阿司匹林对西罗莫司抗胃癌MKN45细胞体外增殖作用的影响研究

目的：研究阿司匹林对西罗莫司抗胃癌MKN45细胞体外增殖作用的影响及作用机制。方法：体外培养胃癌MKN45细胞,给予西罗莫司（0、0.5、1.0、2.0nmol·L-1）、阿司匹林（10mmol·L-1）＋西罗莫司（0、0.5、1.0、2.0nmol·L-1）,以MTT法测定并计算细胞增殖抑制率;通过实时定量聚合酶链式反应（PCR）测定正常胃上皮GES-1细胞、MKN45细胞和经西罗莫司（2.0nmol·L-1）、阿司匹林、阿司匹林＋西罗莫司（2.0nmol·L-1）处理后的MKN45细胞中环氧化酶2（COX-2）、白细胞介素1α（IL-1α）表达情况。结果：西罗莫司可抑制MKN45细胞增殖,且呈剂量依赖性;与西罗莫司比较,阿司匹林＋西罗莫司处理后的MKN45细胞增殖抑制率明显增加（P〈0.01）。mRNA相对表达量COX-2MKN45/GES-1、IL-1αMKN45/GES-1分别为1.49±0.17、1.58±0.19。与对照MKN45细胞比较,COX-2、IL-1α在经西罗莫司、阿司匹林、阿司匹林＋西罗莫司处理后的MKN45细胞中的表达均明显降低（P〈0.01）,其中组间均有统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论：阿司匹林可协同增强西罗莫司抑制胃癌MKN45细胞增殖的作用,其作用机制可能与抑制COX-2、IL-1α表达有关。     

VIP对裸鼠MKN45移植瘤的影响

目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对裸鼠MKN45移植瘤的影响.方法 将18只人胃癌MKN45细胞株的移植瘤裸鼠随机均分为三组,分别每天皮下注射VIP 10 μg·100 μl-1·只-1 (VIP组)、VIP受体拮抗剂[D-p-C1-phe6,Leu17]-VIP(V4380) 10 μg·100μl-1·只1(拮抗剂组)和PBS100μl/只(对照组).每周称量裸鼠体重及移植瘤体积,4周后处死裸鼠,称量移植瘤重量及体积.用免疫组化及RT-PCR检测移植瘤组织中胞外信号调节激酶(ERK)蛋白及mRNA表达的变化.结果 给药第28天,VIP组裸鼠体重明显轻于拮抗剂组(P＜0.05).给药的第14、21天,VIP组移植瘤体积明显小于其它两组(P＜0.01).VIP组ERK蛋白的表达显著低于拮抗剂组(P＜0.05).结论 VIP可能通过抑制肿瘤细胞ERK/NF-κB通路对人胃癌细胞MKN45裸鼠移植瘤有潜在抑制作用.     

幽门螺杆菌黏附MKN45细胞模型的建立与应用

目的建立幽门螺杆菌(Hpylori,Hp)体外黏附MKN45细胞模型,为抗黏附药物的筛选和评价奠定基础。方法采用FITC荧光素标记Hp,以FITC-Hp菌液荧光密度为指标,分别评价FITC用量、FITC标记时间等关键因素,优化FITC标记Hp最佳条件;同时用细胞爬片-革兰染色法确定Hp黏附细胞的最佳时间。结果终浓度为5mg·mL-1的FITC和Hp菌液(浓度为1×106cuf.ml-1)共同孵育1h,为FITC标记Hp的最适条件;Hp黏附MKN45细胞的最佳孵育时间为1h。通过该模型测定芦荟粗多糖抗黏附活性,显示芦荟粗多糖有效抑制Hp黏附MKN45细胞的浓度分别为1g.L-1(P<0.05)以及2g.L-1(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论FITC荧光标记检测Hp黏附MKN45细胞模型建立并可用于检测化合物抗Hp黏附活性研究。     

姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用研究

目的 研究姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 实验分为4组,分别为对照组和10、20和40 μmol/L姜黄素组.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活性;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染检测Bel-7402细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达,Western blot检测细胞色素C和Caspase-3蛋白的表达.结果 姜黄素显著抑制Bel-7402细胞的活性(P＜0.01).姜黄素处理后,Bel-7402细胞的凋亡率明显增加,与对照组相比具有统计学差异(P＜0.05),且具有剂量依赖性.另外,姜黄素使Bax的mRNA表达上升,Bcl-2的mRNA表达下降,Bax/Bcl-2比值明显上升(P＜0.05).同时,细胞色素C和Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P＜0.01).结论 姜黄素可以抑制Bel-7402细胞的活性和增殖,促进Bel-7402细胞的凋亡,其机制可能与与姜黄素激活Bel-7402细胞线粒体凋亡途径有关.     

熊果酸衍生物对人胃癌细胞的抗癌活性及凋亡诱导机制研究

通过对熊果酸的3位和28位进行化学修饰,制备熊果酸衍生物UA-1。采用MTT法评价熊果酸及其衍生物UA-1对不同分化程度的人胃癌细胞株AGS、BGC、MKN45的生长抑制作用,发现UA-1对3种胃癌细胞均具有较强的生长抑制作用,尤其对MKN45细胞的生长抑制作用较UA提高了近3.5倍。通过琼脂糖凝胶电泳、Annexin-V/PI双染、PI单染和流式细胞术检测UA-1对MKN45细胞的凋亡诱导作用,发现UA-1能将MKN45细胞阻断在G0/G1期,并显著诱导细胞凋亡,其作用强度呈药物浓度依赖性。进一步采用WesternBlot法检测凋亡抑制蛋白Survivin的表达,发现UA-1诱导MKN45细胞凋亡的机制可能与下调Survivin的表达有关。     

槲皮素对胃癌MGC-803细胞生长及凋亡作用的研究

目的研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响及诱导凋亡作用。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度槲皮素对MGC-803细胞的增殖活性的效应;原位末端核苷标记(TUNEL)法检测槲皮素诱导细胞凋亡的凋亡指数(AI)。结果槲皮素浓度为40~100μmol/L时对MGC-803细胞增殖有显著的抑制效应,且呈剂量依赖性;细胞加入槲皮素诱导48h后AI明显高于未加入组(P<0.05)。结论槲皮素在一定浓度范围内能显著抑制MGC-803细胞的增殖并能诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖性。     

槲皮素联合喜树碱促进人前列腺癌PC-3细胞的凋亡

目的考察槲皮素联用喜树碱对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。方法体外培养PC-3细胞,用CCK-8实验、细胞周期检测实验和Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测实验,考察槲皮素联用喜树碱对PC-3细胞增殖凋亡的影响;用Western-Blot实验检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、PARP1和Caspase-3)的表达。结果 CCK-8实验结果显示槲皮素和喜树碱都可以一定程度地抑制PC-3细胞增殖,诱导凋亡作用,其中槲皮素和喜树碱联用效果更优。药物作用48 h后其半数抑制浓度(IC₅₀)分别为38.76、2.25、1.88μmol·L^-1。细胞周期实验显示,药物联用组细胞周期处于S期的细胞比例明显高于单用组(P<0.05);细胞凋亡实验显示,药物联用组的细胞凋亡率显著高于单用组(P<0.05);Western-Blot结果显示,药物联用组对凋亡相关蛋白的影响更为明显,使Bcl-2蛋白表达下降为47%,分别使Bax、PARP1和Caspase-3依次增加1.17、0.77和0.69倍(P<0.05)。结论槲皮素联合喜树碱能够显著促进人前列腺癌PC-3细胞的凋亡。     

褪黑素诱导NB4细胞凋亡及机制的研究

目的探讨褪黑素对NB4细胞凋亡的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法将0、10~(-8)、10~(-6)、10~(-4)mol/L褪黑素在体外与NB4细胞共同培养,应用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性,Hoechst荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞技术检测凋亡细胞比例,分光光度计检测上清液中Caspase-3及Caspase-9含量。结果褪黑素能显著抑制NB4细胞增殖,促进细胞凋亡,增加凋亡因子的表达。结论褪黑素促进NB4细胞凋亡的机制可能与增加Caspase-3及Caspase-9表达有关。     

N_3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶通过凋亡作用抑制人胃癌细胞生长

目的N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(N3-O-toluyl-flu-orouracil,TFU)是N1-乙酰基-N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶的降解产物和5-氟脲嘧啶(5-FU)前体物,本研究观察TFU体内外对人胃癌细胞生长抑制活性及作用特点。方法体外实验,以MTT法测定TFU对人胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长抑制作用,并与肝微粒体酶存在条件下的结果比较。在肝微粒体酶存在时,将人胃癌细胞与低剂量TFU孵育10h,以吖啶橙/溴乙锭染色(AO/EB)观察肿瘤细胞形态;分别以琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪分析肿瘤细胞DNA断裂特点;Western blot法检测肿瘤细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。体内实验,以裸鼠移植人胃癌细胞并灌胃给药观察TFU对肿瘤细胞生长抑制作用。取肿瘤组织切片,以TUNEL(ter-minal deoxynucleoid transferase nick-end labeling)染色法,观察肿瘤细胞核染色比例,计算凋亡率。结果TFU对胃癌细胞生长抑制作用较弱,而在肝微粒体酶存在时能够明显提高TFU对胃癌细胞生长的抑制率。TFU对裸鼠移植人胃癌细胞生长抑制作用较强,对动物体重抑制作用弱。进一步实验,在肝微粒体酶存在下,低剂量TFU能够诱导肿瘤细胞凋亡。吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色后,胃癌细胞呈现剂量依赖性凋亡形态改变。细胞染色体DNA断裂呈现Ladder现象和亚二倍体(sub-G1)凋亡峰。TFU上调胃癌细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白水平。TUNEL法检测裸鼠移植人胃癌细胞凋亡,TFU能够提高胃癌细胞核TUNEL染色水平。结论TFU对人胃癌细胞生长具有抑制作用,该作用可能与肝微粒体酶缓慢水解释放出低水平5-FU有关,低水平5-FU可能通过调节Bcl-2和Bax表达活性诱导胃癌细胞凋亡。     

新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究

目的探讨新疆家蚕抗菌肽(cecropin XJ)是否通过诱导人胃癌细胞AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0.01~1 000 mg·L-1浓度范围内的cecropin XJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24 h,采用MTT法检测cecropin XJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞超微结构变化;Hoechst染色观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素C mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 Cecropin XJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),并具有浓度依赖性,IC50值为61.19 mg·L-1,但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropin XJ处理24 h后,AGS细胞核固缩,呈现典型细胞凋亡特征,同时细胞内活性氧增加,线粒体膜电位下降。qRT-PCR和Western blot结果表明,cecropin XJ能够引起Bcl-2表达下调,Bax表达上调,促进细胞色素C的释放并活化caspase-3。Cecropin XJ促进caspase-3活性呈剂量依赖,经caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低cecropin XJ介导的AGS细胞死亡率。结论 Cecropin XJ可通过下调Bcl-2表达,上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡,是其抗肿瘤机制之一。     

苦参素对胃癌细胞株MKN-54产生金属基质蛋白酶的抑制作用

目的：研究中药有效成分苦参素对胃癌细胞株MKN-45产生金属基质蛋白酶MMPs（matrix metalloproteinases）的作用。方法：采用酶联免疫吸附试验检测MKN-45细胞产生金属机制蛋白酶MMP-2和MMP-9。采用明胶酶谱法检测金属蛋白酶活性。结果：在5～20μmol／L的浓度范围内，苦参素能有效抑制MKN-45细胞中MMP-2和MMP-9的表达，同时明胶酶谱结果显示，20μmol／L的苦参素能够显著抑制MMP-2和MMP-9的蛋白酶活性。结论：苦参素能够显著抑制胃癌细胞株MKN-45中金属基质蛋白酶的表达和活性，表明苦参素对胃癌转移具有一定的抑制作用。     

番茄红素对胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用

目的研究番茄红素体外对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用。方法将番茄红素作用于胃癌细胞SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制率,3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR)参入试验测定对细胞DNA合成的影响,TRAPPCRELISA法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果番茄红素作用后胃癌细胞生长明显受抑制,24、48、72和96h的IC50分别为22×10-4、15×10-4、67×10-6和40×10-6mmolL-1。10-5mmolL-1的番茄红素作用胃癌细胞24、48、72、96h后,3HTdR掺入量分别为(442512±13409)cpm、(365647±15391)cpm、(275365±12833)cpm、(161482±9456)cpm,低于对照组的(624831±26563)cpm、(750582±25898)cpm、(832124±22352)cpm、(859130±36821)cpm(P<001);TRAPPCRELISA法显示A值分别为1102±0026、0846±0018、0735±0017、0586±0014,低于对照组(1801±0048、1887±0072、2047±0085、2131±0076,P<001)。10-5mmol·L-1的番茄红素作用胃癌细胞96h后,G0/G1期细胞比例为(697±52)%,高于对照组的(456±37)%(P<001),凋亡率达(256±28)%。结论番茄红素能明显抑制胃癌细胞增殖及端粒酶活性,能使细胞产生G0/G1期阻滞,并诱导凋亡。     

流式细胞检测高压CO2对胃癌MMP2和MMP9水平的影响

目的:探讨高压二氧化碳(CO2)对胃癌细胞腹腔侵袭转移能力的影响.方法:体外培养高侵袭力人胃癌MKN45细胞株,在高压CO2(25 mmHg)及不同持续时间(1、2、3 h)干预后,应用流式细胞技术,检测其MMP2和MMP9的表达水平变化.结果:高压CO2作用后胃癌MKN45细胞株MMP2和MMP9蛋白表达有所变化.与常规细胞培养比较,MMP2和MMP9表达差异较为明显(P＜0.001,P＜0.01).结论:CO2对胃癌细胞的侵袭能力会产生一定的影响,高压CO2环境对胃癌细胞的侵袭能力影响较大.     

大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响

目的观察大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定MNK-45细胞和MGC8-03细胞增殖抑制率;采用AO/EB双染观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪测定细胞周期。结果大黄素（5～80μg/mL）对MNK-45和MGC8-03细胞增殖均具有显著抑制作用（P〈0.01或0.05）,且药物剂量越大,作用时间越长,其抑制作用越强（P〈0.01）;大黄素作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;大黄素使MNK-45和MGC8-03细胞增殖被阻滞于G0/G1期。结论大黄素能抑制人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖,诱导其凋亡,影响其细胞周期时相的分布。     

甲基莲心碱对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响

目的　观察甲基莲心碱 (Nef)在体外对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响。方法　采用MTT比色法检测药物的细胞毒性作用 ,并用流式细胞术、AO/EB双重荧光染色法和TUNEL法测定甲基莲心碱对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡率的影响。结果　 2 5、5、1 0 μmol·L- 1 Nef能增强长春新碱对人胃癌细胞 (SGC790 1 )增殖的抑制作用 ;1 0 μmol·L- 1 Nef能增强长春新碱 (0 1、0 5、2、4mg·L- 1 )诱导SGC790 1细胞凋亡。结论　甲基莲心碱能增强长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡 ,推测其为一种低毒高效的化疗增敏剂。     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨苦马豆素(swainsonine,SW)体外诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC-7901细胞的作用浓度;通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53,c-myc,Bcl-2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式;同时利用激光共聚焦显微镜监测细胞内Ca~(2+)浓度,研究SW与细胞内Ca~(2+)超载的关系。结果:SW体外抗SGC-7901细胞的完全致死浓度为6．2μg·mL~(-1),高于0．05μg·mL~(-1)时抑制作用明显(P＜0．05),其IC_(50)为0．84μg·mL～(-1);经SW 0．5,1．5,4．5μg·mL~(-1)处理24h可引起凋亡抑制基因p53和Bcl-2的明显下降,凋亡促进基因c-myc明显升高以及肿瘤细胞内Ca~(2+)超载,最终诱导SGC-7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。