氧化吲哚类化合物Z24抑制ECV304细胞增殖及迁移的实验研究

目的探讨氧化吲哚类化合物Z24对血管内皮细胞增殖及迁移的抑制作用.方法利用3H-TdR掺入DNA方法来检测Z24对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响;扫描电镜方法测定Z24对细胞骨架系统的影响;体外细胞迁移实验测定它对内皮细胞迁移的抑制效应;用免疫沉淀几Western印迹法检测它对ERK信号通路的影响.结果Z24能抑制EGF刺激后ECV304细胞的增殖,能显著抑制ECV304的骨架形成;ECV304的迁移减少;p-ERK水平下调.结论Z24能够抑制血管内皮细胞的增殖和迁移.这种抑制效应可能阻断MAPK信号通路发挥作用的.     

冠心平片保护血管内皮细胞作用研究

目的观察冠心平片对内皮细胞损伤过程中丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响,探讨冠心平片治疗冠心病的可能机制。方法体外培养内皮细胞ECV304,随机分成正常对照组,模型对照组,阳性药对照组和冠心平大、中、小剂量组。除正常对照组外,其他组用100 μmol•L 1过氧化氢（H2O2）制作内皮细胞损伤模型。血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察各组细胞生长情况,检测MDA与SOD。结果100 μmol•L 1 H2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著增加细胞SOD分泌,显著抑制H2O2诱导的MDA的产生。结论冠心平片可减轻H2O2对ECV304的损伤程度,机制可能与其抗氧化作用有关。     

肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞表达血管形成因子

目的 :探讨肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞在肿瘤血管形成中的作用。方法 :对肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞模型ECV304 -SKOV3和L929-H22 细胞 ,用免疫细胞化学测定促进血管形成因子的表达、RT -PCR测定其端粒酶活性 ,并与亲代细胞比较。结果 :ECV304 -SKOV3细胞和L929-H22 细胞的端粒酶活性明显强于亲代细胞ECV304、L929,分别为0.778±0.011、0.875±0.026、0.692±0.014、0.684±0.012(P<0.001)。ECV304 -SKOV3细胞表达血管形成因子MMP -9、bcl -2增强 (P<0.05) ,TN减弱(P<0.05) ;L929-H22 细胞表达MMP -9、TGF -β1、TN、bcl-2增强 (P<0.01) ;二者表达PCNA增强 (P<0.01)。结论 :肿瘤血管内皮细胞和成纤维细胞存活能力、血管形成因子表达增强 ,可能参与肿瘤血管生成。     

广西尖吻蝮蛇毒K组分抗血管生成活性研究

目的探讨广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分（K组分）对血管生成的抑制作用。方法采用噻唑蓝法检测K组分对培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304的生长抑制情况,结晶紫法测定K组分对ECV304细胞的黏附抑制作用,鸡胚尿囊实验观察K组分对血管生成的影响。结果K组分对人脐静脉内皮细胞株ECV304的增殖有抑制作用并呈明显的时 效及量 效关系,能够抑制ECV304细胞与纤维连接蛋白的黏附和鸡胚尿囊血管生成。结论广西尖吻蝮蛇毒K组分对血管生成有抑制作用。     

降糖复方含药血清对氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的：研究降糖复方含药血清对H2O2诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：采用H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞（ECV304）氧化损伤模型,观察细胞形态学变化并测定细胞活力、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量,NO含量以及内皮素（ET-1）含量。结果：降糖复方含药血清可明显改善氧化损伤的ECV304细胞形态学变化,提高细胞存活率,降低MDA含量、提高SOD活力、增加NO释放、减少ET-1释放。结论：降糖复方含药血清能对抗H2O2对血管内皮细胞的氧化损伤,起到保护血管内皮细胞的作用。     

胎牛血清对人内皮细胞HMEC-1体外成血管实验影响的观察

目的：观察胎牛血清对人内皮细胞HMEC-1体外成血管实验的影响。方法：人内皮细胞HMEC-1采用相同的培养条件处理后,随机分为无胎牛血清组和胎牛血清组,分别采用无胎牛血清培养基和含胎牛血清培养基（含5%胎牛血清）接种于成血管基质胶,培养6h后用倒置相差显微镜观察不同处理组内皮细胞血管管腔形成情况。结果：无胎牛血清组的血管管腔数明显多于胎牛血清组（P<0.05）。结论：提示在体外成血管实验中无胎牛血清的条件有利于内皮细胞毛细血管样结构的形成。     

苦参碱对人HepG2细胞与人ECV304细胞的增殖抑制活性比较研究

目的:研究苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响.方法:购买纯度高达99％的苦参碱纯品,通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察苦参碱时人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响.结果:MTT实验和生长曲线实验显示在不同浓度苦参碱作用不同时间后,人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为487.86μg/ml和1815.34μg/ml,且呈剂量、时间依赖性.HE染色后人肝癌HepG2细胞实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显.结论:苦参碱可抑制人肝癌HepG2细胞生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用较弱.     

白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用

目的比较白藜芦醇和紫檀芪体外抗肿瘤转移作用。方法白藜芦醇和紫檀芪5～50μmol·L-1分别与小鼠黑色素瘤细胞B16F1和内皮细胞ECV304作用48 h,再分别用磺基罗丹明B染色法测定细胞增殖率。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1与细胞作用48 h,用划痕实验评价B16F1和ECV304细胞体外迁移能力,用明胶酶电泳和ELISA测定B16F1细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)的活性和含量。用重建基底膜法观察白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用24 h对ECV304细胞拟管腔形成的抑制作用。结果白藜芦醇和紫檀芪作用48 h均能显著抑制B16F1和ECV304细胞增殖,抑制B16F1细胞增殖的IC50分别为119.7μmol·L-1和37.3μmol·L-1,抑制ECV304细胞增殖的IC50分别为72.2μmol·L-1和37.2μmol·L-1。白藜芦醇和紫檀芪10μmol·L-1作用48 h,B16F1细胞愈合率分别为58.0%和36.8%,ECV304细胞愈合率分别为61.8%和28.9%,明显低于正常对照组的67.7%和88.4%(P<0.01),而且紫檀芪组明显低于白藜芦醇组(P<0.01)。与正常对照组相比,白藜芦醇和紫檀芪10μmo·L-1作用48 h使B16F1细胞MMP-2蛋白表达分别降低7.4%和13.9%(P<0.01),MMP-2活性分别降低19.3%和78.9%(P<0.01)。白藜芦醇和紫檀芪作用24 h均可使ECV304细胞管腔样结构破坏,且紫檀芪的作用较白藜芦醇更加明显。结论白藜芦醇和紫檀芪均具有抑制B16F1和ECV304细胞增殖和转移的作用,并能抑制ECV304细胞拟管腔形成;浓度为10μmol·L-1时紫檀芪的抑制作用强于白藜芦醇。     

氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制

目的探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用于ECV304细胞24、48、72h,均抑制细胞ECV304增殖,但抑制强度依次为(+)MTX>(±)MTX>(-)MTX,倒置显微镜观察不同浓度(±)MTX、(+)MTX和(-)MTX作用ECV304细胞不同时间后,出现细胞体积变小、核固缩等形态学改变。用10μmol·L-1的(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用ECV304细胞48h后,PI单染流式细胞术检测ECV304细胞周期的影响,表明MTX消旋体及单一体干扰ECV304细胞DNA合成。结论(+)MTX和(-)MTX对ECV304细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗ECV304细胞增殖作用明显强于(-)MTX。     

组织型纤溶酶原激活物重组腺病毒载体的构建及其转染ECV304细胞后对血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 评估外源性组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对ECV304细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用细菌内同源重组技术快速构建Adt-PA腺病毒重组质粒,转染不同病毒滴度Adt-PA至ECV304细胞,转染比率(MOI)分别为1∶10、1∶50、1∶100,选取合适MOI值;病毒转染后检测ECV304细胞内t-PA蛋白的表达.然后将培养的ECV304细胞分为二组,在培养液中加入Adt-PA混合培养24 h和48 h分别作为实验组1和实验组2,加入空病毒Ad混合培养48 h作为对照组,比较各组细胞中VEGF mRNA的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建了重组腺病毒Adt-PA.当MOI为1∶50时,细胞转染效率为(69.6±21.2)%,且对ECV304细胞增殖具有一定的促进作用;Adt-PA转染ECV304细胞后在72 h内随着时间的延长其蛋白表达量逐渐升高(P<0.01);细胞内VEGFmRNA的转录水平和蛋白表达量在实验组1和2中较对照组均有明显升高(P<0.01).结论 构建的t-PA腺病毒表达载体可有效感染ECV304细胞并可显著增加其VEGF的表达水平.     

维泰醇和紫杉醇抗肿瘤转移作用比较

目的观察维泰醇和紫杉醇对肿瘤细胞体外迁移能力以及血管内皮细胞管腔形成能力的影响,对它们的抗肿瘤转移能力进行比较,以证实维泰醇的抗肿瘤血管新生及抗肿瘤转移作用。方法采用SRB法,划痕试验,明胶酶谱法、ELISA、AO/EB染色法以及管腔样结构形成试验等方法观察比较维泰醇与紫杉醇的抗肿瘤转移能力。结果维泰醇对黑色素瘤细胞(B16F1)生长抑制率和致死率低于紫杉醇,维泰醇对黑色素瘤细胞迁移、MMP-2表达和对血管内皮细胞(ECV304)管腔形成的抑制能力略低于紫杉醇。结论维泰醇具有较强的抗肿瘤转移活性,虽然其抗转移能力弱于紫杉醇,但其低细胞毒特性依然有望成为新的抗肿瘤转移的药物。     

吡格列酮对血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的观察吡格列酮对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法四唑盐比色试验(M TT法)检测吡格列酮对正常血管内皮细胞(ECV 304)生长的抑制作用。结果吡格列酮在终浓度为1×10-8mm o.lL-1-1×10-4mm o.lL-1时对ECV 304细胞的增殖具有抑制作用,而且此作用呈浓度依赖性。结论吡格列酮对ECV 304细胞具有浓度依赖性的抑制增殖作用。     

何首乌水溶性成分2,3,5,4''-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L-1)或LPC与ST I共孵24 h,收集各组条件培养基,用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量;用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGFmRNA的表达及ST I的影响.结果ECV304细胞暴露于LPC后,VEGF蛋白分泌明显增加;加入STI后VEGF蛋白含量明显降低;LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高,并使VEGF165 mRNA的表达升高;ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达.结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGFmRNA,1×10-5mol·L-1ST I可抑制LPC的作用,降低VEGF的高表达.     

溶血磷脂酰胆碱对ECV304细胞中血管内皮生长因子表达的影响(英文)

目的:研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对内皮细胞(EC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:在人脐静脉内皮细胞株ECV04培养基中加入不同浓度的LPC,培养不同时间,用基础酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组EC条件培养基中VEGF蛋白含量;用免疫组织化学法检测EC中VEGF蛋白及其受体的表达;用原位杂交检测VEGF信使核糖核酸(VEGF mRNA)的表达。结果:培养的ECV304能表达VEGF受体,在胞浆内呈棕色颗粒,当LPC刺激后,阳性增强。原位杂交结果显示,培养的ECV304中未见VEGF mRNA的表达,当LPC刺激后可见VEGF mRNA的高表达,在胞浆内呈棕色颗粒。ELISA结果显示LPC可使ECV304条件培养基中VEGF蛋白含量明显增加,且具有时间和剂量依赖性。结论:LPC能诱导ECV304表达高水平的VEGF。 (责任编辑 吕静)     

腺病毒介导的TSP1f基因转移对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响

目的探讨腺病毒介导的凝血酶敏感蛋白1（TSP1）抗血管新生衍生物（TSP1f）基因转移对人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响。方法应用RTPCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增TSP1f cDNA序列构建TSP1f重组腺病毒（ADV-TSP1f）;Western blot方法检测ADV-TSP1f介导TSP1f在K562细胞中的表达;台盼蓝拒染检测经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基对ECV304细胞增殖的抑制作用。结果K562细胞经ADV-TSP1f感染可高效表达／分泌TSP1f多肽;经ADV-TSP1f感染的K562细胞条件培养基可显著抑制ECV304细胞增殖,以ADV-LacZ及PBS作对照,抑制率分别为51．6％和53．8％。结论ADV-TSP1f可显著抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304增殖,可望成为有效的恶性肿瘤血管新生抑制剂。     

鲁斯可皂苷元对HL-60与EC V304细胞黏附的影响

目的考察麦冬中主要皂苷元鲁斯可皂苷元(Rusco-gen in)抑制细胞黏附的作用,为深入研究其抗炎作用机制提供依据。方法采用MTT比色法检测Ruscogen in对人原髓性白血病细胞株HL-60细胞与正常或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)活化的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞黏附的影响及其对ECV304与HL-60细胞增殖的影响。结果Ruscogen in 0.1,1.0μmol.L-1预处理ECV304细胞后,均抑制TNF-α诱导的ECV304细胞与HL-60细胞黏附的增加,Ruscogen in 0.001,0.01,0.1μmol.L-1预处理HL-60后,亦抑制TNF-α诱导的ECV304细胞与HL-60细胞黏附的增加;同时Ruscogen in在实验浓度范围内不影响ECV304细胞与HL-60细胞的增殖及二者之间的正常黏附。结论Ruscoge-n in可通过抑制HL-60细胞与活化的ECV304细胞之间的黏附作用,发挥抗炎活性。     

卵巢癌血管生成三维模型的体外构建

目的 利用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)及卵巢癌患者腹水中原代卵巢癌细胞构建体外卵巢癌血管生成三维模型。方法 2019年11月至2021年1月原代提取及培养HUVECs及卵巢癌细胞，分3组进行细胞培养。A组为无Matrigel基质胶条件下卵巢癌细胞和HUVECs间接共培养，B组为Matrigel基质胶条件下HUVECs单独培养，C组为Matrigel基质胶条件下卵巢癌细胞和HUVECs三维间接共培养。观察各组HUVECs血管生成情况。采用免疫印迹试验检测卵巢癌细胞条件培养液对HUVECs的CD105表达水平的影响，Transwell实验检测卵巢癌细胞条件培养液对HUVECs侵袭能力的影响。结果 成功提取原代HUVECs和卵巢癌细胞，A组HUVECs有突起或伪足，但不形成管状或网状结构；B组HUVECs排列成网状，但没有细胞的变形、伪足和融合，也不形成类毛细血管样结构；C组HUVECs形成了不连续的三维类毛细血管样结构。卵巢癌细胞条件培养液可增强HUVECs的CD105表达并增强其侵袭能力。结论 成功构建了体外卵巢癌血管生成三维模型，卵巢癌细胞具有促进HUVECs增殖及侵袭能力。该模型...     

转tPA基因血管内皮细胞的功能表达

目的 观察组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因转导血管内皮细胞后的功能表达。方法 利用携带tPA基因的假型逆转录病毒转导血管内皮细胞株ECV304,用G418筛选法观察基因是否成功转导,采用发色底物显色法检测转基因ECV304细胞培养上清液中tPA纤溶活性变化。结果 转tPA基因后的血管内皮细胞经G418筛选后2周左右见大量克隆形成;转tPA基因ECV304细胞培养上清液中tPA纤溶活性在转导24h后增高,48h后增高更明显,72-96h浓度达高峰。结论 假型逆转录病毒载体成功介导tPA基因转导血管内皮细胞,并呈有效功能表达,为心血管手术后预防血栓形成的基因治疗提供实验依据。     

白藜芦醇与白藜芦醇苷抗氧化活性比较

目的：比较白藜芦醇与白藜芦醇苷清除自由基的能力以及对H202造成人脐静脉血管内皮细胞ECV304损伤的保护作用。方法：以邻二氮菲．Fe2＋体系产生羟基自由基（·OH）的方法研究白藜芦醇与白藜芦醇苷清除自由基的能力;采用H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞（ECV304）氧化损伤模型,四甲基偶氮噻唑蓝（MTF）比色法检测两种药物对H202致氧化损伤细胞的保护作用。结果：白藜芦醇与白藜芦醇苷清除·OH的能力呈剂量依赖性,其中白藜芦醇苷的作用比白藜芦醇强,但均弱于维生素C;白藜芦醇对H2O2致氧化损伤的ECV304细胞的保护作用强于白藜芦醇苷。结论：白藜芦醇对H202损伤的ECV304细胞具有明显的保护作用。     

人参果提取物对H_2O_2诱导人脐静脉内皮ECV304细胞损伤的保护作用

目的:研究人参果提取物对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的保护作用。方法:体外培养的ECV304细胞随机均分为正常对照(常规培养液)组、模型(常规培养液)组与人参果提取物1、2、3、4(10、20、40、80μg/ml)组,给予相应药物培养ECV304细胞24 h后,用H2O2(0.3 mmol/L)培养ECV304细胞4 h以复制细胞氧化损伤模型;采用MTT法检测细胞活力以筛选最适质量浓度。体外培养的ECV304细胞随机均分为正常对照(常规培养液)组、模型(常规培养液)组与人参果提取物(80μg/ml)组,给予相应药物培养ECV304细胞24 h后同上复制细胞氧化损伤模型。采用HE染色观察细胞形态;采用流式细胞仪测定细胞周期;检测丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:人参果提取物最适给药质量浓度为80μg/ml。与正常对照组比较,模型组细胞部分皱缩,边缘模糊,细胞有融合现象;细胞活力减弱;G1期细胞比例升高,S期和G2期细胞比例降低;SOD活性减弱,MDA含量增加,LDH活性增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,人参果提取物组细胞损伤程度减轻;G1期细胞进入S期和G2期的细胞比例升高,G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高;SOD活性增强,MDA含量减少,LDH活性减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:人参果提取物对H2O2损伤的ECV304细胞具有保护作用,其机制可能与加快细胞周期进程、抗氧化作用有关。