丹皮酚诱导人MCF-7细胞凋亡的机制

目的 观察丹皮酚诱导人MCF-7乳腺癌细胞凋亡形态学和凋亡率的机制.方法 应用MTT法观察丹皮酚对MCF-7细胞的细胞毒作用;应用hoechst单染观察丹皮酚对肿瘤细胞形态学的影响;Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪测定丹皮酚诱导MCF-7细胞凋亡的凋亡率.结果 丹皮酚作用于MCF-7细胞的IC50为60 mg/L;细胞形态学出现核碎裂、凋亡小体等典型的细胞凋亡特征;60 mg/L丹皮酚作用24 h、48 h的凋亡率分别为14.24％和28.47％.结论 丹皮酚通过诱导MCF-7细胞凋亡而抑制肿瘤细胞生长.     

丹皮酚对人MCF-7乳腺癌细胞PI3K/Akt mRNA表达的影响

目的探讨丹皮酚对人乳腺癌细胞MCF-7磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)mRNA表达的影响,阐明PI3K/Akt在丹皮酚诱导细胞凋亡过程中的意义。方法应用MTT方法检测丹皮酚对MCF-7细胞增殖活性的影响;丫碇橙/嗅乙啶(AO/EB)染色观察细胞形态学变化。Annexin-V FITC染色流式细胞技术检测细胞凋亡数。RT-PCR法检测PI3K/Akt mRNA的表达。结果丹皮酚处理MCF-7细胞48 h后的IC50约是60 mg/L,AO/EB染色后,对照组细胞形态完整,呈多边形贴壁生长,呈均匀绿色。丹皮酚处理组出现核染色质浓缩或碎片状凋亡形态,呈橘红色改变。以60 mg/L丹皮酚处理MCF-7细胞48 h后,凋亡百分数达到31.92%,明显高于对照组。PI3K/Akt mRNA的表达比对照组明显减少(P<0.05)。结论丹皮酚诱导乳腺癌细胞凋亡与PI3K/AktmRNA的表达减少密切相关。     

染料木黄酮对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响

以二甲亚砜为溶剂配制不同浓度染料木黄酮处理乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞,用流式细胞仪检测其细胞凋亡及细胞周期的变化.发现与对照组比较,随着染料木黄酮处理浓度的增高,乳腺癌细胞G0～G1期细胞的百分比逐渐降低,G2～M期细胞的百分比逐渐增高;各组中均未见明显的凋亡峰.认为染料木黄酮处理24 h后对MDA-MB-435细胞的增殖和凋亡没有明显的影响.染料木黄酮引起F-肌动蛋白解聚,不是由于其诱导细胞发生凋亡所致.     

番茄红素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及机制

采用MTT法和3H-TdR 掺入法观察番茄红素对体外培养雌激素受体阴性的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素作用后MDA-MB-231细胞增殖和DNA合成被抑制,具有剂量效应关系,随时间延长,抑制作用增强,最大抑制率达61.9%.番茄红素作用24 h后,细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,并诱导其凋亡.证实番茄红素可抑制MDA-MB-231细胞增殖;其机制除通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

茶多酚对肺癌SPC-A1细胞增殖的影响

目的 探讨茶多酚对人肺癌SPC-A1细胞增殖的影响.方法 体外培养人肺腺癌SPC-A1细胞,以50～300 mg/L茶多酚作用12、24、36 h后,MTT法测定细胞的增殖活性,琼脂糖凝胶电泳、透射电镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测对细胞周期的阻滞作用.结果 茶多酚可抑制肺癌细胞的增殖活性,其抑制作用随时间的延长而增强,以36 h抑制作用最强.浓度50～150 mg/L,抑制作用随浓度增高而增强;浓度＞150 mg/L,抑制作用随浓度增高反而减弱.茶多酚可使肺癌细胞阻滞于G1期,以150 mg/L阻滞作用24 h最强.结论 茶多酚可诱导人肺癌SPC-A1细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期,抑制肺癌细胞的增殖.     

丹皮酚联合5-FU对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-Fu对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00 mg/L)、3种浓度的5-FU(12.50、25.00、50.00 mg/L)及Pae(31.25 mg/L)和5-FU(12.50 mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72 h.同时设对照组(细胞不做处理),采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况:采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31-25、62.50、125.00、250.00 mg/L)处理EC9706细胞72 h后细胞周期的变化:倒置显微镜下观察各Pae组细胞各时间段形态学变化,HE染色光镜下观察凋亡细胞:采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25 mg/L)、5-FU(12.50mg/L)单独和联合作用48 h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05),Pae与5-FU联合用药比单用Pae或5.FU抑制效果更明显(P<0.05);Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降、S期细胞比例上升(Pae 125.00 mg/L组:G0/G1期21.18%±2.28% vs 62.17%±5.23%、G2/M期0.76%±0.54% vs 9.92%±3.10%、S期78.06%±2.82% vs 27.91%±2.13%,均P<0.05):HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变:Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(2.21±0.14 vs 5.67±0.30,4.22±0.34;8.55±0.33 vs 3.90±0.27,6.28±0.26,均P<0.05).结论:Pae可明显抑制人食管癌EC9706细胞的增殖.促进其凋亡,Pae联合5-FU作用更为明显.     

原花青素对HL-60细胞分化及凋亡的影响

目的探讨原花青素(PAC)对HL-60细胞增殖、诱导分化及凋亡的影响。方法 HL-60细胞经不同浓度的PAC作用相应时间后,用CCK-8法检测细胞生长状况,分析PAC对HL-60细胞增殖抑制;Wright染色,光学显微镜观察细胞形态变化;通过流式细胞仪检测分析细胞周期变化和测定髓系较成熟阶段细胞分化抗原CD14、CD11b的表达。结果用不同终浓度PAC在体外与HL-60细胞共培养,细胞抑制率随浓度增加而明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中浓度为20 mg/L的PAC作用HL-60细胞24 h,增殖抑制率为(72.3±1.8)%,高浓度PAC与HL-60体外培养72 h,部分细胞死亡;20 mg/L的PAC诱导HL-60细胞24 h,少数细胞出现核凹陷变形,作用48 h部分细胞分化为较成熟阶段细胞,40 mg/L的PAC作用HL-60细胞48 h,细胞出现凋亡改变;20 mg/L的PAC诱导HL-60细胞24 h,细胞周期G0/G1期百分比明显增高,S期细胞数明显减少,而40 mg/L的PAC作用HL-60细胞24 h,细胞周期G2/M期细胞百分比明显增高,并出现凋亡峰。20 mg/L的PAC诱导HL-60细胞24 h,流式细胞检测髓系细胞分化抗原CD14表达明显增高,CD11b表达稍增高。结论 PAC能抑制HL-60细胞增殖,低浓度PAC诱导其分化为较成熟阶段细胞,高浓度PAC则可能诱导HL-60细胞发生凋亡。     

丹皮酚对人大肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的:探讨丹皮酚(paeonol, Pae)对人大肠癌HT-29细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用及可能的作用机制. 方法:应用MTT法、荧光显微镜及透射电镜技术、TUNEL法和流式细胞仪技术观察不同浓度的Pae对HT-29细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用; 应用免疫细胞化学技术检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2, Bax及P53表达的变化. 结果: HT-29细胞经Pae(浓度范围7.81-250 mg/L)作用后细胞生长明显受到抑制, 呈明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系; 荧光显微镜及透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态; Pae在15.63, 62.5, 250 mg/L 3种浓度下作用48 h均可诱导HT-29细胞凋亡, TUNEL法显示凋亡指数与Pae浓度呈正相依赖关系; 流式细胞仪技术检测其凋亡率分别为7.6%, 16.2%和34.5%, 也有明显的剂量效应关系, 同时Pae使细胞周期分布发生明显变化, 表现为S期细胞比例上升, G0/G1期和G2/M期细胞比例下降; 免疫细胞化学结果显示Pae作用后HT-29细胞Bcl-2及P53蛋白表达显著降低, Bax蛋白表达无显著改变. 结论:Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡, 呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系. 其作用可能与影响癌细胞的细胞周期、下调Bcl-2/Bax的比例及P53蛋白的表达有关.     

茶多酚对肺癌SPC-A1细胞增殖的影响

目的探讨茶多酚对人肺癌SPC—Al细胞增殖的影响。方法体外培养人肺腺癌SPC—A1细胞，以50—300mg／L茶多酚作用12、24、36h后，MTT法测定细胞的增殖活性，琼脂糖凝胶电泳、透射电镜观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测对细胞周期的阻滞作用。结果茶多酚可抑制肺癌细胞的增殖活性，其抑制作用随时间的延长而增强，以36h抑制作用最强。浓度50～150mg／L，抑制作用随浓度增高而增强；浓度〉150mg／L，抑制作用随浓度增高反而减弱。茶多酚可使肺癌细胞阻滞于G1期，以150mg／L阻滞作用24h最强。结论茶多酚可诱导人肺癌SPC-Al细胞的凋亡，并使细胞周期阻滞于G1期，抑制肺癌细胞的增殖。     

SEA对人结肠癌SW480细胞周期进程及凋亡的影响

目的 体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人结肠癌细胞株SW480的增殖抑制作用.方法 应用MTr比色法检测不同浓度的SEA对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,电子显微镜检测亚细胞水平变化.结果 不同浓度的SEA对SW480细胞增殖抑制率分别为18.5％、37.6％和41.5％,与对照组相比差异显著.流式细胞仪结果显示Go/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高.电子显微镜可见,细胞线粒体肿胀、胞膜破裂、细胞核染色质趋边、凝集,可见凋亡小体.结论 SEA能显著抑制SW480细胞增殖,抑制SW480细胞周期G1期向S期转化进程,从而使G2/M期细胞相对增高,诱导SW480细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

TMS对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 观察细胞色素酶P4501B1( CYP1B1)抑制剂2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯(TMS)对人子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 采用免疫细胞化学方法检测Ishikawa细胞中的CYP1B1蛋白.采用MTT法检测10、20、40、80 μmol/L TMS培养24、48、72 h后Ishikawa细胞增殖抑制率,并于培养48 h时用倒置显微镜对Ishikawa细胞进行形态学观察.采用流式细胞术检测10、20、40、80 μmol/L TMS培养48 h后的Ishikawa细胞凋亡率、细胞周期以及细胞中的Bcl-2、Bax及Survivin.结果 CYP1B1蛋白在Ishikawa细胞中为阳性表达.TMS可呈时间和剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖(P均＜0.05).用不同TMS培养48 h后镜下观察可见部分Ishikawa细胞皱缩变形,崩解坏死,细胞脱壁悬浮,并出现细胞核浓缩、核碎裂等细胞凋亡特征性形态学改变.TMS可剂量依赖性促进Ishikawa细胞凋亡,并使细胞周期中G0/G1期比例降低,G2/M期比例增高(P均＜0.05),同时降低凋亡相关蛋白Bcl-2和Surivin的表达(P均＜0.05),升高Bax的表达(P均＜0.05).结论 TMS能抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,其机制可能是通过下调凋亡抑制蛋白Bcl-2、Survivin,上调促凋亡蛋白Bax而实现的.     

氟化物对体外培养乳鼠颅盖骨分离细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 探讨氟化物对体外培养乳鼠颅盖骨细胞的生长、细胞周期和凋亡的影响。方法 用四唑盐（MTT）比色法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡百分率。结果 染氟8.84,22.1,44.2mg/L在24h及48h时细胞活力无明显变化；染氟110.5mg/L48h和染氟44.2,110.5mg/L120h时对细胞活力有抑制作用；而染氟8.84mg/L120h时则刺激细胞活力增强；染氟44.2mg/L，S期细胞数增加，G2/M期细胞数相对减少，G0/G1期细胞无明显改变，染氟22.1,44.2mg/L，凋亡百分率升高；染氟44.2mg/L，可使其DNA含量明显降低。结论 氟可影响体外培养颅盖骨细胞的细胞周期分布，使细胞停滞于S期；低剂量氟对细胞生长有促进作用，高剂量则可降低细胞活力，并诱导细胞凋亡。     

茶多酚对肺癌SPC-A1细胞体外增殖及细胞周期的影响

目的探讨茶多酚对人肺癌SPC-A1细胞增殖和细胞周期的影响。方法体外培养人肺腺癌SPC-A1细胞,以50~300 mg/L茶多酚作用12小时、24小时和36小时后,用MTT法测定细胞的增殖活性,透射电镜检测细胞凋亡情况,流式细胞仪测定细胞周期的阻滞作用。结果MTT法显示茶多酚可抑制肺癌细胞的增殖活性,其抑制作用随时间的延长而增强,以36小时抑制作用最强。在浓度50~150 mg/L范围内,抑制作用随浓度增高而增强;当浓度大于150 mg/L时,抑制作用随浓度增高反而减弱。透射电镜可见凋亡细胞的形态学改变,线粒体空泡化、核凝聚、核固缩。流式细胞术发现茶多酚可使肺癌细胞阻滞于G1期,以24小时、150 mg/L阻滞作用最强。结论茶多酚可诱导人肺癌SPC-A1细胞的凋亡,并使细胞周期阻滞于G1期。     

氧化砷对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的:研究三氧二化砷(氧化砷)对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用。方法:应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡的作用。结果:氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用.10μmol/L氧化砷作用24小时细胞杀伤率为24.6％ 48小时接近50％,氧化砷作用于不同分化程度的胃癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质疑集.呈新月型紧贴于核膜周边.核碎裂.染色质片断化,凋亡小体形成等,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”TU-NEL染色法显示,细胞凋亡指数为1.4％～9.5％。氧化砷的细胞毒作用呈时间和剂量依赖性,且表现为细胞周期特异性,作用48小时后,SGC-7901细胞的细胞周期变化明显,G0/G1期细胞从54.2％下降到17.7％ 而G2/M期细胞则从20.2％上升到63.4％,说明氧化砷主要作用于细胞周期的G2/M期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。结论:氧化砷对胃癌细胞具有较强的细胞毒和诱导细胞凋亡的作用.具有治疗胃癌的潜在价值。值得进一步研究     

蜂胶水提液对人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响

目的 观察蜂胶水提液对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响.方法 贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,用50、100和200 mg/L蜂胶水提液进行干预.细胞计数法检测人脐动脉平滑肌细胞数量;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法观察增殖细胞核抗原;分光光度计检测培养液中超氧化物歧化酶及丙二醛的含量;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡.结果 100 mg/L和200mg/L的蜂胶水提液能减少血管紧张素Ⅱ对细胞的增殖作用,增加G0/G1期细胞的百分比,降低增殖细胞核抗原阳性率,蜂胶各浓度组总超氧化物歧化酶活力升高,而丙二醛含量降低,凋亡指数降低(P<0.01).结论 一定浓度的蜂胶水提液能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖;机制可能与蜂胶水提液影响细胞增殖周期、抑制增殖细胞核抗原的表达、提高人脐动脉平滑肌细胞抗氧化能力有关.     

神经生长因子抑制肝星状细胞增殖的观察

目的 观察神经生长因子(NGF)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的抑制作用,并探讨其作用机制. 方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,将HSC-T6与不同浓度NGF孵育后,用XTT比色法检测NGF对HSC增殖的影响,流式细胞术分析NGF对HSC细胞周期的影响,透射电镜观察经100 ng/ml NGF作用24h后HSC形态学变化.结果 (100、200、400) ng/ml浓度时NGF对HSC的抑制作用经XTT法测得A值分别为0.66±0.03、0.69±0.03和0.66±0.03,与对照组(0.73±0.01)比较,差异具有统计学意义(P＜0.05),但无浓度依赖性(P＞0.05).100、200、400ng/ml NGF作用于HSC 24h后,G2期比例分别为14.83％±5.41％、14.73％±2.50％和14.87％±2.06％,与对照组(7.47％±4.39％)比较,明显增加(P＜0.05),透射电镜可以见到细胞凋亡的形态学变化. 结论 NGF可抑制HSC增殖,通过使HSC细胞周期停滞于G2期而抑制HSC增殖可能为其作用机制之一;经NGF作用的大鼠肝星状细胞可出现明显的增殖受抑、细胞凋亡的形态学改变.     

Flavopiridol通过调节CDK4/CDK6/cyclinD1复合物表达抑制肝癌细胞增殖

目的研究flavopiridol对肝癌细胞Huh7增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法Flavopiridol处理Huh7细胞后,检测细胞增殖和凋亡,进行细胞周期分析。Westernblot检测flavopiridol对cDK4／cDK6／cyclinD1复合物表达的影响。结果Flavopiridol可显著抑制Huh7细胞增殖;Flavopiridol可剂量依赖性导致Huh7细胞发生凋亡,空白对照组凋亡细胞2．65％,550nmol／L剂量处理组凋亡细胞14．17％;Flavopiridol可剂量依赖性引起Huh7细胞G1期阻滞,空白对照组G1期细胞51．06％,550nmol／L剂量处理组G1期细胞57．53％;Flavopiridol可抑制Huh7细胞Gl期相关的蛋白细胞周期素依赖激酶（CDK）4,CDK6,细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结论Flavopiridol通过抑制肝癌细胞G1期cDK4／cDK6／cyclinD1蛋白复合物表达,引起细胞G1期阻滞并发生凋亡,从而抑制细胞增殖。     

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。     

SEA诱导人膀胱癌T24细胞周期进程及凋亡

目的 体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人膀胱癌T24细胞株的增殖抑制作用.方法 应用MTT比色法检测不同浓度的SEA对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测T24细胞周期进程的变化,电子显微镜观察T24细胞亚细胞水平改变.结果 不同浓度的SEA对T24细胞的增殖抑制率分别为24.2％、34.5％和43.3％,与对照组相比差异显著(P＜0.01),且具有明显的剂量依赖性.流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多.电子显微镜下可见T24细胞线粒体肿胀,有空泡形成,可见凋亡小体.结论 SEA能显著抑制T24细胞增殖,抑制T24细胞G1期向S期细胞转化进程,诱导T24细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用的研究

目的：研究阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用,及其相关的凋亡蛋白和细胞周期的变化,为临床治疗淋巴细胞白血病提供新的研究思路。方法：应用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡并用流式细胞术进行细胞周期分析,MTT法检测阿奇霉素对Jurkat细胞的增殖抑制作用,利用West-ern-blotting检测凋亡途径相关蛋白的表达。结果：用阿奇霉素处理Jurkat细胞48h后300mg/L剂量组早期凋亡率显著增高达到（88.0&#177;3.3）%,而25mg/L剂量组为（11.5&#177;2.7）%,与对照组（10.6%&#177;1.8）%无明显差异。MTT法检测结果IC50值为88.4mg/L,200mg/L抑制率达到89.27%。细胞周期显示150mg/L时G1期细胞增加,G2期和S期细胞下降。Western-blotting结果表明Bcl-2蛋白高表达,处理前后无明显变化,而Bax蛋白表达随药物浓度提高而上升,活化的Caspase3在100mg/L表达最高。结论：阿奇霉素可以有效的诱导Jurkat细胞凋亡并呈明显的浓度依赖性,其凋亡途径可能是通过Bax蛋白表达上升诱导下游效应分子Caspase3活化实现。细胞增殖抑制试验表明200mg/L以上时细胞增殖明显受抑制,细胞周期分析提示细胞增殖阻滞在了G1期。