颈癌变中的相互作用.方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者100例、宫颈上皮内瘤样变(CrN)患者101例和宫颈炎(CI)患者109例为研究对象.在收集全部对象人口学特征、生殖因素等相关资料的同时,检测血清叶酸水平(RIA法)、人乳头瘤病毒16的感染状况(PCR法)和DNMT1蛋白的表达量(Westernblot法).采用SPSS 16.0分析软件,进行相关资料的t检验、x2检验、因素与疾病之间关联强度指标(OR值95%CI)的计算及交互作用分析.结果 在SCC、CIN和CI组,血清叶酸含量分别为(2.60±1.61)、(3.14±2.08)和(3.32±1.74)ng/ml,DNMT1蛋白表达水平分别为2.40±0.99、1.88±0.33和0.89±0.29,随着宫颈病变的加重叶酸含量逐渐降低,DNMT1蛋白表达水平逐渐增高,两者呈负相关关系(r=-0 186,P=0001).交互作用分析显示,叶酸水平低和DNMTl蛋白高表达在CIN和SCC组均存在正相加交互作用,OR值分别为2.50(95%CI:1.21～9.22)和6.03(95%CI:2.79～21.72),交互作用指标超额危险度、交互作用归因危险比和交互作用指数在CIN组分别为0.92、0.36和2.59,在SCC组分别为2.47、0.41和1.96.结论 血清叶酸水平低及DNMT1蛋白高表达均是导致宫颈癌和癌前病变发生的危险因素,两者存在协同作用.

Abstract：

Objective To explore the effect of folic acid and DNA methyltransferase 1 (DNMT1) on cervical cancer and cervix precancerous lesion. Methods 100 patients with cervix squamouscell carcinoma (SCC), 101 patients with cervical intraepithelial neoplasm (CIN) and 109 patients with cervix inflammation (CI) diagnosed by histology were included in this study. Radioimmunoassay (RIA), polymerase chain reaction (PCR) and Western blot were used to detect the levels of serum folate, HPV16 infection and the expression of DNMT1 protein,respectively. Results The average levels of serum folate were (2.60 ± 1.61) ng/ml, (3.14 + 2.08) ng/ml and (3.32+1.74) ng/ml,and the expression of DNMT1 protein were 2.40 + 0.99,1.88 + 0.33 and 0.89 ± 0.29 in the group of SCC, CIN and CI, respectively.The relationship of folate levels and DNMT1 protein expression showed inverse correlation (r=-0.186, P=0.00l). The results in our study indicated that there was an additive interaction between low-level of serum folate and high-expressionof DNMT1 protein related to the risk of CIN and SCC, with OR value as 2.50(95%C/: 1.21-9.22) and 6.03 (95%C/: 2.79-21.72) respectively. The relative excessrisk of interaction (RERI) , attributableproportion of interaction (API) and synergy index (S) were 0.92, 0.36 and 2.59 in the CIN group while 2.47, 0.41 and 1.96 in the SCC group. Conclusion The low level of serum folate and high expression of DNMT1 protein seemed to be associated with high risk of cervical cancer and its precancerous lesion. It suggested that there might be a synergistic action between serum folate and DNMT1 in the progression of cervix carcinogenesis.     

Segregation analysis of human red blood cell thiopurine methyltransferase activity

Thiopurine methyltransferase (TPMT) catalyzes thiopurine S-methylation, an important metabolic pathway for drugs such as 6-mercaptopurine (6-MP). Inherited differences in the activity of this enzyme are related to individual differences in the therapeutic efficacy and toxicity of 6-MP and other thiopurine drugs. Variation of TPMT activity in the red blood cell (RBC) has been found to reflect activity differences in less accessible tissues. Previously reported qualitative analyses of inheritance of RBC TPMT in families suggested that a major gene plays a role in the regulation of activity of this enzyme. In the present study we completed complex segregation analyses of RBC TPMT activity of 213 individuals in 49 families that were randomly ascertained through children in the Rochester, MN, public school system. We found clear evidence of a major gene effect on RBC TPMT activity. Both transformed and untransformed data supported the segregation of a Mendelian major gene with frequency of 0.94 for the allele conferring high enzyme activity. The genotype distributions of individuals who were homozygous for the low activity allele, heterozygous, and homozygous for the high activity allele accounted for approximately 0.3%, 11.2%, and 88.5%, respectively, of the individuals in the sample. This major locus accounted for 66% of the total variance in untransformed RBC TPMT activity. Although there were significant residual family correlations among probable high activity homozygotes, there was insufficient power to detect additional major locus or polygenic inheritance effects on the residual variance. © 1995 Wiley-Liss, Inc.     

DNA修复基因O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在人群肺癌发生中的作用

目的：探讨DNA修复基因O^6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,hMGMT)在人群肺癌发生中的作用。方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测150例肺癌组织、40例正常肺组织、50例对肺癌例和对照外周血单个核细胞中hMGMT基因mRNA的表达；用免疫组化检测p53、C－MYC、K－RAS基因表达，并分析有关暴露因素对修复基因hMGMT表达的影响，以及hMGMT基因与p53、C－MYC、K－RAS等癌变相关基因的关系。结果：32．7％（49／150）的肺癌组织和5．0％（2／40）的正常肺组织存在hMGMT基因表达低下，hMGMT基因表达低下与肺癌发生的危险度OR值为9．22（2．05－57．65），20．0％（10／50）的肺癌病人外周血和4％（2／50）的正常人外周单个核细胞细胞也可检出hMGMT基因表达低下，探讨影响hMGMT基因表达的各种暴露因素，发现吸烟可抑制hMGMT基因表达，另外发现，K－RAS癌基因的过度表达与hMGMT表达低下有关（P＜0．05）；而p53、C－MYC基因的表达与hMGMT无关。结论：DNA修复hMGMT在肺癌发生中起着重要的作用，其表达低下是人群发生肺癌的危险因素之一，该基因的低表达可作为有价值的肺癌易感性标志。     

DNA甲基转移酶1与甲基-CpG-结合蛋白2异常表达在宫颈病变中的作用及相互关系

目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMTl)和甲基-CPG-结合蛋白2(MecP2)与宫颈癌发生发展的关系及其在宫颈癌变中的相互作用。方法 选择经病理学确诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者74例、低度宫颈上皮内瘤样变(CIN I)患者52例、高度宫颈上皮内瘤样变(CINⅡ一Ⅲ)患者60例和宫颈炎(CI)患者58例为研究对象。在收集全部对象人口学特征、人乳头瘤病毒感染、生殖因素等相关资料同时,检测DNMTl和MeCP2蛋白(Western blot法)和mRNA(real-time PCR法)的相对表达量。采用SPSS 17.0分析软件,计算相关资料的t检验、X²检验、因素与疾病之间关联强度指标(0R值及其95%CI)及其交互作用。结果 随着宫颈病变的加重,DNMTl和MeCP2蛋白表达水平逐渐增高(H=94.33,PF=21.580,P<0.001),DNMTl和MeCP2 mRNA的表达水平亦逐渐增高(F=4.758,P=0.003;F=7。804,Pr=0.287,P<0.001)和mRNA(r=0.179,P=0.005)表达均存在正相关关系。交互作用分析显示,DNMTl与MeCP2蛋白和mRNA高表达在SCC组和CINl/-Ⅲ组存在正相加交互作用。结论 DNMTl及MeCP2高表达可增加宫颈癌和癌前病变发生的风险,两者在C1N II-Ⅲ组和SCC组存在正相加交互作用。     

上海市供水系统微囊藻毒素LR含量调查

目的　调查上海市供水系统中微囊藻毒素LR(MC- LR)的污染状况及常规水处理工艺对MC- LR的去除效果。方法　运用高效液相色谱法 (HPLC)检测有代表性的水源、水厂及出厂水样中MC LR的含量。结果　源水中MC- LR浓度随采样点及采样季节变化 ,在夏末秋初易形成污染高峰 ,最高达 2 . 38μg L。混凝沉淀、加氯消毒对去除毒素有一定的效果 ,而过滤则效果不明显 ,在出厂水中也能检测到MC- LR ,最高达1. 2 7μg L。结论　夏秋季节上海市供水系统源水受到以MC- LR为代表的蓝藻毒素的污染 ,郊区源水污染较重 ,常规水处理工艺不能有效地去除水中的微囊藻毒素。     

广西南北两地水源水和饮用水中微囊藻毒素-LR含量调查

目的比较广西北回归线两侧的南宁地区和桂林地区水源水和饮用水中微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)含量差异。方法于2017年采集南宁地区和桂林地区主要水源水及饮用水水样,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测水中MC-LR的含量。结果南宁地区与桂林地区水源水和饮用水中MC-LR平均含量均未超过我国地表水环境质量标准、饮用水卫生标准限值1μg/L。南北两地水库水中MC-LR平均含量均高于江河水、井水和山泉水(P<0.05)。南宁地区不同类型水源水MC-LR含量与桂林地区相比,水库水MC-LR平均含量较高,差异有统计学意义(P<0.05)。南北两地分散式供水末梢水中MC-LR平均含量均高于农村和城市集中式供水(P<0.05)。南宁地区的水源水和出厂水MC-LR平均含量分别为(0.256±0.048)、(0.210±0.025)μg/L,两者差异有统计学意义(P<0.05)。南宁地区水源水MC-LR含量在10月份达到峰值。结论广西南北两地水源水和饮用水中MC-LR含量均未超过国标中所规定的标准限值,南北两地水库水MC-LR含量存在明显差异,分散式供水MC-LR含量高于集中式供水。南宁地区水源水MC-LR平均含量高于出厂水,且在10月份达到峰值。提示需加强水源水和饮用水水质日常监测,秋季严格控制自来水处理工艺,以保证水质安全。     

氢醌对DNA甲基转移酶表达的影响

目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的分子机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmo/lL HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达水平。结果与对照组相比,DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达量在各HQ处理组细胞中均下降,其中以20.0μmo/lL组细胞的下降最为明显,分别下降46%(P0.05)、83%(P0.05)和48%(P0.05),且DNMT1和DNMT3a的表达量随着HQ剂量的增加而下降。结论 HQ致DNA整体低甲基化下调机制可能与DNMT1、DNMT3a和DNMT3b表达异常有关。